Esplorazzjoni tal-Mekkaniżmu tal-Formula Cistanche li tirregola NLRP3 Piroptożi medjata mill-infjammatur fit-trattament tal-prostatite kronika
Jun 05, 2025
Għan:
Dan l-istudju kellu l-għan li jinvestiga l-mekkaniżmu li bih formula erbali bbażata fuq Cistanchejirregola l-attivazzjoni tal-NLRP3 inflammasomeu jinibixxipiroptożifit-trattament taProstatite kronika tat-Tip III (CP/CPPS).
Metodi:
(1) Esperiment fuq l-annimali:
Ħamsin firien SD maskili ġew assenjati b’mod każwali f’ħames gruppi: gruppi ta’ kontroll, mudell, u trattat bil-formula Cistanche fibaxx (4.9 g/kg), medju (9.8 g/kg), u għoli (19.6 g/kg)dożi, b'10 firien f'kull grupp. Ħlief għall-grupp ta 'kontroll, il-firien kollha ġew indotti bihomProstatite tat-Tip IIIpermezz ta 'injezzjoni intraprostatika ta' estratt ta 'proteina tal-prostata flimkien ma' CFA. Wara mmudellar b’suċċess, il-firien irċevew amministrazzjoni intragastrika ta’ kuljum jew ta’ salina normali (gruppi ta’ kontroll u mudell) jewFormula bbażata fuq Cistanchegħal 30 jum.
L-infjammazzjoni tat-tessut tal-prostata ġiet evalwata minnTbajja ta' Hematoxylin-Eosin (HE).. SerumIL-1uIL-18kienu mkejla minnELISA, filwaqt li markaturi tal-istress ossidattiv (MDA, SOD, uGSH-Px) ġew evalwati b'mod bijokimiku.espressjoni NLRP3fit-tessut tal-prostata ġie misjub minnimmunoistokimika, uLivelli ta' proteini NLRP3, Caspase-1, u GSDMDġew analizzati bl-użuWestern blot.
(2) Esperiment taċ-ċelluli:
Ċelloli epiteljali tal-prostata tal-bniedem (RWPE-1)kienu maqsuma fi kontroll, mudell,Formula Cistanche, uInibitur NLRP3 (MCC950)gruppi. Ħlief għall-grupp ta 'kontroll, iċ-ċelloli kollha ġew stimulati bihomLPS (100 ng/mL, 4 sigħat)uATP (5 mmol/mL, 30 min)biex jinduċi piroptożi. Wara l-immudellar, il-gruppi ta 'kontroll u mudell irċevew serum vojt, filwaqt li l-grupp Cistancheriċevuti6.25 ug/mL serum li fih il-mediċina. Il-grupp ta 'inibituri ġie ttrattat bihMCC950.
assorbiment tal-PIuEspressjoni Caspase-1ġew evalwati permezzċitometrija tal-fluss. Rilaxx LDHkien imkejjel bijokimiku.Supernatant IL-1 u IL-18 livelliġew ikkwantifikati minn ELISA.Western blotintuża biex jinstabNLRP3, Caspase-1, u GSDMDespressjoni.
Riżultati:
(1) Esperiment fuq l-annimali:
Meta mqabbel mal-grupp ta 'kontroll, il-grupp mudell wera infiltrazzjoni sinifikanti taċ-ċelluli infjammatorji, deġenerazzjoni epiteljali, u edema interstizjali fit-tessut tal-prostata. Il-Gruppi trattati bi Cistanchewera tnaqqis dipendenti fuq id-doża f'dawn il-bidliet patoloġiċi.
Livelli tas-serum IL-1 u IL-18żdiedu b'mod sinifikanti fil-grupp tal-mudell (P<0.01) u naqas b'mod sinifikanti fil-Cistanche gruppi ta' doża baxxa, medja u għolja (P<0.01).
livelli MDAkienu elevati fil-grupp mudell (P<0.01) iżda mnaqqsa b'mod sinifikanti bit-trattament ta' Cistanche (P<0.01).
Livelli ta' SOD u GSH-Pxnaqsu fil-grupp mudell (P<0.05) u żdiedet b'mod sinifikanti fil-gruppi kollha kkurati b'Cistanche (P<0.01, P<0.05).
Immunoistokimikawera elevatiespressjoni NLRP3fil-grupp mudell, li kien imnaqqas b'mod sinifikanti bit-trattament ta 'Cistanche.
Western blotriżultati wrew livelli ogħla ta 'proteina ta'NLRP3, Caspase-1, u GSDMDfil-grupp mudell (P<0.01), li kollha ġew inibiti b'mod sinifikanti minn Cistanche (P<0.01).
(2) Esperiment taċ-ċelluli:
Il-Rata ta' teħid ta' PI, Espressjoni Caspase-1, uRilaxx LDHżdiedu b'mod sinifikanti fil-grupp tal-mudell (P<0.01), iżda mnaqqsa b'mod sinifikanti kemm fil-CistancheuMCC950gruppi (P<0.01).
IL-1 u IL-18 livellifis-supernatant kienu elevati b'mod sinifikanti fil-grupp tal-mudell (P<0.01) u naqas b'mod sinifikanti fil-Cistancheugruppi inibituri (P<0.01).
Western blotwera żieda sinifikanti fl-espressjoni tal-proteini NLRP3, Caspase-1, u GSDMD fil-grupp mudell (P<0.01), li kienu rregolati b'mod sinifikanti fl-Cistancheugruppi inibituri (P<0.01).
Konklużjoni:
Il-Formula tal-ħxejjex ibbażata fuq Cistanchejeżerċita effetti terapewtiċi fuqProstatite kronika tat-Tip IIIminnjinibixxi l-attivazzjoni inflammasome NLRP3, u b'hekk tnaqqasAttivazzjoni ta' Caspase-1, prevenzjoniqsim GSDMD u piroptożi, u jrażżnurilaxx ta' ċitokini pro-infjammatorji. Dawn is-sejbiet jissuġġerixxu liCistanchejista 'jkun promettentirimedju veġetali naturali għal CP/CPPS, joffruanti-infjammatorji, antiossidanti, uinibitorju tal-piroptosieffetti permezz tal-modulazzjoni tal-NLRP3/Caspase-1/GSDMDmogħdija tas-sinjalar.
kliem ewlieni: prostatite kronika; Formula Guihuang;NLRP3 inflammatome; piroptosi; mewt taċ-ċelluli programmata
cistanche tibbenefika mis-Saħħa tal-prostata
Formula Veġetali Ibbażata fuq Cistanche għal Prostatite Kronika: Studju Sperimentali tal-Mekkaniżmu u l-Effikaċja
Prostatite kronika (CP)hija waħda mill-aktar kundizzjonijiet komuni fl-uroloġija u s-saħħa tal-irġiel. Studji epidemjoloġiċi juru li bejn wieħed u ieħor8.4%ta 'rġiel adulti fiċ-Ċina jesperjenzaw sintomi ta' prostatite [1]. Skond il-Istituti Nazzjonali tas-Saħħa (NIH)klassifikazzjoni, prostatite hija kategorizzata ferba tipi, bilProstatite tat-Tip III (sindromu tal-uġigħ pelviku kroniku, CP/CPPS)jammontaw għal aktar minn90%tal-każijiet kroniċi kollha [2]. Il-prostatite tat-Tip III twassal għal uġigħ fil-pelvi u disfunzjoni urinarja u ħafna drabi tkun akkumpanjata minn tbatija psikoloġika bħal ansjetà u depressjoni, li tfixkel b'mod sinifikanti l-kwalità tal-ħajja [3-4].
Fil-Mediċina Tradizzjonali Ċiniża (TCM), il-prostatite kronika tikkorrispondi għal sindromi bħal "Lin Syndrome" jew "Jing Zhuo", u hija primarjament ikkawżata minn fatturi patoġeniċi bħalumdità, sħana, stasis tad-demm, u staġnar[5–7]. Il-Formula Guihuang, tradizzjonalment użata biex tikkura CP/CPPS b'sħana niedja u stasis tad-demm, ġiet modifikata f'dan l-istudju biex tużaCistanchebħala komponent ewlieni, li jifforma rumanzFormula tal-ħxejjex ibbażata fuq Cistanche. Din il-formula modifikata għandha l-għan li ttejjeb is-sintomi urinarji u l-infjammazzjoni tal-pelvi bit-tnejneffikaċja u sigurtà klinika [8–10].
Cistanche tubulosa fid-deżert
pilloli bbażati fuq formula cistanche b'75% glycoside
Servizz ta 'Appoġġ Ta' Wecistanche-Ikkuntattjana Biex Ikseb Prezz bl-ingrossa
Email:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Tel:+86 15292862950
Sfond u Mekkaniżmu
L-istudji preċedenti tagħna wrew li l-formula tal-ħxejjex ibbażata fuq Cistanche ttaffi b'mod sinifikanti leżjonijiet simili għall-prostatite f'mudelli tal-firien billi tnaqqas l-infjammazzjoni patoloġika u trażżan iċ-ċitokini pro-infjammatorji. Dan l-effett huwa assoċjat ma 'l-inibizzjoni ta'PI3KuNF-κBmogħdijiet tas-sinjalar [11].
Aktar attenzjoni ġiet diretta lejn il-NLRP3 inflammasome, kumpless multiprotein li jirregola r-risponsi infjammatorji. L-attivazzjoni tal-inflammasome NLRP3 twassal għar-rilaxx ta 'ċitokini infjammatorji bħal IL-1 u IL-18, li jikkontribwixxu għall-kaskata infjammatorja f'CP/CPPS [12-13]. Jinvestigaw jekkCistanchejistgħu jimmodulaw attivazzjoni inflammasome NLRP3 hija kruċjali għall-fehim tagħhamekkaniżmu anti-infjammatorjufit-trattament tal-prostatite kronika.
1. Materjali
1.1 Annimali u Ċelloli
Firien SD maskili (6 ġimgħat, 240-260 g) inkisbu minn SPF (Beijing) Biotechnology Co., Ltd. [SCXK (Jing) 2019-0010], miżmuma f'kundizzjonijiet SPF b'aċċess ħieles għall-ikel u l-ilma. It-temperatura tal-kamra nżammet fi (23±2) grad u l-umdità f'(60±5)%. Il-proċeduri kollha tal-annimali ġew approvati mill-Kumitat tal-Etika tal-Annimali tal-Isptar Xiyuan, l-Akkademja taċ-Ċina tax-Xjenzi Mediċi Ċiniżi (Nru tal-Etika: 2020XLC005-3). ċelluli epiteljali normali tal-prostata (RWPE-1, ATCC, Katalgu Nru IM-H299) intużaw għal esperimenti in vitro fil-passaġġ 5.
1.2 Formula Veġetali
Il-Formula bbażata fuq Cistanchetikkonsisti fil-ħxejjex tradizzjonali li ġejjin (fi grammi):
Cistanche 12 g
Curcuma longa (Turmeric) 10 g
Angelica sinensis 12 g
Magnolia officinalis 10 g
Boswellia carteri (Frankincense) 5 g
Commiphora myrrha (Myrrh) 5 g
Lonicera japonica (Honeysuckle) 15 g
Hedyotis diffusa 15 g
Plantago asiatica (Plantain Herb) 15 g
Citrus reticulata (Tangerine Peel) 10 g
Il-granuli tal-ħxejjex ġew ipprovduti mid-Dipartiment tal-Ispiżerija tal-Isptar Xiyuan u manifatturati minn Kangrentang Pharmaceutical Co., Ltd. (Lott Nru: 19018391).
Keywords SEO:
Cistanche għal prostatite kronika, rimedju erbali għal CPPS, TCM għas-sindromu tal-uġigħ fil-pelvi, Cistanche infjammazzjoni tal-prostata, ħwawar naturali anti-infjammatorji għall-irġiel, Modulazzjoni immuni Cistanche.
1.3 Reaġenti u Kits
Kit tal-Analiżi tal-Proteina BCA (Beyotime, Cat# P0010)
IL-1 u IL-18 Kits ELISA (Bioswamp, Cat# ZN2877, ZN2883)
Kit tal-Assaġġi tal-Pyroptosis/Caspase-1 (Immunokimika, Cat# 9145)
Antikorp NLRP3 (Novus, Cat# NBP2-12446)
CFA (Adjuvant Komplet ta' Freund, Sigma, Cat# C104202)
Reaġenti komuni: Xylene, etanol assolut, gomma newtrali (Sinopharm)
Kitts tal-istress ossidattiv: SOD, MDA, GSH-Px, LDH (Nanjing Jiancheng, Cat# A001-3, A003-2, BC1190, 20121225)
Antikorpi: Anti-GSDMD, Caspase-1, GAPDH (Abcam, Cat# ab219800, ab179515, ab8245)
MCC950 (inibitur NLRP3, Selleck, Cat# S8930)
Antikorp PYCARD/ASC (Thermo, Cat# PA5-95826)
1.4 Strumenti
Mikroskopju ottiku (Nikon Eclipse Ti-SR, il-Ġappun)
Mikrotomu (Leica RM2016, Shanghai)
Skaner diġitali slide (3D HISTECH Pannoramic MIDI, Ungerija)
Ċentrifuga refriġerata b'veloċità għolja (Thermo Fisher IECCL31R, USA)
Tagħmir tal-elettroforeżi (CAVOY PP-1150, MP-8001, MP-3030, Beijing)
Inkubatur tax-shaker (Qilinbeier TS-2000A, Jiangsu)
Grinder krijoġeniku (Jingxin JXFSTPRP-CL-BSC, Shanghai)
Inkubatur tas-CO₂ (Sanyo MCO-20AIC, il-Ġappun)
Microplate reader (Bio-Rad DNM-9602, Beijing)
Analizzatur bijokimiku (Rayto Chemray 800, Shenzhen)
Ċitometru tal-fluss (Beckman CytoFLEX S, l-Istati Uniti)
2. Metodi
2.1 Stabbiliment Mudell
(1) Mudell tal-Annimali
Ibbażat fuq esperjenza ta 'mudellar preċedenti, mudell tal-far ta' awtoimmuniProstatite kronika tat-Tip IIIġie stabbilit minninjezzjoni intraprostatikata 'estratt purifikat tal-proteina tal-prostata mħallta ma' Complete Freund's Adjuvant (CFA) [14]. L-immudellar b'suċċess kien determinat minn karatteristiċi patoloġiċi inklużi: tħaxxin tal-kapsula tal-prostata, għajbien ta 'jingħalaq glandular, qerda ta' acini, edema stromali sinifikanti, struttura mċajpra, infiltrazzjoni massiva ta 'limfoċiti, monoċiti u ċelluli tal-plażma. Ċelluli tal-muskoli lixxi u iperplażja tat-tessut konnettiv kienu osservati fis-septa tal-prostata, b'mod notevolidilatazzjoni vaskulari u konġestjoni. Bijokimikament, il-mudell ġie kkonfermat minnżieda fil-lewkoċitiutnaqqis fil-korpi tal-leċitinafl-omoġenat tal-prostata.
(2) Mudell taċ-Ċellula
Wara rapporti tal-letteratura u pre-esperimenti preċedenti [15–17], ametodu ta 'stimulazzjoni f'żewġ stadjiintuża biex jattiva l-NLRP3 inflammasomef'RWPE-1 ċelluli. Pass 1: Iċ-ċelloli ġew ittrattati bihomLPS (100 ng/mL)għal 4 sigħat biex jinbeda l-priming inflammasome. Pass 2: Iċ-ċelloli mbagħad ġew ittrattati bihomATP (5 mmol/mL)għal 30 minuta bħala s-sinjal tal-attivazzjoni. L-aħjar kundizzjonijiet tal-mudell ġew skrinjati bl-użuRata ta' teħid ta' PIbħala markatur.
2.2 Raggruppament
(1) Gruppi ta' Studju dwar l-Annimali
Il-firien kienu maqsuma bl-addoċċ fiħames gruppibl-użu ta' tabella ta' numri każwali:
Grupp ta' kontroll
Grupp mudell
Formula Cistanche grupp ta 'doża baxxa
Formula Cistanche grupp ta' doża medja
Formula Cistanche grupp ta 'doża għolja
Kull grupp kien jikkonsisti minn 10 firien. Il-gruppi kollha ħlief il-grupp ta 'kontroll kienu soġġetti għal immudellar. Il-doża umana ekwivalentital-formula bbażata fuq Cistanche ġiet ikkalkulata bħala 109 ÷ 70 × 6.3=9.8 g/kg għall-doża medja, bildoża baxxaf'4.9 g/kg udoża għoljaf'19.6 g/kg [11]. Minnjum 3 wara l-immudellar, il-gruppi ta 'trattament irċevew amministrazzjoni intragastrika ta' kuljum tad-dożi rispettivi tal-Formula tal-ħxejjex ibbażata fuq Cistanchegħal30 jum konsekuttiv, filwaqt li l-gruppi ta 'kontroll u mudell irċevew volumi ugwali ta' salina.
(2) Gruppi ta' Studju taċ-Ċelloli
RWPE-1 ċelluli ġew maqsuma f'erba' gruppi:
Grupp ta' kontroll: ikkultivat b'serum vojt
Grupp mudell: trattat b'LPS (100 ng/mL, 4 h) u ATP (5 mmol/mL, 30 min)
grupp Cistanche: trattat bi6.25 ug/mL ta 'serum medikat tal-formula Cistanche
grupp MCC950: mudell +Inibitur inflammasome NLRP3 MCC950
2.3 Ġbir tal-Kampjuni
Wara 30 jum ta 'trattament, il-firien ġew anestetizzati b'isoflurane. Inġabar demm mill-aorta addominali u ċentrifugat fi 3000 rpm għal 10 minuti biex iżolat is-serum, li kien maħżun f'-80 grad għalELISAu analiżi bijokimiċi.
Lobu tax-xellug tal-prostata: iffissat f'4% paraformaldehyde għall-istopatoloġija, immunoistokimika, u immunofluworexxenza.
Lobu tal-prostata tal-lemin: ippreservat finitroġenu likwidugħalAnaliżi Western blot.
2.4 Sejbien tal-Indiċi tal-Annimali
2.4.1 HE Tbajja
It-tbajja' ta' Hematoxylin u Eosin (HE) intużat biex tosserva infiltrazzjoni infjammatorja fit-tessuti tal-prostata. Bidliet morfoloġiċi fil-glandoli, kanali, u strutturi interstizjali ġew evalwati taħt mikroskopju tad-dawl.
2.4.2 ELISA għal IL-1 u IL-18
Kitts ELISA intużaw biex jikkwantifikawIL-1uIL-18livelli fis-serum tal-firien. Il-kampjuni ġew ipproċessati wara protokoll standard ELISA u analizzati fi450 nmbilli tuża microplate reader.
2.4.3 Sejbien bijokimiku ta 'MDA, SOD, GSH-Px
Livelli tas-serum taMDA, SOD, uGSH-Pxġew imkejla bl-użu ta 'kits kummerċjali biex jevalwaw l-istress ossidattiv fit-tessuti tal-prostata.
2.4.4 Immunoistokimika (IHC) għal NLRP3
Is-sezzjonijiet tat-tessut tal-prostata għaddew minn deparaffinizzazzjoni, rkupru ta’ antiġen, imblukkar, u inkubazzjoni b’antikorp anti-NLRP3 (1:1000). Tbajja DAB saret u counterstained b'ematoxylin. L-espressjoni NLRP3 kienet osservata mikroskopikament.
2.4.5 Immunofluworexxenza għal GSDMD
Sezzjonijiet tal-prostata ffriżati ġew inkubati bihomantikorp anti-GSDMD (1:100), segwit minn antikorp sekondarju fluworexxenti u counterstain nukleari DAPI. L-espressjoni GSDMD ġiet viżwalizzata bl-użu ta 'mikroskopija ta' fluworexxenza.
2.4.6 Western Blot għal NLRP3, Caspase-1, GSDMD
Proteina ġiet estratta minn tessuti tal-prostata għalAnaliżi Western blot. Livelli ta' espressjoni ta'NLRP3 (1:1000), GSDMD (1:2000), uCaspase-1 (1:2000)ġew misjuba. -actin serviet bħala l-kontroll intern. Il-kwantifikazzjoni saret bl-użuImmaġniJsoftwer.
2.5 Sejbien tal-Indiċi Ċellulari
2.5.1 Ċitometrija tal-Fluss għall-Użu ta' PI
Iċ-ċelloli ġew maħsula, sospiżi mill-ġdid f'1 × 10⁶ ċelluli/mL, u mtebbgħin b'jodur tal-propidju (PI). Ir-rati ta 'assorbiment ta' PI ġew analizzati bl-użuċitometrija tal-flussuFlowJosoftwer.
2.5.2 Assaġġ tar-Rilaxx LDH
Wara t-trattament,LDHlivelli fis-supernatanti tal-kultura ġew evalwati bħala markatur ta 'ħsara fil-membrana taċ-ċelluli bl-użu ta' analiżi kolorimetrika fuq490 nm.
2.5.3 Ċitometrija tal-fluss għal Caspase-1
Iċ-ċelloli ġew iffissati, permeabilizzati, u mtebbgħin bihomAntikorp Caspase-1 (1:1000). L-espressjoni kienet imkejla minnċitometrija tal-fluss.
2.5.4 ELISA għal IL-1 u IL-18 fis-Supernatant
Il-midja tal-kultura nġabret biex tiskopriIL-1uIL-18livelli permezz ta’ ELISA. Il-kontenut tal-proteini f'lisati taċ-ċelluli ġie kkwantifikat bl-użu tal-assaġġ BCA biex jiġu normalizzati l-livelli taċ-ċitokini.
2.5.5 Western Blot għal NLRP3, Caspase-1, GSDMD
Western blot sar fuq lysates taċ-ċelluli b'antikorpi kontraNLRP3 (1:1000), GSDMD (1:2000), uCaspase-1 (1:2000). L-iskoperta twettqet bl-użu ta' ECL u sistemi ta' immaġini. -actin intużat bħala l-kontroll tat-tagħbija.
2.6 Analiżi Statistika
Id-dejta ġiet analizzata bl-użuGraphPad Prism 8.0. Ir-riżultati huma espressi bħalamedja ± SD. Tqabbil tal-gruppi saru bl-użutestijiet t-kampjun indipendentijewANOVA f'direzzjoni waħda. A Valur P < 0.05tqieset statistikament sinifikanti.
