Gao-Zi-Yao Ittejjeb il-Funzjoni tat-Tagħlim u tal-Memorja fil-Firien Qodma Spontanji Ipertensivi Parti 2

Annimali esperimentali

Firien ipertensivi spontanji maskili ta 'tnax-il xahar u tmien ġimgħat (SHR) inxtraw miċ-Ċentru tal-Mudell tal-Annimali ta' Nanjing.

Hemm relazzjoni qawwija bejn 8-rġiel ta' ġimgħa u l-memorja. Matul dan il-perjodu, il-moħħ tal-kreatura maskili qed jiżviluppa malajr, u l-konnessjonijiet bejn in-newroni tagħha qed jiżdiedu gradwalment, li mbagħad jaffettwa l-iżvilupp tal-memorja tiegħu.

Ir-riċerka turi li l-memorja tal-ħlejjaq maskili tkompli titjieb bl-età. Dan mhux biss għandu impatt sinifikanti fuq is-sopravivenza u r-riproduzzjoni tagħhom iżda jgħinhom ukoll jadattaw aħjar għall-ambjent u jlaħħqu ma’ sfidi ġodda.

Għalhekk, għandna ninkoraġġixxu b'mod attiv lill-irġiel żgħażagħ biex jipparteċipaw f'varjetà ta 'attivitajiet ta' benefiċċju, bħas-soluzzjoni ta 'puzzles, it-tagħlim ta' ħiliet ġodda, u l-esplorazzjoni ta 'oqsma ġodda. Dawn l-attivitajiet jistimulaw imħuħ tagħhom, li jippermettulhom jiżviluppaw aktar malajr u jtejbu l-kapaċitajiet tal-memorja tagħhom.

Fl-istess ħin, għandna nipprovdu wkoll ambjent u atmosfera xierqa għal kreaturi maskili żgħar. Li tagħmilhom iħossuhom sikuri u qrib jista 'jippromwovi l-iżvilupp tal-moħħ tagħhom u jtejjeb il-memorja tagħhom.

Fil-qosor, għandna nagħmlu dak kollu li nistgħu biex ngħinu lill-irġiel żgħażagħ itejbu l-memorja tagħhom sabiex isiru ħlejjaq aktar intelliġenti, kunfidenti, u kapaċi. Dan mhux biss iwassal għall-iżvilupp personali tagħhom iżda wkoll għall-prosperità u s-sopravivenza tal-ispeċi kollha. Wieħed jista 'jara li għandna bżonn intejbu l-memorja, u Cistanche deserticola tista' ttejjeb b'mod sinifikanti l-memorja, minħabba li Cistanche deserticola għandha effetti antiossidanti, anti-infjammatorji u kontra t-tixjiħ, li jistgħu jgħinu biex jitnaqqsu r-reazzjonijiet ossidattivi u infjammatorji fil-moħħ, u b'hekk jipproteġu l- saħħa tas-sistema nervuża. Barra minn hekk, Cistanche deserticola tista 'wkoll tippromwovi t-tkabbir u t-tiswija taċ-ċelloli tan-nervituri, u b'hekk ittejjeb il-konnettività u l-funzjoni tan-netwerks newrali. Dawn l-effetti jistgħu jgħinu biex itejbu l-memorja, it-tagħlim u l-veloċità tal-ħsieb, u jistgħu wkoll jipprevjenu l-iżvilupp ta 'disfunzjoni konjittiva u mard newrodeġenerattiv.

Ikklikkja taf supplimenti biex tingħata spinta lill-memorja

F'dan il-mudell, l-ipertensjoni tibda tiżviluppa sa 4 xhur bl-apparenza ta' bidliet relatati mal-ipertensjoni fil-mikrovaskulatura tal-moħħ sa 6 xhur [37].

Il-firien kienu miżmuma taħt kundizzjonijiet ottimali b'iġjene standard, miżmuma f'temperatura ta '25 grad b'ċiklu ta' dawl/dlam 12/12, u mitmugħa b'chow standard tal-firien u ilma ad libitum.

Il-proċeduri kollha ġew approvati minn u mwettqa skont il-linji gwida għall-kura u l-użu tal-annimali stabbiliti minn SoochowUniversity, li hija konsistenti mar-rapport preċedenti tagħna[35].

L-esperimenti twettqu skont il-Linji Gwida tal-Istituti Nazzjonali tas-Saħħa għall-Użu tal-Annimali tal-Laboratorju (NIH, numru tal-pubblikazzjoni 85-23, rivedut fl-1996). L-istudju preżenti huwa rrappurtat mill-linji gwida ARRIVE.

SHR ta' tmien ġimgħat ġie applikat għall-kontroll tat-tixjiħ (SHR-Young, n=10). Firien ta’ tnax-il xahar ġew ittrattati bi jew mingħajr Gao-Zi-Yao għal ilma distillat (Old SHR-C, n=10), doża baxxa (Old SHR-L, n{=10), doża medja (SHR-M Qadim, n=10), doża għolja (SHR-H Qadim, n=10) permezz ta' tmigħ fl-istonku.

Dożaġġi ta' Gao-Zi-Yao baxx, medju, u għoli ugwali għal 1/2-, 1-, dożaġġi tliet darbiet għall-applikazzjoni klinika tal-pazjent ikkalkulat skont l-erja tas-superfiċje tal-ġisem. Gao-Zi-Yao ġie maħlul f'5 mL ilma distillat qabel l-applikazzjoni u ġie amministrat ta 'darba tal-ħalib għal 4 ġimgħat.

Il-pressjoni tad-demm u r-rata tal-qalb ġew immonitorjati kull ġimgħa bil-metodu tal-pulzieri tad-denb, u l-piż tal-ġisem ġie mmonitorjat ukoll kull ġimgħa skont l-osservazzjoni preċedenti tagħna [35].

Wara 4 ġimgħat, sar l-esperiment tal-labirint tal-ilma Morris, u l-firien ġew sagrifikati taħt anestesija bis-sodium pentobarbital (50 mg/kg ip), inġabar tessut tal-hippocampus għal aktar analiżi. Il-protokolli sperimentali kollha ġew approvati mill-kumitat tal-liċenzjar tal-etika tal-Università ta 'Soochow.

Esperiment tal-labirint tal-ilma Morris

L-esperiment tal-labirint tal-ilma Morris (BW-MWM101, Shanghai Bio-will Co., Ltd., Shanghai, iċ-Ċina) kien deskritt qabel b'xi modifiki [38]. It-test kien ippjanat għal 6 ijiem, jiem 1 sa 5 kienu għall-perjodu ta 'taħriġ, u jum 6 kien għar-riżultati tal-ittestjar.

Il-firien irċevew taħriġ għal 2 min tal-ħalib, irreġistraw il-ħin għall-imbark fuq il-pjattaforma bħala l-ħin ta 'latenza. Fis-6 jum il-pjattaforma tneħħiet. Il-firien tpoġġew fil-kwadrant tad-distanza l-aktar 'il bogħod u t-trajettorja tal-għawm ġiet irreġistrata għal 2 min.

Parametri għat-tagħlim u l-funzjoni tal-memorja kienu kkalkulati mis-softwer.

Kejl tal-livelli tas-serum ta' NO u fatturi infjammatorji b'ELISA

Livelli tas-serum ta' NO (Nru tal-Katalgu: S0023), IL-1 (Numru tal-Katalgu: A301BH80153), IL-2 (Nru tal-Katalgu: A31038348), IL-6 (Nru tal-Katalgu: A30681042), andTNF- (Numru tal-katalgu: A38280855) kienu mkejla bl-użu ta 'kits ELISA disponibbli kummerċjalment (BiotechnologyCo., Ltd. Shanghai enzyme research. Shanghai, China).Il-passi kollha twettqu skond l-istruzzjonijiet tal-manifattur.

Tbajja Nissl

It-tessut tal-hippocampus tal-firien ġie iżolat, iffissat, inkorporat fil-paraffin, imbagħad inkubat f'soluzzjoni tat-tbajja '1% toluidine blue għal 5-10 min f'temperatura tal-kamra. Għaxar sezzjonijiet ġew laħlaħ f'ilma distillat, mxarrba f'95% etanol għal 5-30 min, u deidratati f'100% etanol.

Wara d-deidrazzjoni, il-porzjon tqiegħdet fil-xylene u kopertura-slipped bl-użu ta 'mezz tar-reżina. In-numru ta 'newroni fir-reġjuni CA1, CA2, u dentate gyrus (DG) ta' l-ippokampus ġew osservati u analizzati bl-użu tal-programm ta 'analiżi ImageJ.

Western blot għat-tagħlim u l-proteini relatati mal-memorja

Western blot għat-tagħlim u l-proteini relatati mal-memorja twettqet kif deskritt fir-rapport preċedenti tagħna b'xi modifiki [39].

Hippocampustissues ġew omoġenizzati b'buffer RIPA (50 mmTris, 150 mM NaCl, 1% Triton-X-100, pH 7.0) li fih fluworidu tal-phenylmenthanesulfonyl (R&D Systems Inc., Minneapolis, US). L-omoġenati ġew ċentrifugati fi 12,000 × g għal 10 min f'4 gradi.

Proteini taċ-ċelluli ġew separati minn SDS-PAGE u trasferiti għal membrani PVDF (Hybond TM-ECL; AmershamPharmacia Biotech, Inc.). Il-membrani ġew imblukkati f'5% ħalib bla xaħam f'PBS u 0.1% Tween-20f'temperatura tal-kamra.

Il-blots ġew imbagħad inkubati b'antikorp primarju: Riċettur ta' Anti-glutamate 1 (1:1000, Abcam, Inc., Nru tal-Katalgu: ab183797), antikorp AntiNMDAR2B (1:1000, Abcam, Inc., Nru tal-Katalgu: ab28373), Anti-fosfo -CaMKII antikorp (1:1000, Abcam, Inc., Katalgu Nru: ab171095), Antiphospho-CREB antikorp (1:1000, Abcam, Inc., Katalgu Nru: 32096) jew anti-GAPDH (Santa Cruz Biotech,Inc., Nru tal-Katalgu: sc-47724).

Sussegwentement, il-membrani ġew inkubati għal siegħa b'antikorp sekondarju (HRPconjugated anti-fenek Ig-G, 1:2000, Abcam, Inc. Catalog Nru: ab205718). Il-membrani mbagħad ġew maħsula tliet darbiet għal 15-il minuta bl-użu ta 'TBS-T biex ineħħu l-antikorpi eċċessivi qabel l-inkubazzjoni għal 1 min b'reaġenti kimiluminixxenti (ECL, R&D Systems Inc., Minneapolis, MN, USA).

Barra minn hekk, bandswered immunoreactive misjuba minn sistema ta ' analiżi ġel elettroforesi (GL2200 Pro, Crestream Inc. USA). L-intensità tal-meded ġiet analizzata permezz ta 'softwer Image J. Il-kwantità ta' proteini fil-mira kienet normalizzata bl-espressjoni GAPDH [39].

Analiżi statistika

Is-softwer SPSS 18.0 intuża għall-analiżi statistika. Id-dejta hija ppreżentata bħala l-medja ± SEM Groupeddata ġiet analizzata bl-użu ta 'analiżi one-way tal-varjanza segwita mit-test Student–Newman–Keuls. Pvalue < 0.05 kien ikkunsidrat bħala statistikament sinifikanti bħar-rapport preċedenti tagħna [35].

Riżultati

Pressjoni tad-demm sistolika (SBP), rata tal-qalb, u piż tal-ġisembejn SHR żgħażagħ u SHR qodma

Yong SHR wera SBP aktar baxx fl-ewwel ġimgħatejn meta mqabbel ma 'SHR qodma, imbagħad żdied għal ebda differenza bejn iż-żewġ gruppi fl-aħħar tliet ġimgħat (Fig. 2A).

Għall-kuntrarju, ir-rata tal-qalb ma kienet l-ebda differenza bejn iż-żewġ gruppi fl-ewwel ġimgħatejn, imbagħad SHR żgħażagħ żdiedet b'mod notevoli meta mqabbla ma 'SHR qodma fi tliet ġimgħat aktar tard (Fig. 2B). Żgħażagħ SHR wera piż tal-ġisem aktar baxx meta mqabbel ma 'SHR qodma matul il-perjodu kollu ta' osservazzjoni (Fig. 2C).

Parametri tal-labirint tal-ilma Morris bejn SHR żgħażagħ u SHR qodma

Biex jiġi ddeterminat it-tagħlim u l-memorja dipendenti fuq l-ippokamp, ​​sar l-esperiment tal-labirint tal-ilma Morris. SHR qodma wera latenza ta 'ħarba itwal fl-ewwel erbat ijiem meta mqabbla ma' SHR żgħażagħ (Fig. 3A).

Il-ħinijiet tal-qsim tal-kwadrant fil-mira kienu inqas f'SHR qodma milli f'SHR żgħażagħ (Fig. 3B).

Il-persentaġġ tal-ħin fil-kwadrant tal-pjattaforma fil-mira kien iqsar inold SHR meta mqabbel ma 'SHR żgħażagħ (Fig. 3C). Perċentwal tat-tul tal-mogħdija fil-kwadrant kien ukoll iqsar f'SHR qodma meta mqabbel ma' SHR qodma (Fig. 3D). Dawn ir-riżultati jissuġġerixxu SHR antik għandu indeboliment fil-funzjoni konjittiva.

Numru ta 'newroni fl-ippokampus bejn SHR żgħażagħ u SHR qodma

In-numru ta 'newroni f'żoni differenti ta' l-ippokampus kien magħdud bit-tbajja 'Nissl. Ir-riżultati wrew li hemm numru iżgħar ta 'newroni f'CA1, CA2, u DGregions ta' SHR qodma meta mqabbla ma 'SHR żgħażagħ (Fig. 4).

Tagħlim u espressjonijiet tal-proteini relatati mal-memorja fl-ippokampus bejn SHR żgħażagħ u SHR qodma

Ir-riżultati Western blot wrew li l-espressjoni ta 'tagħlim u proteini relatati mal-memorja (GluR1, NMDAR 2B, phosphorylated-CaMK II, u phosphorylated-CREB) fl-hippocampus oldSHR kien aktar baxx minn dak fil SHRhippocampus żgħażagħ (Fig. 5).

Effett ta 'Gao-Zi-Yao fuq SBP, ir-rata tal-qalb, u l-piż tal-ġisem f'SHR antik

L-effett ta 'Gao-Zi-Yao fuq SBP ġie analizzat. Trattament b'doża baxxa ta' Gao-Zi-Yao naqas b'mod notevoli l-SBP f'SHR antik mit-tieni ġimgħa għar-raba' ġimgħa meta mqabbel mal-grupp SHR ​​antik ta 'kontroll, dożaġġi medji u għoljin ta' Gao-Zi-Yao naqsu b'mod sinifikanti l-SBP f'SHR qodma mill-ewwel ġimgħa sal- ir-raba 'ġimgħa meta mqabbla mal-kontroll SHR qodma (Fig. 6A). Dawn ir-riżultati jindikaw li Gao-Zi-Yao jeżerċita effett kontra l-pressjoni għolja inold SHR.

Aħna qabblu wkoll id-dejta dwar l-effetti tar-rata tal-qalb Gao-Zi-Yaoon u l-piż tal-ġisem. Id-dejta tagħna wriet li ma kien hemm l-ebda differenza sinifikanti fir-rata tal-qalb u l-piż tal-ġisem fost il-gruppi kollha matul il-perjodu kollu ta 'osservazzjoni (Fig. 6B, C).

Effett ta' Gao-Zi-Yao fuq il-livelli tas-serum ta' NO, IL-1, IL-2, u TNF- f'SHR antik

Trattament b'dożaġġi medji u għoljin ta 'GAO-ZIYAO żied il-livelli ta' NO fis-serum meta mqabbel mal-livelli fil-grupp ta 'kontroll SHR (Fig. 7A). It-trattament bid-dożaġġi kollha ttestjati ta 'GAO-ZI-YAO naqqas il-livelli tas-serum ta' IL-1, IL-2 meta mqabbel mal-livelli fil-grupp ta 'kontroll SHR (Fig. 7B, C); madankollu, biss id-dożaġġ għoli ta 'GAO-ZI-YAO soppressa l-livelli tas-serum ta' TNF- (Fig. 7D).

Dawn ir-riżultati juru li GAO-ZI-YAOcould jirregola l-istress ossidattiv u l-infjammazzjoni.

For more information:1950477648nn@gmail.com