Studju Sperimentali Ta 'Mekkaniżmi ta' Effett ta 'Għeja Kontra l-Isport Ta' Cistanche Deserticola

Kuntatt : emily.li@wecistanche.com

YANG Hong-xin1, YANG Yong2, YAN Xiao-hong1 (1.Dipartiment taċ-Ċitobijoloġija, Kulleġġ Mediku tal-Mongolja Interna, Hohhot 010059, iċ-Ċina;2.Dipartiment tal-Onkoloġija, Sptar tar-Reġjun Awtonomu tal-Mongolja Interna, Huhhot 010017, iċ-Ċina)

Astratti:Għan Biex jiġi studjat l-effett ta'cistanche deserticoladwar l- isoenzyme lactate dehydrogenase (LDH), il- glycogen u l- nitric oxide synthase 3 (NOS3) tal- fwied fil- ġrieden piż ta ' l- għawm u l- esplorazzjoni ta ' mekkaniżmi molekulari rilevanti ta ' għeja kontra l- isports. Metodi Il-ġrieden ġew maqsuma fil-grupp ta 'kontroll normali, il-grupp ta' kontroll sportiv u l-cistanche deserticolagrupp sperimentali. Kull ġrieden tal-grupp ta 'kontroll ormal u l-grupp ta' kontroll sportiv ingħataw salina 0.2 mL kuljum. Kull ġrieden tal-grupp sperimentali cistanche deserticola ngħataw dekossjoni ta 'l-ilma ta'cistanche deserticola0.2 mL (3 g/kg) kuljum. L- amministrazzjonijiet kienu għal 15- il jum. Il-piż li jgħum għal 90 minuta sar fuq il-ġrieden tal-grupp ta 'kontroll tal-isport u l-grupp sperimentali cistanche deserticola f'siegħa wara l-aħħar amministrazzjoni. Il-fwied tal-ġrieden tneħħa wara 10 sigħat ta 'għawm. Parti waħda tal-fwied ġiet iffissata fil-likwidu formalin newtrali biex tipprepara s-sezzjonijiet tal-paraffin u l-oħrajn intużaw għall-kejl tal-attività LDH. L- istruttura tal- fwied kienet osservata bit- tbajja ' ta ' l- HE u l- glycogen tal- fwied tkejlu bit- tbajja ' tal- glycogen. NOS3 ġie eżaminat bil-metodu immunoistokimiku S-P. Riżultati L- istruttura tal- fwied tal- grupp ta ' kontroll ta ' l- isport indarbet serjament, l- isoenzimi ta ' LDH4 u LDH5 kienu ogħla, il- glycogen tal- fwied kien fqir, NOS3 tnaqqas meta mqabbel mal- grupp ta ' kontroll normali (P<0.05). the="" liver="" structure="" of="" the="" cistanche="" deserticola="" experimental="" group="" was="" good,="" ldh5="" isoenzyme="" was="" low,="" the="" glycogen="" was="" rich="" and="" expression="" of="" nos3="" was="" upregulated="" compared="" with="" the="" sport="" control="" group="" (p=""><0.05). conclusions="">Cistanche deserticolajista 'jnaqqas l-LDH5, jipproteġi l-fwied tal-ġrieden jgħum u jaċċellera l-akkumulazzjoni tal-glycogen billi jżid l-espressjoni ta' NOS3 biex jipproteġi l-fwied u jtejjeb l-irkupru tal-kapaċità fiżika.

Kliem ewlieni:cistanche deserticola;glycogen tal-fwied;ossidu nitriku synthase 3; ġrieden.

Stampa Cistanche

Cistanche,magħruf ukoll bħala Dayun, huwa ħwaaq parassitiċi ta 'sentejn tal-Ledanaceae. Għandu zkuk mlaħħmin niexfa bi skali. Huwa prinċipalment prodott f'ħamrija ramlija u bwar semi-ramel fil-Mongolja Interna, Gansu, Xinjiang, Qinghai u postijiet oħra. Il-Mongolja ta' ġewwaCistanchegħandu l-aħjar kwalità fost iż-żoni kollha tal-produzzjoni.Cistanchehuwa ta' natura ħelwa, mielħa u sħuna. Jidħol fil-Kliewiu l-musrana l-kbira meridjan. Il-funzjonijiet ewlenin tiegħu huma li jmantni l-kliewi u jsaħħaħ il-yang, itmantni l-essenza u d-demm, u moisturize l-imsaren. Ħafna drabi jintuża biex jikkura impotenza, infertilità, qadd u irkopptejn dgħajfa, dgħjufija fil-muskoli u l-għadam, intestini niexfa u stitikezza. Dan l-istudju għandu l-għan li josserva l-effetti ta'Cistanchefuq ġrieden ta 'l-għawm li jġorru t-tagħbija lactate dehydrogenase (LDH), glycogen tal-fwied u synthase ossidu nitriku 3 (NOS3) permezz ta' test ta 'għawm li jġorr it-tagħbija fil-ġrieden, u biex tesplora l-mekkaniżmu protettiv tagħha fuq il-fwied. Għalhekk, jista 'jipprovdi bażi teoretika għar-riċerka fil-fond, l-iżvilupp u l-użu ta'CistanchF'ikel għas-saħħa sportiv.

1 Materjali sperimentali

1.1 Annimali

30 firien irġiel Kunming, grad nadif, piż tal-ġisem (20±0.5) g, ipprovdut miċ-Ċentru tal-Annimali tal-Università tal-Mongolja Interna.

1.2 Mediċini

Cistanche deserticolaY.C.Ma, prodott f'Ejina Banner, Il-Mongolja Interna u ġie identifikat. Skond il-materjal mediċinali oriġinali: ilma = 100 g: 400 mL, l-ewwel xarrab għal 30 minuta, sħana u għalli, u mbagħad ferra fuq nar sħun għal 30 min. Ferra l- mediċina likwida u erġa ' ferra fil- proporzjon ta ' 100 g: 200 mL. Iż-żewġ decoctions tħalltu flimkien u ġew iffiltrati b'żewġ saffi ta' garża, u mbagħad ikkonċentraw għall-ekwivalenti ta' 1 g tal-materjal mediċinali oriġinali għal kull millilitru ta' soluzzjoni ta' ħażna ta' dekostru ta' ilma, maħżuna fi friġġ f'temperatura ta' 4 °C.

1.3 Reaġenti u strumenti

L-antikorp poliklonali NOS3 inxtara minn Wuhan Boster Bioengineering Co., Ltd. Il-kit S-P inxtara mingħand Fujian Maixin Reagent Company. Il-kitt tal-isoenzyme Lactate dehydrogenase inxtara mill-Inner Mongolja Tongri Reagent Company (esklussivament proprjetà ta' Nissan). Analizzatur tal-immaġni tal-kulur Nanjing JD-80. Sistema Amerikana ta 'analiżi tal-immaġni tal-ġel UVP.

2 Metodu sperimentali

2.1 Raggruppament u Dożaġġ

Ġrieden kunming kienu maqsuma bl-addoċċ fi grupp ta 'kontroll normali, grupp ta' kontroll tal-eżerċizzju, uCistanchegrupp sperimentali, b'10 ġrieden f'kull grupp. Il-grupp ta' kontroll normali u l-grupp ta' kontroll tal-eżerċizzju ngħataw salina normali darba kuljum, 0.2 mL/ħin; għad-Cistancheingħata grupp sperimentalicistanchedecoction (ħu 3 mL tad-decoction oriġinali tal-ilma u żid l-ilma ma' 10 mL). Darba kuljum, 0.2 mL / ħin, id-dożaġġ ta 'kuljum huwa 3 g / kg, u 15-il jum konsekuttiv. Siegħa wara l-aħħar dożaġġ, il-ġrieden fil-grupp ta' kontroll tal-eżerċizzju u l-Cistanchegrupp ta 'esperimenti tgħabbew b'piż taċ-ċomb ta' 1 g fuq denbhom, u tqiegħdu f'ġabra ta 'għoli ta' 50 cm, twil 50 cm, u 35 cm wiesgħa biex jgħumu taħt it-temperatura (30±0.5)°C, Osserva l-ġrieden kontinwament, jekk jinstabu li jieqfu jgħumu, uża stikka tal-injam biex tistimula l-moviment tagħhom għal 90 minuta. Wara l-eżerċizzju, kul dieta normali, mistrieħ għal 10 sigħat u mbagħad ewtanizza l-ġrieden bi ġrieden tal-grupp ta 'kontroll normali. Oħroġ il-fwied, waħħal parti b'10% formaldehyde newtrali, u agħmilha ħoxna 4 μm wara d-deidrazzjoni, it-trasparenza, l-immersjoni tax-xama ', u l-inkorporazzjoni. Uża l-metodu tat-tbajja 'HE biex tosserva l-istruttura tat-tessut tal-fwied ta' kull grupp. Il-parti l-oħra nħaslet bis-salina normali u maħżuna ffriżata f'temperatura ta' -20 °C, u mdewba f'temperatura tal-kamra waqt il-kejl. Xarrab nixxef b'karta tal-filtru u iżen, imbagħad ipprepara omoġenizza l-fwied b'salina normali, iċċentrifuga fi 3 500 r / min għal 15-il minuta. Ħu s-supernatant u kejjel l-attività ta' l-isoenzimi lactate dehydrogenase bl-elettroforeżi.

2. 2 Determinazzjoni ta ' l- attività lactate dehydrogenase

Bl-użu ta' elettroforeżi tal-ġell tal-polyacrylamide, l-isoenzimi tal-LDH huma separati skont id-differenzi tagħhom fil-mobbiltà elettroforetika. Il-konċentrazzjoni tal-ġell tas-separazzjoni tal-kampjun hija 7%, pH 8.9, u l-konċentrazzjoni ta 'ġell ikkonċentrat hija 4%, pH 6.8. 10 μL il-kampjun jitħallat ma' qatra 1 ta' gliċerol u indikatur blu tal-bromofenol. Il-buffer tal-elettrodu huwa Tris-glycine (pH 8.7), ibda biex tistabbilizza l-vultaġġ f'100-150 V, żid ma '200-250 V wara 30 minuta, u elettroforeżi għal 4 sigħat. Wara l-elettroforeżi, din kienet imtebba' bil-Lactate Dehydrogenase Isoenzyme Kit, u mtebba' f'temperatura ta' 37 °C għal 30 min, li turi faxxa blu ta' isoenzimi lactate dehydrogenase, imbagħad imlaħlaħ bl-ilma, imwaħħla b'aċidu aċetiku glaċjali. Fl-aħħarnett, uża sistema ta 'analiżi tal-immaġni tal-ġel UVP għall-analiżi tad-dejta.

2.3 Tbajja' tal-glikoġen

4 μm sezzjonijiet tas-serje ħoxnin huma deparaffinizzati ta 'rutina għall-ilma. poġġi f'soluzzjoni ta' aċidu perjodiku ta' 1% f'temperatura ta' 37 °C għal 15-il minuta. imlaħlaħ bl-ilma ġieri. poġġi fis-soluzzjoni Schiff għal 60 minuta. imlaħlaħ bl-ilma ġieri, deidratat b'xaqliba etanol, ksilen trasparenti, u mmuntat b'gomma newtrali. Imbagħad osserva r-riżultati tat-tbajja 'taħt il-mikroskopju.

2.4 Tbajja ' immunoistokimiċi

Il-flieli huma deparaffinizzati ta 'rutina għall-ilma, u l-antiġenu jissewwa bil-majkrowejv buffer taċ-ċitrat. Aġixxi b'soluzzjoni A għal 10 minuti biex tneħħi l-peroxidase endoġenu, u faqqa' b'soluzzjoni B (serum tal-mogħoż dilwit) għal 10 minuti. Żid l-antikorp primarju f'kaxxa umidifikata f'4 °C matul il-lejl, u aħsel b'soluzzjoni pbs ta' 5.4 għal 5 min×3 darbiet fit-tieni jum. Imbagħad żid soluzzjoni C ittikkettjata bil-bijotina (soluzzjoni sekondarja tax-xogħol ta' antikorpi) u inkuba għal 10 minuti, aħsel b'soluzzjoni PBS għal 5 minuti×3 darbiet. Żid is-soluzzjoni D ittikkettjata bil-peroxidase tal-għerq tal-mustarda u inkuba għal 10 minuti, aħsel bis-soluzzjoni PBS għal 5 minuti×3 darbiet. Fl-aħħarnett, ġie żviluppat f'soluzzjoni DAB għal 5 min, maħsula bl-ilma tal-vit, HE kontrostained, deidratat b'etanol gradjent, trasparenti bil-ksilen, u mmuntat b'gomma newtrali. Osserva taħt mikroskopju tad-dawl wara li immuntar il-film. F' kull lott ta ' esperimenti, is- salina buffered tal- fosfat (PBS) intużat bħala kontroll negattiv minflok l- antikorp primarju.

2.5 Analiżi ta 'l-Espressjoni tas-Synthase 3 ta' l-Ossidu Nitriku

Osservazzjoni preliminari b'metodu semikwantitattiv viżwali taħt mikroskopju ċar, il-prodott pożittiv NOS3 huwa kannella skur jew kannella. Il- prodott pożittiv jinsab fiċ- ċitoplażma ta ' epatoċiti jew ċelloli endoteljali bejn epatoċiti, u l- isfond blu huwa negattiv. Imbagħad uża s-sistema ta 'analiżi tal-immaġni tal-kulur biex tkejjel il-valur griż tar-reaġent pożittiv. Taħt lenti oġġettiva ta '40x, il-parametri ta' 4 oqsma ta 'vista jitkejlu b'mod każwali għal kull film u jittieħed il-valur medju. Dan il-parametru jintuża biex jirrifletti l-bidla tal-intensità tat-tbajja' NOS3.

2.6 Metodi statistiċi

Id-dejta kollha hija espressa bħala x-±s, u l-pakkett ta ±sipivalenti SPSS11.0 jintuża għat-test t, u P<0.05 is="" considered="" as="" significant="">

3 Ir-riżultati

3.1 Osservazzjoni ta' l-istruttura tat-tessut taħt mikroskopju ottiku

L- istruttura ta ' lobules tal- fwied fil- grupp normali hija ċara, il- kurduni taċ- ċelloli huma rranġati pulit, is- sinusojdi tal- fwied huma normali, iċ- ċelloli tal- fwied m' għandhom l- ebda leżjonijiet ovvji, u l- istruttura nukleari hija ċara. L- istruttura normali tat- tessut tal- grupp ta ' kontroll ta ' l- eżerċizzju sparixxiet, il- konfini tal- lobuli ma kinux ċari, u l- korda taċ- ċellula kienet diżordnata, ħafna mis- sinusojdi tal- fwied sparixxew, u deġenerazzjoni vakwolari estensiva ta ' epatoċiti tidher b' żieda fil- volum taċ- ċelloli. Iċ-ċitoplażma hija maħlula, imtebba ħafifa, anke ċara u trasparenti, u xi ċelloli tal-fwied juru bidla tipika tal-bużżieqa, b'ammont żgħir ta 'nekrożi fokali jew punctate. Iċ-ċelloli tal-fwied tal-Cistanchegrupp sperimentali kien ħafif imdardar, iżda ġew irranġati regolarment. Ma kien hemm l-ebda vakwoli ovvji u laxkezza fiċ-ċelloli, il-kurduni taċ-ċelloli ġew irranġati sewwa, u l-istruttura nukleu kienet ċara.

3. 2 Effetti fuq l- attività ta ' isoenzimi lactate dehydrogenase tal- fwied fil- ġrieden li jkunu qed jeżerċitaw it- tagħbija (ara Tabella 1)

3.3 Osservazzjoni ta' tebgħa ta' glycogen tal-fwied taħt mikroskopju ottiku

Għalkemm il- kontenut ta ' glycogen fil- grupp ta ' kontroll normali mhuwiex għoli, hemm glycogen f' kull ċellula tal- fwied, id- distribuzzjoni hija uniformi, u m' hemm l- ebda fenomenu ta ' vacuole. Il-grupp ta 'kontroll tal-eżerċizzju kellu inqas glycogen, imxerred fiċ-ċelloli tal-fwied, u l-vakwoli dehru f'xi żoni; il-grupp sperimentali Cistanche kien rikk fil-glycogen, iżda ġabar ħafna fuq naħa waħda taċ-ċellula.

3.4 Osservazzjoni tal-espressjoni tas-synthase ossidu nitriku 3 permezz ta' mikroskopju ottiku u analiżi kwantitattiva tal-immaġni

Hemm espressjoni pożittiva qawwija fiċ- ċitoplażma ta ' epatoċiti fil- grupp normali ta ' kontroll, li jitqassam b' mod diffuż, speċjalment f' ċelloli binarji, u espressjoni pożittiva fiċ- ċelloli endoteljali. L- espressjoni fiċ- ċitoplażma ta ' epatoċiti u ċelloli endoteljali fil- grupp ta ' kontroll ta ' l- eżerċizzju ddgħajfet.Cistancheil- grupp sperimentali kellu espressjoni pożittiva fiċ- ċitoplażma ta ' epatoċiti, u espressjoni pożittiva qawwija fiċ- ċelloli endoteljali. Ir-riżultati tal-analiżi tal-analizzatur tal-immaġni tal-kulur huma murija fit-Tabella 2.

4 Diskussjoni

Il-moviment tal-ġisem tal-bniedem jeħtieġ l-enerġija, u l-ġisem jeħtieġ ukoll enerġija fil-proċess tal-metaboliżmu Il-metaboliżmu taċ-ċellola juża direttament l-enerġija mid-dekompożizzjoni tat-trifosfat tal-adenosine (ATP), u l-enerġija meħtieġa għas-sinteżi tal-ATP fl-aħħar mill-aħħar hija pprovduta prinċipalment mill-kataboliżmu taz-zokkor. Studji wrew li wara eżerċizzju qawwi, il-ġisem jipproduċi ammont kbir ta 'H +, radikali ħielsa, aċidu lattiku u sustanzi oħra li jaffettwaw il-metaboliżmu normali taċ-ċelloli. Fl-istess ħin, in-nuqqas ta 'glukożju fiċ-ċelloli jwassal biex jeżerċita għeja u ħsara fiċ-ċelloli. Ir-riżultati ta 'dan l-istudju juru li l-ħsara fl-istruttura tat-tessut tal-fwied hija serja ħafna wara ħafna eżerċizzju, u taffettwa wkoll l-anaboliżmu taċ-ċelluli, bħat-tnaqqis tas-sinteżi tal-glycogen tal-fwied. Ġrieden li jieħdu Cistanche jistgħu jiġu osservati biex inaqqsu l- ħsara fil- fwied wara ħafna eżerċizzju, l- aktar minħabba t- tnaqqis ta ' LDH5, u l- kontenut ta ' glycogen tal- fwied huwa ogħla b' mod sinifikanti minn dak tal- grupp ta ' kontroll ta ' l- eżerċizzju, Li jissuġġerixxi liCistanchejista ' jikseb protezzjoni tal- fwied u jżomm fiżjoloġija normali billi jnaqqas il- funzjoni LDH5. Mir-riżultati tat-tbajja' tal-glycogen, il-kontenut ta' glycogen tal-Cistancheil-grupp sperimentali huwa ogħla minn dak tal-grupp ta' kontroll normali. DoesCistancheiżżid ir-riżervi tal-glycogen tal-fwied qabel l-eżerċizzju jew taċċellera s-sinteżi tal-glycogen taħt stress wara l-eżerċizzju? Ma tista' tinsilet l-ebda konklużjoni għax m'hemm l-ebda grupp ta' kontroll li ma jeżerċitaxCistanchefl-esperiment. Għad irid jiġi kkonfermat fil-pass li jmiss, iżda l-effett protettiv ta 'Cistanche fuq il-fwied u l-promozzjoni tas-sinteżi tal-glycogen wara ħafna eżerċizzju huma ovvji.

LE hija sustanza molekulari żgħira li ġiet stmata ħafna mill-komunità sportiva f'dawn l-aħħar snin. NOS huwa l-fattur ewlieni li jillimita r-rata għall-produzzjoni tal-NO. Ġie kkonfermat li NOS għandu 3 tipi ta ' isoenzimi. NOS1 jissejjaħ synthase ta 'ossidu nitriku newronali. Jeżisti f'ċelloli newronali, ċelloli tal-muskoli skeletriċi, eċċ., U huwa involut prinċipalment fl-iżvilupp newroloġiku, in-newrosekriminazzjoni, it-tagħlim u l-proċessi tal-memorja. NOS2 huwa sintase ta ' l- ossidu nitriku induċibbli, prinċipalment misjub f' ċelloli tal- muskoli lixxi, makrofaġi, u limfoċiti. Ladarba din l- enzima tiġi indotta, tista 'tkompli tissintetizza l- NO sakemm is- sottostrat jiġi eżawrit jew iċ- ċellula tmut. Bħalissa huwa maħsub li huwa involut fi ħsara fiċ-ċelloli; NOS3 huwa sinthase endoteljali ta ' l- ossidu nitriku, li jitqassam prinċipalment fiċ- ċelloli endoteljali u epatoċiti. L-NO prodott huwa prinċipalment involut f'funzjonijiet fiżjoloġiċi. Ir- riżultati ta ' dan l- istudju juru li l- espressjoni ta ' NOS3 fiċ- ċelloli endoteljali u epatoċiti tiddgħajjef wara ħafna eżerċizzju, u l- LE li jirriżulta jitnaqqas, sabiex il- vini u l- arterji ma jkunux jistgħu jiġu estiżi b' mod effettiv, il- fluss tad- demm jitnaqqas, u l- materja prima għall- glycogen sintetiku ma tistax tiġi ttrasportata lejn iċ- ċelloli tal- fwied, għalhekk is- sintesi tal- glycogen titnaqqas.

Funzjoni cistanche kontra l-għeja

Cistanchejista ' jippreprezza l- espressjoni ta ' NOS3 fiċ- ċelloli endotlijali u fiċ- ċelloli tal- fwied. Espandi l-vini tad-demm b'mod reattiv. Żid il-fluss tad-demm, taċċellera l-abbiltà li tittrasporta materja prima tas-sinteżi tal-glycogen. Jitħaffef is-sinteżi tal-glycogen, u żomm il-ġisem f'livell metaboliku fiżjoloġiku normali. Għalhekk, it-tnaqqis tal-LDH5 biex jipproteġi l-fwied u jirregola l-espressjoni ta' NOS3 biex jippromwovi l-glukoneoġenesi tal-aċidu lattiku jista' jkun mekkaniżmu importanti għalCistanchebiex jipproteġi l-fwied u jippromwovi l-irkupru fiżiku. Din ir-riċerka tipprovdi bażi sperimentali xjentifika għall-iżvilupp u l-użu ulterjuri ta'Cistanchefil-qasam tal-mediċina sportiva, u jistabbilixxi wkoll il-pedament għall-iżvilupp u l-purifikazzjoni ta 'L-effett ta' CistancheSustanzi.

Artiku minn: "Studju Sperimentali ta 'Mekkaniżmi ta' Effett ta 'Għeja Kontra l-Isport ta' Cistanche Deserticola " minn YANG Hong-xin1, eċċ.

----- Ġurnal Ċiniż ta 'Informazzjoni fuq TCM Apr.2008 Vol.15 Nru.4