Kif L-Ingredjenti Attivi Ta' Cistanche Tubulosa għandhom Rwol fil-Marda ta' Alzheimer?

JIANHUA YANG1*, BOWEI JU1,2*, YAO YAN1, HUANHUAN XU1, SHANSHAN WU1, DANDAN ZHU1, DANDAN CAO1 u JUNPING HU2

Astratt.L-istudju preżenti kellu l-għan li jinvestiga l-effetti newroprotettivi ta 'phenylethanoid glycosides(PhGs) fuq H2O2- u -amyloid peptide (A )1-42-ikkaġuna ħsara taċ-ċelloli PC12 bħala mudell in vitro ta'Il-marda ta' Alzheimer (AD). L-aħjar kundizzjonijiet ta 'induzzjoni ġew stabbiliti permezz ta' screening ta 'diversi ħinijiet u konċentrazzjonijiet ta' inkubazzjoni. Iċ-ċelloli PC12 ġew ittrattati b'0.5 µM A 1-42 u H2O2 fil-preżenza ta' PhGs għal 24 siegħa u l-vijabbiltà taċ-ċelluli mbagħad ġiet evalwata b'assaġġ MTT; Ġew imkejla wkoll ir-rilaxx tal-lactate dehydrogenase (LDH) u l-kontenut tal-malondialdehyde (MDA). L-aħjar kundizzjonijiet għall-istabbiliment tal-ADmudell kienu t-trattament taċ-ċelloli PC12 bi 0.5 µM A 1-42 għal 48 siegħa, jew b'25 µM H2O2 maħlul f'DMEM b'PBS. PhGs f'konċentrazzjonijiet ta' 5, 25 u 50 µg/ml żiedu l-vijabbiltà u naqqsu r-rilaxx ta' LDH u MDA minn ċelluli PC12 midruba b'A 1-42 jew H2O2. Bħala konklużjoni, il-mudell ta' A 1-42- u H2O2-indotta korriment taċ-ċelluli PC12 ġie stabbilit b'suċċess. Il-PhGs intwerew li għandhom effett newroprotettiv sinifikanti kontra l-ħsara taċ-ċelluli kkaġunata minn A 1-42- jew H2O2-.

Kuntatt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Cistanche tubulosa għandha ħafna effetti, ikklikkja hawn biex tkun taf aktar

Introduzzjoni

Il-marda ta' Alzheimer (AD), disturb newrodeġenerattiv bil-karatteristiċi kliniċi ta 'telf progressiv tal-memorja u indeboliment tal-funzjoni konjittiva (1), huwa l-aktar kawża komuni ta' dimenzja mad-dinja kollha (2). L-ispejjeż finanzjarji huma enormi minħabba l-prevalenza tal-AD (3). Għalhekk, huwa urġenti li jiġu żviluppati mezzi xierqa għall-ġestjoni u l-prevenzjoni ta 'AD.

Il-patoġenesi ta'ADhuwa assoċjat mill-qrib ma 'l-akkumulazzjoni ta' tangles newrofibrillari u plakek senili (SPs) f'reġjuni tal-moħħ affettwati (4,5). -amyloid peptide (A ), il-komponent ewlieni ta 'SPs, ġie rrappurtat li għandu rwol kawżattiv fil-progressjoni ta'ADkif għandu effett tossiku fuq iċ-ċelloli newronali (6). Frammenti A, inklużi A 1-40, A 25-35 u A 1-42, ġew iġġenerati permezz tal-qsim tal-proteina prekursur tal-amilojde (7). In-newrotossiċità ta' A 1-42 instabet li kienet ogħla b'mod sinifikanti minn dik ta' A 25-35 u A 1-40, u A 1-42 kapaċi jinduċiADmudell (1,8-10). Stress ossidattiv jista 'jkun involut fil-patoġenesi ta'ADu huwa l-mekkaniżmu ewlieni sottostanti newrotossiċità indotta A (11-13). Diversi studji ssuġġerew li A 1-42 ikkawża akkumulazzjoni intraċellulari ta 'speċi ta' ossiġnu reattiv (ROS), li wassal għal ossidazzjoni tal-lipidi u proteini, ħsara fid-DNA u attivazzjoni tas-sinjalar tal-punt ta 'kontroll taċ-ċiklu taċ-ċelluli (1,14,15). Ammonti eċċessivi ta 'H2O2 jistgħu jwasslu għal ħsara ossidattiva u jinduċu apoptosi taċ-ċelloli PC12 (16). Għalhekk, l-immirar tal-istress ossidattiv jista 'jkun approċċ promettenti għall-iżvilupp ta' strateġiji terapewtiċi għall-inibizzjoni tan-newrotossiċità indotta minn A fl-AD.

Herba (H.)Cistanche, mediċina tal-ħxejjex Ċiniża użata komunement fiċ-Ċina kontinentali għat-trawwim tal-kliewi u timla l-essenza u d-demm, intużat biex tikkura telf ta 'memorja u stitikezza senile (17). Phenylethanoid glycoside (PhG), wieħed mill-kostitwenti ewlenin f'H.Cistanche, itejjeb l-indeboliment tal-apoptożi newronali kkawżata minn A 25-35 permezz tal-effetti anti-ossidanti tagħha (18,19). Studju preċedenti identifika ħames komponenti ewlenin minn PhGs totali, jiġifieriacteoside, 2'-acetylatteoside,echinacoside, cistanosides u isoacteoside (20). Fost dawn il-komponenti,acteosideuechinacosideġew irrappurtati li għandhom effetti newroprotettivi fuq newrotossiċità indotta minn A 25-35- jew H2O2- (21-23). Per eżempju, Wu et al (24) issuġġerixxa li acteoside uechinacoside

Kliem ewlieni:phenylethanoidglikosidi, PC12 cells, H2O2, -amyloid peptide1-42, newroprotection,cistanche

materjali u metodi

Preparazzjoni ta' PhGs. PhGs totali ġew estratti minn H.Cistanchekif deskritt qabel (25). Iz-zokk imnixxef bl-arja ta 'H.Cistancheġie trab u estratt permezz ta' perkolazzjoni bi 80 fil-mija EtOH. Il-perkolat ġie evaporat taħt pressjoni mnaqqsa, segwit minn sospensjoni mill-ġdid f'ammont xieraq ta' H2O2 (1{{20}}0 µmol/l). It-taħlita ġiet iżolata fuq kolonna tar-reżina makroporuża SP-825 (Mitsubishi Chemical, Tokyo, Japan) u eluwata b'0, 30, 50, 70, u 90 fil-mija EtOH fl-ilma. Biex tinkiseb il-frazzjoni b'ħafna PhG, il-{12}} fil-mija tal-eluwenti EtOH ġew ikkonċentrati u mnixxfa taħt pressjoni mnaqqsa. Twettqet spettrofotometrija ultravjola (UV) biex tiddetermina l-PhG totali. Il-kontenut ta' echinacoside u acteoside ġie determinat permezz ta' kromatografija likwida bi pressjoni għolja skont protokoll preċedenti (26). Kolonna Hypersil ODS-2 (4.6x250 mm, 5 µm; Dalian Elite Analytical Instruments, Co., Ltd., Dalian, iċ-Ċina) ġiet użata u miżmuma f'temperatura ambjentali. Il-fażijiet mobbli kienu methyl cyanides u ilma li fihom 0.4 fil-mija aċidu fosforiku (v/v; Sigma-Aldrich; Merck KGaA, Darmstadt, il-Ġermanja). Ir-rata tal-fluss kienet 0.75 ml/min u l-wavelength kien issettjat għal 333 nm.

Kultura taċ-ċelluli u trattament tad-droga. Il-linja taċ-ċelluli tal-feokromoċitoma tal-firien PC12 ġiet ipprovduta minn Dr He Chunhui, l-Iskola Medika, l-Università Medika ta 'Xinjiang (Urumqi, iċ-Ċina). Iċ-ċelloli ġew ikkultivati ​​f'mezz ta' Eagle modifikat ta' Dulbecco b'livell għoli ta' glukożju (DMEM; Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA, USA) li kien fih 10 fil-mija serum bovin tal-fetu (Sangon Biotech Co. Ltd., Shanghai, iċ-Ċina) , 100 U/ml peniċillina, u 100 U/ml streptomycins f'inkubatur f'37˚C li jkun fih 5 fil-mija CO2 u 95 fil-mija arja. Malli laħqu 80 fil-mija konfluwenza, iċ-ċelloli ġew ittrattati b'0.25 fil-mija trypsin u passaġġ.

Sabiex tiġi eliminata l-interferenza tal-mediċina nnifisha fuq it-tkabbir taċ-ċelloli PC12, sar esperiment ta 'tossiċità. Fil-qosor, ċelluli PC12 (3x104 ċelluli/ml) ġew miżrugħa fi 96-pjanċi bir-bir f'100 µl/bir u inkubati f'37˚C matul il-lejl. Wara li twarrab is-supernatant, ġew miżjuda 200 µl DMEM komplut fil-grupp vojt, filwaqt li ċ-ċelloli fil-gruppi ta’ intervent ġew ittrattati minn PhGs f’dożi varji (5, 25, 50, 75, 100, 125, 150, 175, u 200 µg/). ml). Wara l-inkubazzjoni taċ-ċelloli f'37˚C għal 48 siegħa, 20 µl soluzzjoni MTT (Sigma-Aldrich; Merck KGaA) ġiet miżjuda ma' kull bir. Wara l-inkubazzjoni għal 4 sigħat, is-supernatant ġie mormi u 150 µl dimethylsulfoxide ġie miżjud għal kull bir, segwit minn aġitazzjoni għal 10 min. Il-valuri tad-densità ottika (OD) f'490 nm ġew skoperti bl-użu ta 'qarrej tal-pjanċa ELISA.

Korriment taċ-ċellula PC12 indott minn 1-42. Peptide 1-42 mixtri minn Bioss Biotech (Beijing, iċ-Ċina) ġie maħlul fl-ilma (100 µg/ml). Sussegwentement, it-taħlita ġiet inkubata f'37˚C għal 4 ijiem u maħżuna f'4˚C qabel l-użu.

Iċ-ċelloli PC12 ġew miżrugħa fi 96-pjanċi tal-bir (3xl04 ċelluli f'100 µl kull bir). Wara l-kultura għal 24 siegħa għal aderenza, ġew miżjuda 50 µl A 1-42 f'diversi konċentrazzjonijiet finali (0, 0.25, 0.5, 1, 1.5 jew 2 µM) maħlul f'DMEM mingħajr serum, segwit minn inkubazzjoni għal 24, 48, 72 jew 96 siegħa. Il-vijabbiltà taċ-ċelluli ġiet evalwata b'assaġġ MTT. L-aħjar konċentrazzjoni A 1-42 kienet 0.5 determinata li tkun µM.

Iċ-ċelluli PC12 (3xl04 ċelluli għal kull bir) ġew ittrattati b'diversi dożi ta' PhGs (0, 0.5, 5, 25, jew 50 µg/ml) fil-preżenza ta' 0.5 µM A 1-42 għal 24 siegħa. Il-vijabbiltà taċ-ċelluli ġiet evalwata b'assaġġ MTT.

Korriment taċ-ċelluli PC12 indott minn H2O2. Iċ-ċelloli PC12 ġew ibbanjati miżrugħa fi 96-pjanċi bir-bir (3xl04 ċelluli f'100 µl kull bir). Wara l-kultura għal 24 siegħa għal aderenza, 100 µl H2O2 f'diversi konċentrazzjonijiet finali (0, 25, 50, 100, 200, 300, 400, u 500 µM) maħlul f'DMEM bi jew mingħajr PBS (0.01 mol/l) ġie miżjud, segwit minn inkubazzjoni għal 24 siegħa. Il-vijabbiltà taċ-ċelluli ġiet evalwata b'assaġġ MTT. L-aħjar konċentrazzjoni H2O2 u s-solvent ġew determinati biex jistabbilixxu l-mudell in vitro ta 'AD.

Iċ-ċelloli PC12 (3xl04 ċelluli għal kull bir) ġew ittrattati b'diversi dożi ta' PhGs (0, 0.5, 5, 25 u 50 µM). Wara l-kultura għal 24 siegħa għal aderenza, iċ-ċelluli PC12 ġew ittrattati b'100 µl H2O2 maħlul f'DMEM b'PBS fil-preżenza ta' PhGs għal 24 siegħa. Il-vijabbiltà taċ-ċelluli ġiet evalwata b'assaġġ MTT.

Assaġġ tar-rilaxx tal-lactate dehydrogenase (LDH). Il-ħsara taċ-ċelluli ġiet evalwata billi tkejjel l-attività tal-LDH fis-supernatant taċ-ċelluli PC12 bl-użu ta’ kit LDH skont il-protokoll tal-manifattur (cat. nru. 20150604; Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, iċ-Ċina). Fil-qosor, H2O distillat doppju, 0.2 µmol/ml aċidu piruviku, buffer tal-matriċi, u buffer tal-koenzima I ġew miżjuda f'sekwenza fi 48 siegħa wara t-trattament tad-droga. Wara inkubazzjoni f'37˚C għal 15-il minuta, ġie miżjud 2,4-dinitro-phenylhydrazine. Sussegwentement, 250 µl ta’ soluzzjoni ta’ NaOH 0.4 M ġew miżjuda ma’ kull bir. Is-supernatant inġabar wara inkubazzjoni għal 30 minuta f'temperatura tal-kamra. L-assorbiment f'450 nm imbagħad tkejjel b'microplate reader.

Kejl tal-malondialdehyde (MDA). L-MDA tkejjel fis-supernatant taċ-ċelluli PC12 bl-użu ta' kit kummerċjali (nru tal-kat. 20150604; Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute) skont il-protokoll tal-manifattur Fil-qosor, alkoħol deidrat u reaġenti oħra ġew miżjuda fl-ordni, segwiti minn inkubazzjoni f'banju tal-ilma. f'95˚C għal 40 min. It-taħlita ġiet ċentrifugata f'1,006 xg u 25˚C għal 10 min wara t-tkessiħ. Is-supernatant imbagħad intuża biex jiddetermina l-kontenut tal-MDA. Sussegwentement, l-assorbenza ġiet imkejla b'microplate reader f'532 nm.

Valutazzjoni ta 'effetti protettivi ta' echinacoside u acteoside kontra AD in vitro. Iċ-ċelloli PC12 ġew miżrugħa b'densità ta' 3xl04 ċelluli/bir fi 96-pjanċi bir-bir (100 µl/bir). Iċ-ċelloli ġew inkubati b'mediċini inklużi echinacoside (nru tal-kat 111670-200503; Istituti Nazzjonali għall-Kontroll tal-Ikel u tad-Droga, Beijing, iċ-Ċina) u acetonide (nru tal-kat 111530-200505; Istituti Nazzjonali għall-Kontroll tal-Ikel u tad-Droga) ) f'konċentrazzjonijiet varji (0.5, 25 u 50 µg/ml). Sussegwentement, iċ-ċelloli ġew ittrattati b'A 1-42 jew H2O2 għal 24 siegħa u l-vijabbiltà taċ-ċelluli ġiet imkejla b'assaġġ MTT.

Analiżi statistika. Il-valuri huma espressi bħala l-medja ± devjazzjoni standard. It-test t tal-istudent intuża għal tqabbil bejn il-gruppi. Analiżi statistiċi saru bl-użu ta' SPSS 18.0 (SPSS, Inc., Chicago, IL, USA). P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

Riżultati

Kwantifikazzjoni ta 'PhGs minn H. Cistanches. L-ispettri UV tal-PhGsestratt kif ukoll soluzzjonijiet standard taechinacosideuacteosideġew irreġistrati, u r-riżultati wrew li l-ispettri UV kienu konsistenti (Fig. 1). spettrofotometrija UV

wera li l-kontenut PhG kien 87.6 fil-mija. Ir-riżultati tal-HPLC wrew li l-kontenuti ta 'echinacoside u acteoside kienu 37.7 u 17.8 fil-mija, rispettivament (Fig. 2).

Determinazzjoni tal-konċentrazzjoni PhG ideali. Meta mqabbel mal-grupp vojt, PhG f'75, 100, 125, 150, 175 u 200 µg/ml kellu effett inibitorju sinifikanti fuq iċ-ċelloli PC12 (P<0.05), while="" phg="" at="" 5,="" 25="" and="" 50="" µg/ml="" showed="" low="" toxicity="" on="" pc12="" cells,="" and="" the="" cell="" viability="" was="">80 fil-mija (Fig. 3). Għalhekk, PhGs f'konċentrazzjoni ta '5, 25, u 50 µg/ml intużaw għat-trattament taċ-ċelloli PC12 f'esperimenti sussegwenti minħabba li ma affettwawx il-vijabbiltà taċ-ċelluli.

Korriment taċ-ċelluli PC12 indott minn 1-42. Meta mqabbla ma' dik fil-grupp ta' kontroll, il-vijabbiltà taċ-ċelluli fil-grupp ta' ħsara 0.5 µM A 1-42 kienet 63 fil-mija (P<0.05). the="" cell="" viability="" was="" decreased="" by="" aβ1-42="" in="" a="" concentration-dependent="" manner,="" and="" the="" viability="" was=""><50% in="" the="" 1,="" 1.5,="" and="" 2="" µm="" aβ1-42="" injury="" groups="" (fig.="" 4).="" thus,="" treatment="" with="" 0.5="" µm="" aβ1-42="" for="" 48="" h="" was="" determined="" to="" be="" the="" optimal="" condition="" for="" establishing="" the="" in="" vitro="" ad="">

Ġiet determinata wkoll l-attività taċ-ċelloli PC12 ittrattati b'0.5 µM A 1-42 fil-preżenza ta' dożi sikuri ta' PhGs (5, 25, u 50 µg/ml) għal 24 siegħa. Meta mqabbel mal-grupp mudell (P<0.01), phgs="" showed="" a="" significant="" neuroprotective="" effect="" on="" pc12="" cells.="" the="" cell="" viability="" was="" rescued="" by="" phgs="" in="" a="" dose-dependent="" manner="" (fig.="">

Korriment taċ-ċelluli PC12 indott minn H2O2. Il-vijabbiltà taċ-ċelluli PC12 ittrattati b'25 µM H2O2 maħlul f'DMEM b'PBS kienet 56.43 fil-mija. Il-vijabbiltà taċ-ċelluli PC12 ittrattati b'200 µM H2O2 maħlul f'DMEM mingħajr PBS kienet 71.64 fil-mija (Tabella I). Għalhekk, ċelluli PC12 ittrattati b'25 µM H2O2 maħlul f'DMEM b'PBS intgħażlu bħala l-aħjar kundizzjoni biex jiġi stabbilit il-mudell AD.

Meta mqabbel mal-grupp ta 'kontroll, il-vijabbiltà taċ-ċelluli fil-grupp mudell kienet ta' 48.8 fil-mija (P<0.05). compared="" with="" the="" model="" group,="" phgs="" had="" a="" significant="" neuroprotective="" effect="" on="" pc12="" cells.="" the="" cell="" viability="" was="" dose-dependently="" increased="">

PhGs, u l-vijabbiltà taċ-ċelluli PC12 ittrattati b'PhGs f'konċentrazzjonijiet ta '5, 25 u 50 µg/ml kienet 54, 57 u 64 fil-mija, rispettivament (Tabella II).

PhGs jinibixxu r-rilaxx ta 'LDH ikkawżat mill-ħsara miċ-ċelloli PC12. Meta mqabbel mal-grupp ta 'kontroll, il-kontenut ta' LDH tas-supernatant ta 'ċelluli PC12 midruba żdied, li kien inibit minn PhGs b'mod dipendenti fuq il-konċentrazzjoni. Dan ir-riżultat indika li PhGs għandhom effett newroprotettiv sinifikanti fuq iċ-ċelloli PC12 (Fig. 6).

Tabella I. Vijabilità taċ-ċelluli ( fil - mija ) wara trattament H2O2.

Tabella II. Vijabilità taċ-ċelluli wara interferenza tad-droga.

inibit minn PhGs b'mod dipendenti fuq il-konċentrazzjoni. Dan ir-riżultat indika li PhGs għandhom effett newroprotettiv sinifikanti fuq iċ-ċelloli PC12 (Fig. 7).

PhG u l-komponenti tiegħu echinacoside u acteoside isalvaw il-vijabbiltà taċ-ċelluli PC12 midruba. Meta mqabbel mal-grupp mudell, it-trattament b'acteoside żied b'mod sinifikanti l-vijabbiltà taċ-ċelluli PC12 midruba A 1-42-b'mod dipendenti fuq id-doża. PhGs u echinacoside żiedu wkoll b'mod sinifikanti l-vijabbiltà ta 'ċelluli A 1-42-danneġġjati PC12 fil-konċentrazzjonijiet kollha ttestjati (Fig. 8A).

**P<0.05, vs.="" model="" group.="" aβ,="" â-amyloid="" peptide;="" phgs,="" phenylethanoid="" glycosides;="" ech,="" echinacoside;="" as,="">

Meta mqabbel mal-grupp mudell, l-acteoside żied b'mod sinifikanti l-vijabbiltà taċ-ċelloli PC12 ittrattati b'H2O2. PhGs żiedu wkoll il-vijabbiltà taċ-ċelluli PC12 ittrattati b'H2O2, filwaqt li l-effett ma kienx sinifikanti f'konċentrazzjonijiet ta '5 u 25 µg/ml (Fig. 8B). Barra minn hekk, echinacoside żied il-vijabbiltà taċ-ċelluli b'25 µg/ml.

Bħala konklużjoni, acteoside, PhGs u echinacoside eżerċitaw effetti newroprotettivi sinifikanti fuq ċelluli PC12 soġġetti għal korriment b'A 1-42 jew H2O2.

Diskussjoni

L-istress ossidattiv huwa l-mekkaniżmu ewlieni sottostanti newrotossiċità medjata minn A fl-AD (11-13). Għalhekk, l-immirar tal-istress ossidattiv jista 'jirrappreżenta approċċ għat-trattament tal-AD. Fl-istudju preżenti, ġie stabbilit b'suċċess mudell in vitro ta' AD li jinkludi ħsara taċ-ċelluli PC12 indotta minn A 1-42- u H2O2-. Ir-riżultati tal-analiżi MTT, LDH, u MDA wrew li PhGs żiedu l-vijabbiltà taċ-ċelluli, u naqqsu r-rilaxx ta 'LDH u MDA minn ċelluli PC12 soġġetti għal korriment. Jista 'jiġi konkluż li PhGs għandhom effetti newroprotettivi sinifikanti fuq iċ-ċelloli PC12.

Sabiex jitnaqqsu l-effetti ta 'PhGs infushom fuq it-tkabbir taċ-ċelluli PC12 u jipprevjenu proliferazzjoni anormali, id-doża sikura ta' PhGs ġiet iddeterminata f'assaġġ ta 'screening. Ir-riżultati wrew li PhGs f'75, 100, 125, 150, 175 u 200 µg/ml kellhom effett inibitorju sinifikanti fuq iċ-ċelloli PC12 (P<0.05,><0.01), while="" cell="" viability="" remained="">80 fil-mija f'konċentrazzjonijiet ta' 5, 25 u 50 µg/ml. Għalhekk, PhGs fil-konċentrazzjoni ta '5, 25, u 50 µg/ml kienu sikuri għaċ-ċelloli PC12.

Il-ħsara minn A {{0}} kienet affettwata minn ċerti fatturi, inklużi s-solvent, il-ħin tal-inkubazzjoni, u l-kwalità tal-prodott. Fl-istudju preżenti, A 1-42 peptide ġie maħlul fl-ilma (100 µg/ml) u inkubat f'37˚C għal 4 ijiem f'inkubatur tas-CO2 qabel l-użu. Iċ-ċelloli PC12 ġew ittrattati b'A 1-42 f'konċentrazzjonijiet ta '0.5, 1, 1.5, u 2 µM. Ir-riżultati wrew li l-vijabbiltà taċ-ċelluli naqset biż-żieda ta’ A 1-42, u l-vijabbiltà kienet<50% in="" the="" 1,="" 1.5,="" and="" 2="" µm="" aβ1-42="" injury="" groups.="" thus,="" treatment="" of="" pc12="" cells="" with="" 0.5="" µm="" aβ1-42="" for="" 48="" h="" was="" determined="" to="" be="" the="" optimal="" condition="" for="" establishing="" the="" ad="" model.="" aβ25-35="" has="" been="" commonly="" used="" to="" establish="" ad="" models="" due="" to="" its="" low="" cost="" and="" simple="" operation="" (27-29).="" the="" neurotoxicity="" of="" aβ1-42="" is="" significantly="" higher="" than="" that="" of="" aβ25-35,="" and="" aβ1-42="" is,="" therefore,="" the="" optimal="" aβ="" fragment="" for="" establishing="" an="" ad="" model="">

H2O2 huwa ossidanti u H2O2 eċċessiv jista 'jikkawża ħsara ossidattiva u jinduċi apoptożi taċ-ċelluli (30). Fl-istudju preżenti, iċ-ċelloli PC12 ġew ittrattati b'25-500 µM H2O2 maħlul f'DMEM bi jew mingħajr PBS. Ir-riżultati wrew li H2O2 maħlul f'DMEM mingħajr PBS ikkawża proliferazzjoni anormali taċ-ċelluli PC12. Għalhekk, it-trattament taċ-ċelloli PC12 b'25 µM H2O2 maħlul f'DMEM b'PBS kien l-aħjar kundizzjoni biex jiġi stabbilit il-mudell AD. Il-ħsara kkawżata a 1-42-kienet akbar minn H2O2-korriment indott minħabba l-istabbiltà fqira tal-H2O2 u l-effetti tas-solvent.

Meta ċ-ċellula tkun bil-ħsara, it-tnixxija LDH fil-medju tal-kultura tiżdied b'mod sinifikanti. ROS huwa magħruf li jikkawża l-produzzjoni ta 'MDA. Il-kontenut ta 'MDA u LDH, għalhekk, jirrifletti l-ammont ta' ħsara ossidattiva. Fl-istudju preżenti, l-attività ta 'LDH u MDA indotta mill-ħsara naqset b'dożi dejjem jiżdiedu ta' PhGs. Dawn ir-riżultati indikaw li PhGs għandu effett newroprotettiv sinifikanti fuq iċ-ċelloli PC12. L-assaġġ MTT wera li PhGs urew effett newroprotettiv li jiddependi mid-doża fuq iċ-ċelluli PC12.

Bħala konklużjoni, ġie stabbilit b'suċċess mudell in vitro ta' AD li jinkludi ħsara taċ-ċelluli PC12 indotta minn A 1-42- u H2O2-. It-trattament b'PhGs żied il-vijabbiltà taċ-ċelluli u naqqas ir-rilaxx ta' LDH u MDA minn ċelluli PC12 ittrattati b'A 1-42 jew H2O2. PhGs kellhom effett newroprotettiv sinifikanti fuq il-ħsara taċ-ċelluli kkaġunata minn A 1-42- jew H2O2-.

Referenzi

1. Qu M, Zhou Z, Xu S, Chen C, Yu Z, u Wang D: L-espressjoni eċċessiva ta 'Motalin tnaqqas in-newrotossiċità indotta minn beta-amyloid fiċ-ċelloli SH-SY5Y. Brain Res 1368: 336-345, 2011.

2. Uzun S, Kozumplik O, and Folnegović-Small V: Dimenzja ta' Alzheimer: reviżjoni tad-dejta attwali. Collegium antropologicum 35: 1333-1337, 2011.

3. Brookmeyer R, Johnson E, Ziegler-Graham K, u Arrighi HM: Tbassir tal-piż globali tal-marda ta 'Alzheimer. Alzheimer u dimenzja 3: 186-191, 2007.

4. Castellani RJ, Rolston RK u Smith MA: marda ta 'Alzheimer. Disease-a-month 56: 484-546, 2010.

5. Mattson MP: Mogħdijiet lejn u 'l bogħod mill-marda ta' Alzheimer. Natura 430: 631-639, 2004.

6. Gouras GK, Tsai J, Naslund J, et al: Intraneuronal A 42 accumulation in human brain. Il-ġurnal Amerikan tal-patoloġija 156: 15-20, 2000.

7. Shen C, Chen Y, Liu H, et al: Il-perossidu ta 'l-idroġenu jippromwovi l-produzzjoni A permezz ta' attivazzjoni dipendenti fuq JNK ta '-secretase. Ġurnal tal-Kimika Bijoloġika 283: 17721-17730, 2008.

8. Shih PH u Wu CH, Yeh CT u Yen GC: Effetti protettivi ta 'anthocyanins kontra ħsara kkaġunata mill-amyloid -peptide fiċ-ċelloli Neuro-2A. Journal of agricultural and food chemistry 59: 1683-1689, 2011.

9. Figueiredo CP, Bicca MA, Latini A, Prediger R, Medeiros R, u Calixto JB: L-aċidu foliku flimkien ma '-tocopherol itaffu n-newrotossiċità indotta mill-amilojde- -permezz tal-modulazzjoni tal-attività tal-kumplessi mitokondrijali. Ġurnal tal-marda ta' Alzheimer: JAD 24: 61-75, 2010.

10. Dumont M, Lin MT, u Beal MF: Mitokondrija u strateġiji terapewtiċi mmirati antiossidanti għall-marda ta 'Alzheimer. Ġurnal tal-marda ta 'Alzheimer: JAD 20: S633, 2010.

11. Sonnen JA, Breitner JC, Lovell MA, Markesbery WR, Quinn JF, and Montine TJ: Ħsara medjata minn radikali ħielsa lill-moħħ fil-marda ta 'Alzheimer u l-mudelli tal-ġrieden transġeniċi tagħha. Bijoloġija Radikali Ħielsa u Mediċina 45: 219-230, 2008.

12. Lin MT u Beal MF: Disfunzjoni mitokondrijali u stress ossidattiv f'mard newrodeġenerattiv. Natura 443: 787-795, 2006.

13. Trushina E u McMurray C: Stress ossidattiv u disfunzjoni mitokondrijali f'mard newrodeġenerattiv. Newroxjenza 145: 1233-1248, 2007.

14. Huang SH, Lin CM, u Chiang BH: Effetti protettivi ta 'l-estratt ta' Angelica Sinensis fuq newrotossiċità indotta minn amilojde-peptide. Phytomedicine 15: 710-721, 2008.

15. Burhans WC u Heintz NH: Iċ-ċiklu taċ-ċelluli huwa ċiklu redox: jorbot miri speċifiċi għall-fażi mad-destin taċ-ċelluli. Bijoloġija Radikali Ħielsa u Mediċina 47: 1282-1293, 2009.

16. Xue HY, Gao GZ, Lin QY, Jin LJ, u Xu YP: Effetti protettivi ta 'aucubin fuq apoptosi indotta minn HO fiċ-ċelloli PC12. Fitoterapija

18. Liu, Fx Wang, Xw Luo L, u Xin H, Na B u Wang Xf: L-effetti ta 'glycosides ta' cistanche fuq it-tagħlim u l-memorja fil-marda ta 'Alzheimer indotta minn beta-amyloid peptide fil-ġrieden u l-mekkaniżmu possibbli tagħha. Bullettin Farmakoloġiku Ċiniż 22: 595, 2006.

19. Bao B, Tang X, Tian H, Tong Y, Wu W, and Hong Y: Attività antiossidanti ta' estratti minn Cistanche tubulosa ħajja tad-deżert (Schrenk) R. Wright Shanghai J Tradit Chin Med 44: 68-71, 2010 .

20. Jiang Y, Li S, Wang Y, Chen X, u Tu P: Differenzjazzjoni ta 'Herba Cistanches bil-marki tas-swaba' b'kromatografija likwida ta 'prestazzjoni għolja-firxa ta' dajowd-detezzjoni-spettrometrija tal-massa. Ġurnal tal-Kromatografija A 1216: 2156-2162, 2009.