FGIN-1-27 huwa riċettur mitokondrijali sintetiku ta' inibitur li jgħaqqad id-diazepam (MDR)agonist li wera attività pro-apoptotika, kontra l-ansjetà, u sterojoġenikaf’diversi studji. Hawnhekk nirrapportaw, għall-l-ewwelħin, l-effikaċja anti-melanogenictaFGIN-1-27in vitrouin vivo. FGIN-1-27 b'mod sinifikantiinibiti bażali u -ormon li jistimula l-melanocyte ( -MSH)-, 1-Oleoyl-2-aċetil-sn-gliċerol (OAG)-u melanoġenesi indotta minn Endothelin-1 (ET{-1) mingħajr tossiċità ċellulari.L-assaġġ tal-attività tat-tyrosinase tal-faqqiegħ wera li FGIN-1-27 ma inibixxix direttamentattività tyrosinase, li tissuġġerixxi li FGIN-1-27 ma kienx inibitur dirett tyrosinase. Għalkemm ma setgħetx timmodula l-attività katalitika ta 'tyrosinase tal-faqqiegħin vitro, FGIN-1-27 irregola l-livelli ta' espressjoni ta'proteini ewlenin li jiffunzjonaw fil-melanoġenesi. FGIN-1-27 kellu dawn il-funzjonijietbilli jrażżnu l-PKA/CREB, PKC- , u mogħdijiet MAPK. Ladarba inattivat, dannaqqas l-espressjoni ta' MITF, tyrosinase, TRP-1, u TRP-2, u inibixxi l-attività tyrosinase,finalmentjinibixxi l-melanoġenesi. Matulin vivoesperimenti,FGIN-1-27 inibixxi l-pigmentazzjoni tal-ġisem taż-zebrafishu mnaqqsa indotta mill-UVBiperpigmentazzjoni fil-ġilda tal-fniek tal-Indi, iżda mhux tnaqqis ta 'numru ta' melanoċiti.Tagħnasejbietindika li FGIN-1-27 ma wera l-ebda ċitotossiċità u inibitmelanogenesis fit-tnejnin vitrouin vivomudelli. Jista 'jkun pjuttost utli bħala aaġent li jbajdu l-ġilda aktar sigur.

Skont studji rilevanti,cistanchehija ħaxixa komuni li hija magħrufa bħala "l-ħaxix miraklu li jtawwal il-ħajja". Il-komponent ewlieni tiegħu huwa cistanoside, li għandu diversi effetti bħalantiossidant, anti-infjammatorji, u l-promozzjoni tal-funzjoni immuni. Il-mekkaniżmu bejn cistanche ujbajdu l-ġildatinsab fl-effett anti-ossidanti tal-glycosides cistanche.Melaninfil-ġilda tal-bniedem hija prodotta mill-ossidazzjoni tat-tyrosine katalizzata minntyrosinase, u r-reazzjoni ta 'ossidazzjoni teħtieġ il-parteċipazzjoni ta' ossiġnu, għalhekk ir-radikali ħielsa mill-ossiġnu fil-ġisem isiru fattur importanti li jaffettwa l-produzzjoni tal-melanin. Cistanche fih cistanoside, li huwa antiossidant u jista 'jnaqqas il-ġenerazzjoni ta' radikali ħielsa fil-ġisem, u b'hekkjinibixxi l-produzzjoni tal-melanin.

Ikklikkja fuq Cistanche Tubulosa

Għal aktar informazzjoni: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

INTRODUZZJONI

Il-melanogenesis hija l-iktar funzjoni importanti tal-melanocytes fil-ġilda. Diversi fatturi kritiċi li jinvolvu l-melanoġenesi ġew iċċarati (Raposo and Marks, 2007; Noguchi et al., 2014). L-enzima ewlenija li tirregola l-melanoġenesi hija tyrosinase u taġixxi mal-proteina 1 relatata mat-tyrosinase (TRP1) u l-proteina 2 relatata mat-tyrosinase (TRP2) biex tippromwovi s-sintesi tal-melanin (Zhu et al., 2015). Fattur ieħor importanti involut fil-pigmentazzjoni huwa fattur tat-traskrizzjoni assoċjat mal-mikroftalmja (MITF), li mhux biss jirregola l-proliferazzjoni u s-sopravivenza tal-melanoċiti iżda jirregola wkoll l-espressjoni tat-tyrosinase, TRP1 u TRP2 (Kawasaki et al., 2008; Levy and Fisher, 2011). ). Stimuli ambjentali, bħall-irradjazzjoni ultravjola (UV), għandhom rwol kruċjali fil-melanoġenesi (Abdel-Naser et al., 2003). Mal-espożizzjoni għar-radjazzjoni UV, keratinoċiti u melanoċiti attivati ​​jipproduċu ormon li jistimula l-melanoċiti ( -MSH), diacylglycerol (DAG), u endothelin-1 (ET-1) (D'Mello et al., 2016; Bae Harboe u Park, 2012). Meta l-ormon li jistimula l-melanocyte (-MSH) jeħel mar-riċettur tal-melanocortin-1 (MC1R) fil-melanoċiti, jista’ jżid il-livelli intraċellulari ta’ adenosine monofosfat ċikliku (cAMP) u jattiva l-proteina kinażi A (PKA)/ (CREB). ), fl-aħħar jippromwovi l-melanoġenesi (Corre et al., 2004; Rzepka et al., 2016). Diacylglycerol (DAG) huwa essenzjali għall-attivazzjoni tal-proteina kinase C- (PKC- ) fil-melanoċiti, li żżid l-attività tat-tyrosinase u jinduċi pigmentazzjoni (Kim et al., 2006; Kawaguchi et al., 2012; Yuan and Jin, 2018 ). 1-Oleoyl-2- acetyl-sn-glycerol (OAG) huwa analogu DAG sintetiku, permeabbli mill-membrana li ntuża b'mod estensiv bħala attivatur farmakoloġiku ta 'PKC- (Rainbow et al., 2011). Endothelin-1 (ET{- 1) jinduċi melanoġenesi fil-melanoċiti permezz tal-attivazzjoni tal-mogħdija tal-proteina kinażi attivata minn mitoġenu (MAPK) (Park et al., 2015; Regazzetti et al., 2015).

Il-melanin għandu rwol importanti fil-protezzjoni tal-ġilda mill-effetti ta 'ħsara tar-radjazzjoni ultravjola, bħall-kanċer tal-ġilda u t-tixjiħ (Slominski et al., 2004). Madankollu, produzzjoni eċċessiva u akkumulazzjoni anormali ta 'melanin iwasslu għal problemi estetiċi tal-ġilda, bħal melasma, freckles, u tikek skuri (Jadotte u Schwartz, 2010). Bosta mill-komposti attivi li jbajdu, inklużi l-aċidu kojic u l-arbutin, diġà ġew approvati bħala addittivi kosmetiċi (Kim et al., 2008). Iżda ġie rrappurtat li l-arbutin għandu effetti ċitotossiċi u l-aċidu kojic jista 'jikkaġuna l-kanċer (Singh et al., 2016). Għalhekk, l-iskoperta ta 'aġenti li jbajdu l-ġilda aktar effiċjenti u aktar sikuri hija importanti ħafna.

Ir-riċettur tal-inibitur tal-irbit tad-diazepam mitokondrijali (MDR) għandu rwol ċentrali fir-regolazzjoni tas-sinteżi tal-lipidi u sterojdi u huwa distribwit b'mod wiesa 'f'tessuti periferali inkluża l-ġilda (Alho et al., 1993). Fl-istudji preċedenti tagħna, diazepam, agonist wieħed tal-MDR, irregola l-pigmentazzjoni permezz tal-mogħdija PKA/CREB (Lv et al., 2019). Barra minn hekk, sejbiet reċenti ssuġġerew li l-attivazzjoni tal-MDR żiedet kemmxejn in-numru ta 'melanoċiti ġodda fiż-zebrafish (Allen et al., 2020). Meta mqabbel mad-diazepam, FGIN-1-27 (N, N-Dihexyl-2-(4-fluorophenyl)indole-3- acetamide) juri affinità u speċifiċità relattivament ogħla għall-MDR (Freeman u Young, 2000). FGIN-1–27 wera attività pro-apoptotika u sterojoġenika (Lacapère u Papadopoulos, 2003). Riċentement, ġie rrappurtat li FGIN-1-27 ipproduċa effetti kontra l-ansjetà u kontra l-paniku in vivo (Lima-Maximino et al., 2018). Madankollu, l-effett ta' FGIN-1-27 fuq il-pigmentazzjoni in vitro u in vivo ma ġiex irrappurtat.

MATERJALI U METODI

Materjali

FGIN-1-27(N, N-Dihexyl-2-(4-fluorophenyl)indole-3-acetamide), OAG ({1-Oleoyl-2-acetyl-sn -gliċerol), u l-antikorpi kontra PKC- (1:200), qattus p-PKA (fosfo T197)(1:200), qattus PKA (1:500), p-CREB (1:200), CREB (1:200), p-ERK(1:200), ERK (1:200), p-p38 (1:200), p38 (1:200), p-JNK (1:200),u JNK (1:200) inkisbu minn Santa Cruz Biotechnology(CA, l-Istati Uniti). Tyrosinase mill-faqqiegħ, -MSH, ET-Inkisbu 1(Endothelin-1), u PTU(N-Phenylthiourea)minn Aladdin (Shanghai, iċ-Ċina). L-antikorpi kontratyrosinase (1:1,000), TRP-1(1:1,000), TRP-2 (1:1,000), MITF(1:2000), u -actin (1:3,000) inkisbu minn Abcam(Cambridge, ir-Renju Unit). Soluzzjoni tat-tebgħa tal-melanin Masson-Fontanainxtara minn SenBeiJia Biological Technology (Nanjing,iċ-Ċina). Il-kits RT-qPCR inxtraw mingħand Takara BiomedicalTeknoloġija (Beijing, iċ-Ċina). Buffer tal-liżi taċ-ċelluli u proteina BCAkit ta’ analiżi nkisbu minn Beyotime Biotechnology (Shanghai,iċ-Ċina).

Ċelloli Kultura

Assaġġ tal-Vijabilità taċ-Ċelluli

Il-vijabbiltà taċ-ċelluli SK-MEL-2 u HEM tkejlu permezz tal-assaġġ MTT (Zhou et al., 2014). Iċ-ċelluli SK-MEL-2 u l-HEM kienu ppjanati rispettivament fi 96-pjanċi ta' bir b'densità ta' 2 × 104 ċelluli għal kull bir. FGIN-1-27 (0, 1, 2, 4, 8, 16 μM) ġie applikat għal ċelluli SK-MEL-2 u HEM għal 48 siegħa. Soluzzjoni MTT (20 μL) ġiet miżjuda ma' kull bir ta' pjanċa ta' 96-bir għal 4 sigħat oħra. Wara li tneħħiet is-soluzzjoni, DMSO (200 μL) ġie miżjud ma 'kull bir u l-assorbanza ġiet eżaminata f'570 nm bl-użu ta' spettrofotometru tal-mikroplate (BioTek Instruments).

Melanin Assay

Iċ-ċelloli SK-MEL-2 u l-HEM kienu ppjanati rispettivament fi 6-pjanċi bir-bir f'konċentrazzjoni ta' 5×105 ċelluli għal kull bir. Wara 24 siegħa ta 'inkubazzjoni f'37 grad, FGIN-1-27 (0, 1, 2, 4 μM) ġie applikat għal ċelluli SK-MEL-2 u HEM. Iċ-ċelloli ġew inkubati għal 48 siegħa oħra, maħsula b'PBS, segwiti minn liżi b'buffer tal-liżi taċ-ċelluli għal 20 min f'4 gradi C, u l-lysates ġew ċentrifugati fi 13,000 rpm għal 10 min f'4 gradi C. Il-melanin totali fil-pellet taċ-ċelluli ġie maħlul f'soluzzjoni ta '100 μL NaOH (1 mol/L, li fih 10 fil-mija DMSO) f'80 grad C għal siegħa (Lv et al., 2015). L-assorbiment ottiku tkejjel f'405 nm bl-użu ta 'spettrofotometru tal-mikroplate (BioTek Instruments).

Assaġġ tal-Attività tat-Tyrosinase

L-attività tyrosinase ċellulari twettqet kif deskritt qabel (Lv et al., 2020). Iċ-ċelloli SK-MEL-2 ġew inkubati b'konċentrazzjonijiet differenti ta' FGIN-1-27 (0, 1, 2, 4 μM) jew OAG (200 μM) għal 12-il siegħa jew 48 siegħa u mbagħad lisati b'buffer tal-liżi taċ-ċelluli. Lisati taċ-ċelluli ġew ċentrifugati fi 13,000 rpm għal 10 min f'4 gradi C biex jinkiseb is-supernatant għall-assaġġ tal-attività tat-tyrosinase. Konċentrazzjonijiet tal-proteini ġew determinati minn kit BCA b'albumina tas-serum bovin (BSA) bħala standard. C għal siegħa. L-assorbiment ottiku tkejjel f'475 nm bl-użu ta 'spettrofotometru tal-mikroplate (BioTek Instruments).

L-effett dirett ta 'FGIN{{0}} fuq l-attività tyrosinase sar skond metodu preċedenti (Tomita et al., 2{010; Lv et al., 2020). 100 μL PBS (0.1 M, pH 6.5) li fihom konċentrazzjonijiet differenti ta 'FGIN-1-27 imħallat ma' tyrosinase tal-faqqiegħ (10 unitajiet) u 50 μL L-tyrosine (0.05 fil-mija) u mbagħad inkubat f'37 grad għal 10 min. L-assorbiment ottiku tkejjel f'475 nm bl-użu ta 'spettrofotometru tal-mikroplate (BioTek Instruments).

Tbajja tal-fidda Ammonjakali Masson–Fontana

Għad-detezzjoni tal-pigment tal-melanin, iċ-ċelluli SK-MEL-2 ġew ibbanjati fuq 6-platt tal-bir li kien fih coverslips tal-ħġieġ 13-mm f'2.0 ml ta' mezz ta' kultura (10 fil-mija serum bovin fetali) f’kull bir. Fi 48 siegħa wara l-amministrazzjoni, iċ-ċelloli ġew iffissati b'Formalin (10 fil-mija newtrali buffered) għal 20 min.

Iċ-ċelluli u l-pjastri tal-ġilda kienu mtebbgħin skont il-metodu tat-tbajja tal-fidda ammonjakali Masson-Fontana (Lee et al., 2013). Iċ-ċelluli u l-pjastri tal-ġilda ġew inkubati b'soluzzjoni tat-tebgħa ta 'melanin Masson-Fontana għal 16-il siegħa f'temperatura tal-kamra. Imbagħad iċ-ċelluli u slides tal-ġilda tlaħlaħ f'ilma distillat 3 darbiet u ġew inkubati b'soluzzjoni ipo għal 7 min. Wara ħasil bir-reqqa f'ilma distillat, iċ-ċelluli, u slides tal-ġilda ġew counterstained bi tebgħa ħamra newtrali għal 7 min. Ċelloli u slides tal-ġilda ġew osservati bl-użu ta' mikroskopju Nikon Ti2-U.

Immunoistokimika għal S-100

S-100 immunoistokimika saret kif deskritt qabel (Lee et al., 2013). Slajds ġew imblukkati b'5 fil-mija BSA għal siegħa f'temperatura tal-kamra u mbagħad inkubati f'antikorp primarju anti-S-100 (Dako, Carpentaria, CA) dilwit f'soluzzjoni ta 'imblukkar matul il-lejl f'4 gradi C. L-għada, il-Slajds ġew maħsula b'TBST 4 darbiet, u inkubati b'antikorp sekondarju (Dako, Carpentaria, CA). Imbagħad, slides ġew ittrattati b'aminoethyl carbazole biex jiżviluppaw is-sezzjonijiet. Slajds tal-ġilda ġew osservati bl-użu ta' mikroskopju Nikon Ti2-U.

PCR Kwantitattiv ta' Traskrizzjoni Reverse (RT-qPCR)

RT-qPCR sar kif deskritt qabel (Lv et al., 2020). Fil-qosor, l-RNA totali taċ-ċelluli SK-MEL-2 ġie estratt bl-użu tar-reaġent TRIzol u kkwantifikat spettrofotometrikament. Single-stranded cDNA ġie sintetizzat bl-użu ta' SuperScript II Reverse transcriptase skont l-istruzzjonijiet tal-manifattur. Twettqet analiżi PCR kwantitattiva SYBR-Green b'Sistema ta' Sekwenza ta' Sekwenza ABI PRISM (Bijosistemi Applikati) u settijiet ta' primer validati minn qabel. Il-kampjuni kollha tmexxew fi tliet kopji. Ċikli ta 'limitu tqiegħdu fil-porzjon logaritmiku tal-kurva ta' amplifikazzjoni, u r-riżultati ġew normalizzati għal GAPDH. Id-differenza darbiet bejn iż-żewġ kampjuni ġiet iddeterminata bil-metodu delta-delta Cq. Is-sekwenzi tal-primers tal-ġene Mitf huma 5′-AGAGCAGGGCAGAGAGTGAGTG-3′, 5′-AACTTGATT CCAGGCTGATGATGTC-3′.

Analiżi Western Blot

Is-sospensjoni tal-proteina nkisbet bħala l-metodu msemmi hawn fuq. Il-proteini intraċellulari estratti (30 ug) ġew separati minn SDS-PAGE (10 fil-mija) u mbagħad trasferiti għal membrana polyvinylidene L fluoride (PVDF), wara protokoll standard ta 'trasferiment imxarrab. Il-membrana ġiet imblukkata bl-użu ta '2.5 fil-mija BSA f'temperatura tal-kamra għal siegħa, esposta għal antikorpi primarji xierqa f'4 gradi C matul il-lejl, u maħsula b'TBST 4 darbiet. Il-membrani ġew esposti għal IgG Anti-Fenek tal-Mogħoż (1:1,000) jew IgG Kontra l-Ġurdien tal-Mogħoż (1:1,000) f'temperatura tal-kamra għal siegħa u maħsula bil-HRP. TBST 4 darbiet (Liao et al., 2017). Il-membrani mbagħad ġew viżwalizzati bl-użu ta 'sistema ta' immaġini ta 'kimiluminixxenza multifunzjonali (Tanon 4600). Kontrolli interni mill-istess blot ġew ittestjati b'anti-actin.

Evalwazzjoni Ibbażata fuq Fenotip u Determinazzjoni tal-Kontenut ta' Melanin fiż-Żebrafish

Żebrafifish adulti nżammu f'tank bil-kundizzjonijiet li ġejjin: 28.5 grad , b'ċiklu ta' dawl/dlam ta' 14/10 siegħa. L-embrijuni nkisbu mit-tnissil naturali li kien indott filgħodu billi jinxtegħel id-dawl. Il-ġbir tal-embrijuni tlestiet fi żmien 30 minuta. L-evalwazzjoni bbażata fuq il-fenotip saret kif deskritt qabel (Choi et al., 2007). Fil-qosor, embrijuni sinkronizzati ġew miġbura u mqassma permezz ta' pipetta (3-4 embrijuni għal kull bir fi 96-pjanċi tal-bir li fihom 200 ul ta' medju tal-embrijuni). FGIN-1-27 u PTU ġew maħlula f'0.1 fil-mija DMSO, imbagħad miżjuda mal-medium tal-embrijuni minn 35 sa 60 siegħa (espożizzjoni ta' 25 siegħa). L-effetti fuq il-melanoġenesi taż-żebrafish ġew osservati taħt l-isterjomikroskopju.

Mudell tal-Ginea Iperpigmentazzjoni Indotta mill-UVB

Tmien fniek tal-Indi kannella (6 ġimgħat, madwar 300 g) inkisbu mill-Istitut tax-Xjenza tal-Annimali tal-Laboratorju (Beijing, iċ-Ċina). Il-fniek ta' l-Indi kienu miżmuma individwalment f'kamra kkontrollata b'temperatura taħt kondizzjonijiet standard tal-laboratorju, b'ċiklu ta' 12-il siegħa dawl/12-il siegħa dlam (dwal mixgħula mid-9:00 AM sad-9:00 PM) b' temperatura kostanti (23 ± 3 grad ) u umdità (50 ± 10 fil-mija). Iż-żoni separati (ċirku dijametriku ta '1 ċm) tad-dahar ta' kull annimal kienu esposti għal 500 mJ/cm2 UVB (Sigma SH-4, Shanghai, iċ-Ċina) darba kuljum għal ġimgħa (Fujimoto et al., 1988; Lee et al., 2013). Imbagħad il-vettura (PEG400/ EtOH 7:3) u FGIN-1-27 (1 fil-mija) ingħataw liż-żoni iperpigmentati (soluzzjoni ta '20 ul għal kull ċirku) darbtejn kuljum għal 3 ġimgħat. Il-grad ta 'pigmentazzjoni tkejjel mill-Ispettrofotometru (YS3010, 3nh, Shenzhen, iċ-Ċina). Il-valur ΔL ġie ddeterminat skont il-valur L imkejjel mill-ispettrofotometru, kif ġej: ΔL L (f'kull jum imkejjel) -L (f'jum 0). Il-proċeduri kollha tal-annimali għal dan l-istudju twettqu skont il-"Gwida tal-NIH għall-Kura u l-Użu tal-Annimali tal-Laboratorju" u approvati mill-kumitat tal-kura u l-użu tal-annimali tal-Università ta 'Changzhou.

Analiżi Statistika

RIŻULTATI

FGIN-1-27 Inibit -MSH, OAG jew ET-1-Sinteżi ta' Melanin Indotta fiċ-Ċelloli SK-MEL-2

Qabel ma ġew investigati l-effetti ta 'FGIN-1-27 (Figura 1A) fuq il-pigmentazzjoni, sar analiżi tal-vijabbiltà taċ-ċelluli biex jiġu eżaminati l-effetti ta' FGIN-1-27 fuq it-tkabbir taċ-ċelluli SK-MEL-2. Kif muri fil-Figura 1B, FGIN-1-27 ma kellu l-ebda effett fuq it-tkabbir taċ-ċelloli SK-MEL- 2 f'medda ta 'dożaġġ ta' 1-16 μM wara 48 siegħa. Fl-assaġġ tal-kontenut tal-melanin, FGIN-1-27 inibixxi l-melanoġenesi bażali (Figura 1C). -MSH huwa lift ta 'cAMP intraċellulari, li jinduċi b'mod sinifikanti melanoġenesi (Rzepka et al., 2016; Corre et al., 2004; Lee et al., 2013). FGIN-1-27 inibixxi wkoll is-sintesi tal-melanin indotta minn -MSH (Figura 1C). B'mod konsistenti, it-tbajja tal-fidda ammonjakali Masson-Fontana indikat li FGIN-1-27 naqqas b'mod sinifikanti l-konċentrazzjoni tal-melanin fiċ-ċelloli SK-MEL-2 bi jew mingħajr -MSH (Figura 1D). Barra minn hekk, OAG huwa lift tal-PKC u ET-1 huwa attivatur tal-mogħdija MAPK, li t-tnejn li huma jistgħu jippromwovu s-sintesi tal-melanin (Kim et al., 2006; Park et al., 2015; Regazzetti et al., 2015). Kif muri fil-Figuri 1E u 1F, FGIN-1-27 inibixxa wkoll b'mod notevoli l-OAG jew il-melanoġenesi indotta minn ET-1-.

FGIN-1-27 Imrażżna Tyrosinase, TRP-1, TRP-2 Espressjoni u Naqqas l-Attività Ċellulari Tyrosinase

Il-melanogenesis hija kkontrollata minn tliet enzimi kritiċi: tyrosinase, TRP-1, u TRP-2 (Zhu et al., 2015). -MSH u ET-1 ippromwovew is-sintesi tal-melanin billi żiedu l-espressjoni ta 'tliet enzimi melanoġeniċi kruċjali (Regazzetti et al., 2015; Lee et al., 2013). Biex ninvestigaw jekk l-effetti li jbajdu ta' FGIN-1-27 humiex relatati mal-espressjoni ta' dawn il-proteini, studjajna l-effett ta' FGIN-1-27 fuq l-espressjoni ta' tyrosinase, TRP-1, u TRP{{10 }} permezz ta' analiżi western-blot. Kif muri fil-Figura 2A, FGIN-1-27 imrażżna tyrosinase, TRP-1, u TRP-2 espressjoni bi jew mingħajr -MSH. FGIN-1-27 reġġa' lura wkoll b'mod konsistenti ET-1- tyrosinase indott, TRP-1, u TRP-2 żieda fl-espressjoni (Figura 2B). B'differenza minn -MSH u ET-1, OAG ippromwova l-melanoġenesi billi żiedet direttament l-attività tat-tyrosinase ċellulari (D'Mello et al., 2016). Kif muri fil-Figuri 2C u 2D, it-trattament ta 'FGIN-1-27 12-il siegħa inibit iż-żieda fl-attività tyrosinase ċellulari indotta minn OAG u ma affettwax l-espressjoni ta' tyrosinase. Barra minn hekk, sar analiżi tal-attività tat-tyrosinase tal-faqqiegħ biex jiġu eżaminati l-effetti diretti ta' FGIN-1-27 fuq l-attività tat-tyrosinase. Kif muri fil-Figura 2E, FGIN-1-27 ma affettwax l-attivitajiet enżimatiċi tat-tyrosinase tal-faqqiegħ. Dawn ir-riżultati ssuġġerew li FGIN-1-27 trażżan l-espressjoni ta' tyrosinase, TRP-1, u TRP-2, u naqqas l-attività ċellulari ta' tyrosinase, iżda ma kellu l-ebda effett dirett fuq l-attivitajiet enżimatiċi ta' tyrosinase.

FGIN-1-27 Naqqas l-Espressjoni tal-MITF

MITF huwa l-fattur traskrizzjoni prinċipali li jinduċi l-espressjoni ta 'tyrosinase, TRP-1, u TRP-2 (Kawasaki et al., 2008; Levy and Fisher, 2011). Kif muri fil-Figura 3A, FGIN-1-27 inibixxi t-traskrizzjoni tal-MITF. Aħna kejlu wkoll l-espressjoni ta' MITF wara li ċ-ċelloli SK-MEL-2 ġew ittrattati b'-MSH fil-preżenza jew in-nuqqas ta' FGIN-1-27. Kif muri fil-Figura 3B, -MSH promossi b'mod sinifikanti l-espressjoni ta 'MITF. Interessanti, l-espressjoni ta' MITF naqset b'mod sinifikanti fil-preżenza ta' FGIN-1-27. FGIN-1-27 soppressa wkoll b'mod konsistenti ż-żieda fl-espressjoni MITF indotta minn ET-1-(Figura 3C). Dawn ir-riżultati ssuġġerew li FGIN-1-27 inibixxi l-espressjoni tal-MITF.

FGIN-1-27 Naqqas l-Espressjoni ta' PKC- , p-PKA Cat, p-CREB, p-p38, u p-ERK

PKA, PKC, u MAPK huma mogħdijiet kritiċi ta 'transduzzjoni fil-melanoġenesi (D'Mello et al., 2016). It-tieni cAMP messaġġier jista 'jattiva PKA, li fosforila CREB, fl-aħħar jippromwovi l-espressjoni ta' MITF (Corre et al., 2004; Rzepka et al., 2016). Il-passaġġ dipendenti PKC- -jirregola l-melanoġenesi permezz tal-attivazzjoni ta 'tyrosinase (Kim et al., 2006; Kawaguchi et al., 2012; Yuan and Jin, 2018). MAPK, inkluż p38, proteina kinase regolata minn sinjal extraċellulari (ERK), u c-jun N-terminal kinase (JNK), ġew irrappurtati li jirregolaw il-pigmentazzjoni (Zhou et al., 2014). Biex nifhmu aktar il-mekkaniżmi molekulari tar-regolazzjoni tal-melanoġenesi mill-FGIN-1-27, kejlna l-mogħdijiet tat-trasduzzjoni involuti fil-pigmentazzjoni. Kif muri fil-Figura 4, FGIN-1-27 naqqas b'mod notevoli l-espressjoni ta' PKC- , p-PKA cat, p-CREB, p-p38, u p-ERK.

FGIN-1-27 Melanoġenesi Inibita fil-Melanoċiti Umani

L-inibizzjoni ta' FGIN-1-27 fuq il-melanoġenesi ġiet ivvalutata fil-melanoċiti tal-epidermide umana (HEM). Kif muri fil-Figura Supplimentari S1, FGIN-1-27 ma kellu l-ebda effett fuq it-tkabbir ta 'HEM f'medda ta' dożaġġ ta '1-16 μM wara 48 siegħa. Kif muri fil-Figura 5A, FGIN-1-27 inibixxi b'mod sinifikanti l-melanoġenesi fl-HEM. L-analiżi tal-Western blotting ssuġġeriet li FGIN-1-27 naqqas il-livelli ta' espressjoni ta' tyrosinase, TRP-1, u TRP-2 f'HEM (Figura 5B). Kif muri fil-Figura Supplimentari S2, it-trattament FGIN- 1-27 12-il siegħa inibit iż-żieda fl-attività tyrosinase ċellulari indotta minn OAG f'HEM. Barra minn hekk, kejlna l-espressjoni ta 'MITF wara HEM ittrattat b'-MSH fil-preżenza jew in-nuqqas ta' FGIN-1-27. Kif muri fil-Figura 5C, l-espressjoni ta 'MITF naqset b'mod sinifikanti fil-preżenza ta' FGIN-1-27. Barra minn hekk, bħal fiċ-ċelloli SK-MEL-2, l-involviment ta 'PKC- , PKA, u MAPK f'anti-melanogenic medjat minn FGIN-1-27- ġie kkonfermat ukoll f'HEM (Figura 5D).

Għal aktar informazzjoni: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501