Dieta b'fosfru għoli Tinduċi regolazzjoni 'l fuq tal-espressjoni tal-MRNA Bmp2 u Spp1 fil-kliewi tal-firien

Biex tiċċara l-mekkaniżmu ta ' l-iżvilupp ta 'nefrokalċinożiindott minn adieta b'ħafna fosfru (P)., aħna ffukajna fuq proteini relatati mal-għadam bħall-proteina morfoġenetika tal-għadam 2 u l-osteopontin. Dan l-istudju investiga l-effetti ta 'dieta b'ħafna P fuq l-espressjoni tal-mRNA ta' Bmp2 u Spp1 fil-kliewi tal-firien. Il-firien Wistar kienu maqsuma f'żewġ gruppi u mitmugħa dieta ta 'kontroll (grupp ta' kontroll) jew dieta ta 'P għoli (grupp ta' P għoli).Kalċju tal-kliewiu l-konċentrazzjonijiet ta 'P żdiedu b'mod sinifikanti fil-grupp ta' P għoli meta mqabbel mal-grupp ta 'kontroll. L-espressjoni ta 'mRNA kemm ta' Bmp2 kif ukoll ta 'Spp1 żdiedet b'mod sinifikanti fil-grupp ta' P għoli meta mqabbel mal-grupp ta 'kontroll. Dawn ir-riżultati jindikaw li dieta b'ħafna P tinduċi regolazzjoni 'l fuq ta' Bmp2 u Spp1mRNA fil-kliewi.

Kliem ewlieni:dieta b'ħafna fosfru, nefrokalċinożi, Bmp2, Spp1,kliewi, far

Agħfas HAWN BIEX IKseb ESTRAT TA' CISTANCHE ORGANIKU NATURALI B'25% ECHINACOSIDE U 9% ACTEOSIDE GĦALL-FUNZJONI TAL-KLIEI

Introduzzjoni

Nefrokalċinożihuwa kkaratterizzat minn depożiti tal-kalċju (Ca) fil-parenkima renali. Fosfru tad-dieta(P), b'mod partikolari, huwa fattur ċentrali fl-iżvilupp ta 'dan id-disturb. Amministrazzjoni ta 'dieta għolja P intwera li tirriżulta f'żieda fil-konċentrazzjoni ta' Ca fil-kliewiu depożiti ta' Ca fil-parenkima renali1-6). Għalkemm l-effett ta 'dieta għolja P fuq l-iżvilupp ta' nefrokalċinożi kien il-fokus ta 'studji li għaddejjin, ftit hu magħruf dwar il-mekkaniżmu responsabbli għall-iżvilupp ta' dan id-disturb. Għalhekk, tinħtieġ riżoluzzjoni f'waqtha ta' din il-kwistjoni.

Aħna rrapportajna li wara eżami istoloġiku bl-użu ta 'mikroskopija elettronika ta' trażmissjoni, ġew osservati kristalli f'forma ta 'labra bħal hydroxyapatite fit-tubuli renali tal-firien mitmugħa b'dieta ta' P għoli6, 7). Mikroanaliżi tar-raġġi X indikat li d-depożiti ta 'Ca indotti minn dieta b'ħafna P jinkludu prinċipalment Ca u P7). Dawn ir-riżultati wrew li d-depożiti ta 'Ca indotti minn dieta b'ħafna P huma forma ta' hydroxyapatite. Ibbażat fuq din is-sejba, aħna nippopolaw li l-iżvilupp tan-nefrokalċinożi huwa kkontrollat ​​minn mekkaniżmu simili għal dak fil-formazzjoni tal-għadam. Għalhekk, l-istudju preżenti ffoka fuq proteini assoċjati mal-għadam bħall-proteina morfoġenetika tal-għadam 2 (BMP2). BMP2 huwa fattur osteoġeniku li juri attività li tinduċi l-osteoġenesi, 9). Ta' min jinnota li BMP2 ġie identifikat bħala fattur li jinduċi l-formazzjoni tal-għadam ektopiku10, 11). Għalhekk, aħna ipoteżijna li jekk BMP2 għandu rwol importanti fl-iżvilupp ta 'nefrokalċinożi, l-espressjoni ta' din il-proteina fil-kliewi tkun regolata 'l fuq minn dieta b'P għolja. L-istudju preżenti kellu l-għan li jiddetermina jekk dieta ta 'P għolja taffettwax l-espressjoni ta' mRNABmp2 fil-kliewi.

Sadanittant, l-istudju preċedenti tagħna rrapporta li dieta ta 'P għolja tgħolli l-espressjoni ta' osteopontin (OPN) fit-tubuli renali bl-użu ta 'analiżi immunoistokimika, li tissuġġerixxi li OPN jista' jkun implikat fl-iżvilupp ta 'depożiti ta' Ca indotti minn dieta ta 'P għoli12). Għalhekk, investigajna l-bidliet fl-espressjoni tal-mRNA Spp1 fil-kliewi wkoll.

Ir-riżultati ta 'dan l-istudju jistgħu jipprovdu għarfien siewi dwar il-mekkaniżmu responsabbli għall-iżvilupp ta' nefrokalċinożi indotta minn dieta b'ħafna P.

materjali u metodi

Annimali u dieti. L-istudju preżenti ġie approvat mill-Kumitat għall-Użu tal-Annimali tal-Università tal-Agrikoltura ta 'Tokjo, u l-annimali kollha ġew miżmuma mill-linji gwida tal-università għall-kura u l-użu ta' annimali tal-laboratorju (Approvazzjoni Nru 300049).

Huwa importanti li wieħed jinnota li l-firien nisa jiżviluppaw nefrokalċinożi aktar faċilment mill-firien irġiel13, 14). Barra minn hekk, aħna rrapportajna li dieta ta 'P għoli żżid l-espressjoni OPN fit-tubuli renali ta' firien nisa12). L-istudju preżenti mbagħad uża firien nisa bħala annimali sperimentali. Firien Wistar femminili ta 'erba' ġimgħat (Clea Japan, Tokyo, Japan) kienu miżmuma f'gaġeġ individwali ta 'malji tal-wajer tal-istainless steel. Matul il-perjodu sperimentali, il-gaġeġ kienu jinsabu f'kamra b'dawl ikkontrollat ​​taħt dawl ta' 12-h: ċiklu skur (dawl, 0800-2000 h), temperatura ta' 22 ± 1 grad u umdità relattiva ta' 60% sa 65%.

Il-kompożizzjoni tad-dieti sperimentali tidher fit-Tabella 1. Id-dieti sperimentali ġew ippreparati b'referenza għad-dieta AIN-93G15). Id-dieti sperimentali kien fihom żewġ konċentrazzjonijiet differenti ta' P (dieta ta' kontroll, 0.3%; dieta ta' P għoli, 1.5%). Il-konċentrazzjoni P fid-dieta b'ħafna P ġiet issettjata għal 1.5%, peress li l-istudji preċedenti tagħna osservaw likonċentrazzjoni P tad-dietata' 1.5% jinduċi nefrokalċinożi severa6, 7, 12, 14) u espressjoni għolja ta' OPN12). Id-dieti sperimentali kollha kellhom l-istess konċentrazzjoni ta' Ca (0.5%). Il-konċentrazzjonijiet P u Ca, kif determinati mill-analiżi tad-dieti sperimentali, huma murija fit-Tabella 1. Qabel il-bidu tal-istudju, il-firien kollha ġew akklimatizzati għal 7 ijiem, li matulhom ingħataw aċċess liberu għad-dieta ta 'kontroll u ilma dejonizzat. . Wara l-perjodu ta 'akklimatizzazzjoni, il-firien ġew maqsuma b'mod każwali f'żewġ gruppi b'piżijiet medji tal-ġisem simili u mitmugħa jew id-dieta ta' kontroll (grupp ta 'kontroll) jew id-dieta ta' P għoli (grupp ta 'P għoli) għal 14-il jum. Il-firien ingħataw aċċess liberu għad-dieti sperimentali assenjati u l-ilma dejonizzat matul il-perjodu sperimentali. Fl-aħħar tal-perjodu sperimentali, il-firien ġew ewtanizzati b'injezzjoni intraperitoneali tat-taħlita anestetika (medetomidine, midazolam u butorphanol) u nġabru kampjuni tad-demm u tal-kliewi għall-analiżi. Kampjuni tad-demm ġew ċentrifugati u s-supernatanti ġew użati bħala kampjuni tas-serum. Il-kliewi tneħħew u l-kapsula renali twarrbet. Il-kampjuni tas-serum u tal-kliewiġew maħżuna f'-80 grad sakemm ikunu meħtieġa għall-analiżi. Il-kilwa tal-lemin intużat għal analiżi kwantitattiva ta 'Bmp2 u Spp1 mRNA, u l-kilwa tax-xellug intużat għall-analiżi tal-konċentrazzjonijiet ta' Ca u P.

Analiżi minerali.

Kampjuni tad-dieti sperimentali u l-kliewi ġew irmied f'550 grad għal 48 siegħa f'forn muffle, u minerali ġew estratti f'1 mol / L ta 'HCl għall-analiżi. Il-konċentrazzjonijiet ta’ Ca fid-dieti sperimentali u l-kliewi ġew determinati permezz ta’ spettrofotometrija ta’ assorbiment atomiku16). Konċentrazzjonijiet P fid-dieti sperimentali u l-kliewi ġew analizzati bl-użu tal-metodu ta 'Gomori17).

Analiżi kwantitattiva ta 'Bmp2 u Spp1 mRNA.

L-RNA totali ġie iżolat mill-kliewi omoġenizzat bl-użu ta 'reaġent TRIzol (Life Technologies, CA, USA) skont l-ispeċifikazzjonijiet tal-manifattur. L-ammont u l-purità tal-RNA ġew ivvalutati bl-użu ta' NanoDrop 2000c (Thermo Fisher Scientific, MA, USA). cDNA ġie sintetizzat bl-użu tas-SuperScript III First-Strand Synthesis SuperMix għal qRT-PCR (Life Technologies) u mbagħad suġġett għal RT PCR kwantitattiv f'ħin reali bl-użu ta 'SYBR Select Master Mix (Teknoloġiji tal-Ħajja). Primers speċifiċi18-20) intużaw għall-analiżi ta' Bmp2 ('il quddiem, 5'-ACCGTGCTCAGCTTCCATCAC-3'; b'lura, 5'-TTCCTGCATTTGTTCCCGAAA-3'), Spp1 ('il quddiem, 5'- TGAGACTGGCAGTGGTTTGC-3'; bil-maqlub, 5'-CCACTTTCACCGGGAGACA-3'), u Gapdh (quddiem, 5'-TGGGAAGCTGGTCATCAAC-3'; bil-maqlub, 5'-GCAT CACCCCATTTGATGTT-3 '). Ir-reazzjoni tal-PCR f'ħin reali twettqet bl-użu ta 'Sistema StepOne Real-Time PCR (Applied Biosystems, CA, USA), u l-livelli tal-espressjoni tal-mRNA ġew normalizzati għal-livelli tal-mRNA ta' Gapdh. Il-valur tal-grupp ta 'kontroll kien ikkunsidrat bħala 1.00.

Analiżi statistika.

Ir-riżultati huma ppreżentati bħala l-mezzi ± SEM għal kull grupp ta' 6 firien. Wara li wettaq test F biex tiddetermina l-omoġeneità tal-varjanzi, intuża t-test ta' Student biex jiddetermina differenzi sinifikanti bejn iż-żewġ gruppi. Jekk l-omoġeneità tal-varjanzi ma kinitx ugwali, intuża t-test ta' Welch minflok it-test t ta' Student. Id-differenzi kienu kkunsidrati sinifikanti f'p ＜ 0.05

Riżultati

Piż tal-ġisem, teħid ta 'ikel, u analiżi tas-serum.

Il-piż tal-ġisem finali u t-teħid ta 'ikel naqsu b'mod sinifikanti fil-grupp ta' P għoli meta mqabbel mal-grupp ta 'kontroll (Tabella 2).

Piż tal-kliewi u konċentrazzjonijiet minerali.

Il-piżijiet imxarrbin u niexfa tal-kliewi żdiedu b'mod sinifikanti fil-grupp ta 'P għoli meta mqabbel mal-grupp ta' kontroll (Tabella 3). Il-konċentrazzjonijiet ta 'Ca u P fil-kliewi żdiedu wkoll b'mod sinifikanti fil-grupp ta' P għoli meta mqabbel mal-grupp ta 'kontroll.

Espressjoni tal-mRNA renali Bmp2 u Spp1. Il-livelli ta 'mRNA Bmp2 fil-grupp ta' P għoli żdiedu b'mod sinifikanti meta mqabbla mal-grupp ta 'kontroll (Fig. 1A). L-espressjoni tal-mRNA ta 'Spp1 żdiedet ukoll b'mod sinifikanti fil-grupp ta' P għoli meta mqabbel mal-grupp ta 'kontroll (Fig. 1B).

Servizz ta 'Appoġġ Ta' Wecistanche-L-akbar esportatur ta' cistanche fiċ-Ċina:

Email:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Shop Għal Aktar Speċifikazzjonijiet Dettalji:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop