Gomisin N Inibixxi l-Melanoġenesi Permezz tar-Regolamentazzjoni tal-Mogħdijiet ta' Sinjali PI3K/Akt U MAPK/ERK fil-Melanoċiti

Kuntatt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Astratt: Gomisin N, wieħed mill-komposti tal-lignan misjuba f'Schisandra Chinensis intwera li jippossjedi attivitajiet anti-ossidattivi, anti-tumoriġeniċi u anti-infjammatorji f'diversi studji. Hawnhekk nirrapportaw, għall-ewwel darba, l-effikaċja anti-melanoġenika ta' Gomisin N fil-mammiferi. ċelluli kif ukoll fl-embrijuni tal-fish zebra. Gomisin N naqqas b'mod sinifikanti l-kontenut ta 'melanin mingħajr tossiċità ċellulari. Għalkemm ma kienx kapaċi jimmodula l-attività katalitika tal-faqqiegħtyrosinasein vitro,Gomisin Nirregolat il-livelli ta' espressjoni ta' proteini ewlenin li jiffunzjonaw fihommelanoġenesi. Gomisin N riċettur ta' melanocortin 1 regolat 'l isfel (MC1R), adenylyl cyclase 2, fattur ta' traskrizzjoni assoċjat mal-mikroftalmija (MITF), tyrosinase,tyrosinase-proteina relatata-1(TRP-1), u proteina relatata mat-tyrosinase-2 (TRP-2). Barra minn hekk, iċ-ċelluli Melan-A ttrattati b'Gomisin N urew livelli ogħla ta' p-Akt u p-ERK, li jimplika li l-attivazzjoni tal-mogħdijiet PI3K/Akt u MAPK/ERK tista' tiffunzjona biex tinibixximelanoġenesi. Aħna vvalidajna wkoll li Gomisin Naqqas il-produzzjoni tal-melanin billi rrepressa l-espressjoni tal-MITF,tyrosinase, TRP-1, u TRP-2fiċ-ċelloli tal-ġurdien u tal-bniedem kif ukoll fl-iżvilupp ta' embrijuni tal-fish zebra. Kollettivament, nikkonkludu liGomisin Njinibixxi s-sintesi tal-melanin billi jrażżan l-espressjoni ta 'MITF u melanogenicenzymes, probabbilment permezz tal-modulazzjoni tal-mogħdijiet PI3K/Akt u MAPK/ERK.

Kliem ewlieni:Schisandra Chinensis;Gomisin N; lignan;melanoġenesi; jbajdu l-ġilda

cistanche għandhom funzjoni li jbajdu l-ġilda

1. Introduzzjoni

Il-melanin huwa pigment li jinsab fil-biċċa l-kbira tal-organi tal-annimali inklużi l-ġilda, ix-xagħar, l-għajnejn, il-widna ta’ ġewwa, l-għadam, il-qalb u l-moħħ [1,2].Melanogenesishuwa proċess kumpless fejn huma involuti mogħdijiet multipli tas-sinjalar. Ir-riċettur tal-melanocortin 1 (MC1R) huwa regolatur ewlieni filmelanoġenesi, sinjalazzjoni permezz tal-ligandi tiegħu bħall-ormon li jistimula l-melanoċiti (MSH) u l-ormon adrenokortikotropiku (ACTH) [3]. Il-melanin tal-ġilda huwa bijosintetizzat minn melanoċiti fl-epidermide u mbagħad trasferit għal keratinoċiti, fejn għandhom rwoli importanti fil-protezzjoni tal-ġilda billi jassorbu r-radjazzjoni UV mid-dawl tax-xemx u jneħħu r-radikali ħielsa reattivi [4,5]. Is-sintesi u t-trasferiment tal-melanin fil-ġilda u l-follikuli tax-xagħar huma regolati mid-disponibbiltà tal-prekursuri tagħha [6]. L-tyrosine u L-dihydroxyphenylalanine (L-DOPA), sottostrati ewlenin ta 'enzimi melanoġeniċi, jiffunzjonaw ukoll bħala regolaturi li jixbħu l-ormoni fil-melanoġenesi [7]. Min-naħa l-oħra, il-produzzjoni żejda ta 'melanin tirriżulta fi tħassib tal-ġilda mhux mixtieq bħal freckles u melasma [8,9]. Il-melanogenesis tista' taffettwa l-imġieba ta' melanocytes normali u malinni billi timmodula l-proprjetajiet elastiċi taċ-ċelloli [10]. Għalkemm ir-riċetturi għas-serotonin u l-melatonin espressi fiċ-ċelloli tal-ġilda għandhom rwol ewlieni fiż-żamma tal-omeostasi ċellulari, il-produzzjoni eċċessiva ta 'melanin permezz ta' bidliet ormonali mhux ikkontrollati tista 'tikkawża kundizzjonijiet patoloġiċi fil-ġilda [11].

Għalhekk, kien hemm sforzi estensivi biex jiċċaraw mekkaniżmi molekulari li jikkontrollaw il-melanoġenesi bħala l-pass primarju għat-trattament ta 'disturbi iperpigmentarji tal-ġilda. Barra minn hekk, diversi tipi ta 'jbajdu l-ġildaaġenti li jinibixxu s-sintesi tal-melanin ġew identifikati minn estratti tal-pjanti u mhux tal-pjanti u użati kummerċjalment fil-kożmeċewtiċi [12,13]. L-aġenti li jbajdu l-aktar użati jinkludu hydroquinone, mequinol, arbutin, aċidu Kojic, aċidu askorbiku u retinoicacid [12,14]. Madankollu, hemm diversi limitazzjonijiet tal-użu tagħhom fit-trattament ta 'sintomi akuti jew kroniċi ta' iperpigmentazzjoni fil-bnedmin. Pereżempju, hydroquinone, għalkemm ilu jintuża għad-depigmentazzjoni mis-sittinijiet, jista 'jikkawża irritazzjoni tal-ġilda u dermatite tal-kuntatt [15,16]. Iwassal ukoll għal ħsara fid-DNA billi żżid il-produzzjoni ta 'speċi ta' ossiġnu reattiv u l-iżvilupp ta 'okronożi eżoġena fiċ-ċelloli tal-mammiferi [17,18]. Oħrajn magħrufatyrosinaseinibituri bħall-aċidu Kojiku u l-aċidu askorbiku mhux biss għandhom penetrazzjoni fqira tal-ġilda, stabbiltà, u effikaċja li jbajdu, iżda wkoll jistgħu jikkawżaw ċitotossiċità, dermatite u eritema minn użu fit-tul [19,20]. F'dan ir-rigward, hemm bżonn dejjem akbar li jiġu żviluppati aġenti li jbajdu aktar sikuri u effettivi għat-trattament tal-iperpigmentazzjoni tal-ġilda umana. Ħwawar naturali użati fil-mediċina tradizzjonali jistgħu jipprovdu sorsi alternattivi biex jiġu identifikati aġenti ġodda li jbajdu li jikkontrollaw il-passi ewlenin fihommelanoġenesib'inqas jew bl-ebda effetti sekondarji [21].

Schisandra chinensis, magħrufa wkoll bħala berry tat-togħma fina tat-Tramuntana, tinsab b'mod naturali fil-grigal taċ-Ċina, fil-Lvant Imbiegħed tar-Russja, il-Ġappun u l-Korea [22]. Dan l-impjant ilu jintuża għat-trattament ta 'għama bil-lejl, ħruq tal-ġilda, infjammazzjoni asettika, u mard tal-fwied fil-mediċina orjentali tradizzjonali [23,24]. L-estratt tal-frott ta 'S. chinensis u l-komposti tal-lignan tiegħu intwerew li jippossjedu diversi effetti farmakoloġiċi fil-linji taċ-ċelluli murini. Pereżempju, Schisandra A u C għandhom effetti anti-ossidattivi, filwaqt li Schisandra B għandha attivitajiet anti-fibrotiċi, anti-infjammatorji, anti-ossidanti u anti-apoptotiċi [25]. Kompost ieħor tal-lignanGomisin N(Figura 1A) ġie rrappurtat li apoptosi indotta mill-istress soppressiv billi jinibixxi r-rilaxx ta 'ċitokromu Ċ minn mitokondrija għaċ-ċitoplasma, il-qsim ta' caspase 3 u PARP, u transizzjoni tal-permeabilità mitokondrijali indotta minn Ca2 plus f'kardjomijoċiti tal-firien H9c2 [7,8]. Interessanti, bosta studji li jużaw mudelli tal-ġurdien u linji taċ-ċelluli tal-ġilda umana wrew il-potenzjal terapewtiku ta 'S. chinensis għat-trattament ta' disturbi tal-ġilda.Lee et al. irrapporta li l-estratt tal-metanol tal-frott ta 'S. chinensis itaffu s-sintomi tad-dermatite tal-kuntatt billi naqqas il-produzzjoni ta' ċitokini pro-infjammatorji bħal TNF- u IFN- meta applikati topikament [8,24]. Kang et al. wera li l-estratt ta 'l-ilma ta' Schisandra Fructus inibixxa l-attivazzjoni ta' IκB, u b'hekk irażżan il-produzzjoni ta' TNF- , IL-6, u GM-CSF fil-linja taċ-ċelluli mast umani HMC-1 [26].Dawn is-sejbiet wassluna biex nippostulaw. li S. chinensis lignans jistgħu jaffettwaw il-funzjonijiet taċ-ċelluli tal-ġilda b'mod aktar wiesa'. F'dan l-istudju, fittxejna li ninvestigaw ir-rwoli putattivi ta 'Gomisin N, wieħed mill-komposti lignan maġġuri f'S. Chinensis, fir-regolamentazzjonimelanoġenesi, u b'hekk jevalwaw l-użu potenzjali tiegħu bħala aġent akkożmeċewtiku. Hawnhekk, nirrapportaw danGomisin Njinibixxi l-bijosintesi tal-melanin mingħajr tossiċità ċellulari fiċ-ċelloli tal-bniedem u tal-ġrieden, kif ukoll fl-embrijuni tal-fish zebra.

2. Riżultati

2.1. Effetti ta 'Gomisin N fuq Formazzjoni ta' Melanin u Vijabilità taċ-Ċelloli

Biex tivverifika l-effetti ta’ Gomisin N fuqmelanoġenesi, aħna trattati melanocytes ġurdien b'konċentrazzjonijiet differenti ta 'Gomisin Ngħal 72 siegħa, u mbagħad ivvaluta bidliet fil-kontenut tal-melanin. Gomisin Ntreatment naqqas il-kontenut ta 'melanin kemm fil-linja taċ-ċelluli normali tal-melanocyte Melan-A kif ukoll fiċ-ċelloli B16F10melanoma b'mod dipendenti fuq id-doża mingħajr tossiċità ċellulari (Figura 1B, C). Aħna osservajna li l-Gomisin N inibixxi l-produzzjoni tal-melanin indotta minn -MSH fiċ-ċelloli B16F10, li kienet komparabbli mar-riżultati miksuba bit-trattament PTU [27] (Figura 1C). Biex tevalwa jekk it-tnaqqis tal-melanin fuqGomisin Nit-trattament huwa dovut għal attività mnaqqsa ta 'tyrosinase, għamilna assay ta' L-DOPAstaining f'ċelluli normali tal-melanoċiti epidermali umani (NHEM). Kif muri fil-Figura 1E, iċ-ċelluli NHEM ittrattati b'Gomisin N urew livelli mnaqqsa ta 'L-DOPA meta mqabbla ma' ċelluli mhux ittrattati. Madankollu, l-effett inibitorju ta 'Gomisin N fuq il-produzzjoni tal-melanin ma kienx sinifikanti fiċ-ċelluli MNT-1 tal-melanoma umana (Figura 1D) .

2.2. Effetti ta 'Gomisin N fuq l-Attività Tyrosinase

Biex teżamina jekkGomisin Njinibixxityrosinaseattività in vitro, użajna faqqiegħ tyrosinaseand B16 melanoma cell lysates. L-aċidu kojiku, inibitur ta 'tyrosinase magħruf, intuża bħala kontroll pożittiv. Meta ttrattat b'tirosinażi tal-faqqiegħ, filwaqt li l-aċidu Kojic naqqas b'mod sinifikanti l-attività enżimatika, Gomisin N ma wassal għall-ebda bidla fil-konverżjoni ta 'L-DOPA għal dopachrome (Figura 2A).Madankollu, meta ttrattat għal ċelloli tal-melanoma B16, Gomisin N irriżulta fi tnaqqis. fityrosinaseattività tal-lisat taċ-ċelluli b'mod dipendenti mid-doża (Figura 2B). Barra minn hekk, meta ttrattat flimkien maċ-ċelloli -MSH inB16,Gomisin Nbiddel iż-żieda fil-formazzjoni ta 'dopachrome stimulata minn -MSH (Figura 3C). Notevolment, Gomisin N deher li kien aktar effettiv mill-aċidu Kojic biex jinibixxi ċ-ċellulari.attività tyrosinaseta 'ċelluli B16 fuq stimolu -MSH. Dawn is-sejbiet jimplikaw li l-effett inibitorju ta 'GomisinN fuq il-produzzjoni ta' melanin osservat fiċ-ċelloli tal-ġurdien u tal-bniedem (Figura 1) mhuwiex minħabba l-funzjoni tiegħu li jinibixxi direttament l-attività katalitika ta 'tyrosinase. Madankollu, għadu possibbli li Gomisin N jirregola l-espressjoni ta’ tyrosinase jew proteini oħra li għandhom rwoli ewlenin fil-melanoġenesi.

2.3. Effetti ta 'Gomisin N fuq l-Inattivazzjoni tal-Pathway ta' Sinjali MC1R

Fittixna li niċċaraw il-mekkaniżmu sottostanti responsabbli għall-effett inibitorju ta 'GomisinN fuq il-produzzjoni tal-melanin. Aħna rraġunajna hekkGomisin Njistgħu jirregolaw proteini tas-sinjalar li huma involutimelanoġenesiu b'hekk jinibixxu s-sintesi tal-melanin. Ir-riċettur tal-melanocortin 1 (MC1R) huwa riċettur akkoppjat mal-proteini G amelanoċitiċi li jiffunzjona bħala regolatur ewlieni fis-sintesi tal-melanin. L-attivazzjoni ta 'MC1R mill-ligand tiegħu -MSH jew l-ormon adrenokortikotropiku (ACTH) twassal għal żieda fl-adenyyl cyclase, li mbagħad tirregola l-livelli ta' cAMP intraċellulari [2,3]. Konsegwentement, il-livell ta' traskrizzjoni ta' MITF jiżdied permezz tal-mogħdija ta' Protein kinase-C (PKA)/element-responsive element-bindingprotein (CREB) [2,28]. Biex nevalwaw l-effett regolatorju ta 'Gomisin N fuq il-passaġġ ta' sinjalazzjoni MC1R, aħna ċċekkjaw il-livelli ta 'espressjoni ta' MC1R u l-molekuli ta 'sinjalazzjoni downstream tiegħu wara t-trattament taċ-ċelloli Melan-A b'Gomisin N. Osservajna li Gomisin N irregola b'mod sinifikanti l-livelli ta' proteina kemm ta 'MC1R kif ukoll ta' adenylyl cyclase 2. b'mod dipendenti mid-doża (Figura 3A–C).Kif mistenni,Gomisin N-ċelluli ttrattati wkoll urew livelli mnaqqsa ta 'proteini ta' MITF u l-miri magħrufa tiegħu tyrosinase, TRP -1, u TRP -2 (Figura 3A, D-G). Dawn is-sejbiet jissuġġerixxu li Gomisin N jinibixxi l-enzimi li jipproduċu l-melanin billi jinattiva l-MITF permezz tal-mogħdija tas-sinjalar MC1R.

2.4. Effetti ta' Gomisin N fuq il-Fosforilazzjoni ta' Akt u ERK1/2 fiċ-Ċelloli Melan-A

Il-mogħdijiet PI3K/Akt u MAPK/ERK huma magħrufa li huma involuti fil-melanoġenesi li jirregolaw mit-traskrizzjoni jew wara t-traskrizzjoni MITF [29,30]. Biex nevalwaw jekk GomisinN taffettwax dawn il-mogħdijiet ta 'sinjalazzjoni, aħna evalwajna l-istatus ta' fosforilazzjoni ta 'Akt u ERK1/2 mill-analiżi Western blot. Kif muri fil-Figura 3H–J, trattament ta 'doża għolja (30 µM) ta'Gomisin Ntejbet b'mod sinifikanti l-fosforilazzjoni kemm ta 'Akt kif ukoll ta' ERK. Din id-dejta tindika li l-effett inibitorju ta 'Gomisin N fuqmelanoġenesix'aktarx li jkun assoċjat mal-mogħdijiet P13K/Akt u MAPK/ERK.

2.5. Gomisin N Inibit Melanogenesis fl-Embrijuni Zebrafish

Imbagħad immiraw li neżaminaw jekk Gomisin N huwiex effettiv fl-inibizzjonimelanoġenesiin vivo. Għal dan il-għan, ittrattajna l-embrijuni tal-fish zebra b'Gomisin N għal 72 siegħa f'konċentrazzjonijiet ta '1, 10, 20, u 30 µM, u mbagħad imkejla l-livelli ta' espressjoni ta 'proteini melanoġeniċi. Aħna osservajna li t-trattament ta 'Gomisin N inibixxi l-formazzjoni ta' melanin fl-iżvilupp ta 'embrijuni ta' zebrafish.Gomisin Nembrijuni ttrattati showeda tnaqqis fil-kontenut ta 'melanin b'mod dipendenti fuq il-konċentrazzjoni meta mqabbla mal-kontroll mhux ittrattat (Figura 4). Sibna wkoll li l-livelli tal-proteini tatyrosinase, MITF, TRP-1, u TRP-2 tnaqqsu bit-trattament ta' Gomisin N (Figura 5). Dawn ir-riżultati juru li Gomisin N jinibixxi l-melanogenesis in vivo billi jirregola l-fattur ta’ traskrizzjoni MITF u l-miri tiegħutyrosinase, TRP-1,u TRP-2.

2.6. Gomisin N qaleb il-Melanoġenesi indotta minn Rapamycin fl-MNT tal-Bniedem-1

Għalkemm Gomisin N inibit b'mod sinifikantimelanoġenesifiċ-ċelloli Melan-A u B16 kif ukoll f'embrijuni ta' inzebrafish, aħna ma osservajnax l-effett tiegħu fuq iċ-ċelloli tal-melanoma MNT-1 tal-bniedem. Aħna nistennew li l-effett ta' Gomisin N jista' jiġi skopert fiċ-ċelloli MNT-1 taħt il-kondizzjoni fejn il-melanoġenesi hija rregolata bi stimolu xieraq. Rapamycin intwera li jinduċi melanoġenesi billi jżid l-attività ta' tyrosinase u l-livelli ta' proteini ta' MITF, tyrosinase, TRP-1, u TRP-2 [31], parzjalment permezz tal-attivazzjoni tal-awtofaġija [32]. Aħna mmonitorjaw il-livelli ta 'tyrosinase, MITF,TRP-1, u TRP-2 f'ċelluli MNT-1 b'analiżi Western blot, wara ko-trattament b'Gomisin N andrapamycin. It-trattament b'Rapamycin indotta b'mod sinifikanti l-livelli ta' MITF, TRP-1, u TRP-2 iżda ma kellu l-ebda effett fuqtyrosinaselivelli (Figura 6). Madankollu, it-trattament ta' Gomisin N qaleb b'mod sinifikanti l-effetti tar-rapamiċina fuq MITF, TRP-1, u TRP-2 b'mod dipendenti fuq il-konċentrazzjoni. L-effett invers ta 'Gomisin Nkontra rapamycin kien aktar promettenti fil-konċentrazzjoni ta '20 u 30 µM minn 10 µM. Dawn ir-riżultati jissuġġerixxu li Gomisin N jinibixximelanoġenesifiċ-ċelloli tal-melanoma MNT-1 tal-bniedem billi jirregola l-fattur ta' traskrizzjoni MITF u l-miri tiegħu TRP-1 u TRP-2.

3. Diskussjoni

Il-funzjoni ewlenija tal-melanin hija li tipproteġi ċ-ċelloli tal-ġilda kontra r-radjazzjoni UV [33-35]. L-iperpigmentazzjoni, ir-riżultat ta 'produzzjoni żejda ta' melanin fil-ġilda, tikkawża tħassib kosmetiku mhux mixtieq u hija assoċjata ma 'dermatite u kanċer tal-ġilda. Bosta rapporti ssuġġerewmelanoġenesibħala mira importanti għat-trattament tal-melanoma metastatika [36,37]. Għalhekk, hemm bżonn dejjem akbar li jiġu żviluppati aġenti anti-melanoġeniċi li jirregolaw il-melanoġenesi mingħajr tossiċità ċellulari [38]. Hemm diversi mogħdijiet involuti fil-melanoġenesi tal-ġilda [39,40]. Mal-irbit tal-ligand, MC1R isaħħaħ l-attività ta 'adenylyl cyclase, li sussegwentement iżid il-livelli intraċellulari ta' cAMP [41,42]. L-attivazzjoni dipendenti fuq cAMP tal-mogħdija PKA/CREB ġiet irrappurtata b'mod wiesa 'biex tirregola l-livelli ta' traskrizzjoni tal-MITF, u b'hekk ittejjeb is-sintesi tal-melanin [43]. L-MITF jiffunzjona bħala regolatur ewlieni tat-tliet enzimi melanoġeniċi ewlenin tyrosinase, TRP-1, u TRP-2f'vertebrati [3,21,44]. Dawn l-enzimi huma proteini transmembrani li jinsabu fil-membrana melanosomal tal-melanoċiti. Tyrosinase jirregola l-pass li jillimita r-ratamelanoġenesibilli tikkonverti L-tyrosinase għal L-DOPA [23]. TRP-1 u TRP-2 għandhom ukoll rwoli importanti fis-sintesi tal-melanin, għalkemm il-funzjonijiet tagħhom mhumiex mifhuma bis-sħiħ.

F'dan l-istudju, Gomisin N, kompost ta 'lignan ta' S. chinensis wera attività depigmentanti mingħajr tossiċità ċellulari. Gomisin N inibixxi s-sintesi tal-melanin f'linji ta 'ċelluli mammiferi kkultivati ​​kif ukoll f'embrijuni ta' zebrafish. Gomisin N deher li kien aktar effettiv mill-kontroll pożittiv PTU li jinibixxi l-produzzjoni tal-melanin fiċ-ċelloli Melan-A (Figura 1B). Gomisin N naqqas il-kontenut ta 'melanin b'mod dipendenti fuq il-konċentrazzjoni. Meta mqabbel mal-grupp ta 'kontroll mhux ittrattat, 10 µM ta'Gomisin Nnaqqas il-kontenut ta 'melanin b'madwar 40 fil-mija, mingħajr tossiċità ċellulari. L-attività anti-melanoġenika ta' 10-µM Gomisin N kienet komparabbli ma' dik ta' 100-µM PTU fiċ-ċelloli Melan-A. Bl-istess mod, Gomisin Deher li kien aktar qawwi minn PTU fiċ-ċelloli B16F10 attivati ​​minn -MSH, fejn l-effetti ta' 5- u10-µM Gomisin N kienu komparabbli ma' dawk ta' 10- u {{12 }}µM PTU, rispettivament (Figura 1C).Ċelloli NHEM ittrattati b'Gomisin N urew livelli mnaqqsa ta 'L-DOPA, li jissuġġerixxi li GomisinN jinibixxityrosinaseattività f'ċelloli kkultivati ​​(Figura 1E). Dawn is-sejbiet wassluna biex ninvestigaw aktar il-mekkaniżmu sottostanti li bih Gomisin N jinibixxi l-melanoġenesi.

Aħna eżaminajna jekkGomisin Njimmodula direttament l-attività katalitika tatyrosinasein vitro.B'differenza mill-aċidu Kojic, Gomisin N ma werax effetti inibitorji fuq l-attività tat-tyrosinase tal-faqqiegħ (Figura 2A). Madankollu, l-attività ċellulari tyrosinase fil-lysates taċ-ċelluli tal-melanoma B16 kienet irregolata b'mod sinifikanti minn Gomisin N kemm bi kif ukoll mingħajr trattament -MSH (Figura 2B, C). L-inibizzjoni ta' l-attività tyrosinase ċellulari ta' Gomisin N fuq stimolu -MSH instabet li kienet aktar sinifikanti minn dik ta' l-aċidu Kojic ta' kontroll pożittiv (Figura 2C).

Aħna ppostulajna li l-funzjoni anti-melanoġenika ta 'Gomisin N tista' sseħħ permezz ta 'regolazzjoni traskrizzjoni jew post-traskrizzjoni ta' tyrosinase u proteini relatati mat-tyrosinase (TRPs). Biex nivvalidaw dan, kejlna l-livelli ta 'espressjoni ta' molekuli ta 'sinjalazzjoni fil-passaġġ MC1R, determinant ewlieni għall- kwantità u kwalità tal-produzzjoni tal-melanin fil-melanoċiti. B'mod mistenni, weobserved li Gomisin N naqqas il-livelli ta 'MC1R u adenylyl cyclases 2 fiċ-ċelloli Melan-A (Figura 3A–C). Barra minn hekk,Gomisin Nirregolat 'l isfel l-espressjoni ta' MITF u l-proteini fil-mira tiegħu inklużi tyrosinase, TRP-1, u TRP-2 (Figura 3A, D-G). Dawn ir-riżultati jissuġġerixxu li l-livelli mnaqqsa ta 'kontenut ta' melanin fuq trattament ta 'Gomisin N jirriżultaw mid-diżattivazzjoni tal-mogħdija MC1R.

Min-naħa l-oħra, il-mogħdijiet PI3K/Akt u MAPK/ERK jistgħu fosforilaw l-MITF, u b'hekk jistgħu jimmodulaw wara t-traskrizzjoni l-attività tiegħu [45]. Madankollu, l-effett ġenerali tal-attivazzjoni tal-mogħdijiet PI3K/Akt u MAPK/ERK fimelanoġenesihija kontroversjali. Kemm il-mogħdijiet PI3K/Akt kif ukoll MAPK/ERK huma attivati ​​b'mod kostituttiv fil-melanomi umani minħabba mutazzjonijiet akkumulati [46]. Id-depigmentazzjoni medjata minn C2-ċeramide fiċ-ċelloli Mel-Ab hija magħrufa li sseħħ permezz ta' tnaqqis fil-livelli ta' p-Akt [47]. Hemm bosta komposti naturali li jattivaw il-melanogenesis billi jirregolaw il-livelli ta 'p-ERK fiċ-ċelloli tal-melanoma B16 [28]. B'kuntrast, hemm ukoll evidenza li livelli elevati ta 'p-ERK u p-Akt jinibixxu s-sintesi tal-melanin [28,48]. L-inregolazzjoni tal-kumplessità tal-melanoġenesi tista 'tiġi parzjalment spjegata mill-fatt li l-fosforilazzjoni ssaħħaħ l-attività tat-traskrizzjoni ta' MITF, iżda fl-istess ħin tinduċi degradazzjoni dipendenti fuq ubiquition-proteosome ta 'MITF [26,49-51]. Id-dejta tagħna wriet li kemm il-livelli ta 'p-Akt kif ukoll p-ERK kienu upregulatedin ċelluli Melan-A trattati b'Gomisin N (Figura 3H-J). Dan jimplika li l-mogħdijiet PI3K/Akt u MAPK/ERK jistgħu jikkontribwixxu għall-inibizzjoni tal-produzzjoni tal-melanin.

Aħna vvalidajna aktar l-attività anti-melanoġenika ta 'Gomisin N fil-mudell in vivo taż-zebrafish. L-embrijuni ta' zebrafish ittrattati b'Gomisin N urew tnaqqis sinifikanti fil-pigmentazzjoni tal-melanin (Figura 4). Barra minn hekk, Gomisin N naqqas sew il-livelli ta 'tyrosinase, MITF, TRP-1,u TRP-2 fl-iżvilupp ta' embrijuni ta' zebrafish. Dawn is-sejbiet kollettivament jissuġġerixxu liGomisin Njinduċi depigmentazzjoni billi jirregola l-espressjoni ta 'MITF u enzimi melanoġeniċi in vivo. Għalkemm Gomisin N irriżulta biss f'bidliet żgħar fil-kontenut tal-melanin fiċ-ċelluli MNT-1 (Figura 1D), kien effettiv li jreġġa' lura r-regolazzjoni 'l fuq indotta minn rapamycin ta' MITF, TRP-1, u TRP-2 f' b'mod dipendenti fuq il-konċentrazzjoni (Figura 6A, C–E). Meħuda flimkien, l-effett regolatorju taGomisin Nfuq MITF u enzimi melanoġeniċi nstabet b'mod riproduċibbli fiċ-ċelluli tal-ġurdien u tal-bniedem kif ukoll fl-embrijuni tal-fish zebra.

Fil-qosor, dan ix-xogħol jissuġġerixxi li Gomisin N jista 'jkollu potenzjal għoli bħala rumanzjbajdu l-ġildaaġent. Gomisin N jidher li jinibixximelanoġenesibilli tirreprimi l-espressjoni ta 'MITF permezz tal-mogħdija MC1R, minflok timmodula direttament l-attività katalitika ta'tyrosinaseuTRPs. Għalkemm għad iridu jiġu eluċidati mekkaniżmi dettaljati, id-depigmentazzjoni indotta minn Gomisin N x'aktarx tkun assoċjata mal-attivazzjoni tal-mogħdijiet PI3K/Akt u MAPK/ERK (Figura 7).

4. Materjali u Metodi

4.1. Materjali

RPMI1640 inxtara minn Gibco-BRL (Gaithersburg, MD, USA). Dulbecco's modifiedEagle's medium (DMEM), serum bovin fetali (FBS), u penicillin-streptomycin (PS) kienu mixtrija minn Hyclone (Carlsbad, CA, USA). Il-medju tat-tkabbir tal-melanocyte inxtara minn PromoCell (Heidelberg, il-Ġermanja). Phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF), 12-O-tetradecanoylphorbol-13-aċetat (TPA), Kojic acid, 1-phenyl-2-thiourea (PTU), faqqiegħ tyrosinase, 3,{{ 9}}dihydroxy-l-phenylalanine(L-DOPA), -MSH, dimethyl sulfoxide (DMSO), u paraformaldehyde inxtraw minn SigmaChemical Co. (St. Louis, MO, USA).Gomisin Nkompost ġie pprovdut minn Chul Young Kim(Hanyang University, Ansan, Korea). Rapamycin inxtara minn Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA).

4.2. Kultura taċ-Ċelloli

Il-linja taċ-ċelluli tal-melanoma tal-ġurdien B16F10 ġiet ipprovduta mill-Korean Cell Line Bank (Seoul, Korea).Iċ-ċelluli Melan-A tal-melanoċiti murini [52] kienu rigal ġeneruż minn Dr Byeong Gon Lee (l-Istitut tar-Riċerka tal-Ġilda, Amore Pacific Co., Yongin -si, Korea). Iċ-ċelloli tal-melanoma MNT-1 tal-bniedem ġew ipprovduti b'mod ġeneruż minn Aeyeong Lee (Collage tal-Mediċina fl-Università ta' Dongguk, Goyang-si, Korea). Melanoċiti epidermali umani normali primarji (NHEM) inxtraw minn PromoCell (Heidelberg, il-Ġermanja). Iċ-ċelloli Melan-A tkabbru f'medja RPMI 1640 (Gibco, Carlsbad, CA, USA) supplimentati b'10 fil-mija FBS, 1 fil-mija PS, u 200 nM TPA. DMEM supplimentat b'10 fil-mija FBS u 1 fil-mija PS intuża biex jinżammu ċelloli Melan-A u ċelloli NHEM. Iċ-ċelloli kollha ġew inkubati f'37 ◦C f'inkubatur ta '5 fil-mija CO2.

4.3. Kejl tal-Kontenut tal-Melanin

Iċ-ċelloli Melan-A ġew miżrugħa fi pjanċa ta' 24-bir (1 × 105 ċelluli/bir), ittrattati biGomisin N, u mbagħad inkubat għal 72 siegħa. Wara 72 siegħa, il-kontenut ta 'melanin tkejjel kif deskritt qabel [53]. Fil-qosor, wara li tneħħiet il-midja tal-kultura, iċ-ċelloli ġew maħsula tliet darbiet b'PBS. Minn hemm 'il quddiem, soluzzjoni ta' idrossidu tas-sodju (1 mL, 1 N) ġiet miżjuda ma 'kull bir biex tħoll il-melanin. L-assorbiment f'405 nm tkejjel bl-użu ta' microplate reader. Dan l-assaġġ ġie ripetut b'ċelluli B16F10 (2 × 104 ċelluli/bir) u ċelluli MNT-1 wara l-istess metodu.

4.4. Analiżi Western Blot

Iċ-ċelloli Melan-A ġew miżrugħa f'platti ta' 100 mm (1 × 106 ċelluli/dixx) u ttrattati b'1, 5, jew 10 µMGomisin Ngħal tlett ijiem f'37 ◦C. Iċ-ċelloli ġew maħsula bil-PBS u mbagħad maħsuda bl-użu ta 'barraxa. Ċelloli maqlugħa tpoġġew f'1 ml ta' PBS u ċentrifugati f'75 00 rpm għal 5 min. Wara li tneħħiet is-soluzzjoni ta' fuq, il-gerbub taċ-ċelluli ġew lysed b'liżi buffer (50 mM Tris-HCl, pH 8.0, 0.1 fil-mija SDS, 150 mM NaCl, 1 fil-mija NP-40, 0.02 fil-mija sodium azide, 0.5 fil-mija sodium deoxycholate, 100 µg/mL PMSF, 1 g/mL aprotinin) għal 24 siegħa f'4 ◦C. Proteini totali ġew estratti bl-użu ta 'ultracentrifuge f'12,000 rpm għal 30 min f'4◦C. Il-kontenut tal-proteina tkejjel bl-użu tal-assaġġ Bradford. Proteini (30 µg) ġew isseparati bl-użu ta 'ġel ta' elettroforesi tal-ġell ta '10 fil-mija sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel (SDS-PAGE) u trasferiti għal membrana anitrocellulose. Il-membrana ġiet imblukkata għal siegħa b'5 fil-mija ħalib xkumat f'Tris-buffered salinewith Tween-20 (TBST), u mbagħad inkubata għal 12-il siegħa f'4 ◦C b'antikorpi primarji mmirati lejn -tubulina (Santa Cruz, CA, USA ), MITF (Sinjali taċ-Ċelloli, Danvers, MA, USA), tyrosinase (Sinjali taċ-Ċelloli), ERK (Sinjali taċ-Ċelloli), phospho-ERK (Sinjali taċ-Ċelloli), AKT (Sinjali taċ-Ċelloli), phospho-AKT (Sinjali taċ-Ċelloli), MC1R ( Santa Cruz), adenylyl cyclases 2 (Santa Cruz), TRP-1 (Santa Cruz), u TRP-2 (Santa Cruz). Wara li tneħħew l-antikorpi primarji, il-membrani ġew maħsula tliet darbiet b'TBST u inkubati b'sekondarja. antikorpi (fenek kontra l-mogħoż IgG-HRP; ġurdien kontra l-fenek HRP, Santa Cruz) għal 1 h.Il-membrani ġew ittrattati b'reaġent ta 'kimiluminixxenza msaħħa bl-użu tas-sistema ta' immaġini ChemiDoc XRS plus (Bio-Rad, Hercules, CA, USA). Analiżi densitometrika tal-meded saret bl-użu ta 'softwer Image MasterTM 2D Elite (verżjoni 3.1, GE Healthcare, Chicago, IL, USA).

4.5. Assaġġ tal-Attività tat-Tyrosinase

Biex jiġi stmat l-effett inibitorju ta 'Gomisin N fuq il-faqqiegħtyrosinaseattività, tyrosinase ġiet inkubata b'1, 5, jew 10 µMGomisin Njew il-kontroll pożittiv Kojic acid. Kull kampjun ġie maħlul fil-metanol. L-DOPA (8.3 mM) u tyrosinase tal-faqqiegħ (125 U) ġew dilwiti f'80 mM phosphatebuffer (pH 6.8). 40 µL ta' kull kampjun u 120 µL ta' L-DOPA tħalltu fi pjanċa ta' 96-bir, segwiti biż-żieda ta' 40 µL ta' tyrosinase tal-faqqiegħ dilwit. Il-pjanċi mbagħad ġew inkubati għal 15-il minuta, u l-assorbiment tkejjel f'490 nm bl-użu ta 'mikroplate reader.

Tyrosinasel-attività fil-lysates taċ-ċelluli tal-melanoma B16 kienet imkejla bi jew mingħajr trattament -MSH, kif deskritt qabel minn Ohguchi et al. [54], b'modifiki żgħar. Lisat taċ-ċelluli kien ippreparat kif deskritt hawn fuq fil-parti ta 'l-analiżi Western Blot. Il-proteini totali fis-supernatant ġew imkejla b'assaġġ Bradford bl-użu ta' Albumin tas-Serum Bovini bħala standard [55]. Ammont ugwali ta 'proteini kien dilwit u użat għall-assaġġ ta' attività ta 'tyrosinase.

jinibixxi l-attività tyrosinase

4.6. Tbajja ta' L-DOPA fiċ-Ċelloli NHEM

Iċ-ċelloli NHEM ġew miżrugħa fi pjanċa ta' {{0}}bir u inkubati għal 72 siegħa b'Gomisin N. Iċ-ċelloli ġew iffissati b'4 fil-mija paraformaldehyde għal 40 min, segwiti minn trattament b'0.1 fil-mija Triton X{ {6}} għal 2 min. L-DOPA (0.1 fil-mija) ġie miżjud ma 'kull bir, segwit minn inkubazzjoni għal 2 sigħat. Wara li tneħħiet is-soluzzjoni, iċ-ċelloli ġew maħsula darbtejn bil-PBS. Stampi ġew fotografati bil-mikroskopju.

4.7. Esperimenti Zebrafish

L-embrijuni tal-fish zebra nkisbu mill-Zebrafish Resource Bank (Daegu, il-Korea). L-embrijuni ġew ittrattati b'Gomisin N għal 72 siegħa. L-effett depigmenting taGomisin Nfuq l-embrijuni tal-ħut zebra kien osservat taħt l-isterjomikroskopju. Għall-analiżi Western blot, l-embrijuni ttrattati b'Gomisin N ġew lisati bl-użu ta 'lysis buffer, li minnu ġew ippreparati proteini totali kif imsemmi hawn fuq.

5. Konklużjonijiet

Ir-riżultat tagħna jappoġġja l-fehma li Gomisin N għandu potenzjal għoli għall-użu bħala ikel u funzjonalijbajdu l-ġildaaġent.Gomisin Nhuwa wieħed mill-komposti ewlenin tal-lignan f'S. Chinensis. Fil-fatt, S. Chinensis hija mediċina tal-ħxejjex użata għall-kura ta 'ħafna mard tal-bniedem. Madankollu, aktar studji epidemjoloġiċi huma meħtieġa biex tipprova s-sigurtà ta 'Gomisin N fuq il-ġilda. Konsegwentement, studji in vivo u provi kliniċi jkunu jistgħu juru b'mod aktar ċar l-effettività ta' GomisinN. Bħala konklużjoni, dan l-istudju jissuġġerixxi liGomisin Njista 'jkun aġent ipo-pigmentarju potenzjali u naturalijbajdu l-ġildakandidat għall-industrija tal-kosmetiċi.

cistanche itejbu jbajdu

Referenzi

1. Alaluf, S.; Atkins, D.; Barrett, K.; Blount, M.; Carter, N.; Heath, A. L-impatt ta 'melanin epidermali fuq kejl oġġettiv tal-kulur tal-ġilda tal-bniedem. Pigment Cell Res. 2002, 15, 119–126. [CrossRef] [PubMed]

2. D'Mello, SA; Finlay, GJ; Baguley, BC; Askarian-Amiri, ME Mogħdijiet ta' Sinjali fil-Melanoġenesi. Int. J.Mol. Sci. 2016, 17, 1144. [CrossRef] [PubMed]

3. Slominski, A.; Tobin, DJ; Shibahara, S.; Wortsman, J. Pigmentazzjoni tal-melanin fil-ġilda tal-mammiferi u r-regolamentazzjoni ormonali tagħha. Physiol. Rev 2004, 84, 1155–1228. [CrossRef] [PubMed]

4. Herrling, T.; Jung, K.; Fuchs, J. Ir-rwol tal-melanin bħala protettur kontra r-radikali ħielsa fil-ġilda u r-rwol tiegħu bħala indikatur freeradical fix-xagħar. Spectrochim Acta A Mol. Bijomol. Spectrosc. 2008, 69, 1429–1435. [CrossRef] [PubMed]

5. Brozyna, AA; Jozwicki, W.; Roszkowski, K.; Filipiak, J.; Slominski, AT Il-kontenut ta 'melanin fil-melanometastases jaffettwa r-riżultat tar-radjuterapija. Oncotarget 2016, 7, 17844–17853. [CrossRef] [PubMed]

6. Slominski, A.; Wortsman, J.; Plonka, PM; Schallreuter, KU; Paus, R.; Tobin, DJ Pigmentazzjoni tal-follikuli tax-xagħar.J. Investig. Dermatol. 2005, 124, 13–21. [CrossRef] [PubMed]

7. Slominski, A.; Zmijewski, MA; Pawelek, J. L-tyrosine, u L-dihydroxyphenylalanine bħala regolaturi li jixbhu l-ormoni tal-funzjonijiet tal-melanoċiti. Melanoma Ċellula tal-pigment Res. 2012, 25, 14–27. [CrossRef] [PubMed]

8. Lee, AY Progress reċenti fil-patoġenesi tal-melasma. Melanoma Ċellula tal-pigment Res. 2015, 28, 648–660. [CrossRef][PubMed]9. Speeckaert, R.; van Gele, M.; Speeckaert, MM; Lambert, J.; van Geel, N. Il-bijoloġija ta 'hyperpigmentationsyndromes. Melanoma Ċellula tal-pigment Res. 2014, 27, 512–524. [CrossRef] [PubMed]

10. Slominski, RM; Zmijewski, MA; Slominski, AT Ir-rwol tal-pigment tal-melanin fil-melanoma. Exp. Dermatol.2015, 24, 258–259. [CrossRef] [PubMed]11. Slominski, A.; Wortsman, J.; Tobin, DJ Is-sistema serotoninerġika/melatoninerġika tal-ġilda: Żgurar f'post taħt ix-xemx. FASEB J. 2005, 19, 176–194. [CrossRef] [PubMed]

12. Sarkar, R.; Arora, P.; Garg, KV Cosmeceuticals għall-Iperpigmentazzjoni: X'inhu Disponibbli? J. CutaneousAesthet. Surg. 2013, 6, 4–11. [CrossRef] [PubMed]

13. Miyamura, Y.; Coelho, SG; Wolber, R.; Miller, SA; Wakamatsu, K.; Zmudzka, BZ; Ito, S.; Smuda, C.;Passeron, T.; Choi, W.; et al. Regolament tal-pigmentazzjoni tal-ġilda tal-bniedem u risponsi għar-radjazzjoni ultravjola.Pigment Cell Res. 2007, 20, 2–13. [CrossRef] [PubMed]

14. Davis, KE; Callender, VD Iperpigmentazzjoni ta 'wara l-infjammazzjoni: Reviżjoni ta' l-epidemjoloġija, il-karatteristiċi kliniċi, u l-għażliet ta 'trattament fil-ġilda tal-kulur. J. Clin. Esteta. Dermatol. 2010, 3, 20–31. [PubMed]

15. Sales-Campos, H.; Souza, PR; Peghini, BC; da Silva, JS; Cardoso, CR Ħarsa ġenerali lejn l-effetti modulatorji tal-aċidu olejku fis-saħħa u l-mard. Mini. Dun Med. Chem. 2013, 13, 201–210. [CrossRef] [PubMed]

16. Parvez, S.; Kang, M.; Chung, HS; Cho, C.; Hong, MC; Shin, MK; Bae, H. Stħarriġ u mekkaniżmu ta 'aġenti skindepigmenting u tħaffif. Phytother. Riż. 2006, 20, 921–934. [CrossRef] [PubMed]

17. Luo, L.; Jiang, L.; Geng, C.; Cao, J.; Zhong, L. Ġenotossiċità indotta mill-idroquinone u ħsara ossidattiva tad-DNA fiċ-ċelloli HepG2. Chem. Biol. Interaġixxi. 2008, 173, 1–8. [CrossRef] [PubMed]

18. Enguita, FJ; Leitao, AL Hydroquinone: Tniġġis ambjentali, tossiċità, u tweġibiet mikrobjali.BioMed Res. Int. 2013, 2013, 542168. [CrossRef] [PubMed]

19. Draelos, ZD Preparazzjonijiet għat-tħaffif tal-ġilda u l-kontroversja tal-idroquinone. Dermatol. Ther. 2007, 20,308–313. [CrossRef] [PubMed]

20. Koo, JH; Lee, I.; Yun, SK; Kim, HU; Park, BH; Park, JW Żejt tal-primula ta 'filgħaxija saponifikat inaqqas il-melanogenesis fiċ-ċelluli tal-melanoma B16 u jnaqqas il-pigmentazzjoni tal-ġilda indotta mill-UV fil-bnedmin. Lipidi 2010,45, 401–407. [CrossRef] [PubMed]

21. Cordell, GA; Colvard, MD Prodotti naturali u mediċina tradizzjonali: Tidwir fuq paradigma. J. Nat. Prod.2012, 75, 514–525. [CrossRef] [PubMed]

22. Panossian, A.; Wikman, G. Farmakoloġija ta 'Schisandra Chinensis Bail: Ħarsa ġenerali tar-riċerka Russa u l-użu fil-mediċina. J. Ethnopharmacol. 2008, 118, 183–212. [CrossRef] [PubMed]

23. Chen, P.; Pang, S.; Yang, N.; Meng, H.; Liu, J.; Zhou, N.; Zhang, M.; Xu, Z.; Gao, W.; Chen, B.; et al. Effetti ta 'benefiċċju ta' Schisandrin B fuq il-funzjoni kardijaka fil-mudell tal-ġrieden ta 'infart mijokardijaku. PLoS ONE 2013, 8,e79418. [CrossRef] [PubMed]

24. Lee, HJ; Jo, S.; Ryu, J.; Jeong, HS; Lee, G.; Ryu, MH; Jung, MH; Kim, H.; Kim, BJ Effetti ta 'SchisandraChinensis Turcz. frott fuq dermatite tal-kuntatt indotta minn dinitrofluorobenzene fil-ġrieden. Mol. Med. Rapport 2015,12, 2135–2139. [CrossRef] [PubMed]

25. Chun, JN; Cho, M.; Allura jien.; Jeon, JH L-effetti protettivi ta 'l-estratt tal-frott ta' Schisandra Chinensis u itslignans kontra l-mard kardjovaskulari: Reviżjoni tal-mekkaniżmi molekulari. Fitoterapia 2014, 97, 224–233.[CrossRef] [PubMed]

26. Kang, OH; Chae, HS; Choi, JH; Choi, HJ; Park, PS; Cho, SH; Lee, GH; Allura, HY; Choo, YK;Kweon, OH; et al. Effetti ta 'l-estratt ta' l-ilma ta 'Schisandra Fructus fuq ir-rilaxx ta' ċitokini minn linja ta 'ċelluli mast umani. J. Med. Ikel 2006, 9, 480–486. [CrossRef] [PubMed]

27. Poma, A.; Bianchini, S.; Miranda, M. Inibizzjoni tal-produzzjoni ta 'mikronukleji indotta minn L-tyrosine byphenylthiourea fiċ-ċelloli tal-melanoma tal-bniedem. Mutat. Riż. 1999, 446, 143–148. [CrossRef]

28. Kim, HJ; Kim, IS; Dong, Y.; Lee, IS; Kim, JS; Kim, JS; Woo, JT; Cha, BY Melanogenesis inducingeffect ta 'cirsimaritin permezz ta' żidiet fil-fattur ta 'traskrizzjoni assoċjati mal-mikroftalmja u tyrosinaseexpression. Int. J. Mol. Sci. 2015, 16, 8772–8788. [CrossRef] [PubMed]

29. Busca, R.; Abbe, P.; Mantoux, F.; Aberdam, E.; Peyssonnaux, C.; Eychene, A.; Ortonne, JP; Ballotti, R. Rasmediates l-attivazzjoni dipendenti fuq cAMP ta 'kinases extraċellulari regolati minn sinjal (ERKs) fil-melanocytes.EMBO J. 2000, 19, 2900-2910. [CrossRef] [PubMed]

30. Busca, R.; Ballotti, R. Cyclic AMP messaġġier ewlieni fir-regolamentazzjoni tal-pigmentazzjoni tal-ġilda. Pigment Cell Res.2000, 13, 60-69. [CrossRef] [PubMed]

31. Hah, YS; Cho, HY; Lim, TY; Park, DH; Kim, HM; Yoon, J.; Kim, JG; Kim, CY; Yoon, TJ Induzzjoni tal-melanogenesis minn rapamycin fiċ-ċelloli tal-melanoma MNT-1 tal-bniedem. Ann. Dermatol. 2012, 24, 151–157. [CrossRef][PubMed]

32. Yun, WJ; Kim, EY; Park, JE; Jo, SY; Bang, SH; Chang, EJ; Chang, SE Katina ħafifa proteina assoċjata mal-mikrotubuli 3 hija involuta fil-melanoġenesi permezz tar-regolazzjoni tal-espressjoni MITF fil-melanoċiti. Sci. Rapport.2016, 6, 19914. [CrossRef] [PubMed]

33. Spritz, RA; Smigħ, VJ, Jr. Disturbi ġenetiċi tal-pigmentazzjoni. Adv. Hum. Genet. 1994, 22, 1–45. [PubMed]

34. Kadekaro, AL; Chen, J.; Yang, J.; Chen, S.; Jameson, J.; Swope, VB; Cheng, T.; Kadakia, M.; Abdel-Malek, Z. -ormon li jistimula l-melanoċiti jrażżan l-istress ossidattiv permezz ta' mogħdija ta' sinjalazzjoni medjata minn ap53-f'melanoċiti umani. Mol. Cancer Res. 2012, 10, 778–786. [CrossRef] [PubMed]

35. Wasmeier, C.; Hume, AN; Bolasco, G.; Seabra, MC Melanosomes f'daqqa t'għajn. J. Cell Sci. 2008, 121,3995–3999. [CrossRef] [PubMed]

36. Brozyna, AA; Jozwicki, W.; Carlson, JA; Slominski, AT Melanogenesis taffettwa s-sopravivenza ġenerali u mingħajr mard f'pazjenti b'melanoma ta' stadju III u IV. Hum. Pathol. 2013, 44, 2071–2074. [CrossRef] [PubMed]

37. Slominski, A.; Kim, TK; Brozyna, AA; Janjetovic, Z.; Brooks, DL; Schwab, LP; Skobowiat, C.; Jozwicki, W.;Seagroves, TN Ir-rwol tal-melanoġenesi fir-regolamentazzjoni tal-imġieba tal-melanoma: Il-melanogenesis twassal għall-istimulazzjoni tal-espressjoni HIF-1 u l-mogħdijiet li jakkumpanjaw HIF dipendenti fuq l-HIF. Arch. Biochem. Biophys. 2014, 563,79–93. [CrossRef] [PubMed]

38. Kim, HJ; Lee, JH; Shin, MK; Hyun Leem, K.; Kim, YJ; Lee, MH Effett inibitorju ta 'Gastrodia elata extracton melanogenesis fiċ-ċelloli tal-melanoma HM3KO. J. Kosmet. Sci. 2013, 64, 89–98. [PubMed]

39. Hemesath, TJ; Prezz, ER; Takemoto, C.; Badalian, T.; Fisher, DE MAP kinase jgħaqqad il-fattur tat-traskrizzjoniMicrophthalmia mas-sinjalar c-Kit fil-melanoċiti. Natura 1998, 391, 298–301. [PubMed]

40. Prezz, ER; Ding, HF; Badalian, T.; Bhattacharya, S.; Takemoto, C.; Yao, TP; Hemesath, TJ; Fisher, sinjalazzjoni speċifika għal DELineage fil-melanoċiti. L-istimulazzjoni C-kit tirrekluta p300/CBP għal mikroftalmija.J. Biol. Chem. 1998, 273, 17983–17986. [CrossRef] [PubMed]

41. Bertolotto, C.; Abbe, P.; Hemesath, TJ; Bille, K.; Fisher, DE; Ortonne, JP; Ballotti, R. Prodott Microphthalmiagene bħala transducer tas-sinjal fid-divrenzjar tal-melanoċiti kkaġunat minn cAMP. J. Cell Biol. 1998, 142,827–835. [CrossRef] [PubMed]

42. Pogenberg, V.; Ogmundsdottir, MH; Bergsteinsdottir, K.; Schepsky, A.; Phung, B.; Deineko, V.; Milewski, M.;Steingrimsson, E.; Wilmanns, M. Dimerizzazzjoni ristretta taż-żippijiet tal-lewċina u speċifiċità tar-rikonoxximent tad-DNA tar-regolatur kaptan tal-melanocyte MITF. Ġeni Dev. 2012, 26, 2647–2658. [CrossRef] [PubMed]

43. Flaherty, KT; Hodi, FS; Fisher, DE Mill-ġeni għad-drogi: Strateġiji mmirati għall-melanoma. Nat. Dun Cancer2012, 12, 349–361. [CrossRef] [PubMed]

44. Lee, TH; Seo, JO; Baek, SH; Kim, SY Effetti inibitorji tar-resveratrol fuq is-sintesi tal-melanin fil-pigmentazzjoni indotta mill-ultravjolaB fil-ġilda tal-fniek tal-Guinea. Bijomol. Ther. 2014, 22, 35–40. [CrossRef] [PubMed]

45. Su, TR; Lin, JJ; Tsai, CC; Huang, TK; Yang, ZY; Wu, MO; Zheng, YQ; Su, CC; Wu, YJ Inibizzjoni tal-melanoġenesi bl-aċidu galliku: Involviment possibbli tal-mogħdijiet PI3K/Akt, MEK/ERK u Wnt/-cateninsignaling fiċ-ċelloli B16F10. Int. J. Mol. Sci. 2013, 14, 20443–20458. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Yajima, I.; Kumasaka, MY; Thang, ND; Goto, Y.; Takeda, K.; Yamashita, O.; Iida, M.; Ohgami, N.;Tamura, H.; Kawamoto, Y.; et al. Sinjali RAS/RAF/MEK/ERK u PI3K/PTEN/AKT fi Progressjoni u Terapija tal-Melanoma Malinna. Dermatol. Riż. Prattika. 2012, 2012, 354191. [CrossRef] [PubMed]

47. Kim, DS; Kim, SY; Qamar, SJ; Chung, JH; Kim, KH; Cho, KH; Park, KC Ceramide jinibixxi l-proliferazzjoni taċ-ċelluli permezz ta 'inattivazzjoni ta' AKT / PKB u jnaqqas is-sintesi tal-melanin fiċ-ċelluli Mel-Ab.Pigment Cell Res. 2001, 14, 110–115. [CrossRef] [PubMed]

48. Kim, JH; Baek, SH; Kim, DH; Choi, TY; Yoon, TJ; Hwang, JS; Kim, MR; Kwon, HJ; Lee, CHDownregulation tas-sintesi tal-melanin billi jkollu A u l-applikazzjoni tiegħu għal mudell tas-sajjetti in vivo. J.Investiga. Dermatol. 2008, 128, 1227–1235. [CrossRef] [PubMed]

49. Hartman, ML; Czyz, M. MITF fil-melanoma: Mekkaniżmi wara l-espressjoni u l-attività tagħha. Ċellula Mol.Life Sci. 2015, 72, 1249–1260. [CrossRef] [PubMed]

50. Kim, DS; Hwang, ES; Lee, JE; Kim, SY; Kwon, SB; Park, KC Sphingosine-1-fosfat inaqqas is-sintesi tal-melanin permezz ta' attivazzjoni sostnuta ta' ERK u degradazzjoni sussegwenti tal-MITF. J. Cell Sci. 2003, 116,1699–1706. [CrossRef] [PubMed]

51. Xu, W.; Gong, L.; Haddad, MM; Bischof, O.; Campisi, J.; Yeh, ET; Medrano, EE Regolament tal-fattur ta 'traskrizzjoni assoċjati mal-mikroftalmja livelli ta' proteina MITF b'assoċjazzjoni ma 'l-enzima li tikkonjuga l-ubiquitin hUBC9. Exp. Ċellula Res. 2000, 255, 135–143. [CrossRef] [PubMed]

52. Bennett, DC; Cooper, PJ; Hart, IR Linja ta' melanoċiti tal-ġrieden mhux tumorigeniċi, syngeneic mal-melanoma B16 u li jeħtieġu promotur tat-tumur għat-tkabbir. Int. J. Cancer 1987, 39, 414–418. [CrossRef][PubMed]

53. Meira, WV; Heinrich, TA; Cadena, SM; Martinez, GR Il-melanogenesis tinibixxi r-respirazzjoni fiċ-ċelloli B16-F10melanoma filwaqt li ttejjeb il-kontenut taċ-ċelluli mitokondrijali. Exp. Ċellula Res. 2017, 350, 62–72. [CrossRef][PubMed]

54. Ohguchi, K.; Tanaka, T.; Iliya, I.; Ito, T.; Iinuma, M.; Matsumoto, K.; Akao, Y.; Nozawa, Y. Gnetol bħala inibitur potenttyrosinase mill-ġeneru Gnetum. Biosci. Bijoteknoloġija. Biochem. 2003, 67, 663–665. [CrossRef] [PubMed]

55. Uchida, R.; Ishikawa, S.; Tomoda, H. Inibizzjoni ta 'attività ta' tyrosinase u pigmentazzjoni melanina minn 2-hydroxytyrosol. Acta Pharm. Sinica B 2014, 4, 141–145. [CrossRef] [PubMed]