Estratti ta 'Cistanche Deserticola Jistgħu Jantagonizzaw l-Immunosenescence U Jestendu l-Ħajja Fil-Ġrieden Prone 8 tal-Ġurdien Aċċellerat mis-Senescence (SAM-P8)

Ke Zhang, Xu Ma, Wenjun He, Haixia Li, Shuyan Han, Yong Jiang, Hunan Wu, Li Han, Tomohiro Ohno, Nobuo Uotsu, Kohji Yamaguchi, Zhizhong Ma, u Pengfei Tu

1 Dipartiment tal-Mediċini Naturali, Skola tax-Xjenzi Farmaċewtiċi, Università peking, Nru 38 Triq Xueyuan, Beijing 100191, iċ-Ċina

2 Ċentru Analitiku Mediku u b'saħħtu, Università ta 'Peking, Triq Nru 38 Xueyuan, 100191 ta' Beijing, iċ-Ċina

3 Fakultà tar-Riċerka Fundamentali, Fancl Research Institute, FANCL Corporation, 12-13 Kamishinano, Totsuka-Ku, Yokohama, Kanagawa 244-0806, il-Ġappun

4 Dipartiment tal-Integrazzjoni tal-Mediċina Tradizzjonali Ċiniża u tal-Punent, Skola tax-Xjenzi Mediċi Bażiċi, Università peking, Nru 38 Triq Xueyuan, Beijing 100191, iċ-Ċina

Kuntatt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Is-substrains tal-ġurdien 8 tal-ġrieden aċċellerati bis-senescence (SAM-P8), aċċettati b'mod wiesa 'bħala mudell ta' annimali għall-istudju ta 'mediċini li qed jixjieħu u antiaging, intużaw biex jeżaminaw l-effetti tas-supplimentazzjoni tad-dieta b'estratti ta'Cistanchedeżerticola(ECD) li ntuża b'mod estensiv fil-mediċina tradizzjonali Ċiniża minħabba l-kapaċità perċepita tiegħu li jippromwovi l-funzjoni immuni fl-anzjani. Ġrieden SAM-P8 maskili ta 'tmien xhur ġew ittrattati b'ECD minn amministrazzjonijiet orali ta' kuljum għal 4 ġimgħat. Ir-riżultati wrew li s-supplimentazzjoni tad-dieta ta' 150 mg/kg u 450 mg/kg tal-ECD tista' testendi l-ħajja mkejla bl-analiżi tas-sopravivenza Kaplan-Meier b'mod dipendenti fuq id-doża. Is-supplimentazzjoni tad-dieta tal-ġrieden SAM-P8 għal 4 ġimgħat b'100, 500, u 2500 mg / kg ta 'ECD intweriet li tirriżulta f'żidiet sinifikanti kemm fiċ-ċelloli qattiela naive T kif ukoll naturali fil-popolazzjonijiet taċ-ċelloli tad-demm u tal-milsa. B' kuntrast ma ' dan, iċ- ċelluli T tal- memorja periferali u ċ- ċitokini proinflammanti, IL- 6 fis- serum, naqsu b' mod sostanzjali fil- ġrieden li inġemgħu 100 u 500 mg/ kg ta ' ECD kuljum. Barra minn hekk, ċelloli pożittivi sca-1, il-proġenituri rikonoxxuti ta 'ċelloli T naive periferali, ġew restawrati b'mod parallel. Ir-riżultati tagħna jipprovdu appoġġ sperimentali ċar għal studji ta 'osservazzjoni klinika li ilhom jeżistu li juru liCistanchedeżerticolajippossjedi effetti sinifikanti fl-estensjoni tal-ħajja u jissuġġerixxi li dan jinkiseb billi jantagonizza l-immunosenexenza.

CistancheJistgħukontra t-tixjiħUġilda bajdanija

Introduzzjoni

Cistanchedeżerticola, waħda mill-aktar mediċini veġetali tradizzjonali Ċiniżi popolari / prodotti tas-saħħa, ġiet deskritta f'numru ta 'farmakopeias veġetali Ċiniżi storiċi bħala li għandhom proprjetajiet antiaging. Konsegwentement, intuża ħafna fiċ-Ċina għall-kura ta 'diversi disturbi relatati mal-età inklużi dimenzja senile, impotenza, infertilità, infezzjoni kronika, u disturbi ematopojetiċi fl-anzjani [1]. Approċċi kimiċi moderni ppermettew li żewġ tipi prinċipali ta' komposti, glikosidi tal-fenilentanojdi, u oligosakkaridi, jiġu iżolati bħala l-ingredjenti attivi ewlenin ta'Cistanchedeżerticola[1]. Fl-aħħar għaxar snin,Cistanchedeżerticolau l-estratti tiegħu ġew studjati b'mod intensiv u murija li jistgħu jipproteġu n-newroni minn korriment ikkawżat min-newrotossini [2], li jinibixxu epatotossiċità kkawżata minn tetraklorur tal-karbonju [2], u jippromwovu l-irkupru taċ-ċelloli tal-mudullun minn ħsara kkawżata mir-radjazzjoni minn Co60 [3]. Intwera wkoll li għandu effetti anti-infjammatorji, antiossidanti u antiaging [4]. Madankollu, jekk Cistanche deserticola tistax iżżid il-ħajja u x'inhuma l-mekkaniżmi molekulari sottostanti [3] assoċjati mal-proprjetajiet antiaging tagħha ma ġewx ittestjati b'mod rigoruż.

Immunosenescence, jiġifieri, tibdil fis-sistema immunitarja bl-età jifforma l-isfond li bih ġiet innotata żieda fis-suxxettibilità għall-infezzjonijiet, kanċer, mard newrodeġenerattiv, u mard awtoimmuni fl-anzjani [5]. Interventi terapewtiċi, bħar-restrizzjoni kalorika [6] u s-supplimentazzjoni tal-vitamina E, ġew irrappurtati li huma effettivi biex idewmu l-progressjoni tal-immunosenexenza u b'hekk inaqqsu l-morbożità ta' xi mard relatat mal-età kif ukoll itawlu l-ħajja kemm tal-bnedmin kif ukoll tal-annimali gerriema [7, 8]. Madankollu, studji f'dan il-qasam huma kkumplikati mill-fatt li t-tixjiħ huwa assoċjat mal-paradoss ta 'defiċjenza immuni simultanja u infjammazzjoni kronika [9]. Dan ifisser li stimulazzjoni sempliċi tal-proliferazzjoni tal-limfoċiti jew tal-anti-infjammazzjoni ma tirrappreżentax interventi terapewtiċi ideali fit-trattament tat-tixjiħ u kundizzjonijiet relatati mal-età [10]. Konsegwentement fit-tfittxija għal interventi mediċi li kapaċi jipprevjenu jew itaffu l-kundizzjonijiet relatati mal-età inklużi infezzjonijiet, kanċer, mard awtoimmuni, aterosklerożi, u mard newrodeġenerattiv li qed iwassal għal kawżi ta 'mewt u diżabilità, u t-tiswija ta' difetti fis-sistema immunitarja għandha tkun akkumpanjata minn inibizzjoni ta 'reazzjonijiet infjammatorji.

Il-ġurdien aċċellerat bis-senescence [11] huwa mudell ta 'ġurdien imnikkta, derivat mir-razza AKR / J, li jintuża ħafna fi studji ta' tixjiħ. Is-substrain P8 (SAM-P8) ta 'dawn il-ġrieden għandu ħajja mqassra b'mod sinifikanti meta mqabbel mas-substrain R1 (SAM-R1), li juri wkoll proċess ta' tixjiħ aktar bil-mod [12]. B'mod parallel mat-tixjiħ prematur tagħhom, il-ġrieden SAM-P8 juru wkoll żieda fis-senescence newroloġika, immunosenexenza, u defiċits ematopojetiċi relatati mal-età li jimitaw mill-qrib il-karatteristiċi tipiċi tat-tixjiħ tal-bniedem [13, 14]. Analiżi tal-mekkaniżmi sottostanti responsabbli għall-proċess ta 'tixjiħ aċċellerat u disturbi relatati mal-età tindika li disfunzjoni mitokondrijali [15], stress ossidattiv, u rata ta' mutazzjoni tad-DNA somatiċi miżjuda kollha jidhru li huma involuti [16, 17]. Din is-sistema tal-ġrieden, bl-isfond ġenetiku omoġenju tagħha, għalhekk, tipprovdi mudell sperimentali eċċellenti għall-istudju tat-terapiji tat-tixjiħ u tal-antiaging [12]. Dan l-istudju ffoka fuq l-investigazzjoni ta 'jekk estratti ta' Cistanche deserticola humiex kapaċi jestendu l-ħajja tal-ġrieden SAM-P8 u jreġġgħu lura l-istatus ta 'immunosenescence tagħhom.

cistancheechinacosideJistgħukontra t-tixjiħ

Riżultati

3.1. Analiżi ta' Komponenti Attivi Potenzjali f'Estratti ta' Cistanche deserticola (ECD). Kif muri fit-Tabella 1, l-ECD huwa magħmul prinċipalment minn żewġ tipi ta' glikosidi komposti, fenenitanojdi, u oligosakkaridi. Fil- glikosidi tal- fenitanojdi, l- echinacoside, l- acteoside, u l- aċidu 8- epiloganiku ġew identifikati, filwaqt li fl- oligosakkaridi, ġie identifikat biss galactitol.

3.2. L-Impatt tal-Estratti tad-deżertifikazzjoni Cistanche fuq il-Ħajja Medja tal-Ġrieden SAM-P8. Għal dan u studji sussegwenti, ġrieden SAM-P8 maskili ta 'tmien xhur kienu maqsuma f'4 gruppi. Fosthom, grupp wieħed ta 'ġrieden ġew mitmugħa b'dieta normali mingħajr ECD, it-3 gruppi l-oħra inbelgħu separatament id-dieti li fihom proporzjonijiet differenti ta' ECD. Ġrieden mis-substrain SAM-R1, li għandhom proċess normali ta 'tixjiħ u ħajja, intużaw bħala grupp ta' kontroll fl-esperimenti kollha.

Meta mqabbel mal-grupp TA 'kontroll SAM-R1, il-ħajja medja tal-ġrieden SAM-P8 tqassar b'mod sinifikanti (Figura 1(a); P< 0.001).="" although="" supplementation="" of="" diet="" with="" the="" low="" dose="" (50="" mg/kg)="" of="" ecd="" failed="" to="" produce="" a="" significant="" increase="" in="" a="" life="" span="" of="" sam-p8="" mice,="" at="" the="" medium="" (150="" mg/kg)="" and="" high="" (450="" mg/ml)="" supplementary="" doses="" there="" was="" a="" dose-dependent="" increase="" in="" life="" span="" (figures="" 1(a)="" and="" 1(b);="" 𝑃="">< 0.05–0.01)="" that="" was="" confirmed="" by="" kaplan-meier="" survival="" analysis,="" which="" included="" the="" use="" of="" both="" the="" log-rank="" (mantel-cox)="" and="" gehan-breslow-wilcoxon="">

3.3. Treġġigħ lura tal-Immunosenescence fil-Ġrieden SAM-P8 minn Estratti ta' Cistanche deserticola (ECD). Tnaqqis fil- limfoċiti T naïve periferali u żieda konkomitanti ta ' limfoċiti T tal- memorja periferali huma karatteristiċi prominenti ta ' immunosenexenza li huma meqjusa b' mod wiesa ' bħala r- raġunijiet sottostanti ewlenin għal anormalitajiet immunoloġiċi relatati ma ' l- età. Din l- immunosenescence f' SAM- P8 meta mqabbla ma ' annimali SAM- R1 kienet evidenti b' mod ċar meta l- analiżi tal- FACS intużat biex telenka l- limfoċiti (CD3+ CD44low CD45RBhigh) bħala indikatur ta ' ċelluli T naïve u limfoċiti (CD3+ CD44high CD45BRlow) bħala indikatur taċ- ċelluli T tal- memorja. Għalhekk, kemm fil- popolazzjonijiet tad- demm periferali (Figura 2) kif ukoll taċ- ċellula tal- milsa (Figura 3) naqqsu l- livelli ta ' ċelluli T naïve u livelli ogħla ta ' ċelluli T tal- memorja dehru fil- ġrieden SAM- P8. Is-supplimentazzjoni tad-dieta tal-ġrieden SAM-P8 bl-ECD instabet li kienet kapaċi treġġa' lura dawn l-indikaturi ta' immunosenexenza b'mod dipendenti fuq id-doża kemm fil-popolazzjonijiet tad-demm periferali (Figura 2) kif ukoll taċ-ċellula tal-milsa (Figura 3). Bħala indikatur addizzjonali tat-treġġigħ lura tal-immunosenexexxenza permezz ta 'supplimentazzjoni ta' dieta ECD, ġie analizzat il-livell ta 'ċelloli qattiela naturali [18], markatur ċellulari ewlieni tas-sistema immuni intrinsika. Dan wera li s- supplimentazzjoni tad- dieta ecD irriżultat f' żieda dipendenti fuq id- doża fiċ- ċelloli NK (CD3+ CD49+) kemm fid- demm periferali (Figura 4) kif ukoll fil- popolazzjonijiet taċ- ċelluli tal- milsa (Figura 5).

3.4. Estratti tad-deżertifikazzjoni Cistanche Isaħħu l-Intensità Relattiva tal-Fluworexxenza taċ-Ċelloli Pożittivi sca-1 fil-Ġrieden SAM-P8. L-antiġen-1 taċ-ċelloli staminali (Sca-1) huwa wieħed mill-aktar bijomarkaturi prominenti taċ-ċelloli staminali ematopojetiċi (HSC) fil-popolazzjonijiet taċ-ċelloli tal-mudullun. Ċelloli pożittivi għall- iskor-1 jirrappreżentaw ukoll proġenituri tal-limfoċiti li ġew esportati mill-mudullun għal demm periferali fejn jgħaddu minn aktar differenzjazzjoni f'diversi tipi ta' limfoċiti maturi. Konsegwentement, dawn iċ- ċelluli pożittivi ta ' Sca- 1 jirrappreżentaw is- sors ewlieni ta ' limfoċiti T naïve fid- demm periferali. Il-Figura 6 turi li meta mqabbla mal-ġrieden tal-kontroll SAM-R1, l-intensità relattiva tal-fluworexxenza taċ-ċelloli pożittivi sca-1 fil-ġrieden SAM-P8 kienet sostanzjalment aktar baxxa. Is-supplimentazzjoni tad-dieta ta 'ġrieden SAM-P8 bi tliet dożi differenti ta' ECD intweriet li ttejjeb b'mod sinifikanti l-intensità relattiva tal-fluworexxenza taċ-ċelloli pożittivi sca-1 (Figura 6).

3.5. Estratti ta' Cistanche deserticola (ECD) Jippromwovu l-Apoptożi u Jinibixxu n-Nekrożi tal-Limfoċiti fil-Ġrieden SAM-P8. Il- livelli ta ' nekrożi u apoptożi fil- popolazzjonijiet tal- limfoċiti fid- demm ġew analizzati permezz ta ' tbajja ' doppji ma ' l- Annessin V- FITC V/ PI. Dan żvela li l- proporzjon ta ' limfoċiti nekrotiċi fi ġrieden SAM- P8 kien ogħla b' mod sinifikanti milli f' annimali ta ' kontroll SAM- R1, filwaqt li l- proporzjon ta ' limfoċiti apoptotiċi kien aktar baxx (Figura 7). Is- supplimentazzjoni tad- dieta ta ' ġrieden SAM- P8 bi tliet dożi differenti ta ' ECD kienet kapaċi tfixkel il- livelli ta ' nekrożi li dehru f' popolazzjonijiet ta ' limfoċiti periferali, filwaqt li ż- żewġ livelli ogħla biss ta ' supplimentazzjoni ta ' ECD ipproduċew bidla sinifikanti fil- livell ta ' limfoċiti apoptotiċi (Figura 7).

cistancheJistgħuanti-ossidazzjoni

3.6. Estratti ta' Cistanche deserticola (ECD) Naqqas iċ-Ċitokina Proinflammattiva IL-6 fil-Ġrieden SAM-P8. Bħala indikatur ieħor tal- kapaċità ta ' l- ECD li jinfluwenza bidliet relatati ma ' l- età fis- sistema immunitarja, l- effett tas- supplimentazzjoni tad- dieta ECD fuq il- livell ta ' numru ta ' ċitokini (IFN- γ, TNF- α, IL- 2, IL- 6, IL- 10, GM- CSF, u IL- 3) ġie analizzat bl- użu ta ' analiżi tal- firxa taċ- ċitometrika taż- żibeġ (CBA) li tinvolvi tbajja ' b' antikorpi ttikkettjati biż- żebgħa fluworexxenti flimkien ma ' żibeġ ċitometriċi tal- qbid. Ir- riżultati (Figura 8) urew li ċ- ċitokina infjammatorja IL- 6 ma żdiedetx fi ġrieden SAM- P8 ta ' 8 monthold meta mqabbla ma ' ġrieden SAM- R1 ta ' kontroll ta ' l- istess età, iżda żdiedet b' mod sinifikanti meta mqabbla ma ' ġrieden SAM- R1 ta ' 6 xhur (ir- riżultati ma ntwerewx). Madankollu, is-supplimentazzjoni tad-dieta b'dożi għoljin u medji ta' ECD kienet kapaċi tipproduċi tnaqqis statistikament sinifikanti fil-livelli il-6 fil-plażma (Figuri 8(a) u 8(b), P< 0.05).="" the="" plasma="" levels="" of="" the="" other="" cytokines="" examined="" (ifn-𝛾,="" tnf-𝛼,="" il-2,="" il-10,="" gm-csf,="" and="" il-3)="" showed="" no="" significant="" variations="" between="" sam-p8,="" sam-r1,="" and="" ecd="" treated="" groups="" of="" mice="" (data="" not="">

4. Diskussjoni

Id-difiża immuni kontra mikroorganiżmi invażivi ġodda jew ċelloli tat-tumur endoġeni tiddependi fuq id-diversità tar-repertorju taċ-ċelloli T, li min-naħa tiegħu jiddependi fuq il-ġenerazzjoni u l-manutenzjoni ta 'ċelloli T naive [19]. Matul il-proċess tax-xjuħija, id-diversità tar-repertorju taċ-ċellula-T intweriet li tonqos b'mod drammatiku minħabba t-tnaqqis progressiv taċ-ċelloli T inġenwi fil-ġabra ta 'riżerva periferali. Huwa dan in- nuqqas ta ' ċelluli T inġenwi li jirrispondu li kienu maħsuba li huma responsabbli għas- suxxettibilità ta ' l- anzjani għal infezzjoni, kanċer, u riżultati ħżiena wara t- tilqima [20]. Diversi interventi, inkluża r-restrizzjoni kalorika [7], eżerċizzju [21], u supplimentazzjoni tal-vitamina E [8], kollha ntużaw biex jimlew b'suċċess iċ-ċelloli T inġenwi u b'hekk jestendu l-ħajja u jnaqqsu l-bidu tal-infezzjoni u l-kanċer fost l-anzjani. F'dan l-istudju, urejna li l-ECD huwa kapaċi jżid il-livell ta 'ċelloli T inġenwi fil-pixxina periferali u kien hemm estensjoni konkomitanti tal-ħajja u tnaqqis fil-frekwenza tal-formazzjoni tat-tumur fi ġrieden aċċellerati bis-senescence (grupp terapewtiku ECD kontra SAM-P8, 0 kontra 1/6). Għalhekk, jidher raġonevoli li jiġi konkluż li l-kapaċità tal-ECD li treġġa' lura t-tnaqqis dipendenti fuq l-età taċ-ċelloli T inġenwi periferali tista' tikkontribwixxi għall-effetti magħrufa tagħha fit-tnaqqis tal-mard relatat mal-età li jirriżulta minn osservazzjonijiet kliniċi fit-tul.

cistanchel-aġġeosideJistgħukontra t-tixjiħ

Referenzi

[1] Y. Jiang u P.-F. Tu, "Analysis of chemical constituents in Cistanche species," Journal of Chromatography A, vol. 1216, no. 11, pp. 1970–1979, 2009.

[2] Q. Xiong, K. Hase, Y. Tezuka, T. Tani, T. Namba, u S. Kadota, "Attività epatoprotettiva tal-fenitanojdi minn Cistanche deserticola," Planta Medica, vol. 64, nru 2, pp. 120–125, 1998.

[3] "Immunoloġija u tixjiħ fl-Ewropa. Proċediment tat-2 Konferenza dwar il-Bijoloġija Bażika u l-Impatt Kliniku tal-Immunosenescence. 22-26 ta 'Marzu, 2001, Cordoba, Spanja," Ġerontoloġija Sperimentali, vol. 37, Nru 2-3, pp. 183–473, 2002.

[4] G.-D. Xuan u C.-Q. Liu, "Riċerka dwar l-effett tal-glikosidi tal-fenitanojde (PEG) tad-deżertifikati Cistanche fuq l-anti-aging fi ġrieden ta'età kkawżati minn D-galactose," Ġurnal tal-Materjali Mediċinali Ċiniżi, vol. 31, nru 9, pp. 1385–1388, 2008.

[5] D. Aw, A. B. Silva, u D. B. Palmer, "Immunosenescence: sfidi emerġenti għal popolazzjoni li qed tixjieħ," Immunoloġija, vol. 120, nru 4, pp. 435–446, 2007.

[6] M. Alizadeh, H. Pohla, A. Rehbein, u G. Pawelec, "Kultura fit-tul ta' limfoċiti T umani monoklonali: mudelli għall-immunosenescence?" Mekkaniżmi ta' Tixjiħ u Żvilupp, vol. 83, nru 3, pp. 171–183, 1995.

[7] E. H. Greeley, E. Spitznagel, D. F. Lawler, R. D. Kealy, u M. Segre, "Modulazzjoni tal-immunosenescence tal-klieb b'restrizzjoni kalorika tul il-ħajja," Immunoloġija Veterinarja u Immunopatija, vol. 111, pp. 287–299, 2006.

[8] S. N. Meydani, S. N. Han, u D. Wu, "Vitamina E u rispons immuni fl-età: mekkaniżmi molekulari u implikazzjonijiet kliniċi," Reviżjonijiet Immunoloġiċi, vol. 205, pp. 269–284, 2005.

[9] S. G. Deeks, "Infezzjoni tal-HIV, infjammazzjoni, immunosenescence, and aging," Reviżjoni Annwali tal-Mediċina, vol. 62, pp. 141–155, 2011.

[10] M. Capri, D. Monti, S. Salvioli et al., "Complexity of antiimmunosenescence strategies in humans," Artificial Organs, vol. 30, no. 10, pp. 730–742, 2006.

[11] S. Antonaci, A. R. Garofalo, C. Chicco et al., "Dimenzja senile, tip Alzheimer: entità distinta fl-immunosensescence?" Ġurnal tal-Analiżi tal-Laboratorju Kliniku, vol. 4, nru 1, pp. 16–21, 1990.

[12] R. Takahashi, "Studji kontra t-tixjiħ dwar ir-razez tal-ġurdien aċċellerati mas-senescence (SAM)," Yakugaku Zasshi, vol. 130, nru 1, pp. 11–18, 2010.

[13] S. Llor'ens, R. M. M.-F. De Mera, A. Pascual et al., "Il-ġurdien aċċellerat mis-senescence (SAM-P8) bħala mudell għall-istudju ta 'alterazzjonijiet funzjonali vaskulari waqt it-tixjiħ," Bijogerontoloġija, vol. 8, nru 6, pp. 663–672, 2007.

[14] T. Takeda, "Ġurdien aċċellerat bis-Senescence (SAM) b'referenzi speċjali għal mudelli ta ' newrodeġenerazzjoni, ġrieden SAMP8 u SAMP10," Riċerka Newrokimika, vol. 34, nru 4, pp. 639–659, 2009.

[15] H. Nakahara, T. Kanno, Y. Inai et al., "Disfunzjoni mitokondrijali fil-ġurdien aċċellerat fis-senescence (SAM)," Bijoloġija Radikali Ħielsa u Mediċina, vol. 24, Nru 1, pp. 85–92, 1998.

[16] J. Mizutani, T. Chiba, M. Tanaka, K. Higuchi, u M. Mori, "Mutazzjonijiet uniċi fid-DNA mitokondrijali tar-razez tal-ġurdien aċċellerat mis-senescence (SAM)," Ġurnal tal-Eredità, vol. 92, nru 4, pp. 352–355, 2001.

[17] A. Mori, K. Utsumi, J. Liu, u M. Hosokawa, "Ħsara ossidattiva fil-ġurdien aċċellerat mis-senescence," Annals tal-Akkademja tax-Xjenzi ta' New York, vol. 854, pp. 239–250, 1998.

[18] W. B. Ershler, W. H. Sun, N. Binkley et al., "Interleukin-6 u aging: livelli tad-demm u żieda fil-produzzjoni taċ-ċelloli mononukleari bl-età li tavvanza u l-produzzjoni in vitro hija modifikabbli bir-restrizzjoni tad-dieta," Riċerka lymphokine u Cytokine, vol. 12, nru 4, pp. 225–230, 1993.

[19] A. N. Vallejo, "Remodeling immuni: lezzjonijiet minn alterazzjonijiet repertorju waqt tixjiħ kronoloġiku u f'mard medjat mill-immunità," Tendenzi fil-Mediċina Molekulari, vol. 13, nru 3, pp. 94–102, 2007.