2 Metodi tat-test

2.1 Analiżi tal-farmakoloġija tan-netwerk

2.1.1 Ingredjenti attivi ta' Cistanche deserticola

Fuq il-bażi ta' studji eżistenti [7, 22], "Echinacoside", "Verbascoside", "Cistanoside A", "Tubuloside A", "Isoacteoside", "2-Acetylatteoside" u "Tubuloside B" ġew magħżula bħala l-komponenti bijoattivi għall-analiżi. Sib id-dejta tal-istruttura kimika tridimensjonali tas-seba 'ingredjenti ta' hawn fuq permezz ta 'Pubchem (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/) u ssalvahom f'format sdf.

2.1.2 Tbassir u skrinjar ta' miri potenzjali

Importa l-fajls tal-istruttura tridimensjonali tal-ingredjenti attivi fid-database PharmMapper(http://lilab-ecust.cn/pharmmapper/index.html). Agħżel "miri tal-proteina umana biss" bħala l-ispeċi fil-mira, u żomm l-għażliet l-oħra bħala default biex tikseb id-dejta korrispondenti ta 'ingredjenti differenti. Mira mira korrispondenti.

Id-database UniProt (https://www.uniprot.org/) intużat biex tinkiseb l-informazzjoni dwar l-isem tal-proteina u l-isem tal-ġene li tikkorrispondi għal kull mira. Għaqqad il-punti fil-mira li jikkorrispondu għas-7 komponenti.

Fid-database GeneCards (https://www.genecards.org/), uża "mard infjammatorju tal-musrana" bħala l-kelma prinċipali biex tfittex ġeni relatati mal-mard infjammatorju tal-musrana, u organizza r-riżultati tat-tfittxija.

Suppliment ta' Cistanche Suppliment ta' appoġġ Anti-Infjammatorju PhGs75% Ech 30% Att 12%

2.1.3 Interazzjoni proteina-proteina (PPI)

Kostruzzjoni tan-netwerk Uża jvenn (https:/jvenn.toulouse.inrae.fr/app/example.html) biex tfassal dijagramma Venn onlajn biex tikseb l-intersezzjoni tal-miri tal-ingredjent attiv Cistanche deserticola u l-miri tal-IBD. Tella' l-miri tal-intersezzjoni miksuba fid-database String għall-analiżi tal-iskrinjar tal-PPI. Niżżel il-fajl TSV tan-netwerk PPI, importah f'Cytoscape 3.8.0, ikkalkula l-valur tal-grad tan-netwerk tal-interazzjoni tal-proteini, u mbagħad isebbħu d-dijagramma tan-netwerk PPI ibbażata fuq il-valur tal-grad.

2.1.4 Ontoloġija tal-Ġene (GO)

L-arrikkiment funzjonali u l-analiżi tal-arrikkiment tal-mogħdija tal-Enċiklopedija ta 'Kyoto tal-Ġeni u l-Ġenomi (KEGG) saru bl-użu tad-database DAVID (https://david.ncifcrf.gov/) biex jiġu identifikati l-miri tal-effetti protettivi tal-ingredjenti attivi ta' Cistanche deserticola fuq IBD. Twettqet analiżi GO fuq il-punti, u mbagħad id-database DAVID intużat biex twettaq analiżi ta 'arrikkiment tal-mogħdija KEGG fuq il-miri fejn l-ingredjenti attivi ta' Cistanche deserticola għandhom rwol protettiv fl-IBD.

2.1.5 Kostruzzjoni ta' netwerk ta' "mogħdija ta' ingredjent attiv-mira" ta' Cistanche deserticola

L-ingredjenti attivi ta 'Cistanche deserticola, il-miri ta' intersezzjoni ta 'ingredjenti attivi ta' Cistanche deserticola u IBD u l-mogħdijiet arrikkit minn KEGG intużaw biex jinbena netwerk ta 'l-ingredjent attiv-mira-mogħdija.

2.2 Validazzjoni tal-mudell tal-annimali

2.2.1 Stabbiliment tal-mudell tal-annimali

Ġrieden maskili BALB/c grad SPF (5 ~ 8 ġimgħat, 18 ~ 21 g) intużaw, ipprovduti miċ-Ċentru tal-Ittestjar tal-Ikel tas-Saħħa tal-Iskola tal-Arti u x-Xjenzi Applikati, Università tal-Unjoni ta 'Beijing [Numru tal-Liċenzja għall-Użu tal-Annimali Sperimentali: SYXK (Beijing ) 2017-0038], Inżammu f'kamra ta 'l-annimali ta' grad SPF b'temperatura ta '(23±2) grad, umdità relattiva ta' 50% sa 70%, u 12-il siegħa ta 'espożizzjoni għal dawl fluworexxenti li jalterna lejl u nhar . Il-protokolli tal-esperimenti tal-annimali ġew kollha approvati mil-Laboratorju tal-Annimali taċ-Ċentru tal-Ittestjar tal-Ikel tas-Saħħa, l-Iskola tal-Arti u x-Xjenzi Applikati, l-Università tal-Unjoni ta 'Beijing. Wara tmigħ adattiv għal 3 ijiem, 20 ġrieden ġew maqsuma b'mod każwali f'4 gruppi skont il-piż tal-ġisem, b'5 ġrieden f'kull grupp. ①Grupp ta 'kontroll (CZ): ixrob ilma sterili b'mod liberu u gavage ilma sterili għal 7 ijiem konsekuttivi; Grupp ta 'kontroll ②DSS

(DZ): Ħieles li tixrob 3% soluzzjoni DSS ippreparata kuljum għal 7 ijiem konsekuttivi; ③ Grupp ta 'doża baxxa ta' glycosides totali ta 'Cistanche deserticola (LZ) (konċentrazzjoni ta' likwidu: 0.1 g/mL): Ħieles li tixrob 3% soluzzjoni DSS ippreparata kuljum għal 7 ijiem; , likwidu gavage għal 7 ijiem konsekuttivi; ④ Cistanche deserticola grupp ta' doża għolja ta' glikożidi totali (HZ) (konċentrazzjoni ta' likwidu 0.4 g/

mL): Ixrob is-soluzzjoni DSS 3% ippreparata friska kuljum liberament, u agħti s-soluzzjoni bil-gavage għal 7 ijiem konsekuttivi. Wara 7 ijiem ta 'mudellar kontinwu, kienu sajmu għal 12-il siegħa u mbagħad sagrifikati permezz ta' dislokazzjoni ċervikali. Iċ-ċelluli ħomor tad-demm tat-tiġieġ ġew injettati intraperitonealment 4 sigħat qabel l-eżekuzzjoni. Immedjatament wara l-eżekuzzjoni, il-boċċi tal-għajnejn tneħħew biex jiġbru d-demm. Il-fluwidu peritoneali ġie estratt u nfetħet il-kavità addominali. It-tul tal-kolon tkejjel, u tneħħew il-milsa tal-ġurdien, l-għoqda ta 'Peyer u organi oħra.

Suppliment ta 'Cistanche Suppliment ta' appoġġ Anti-Infjammatorju

2.2.2 Indiċi tal-attività tal-mard (DAI)

Il-ġrieden kienu jintiżnu qabel l-amministrazzjoni intragastrika f'ħin fiss kuljum, u l-istat mentali u l-proprjetajiet tal-ħmieġ tal-ġrieden ġew osservati. Demm okkult ippurgar kien imkejjel u skurjat kif xieraq. L-istandards tal-punteġġ huma murija fit-Tabella 1. Punteġġ DAI=(punteġġ tal-piż tal-ġisem + punteġġ tal-karattru tal-ippurgar + punteġġ tad-demm okkult tal-ippurgar)/3 (1)

Tabella 1 Kriterji ta' punteġġ tad-DAI

2.2.3 Sejbien tal-mogħdija tas-sinjali immuni (qRT-PCR) ta' detezzjoni kwantitattiva tal-PCR ta' fluworexxenza f'ħin reali

Il-milsa tal-ġrieden inġabret, inqatgħu fi 0.5 ċm blokki tat-tessuti, u mxarrba f'soluzzjoni stabilizzanti tal-RNA tat-tessuti għall-ħażna. Neħħi t-tessut u aqta 'f'biċċiet, żid is-soluzzjoni ta' estrazzjoni tal-RNA u itħan f'biċċiet biex tiġbed l-RNA totali. Wara t-traskrizzjoni inversa u l-amplifikazzjoni tal-PCR, ġiet skoperta l-attivazzjoni ta 'żewġ mogħdijiet ewlenin ta' sinjalazzjoni immuni, mTOR u TGF- , fil-milsa tal-ġrieden. Is-sekwenzi tal-primer użati fil-qRT-PCR huma murija fit-Tabella 2.

Tabella 2 Tabella tas-sekwenza tal-Primer