L-Ossidu Nitriku Eżoġenu Jistimula l-Ħruġ Bikri tal-Eimeria Tenella Sporozoites Miċ-Ċelloli Primarji tal-Kliewi tat-Tiġieġ in Vitro

Għal aktar informazzjoni. kuntatttina.xiang@wecistanche.com

Astratt-Egress għandu rwol vitali fiċ-ċiklu tal-ħajja tal-parassiti apicomplexan inkluż Eimeria tenella, li ilu jiġbed l-attenzjoni minn diversi gruppi ta 'riċerka. Bosta studji reċenti ffukaw fuq ħruġ bikri indott minn molekuli immuni biex jiżviluppaw metodu ġdid ta 'eliminazzjoni tal-parassiti apicomplexan. F'dan l-istudju, investigajna jekk l-ossidu nitriku (NO), molekula immuni prodotta minn tipi differenti ta 'ċelloli bi tweġiba għall-istimulazzjoni taċ-ċitokini, jistax jinduċi ħruġ bikri ta' sporozoites Amerikani in vitro. L-isporozoites ta 'Eimeria tenella ġew estratti u kkultivati ​​f'ċelloli primarji tal-kliewi tat-tiġieġ. In-numru ta 'sporozoites egressed minn ċelluli infettati ġie analizzat permezz ta' ċitometrija tal-fluss wara trattament b'NO rilaxxat minn sodium nitroferricianide (II) dihydrate. Ir-riżultati wrew li NO eżoġenu stimula l-ħruġ rapidu ta 'E.tenella sporozoites minn ċelluli primarji tal-kliewi tat-tiġieġ qabel ir-replikazzjoni tal-parassita. Sibna wkoll li l-ħruġ kien dipendenti fuq il-livelli tal-jone tal-kalċju intra-parassitiku (Ca2) u ma seħħet l-ebda ħsara liċ-ċelloli ospitanti wara l-ħruġ, Il-Virulenza ta 'sporozoites egressed kienet sinifikament inqas minn dik ta' sporozoites friski Ir-riżultati ta 'dan l-istudju jikkontribwixxu għal qasam ġdid. jeżamina l-interazzjonijiet bejn il-parassiti apicomplexans u ċ-ċelloli ospitanti tagħhom, kif ukoll dak tat-tneħħija tal-patoġeni intraċellulari mill-ospitantsistema immuni.

Kliem ewlieni: Ħruġ, Eimeria tenella sporozoites, Nitric oxide.

Cistanche tubulosahija għanja fiechinacosideuverbascoside, għalhekk għandu effett tajjeb fuq it-titjib tal-immunità. Cistanche tubulosa huwa materjal mediċinali siewi li jista 'jiġri l-glandola pitwitarja, u l-kortiċi adrenali jew ikollu effett simili għall-ormoni simili għall-kortiċi adrenali, u jirregola l-funzjoni immuni tal-ġisem. Jintwera li l-polisakkaridi ta 'Cistanche tubulosa jistgħu jtejbu l-funzjoni immuni tal-ġisem; l-effett li jsaħħaħ l-immunità tapolisakkaridkomponenti jista 'jkollhom rwol ewlieni fit-tisħiħ u l-effett toniku ta' Cistanche tubulosa. Verbasin, wieħed mill-ingredjenti attivi ta 'Cistanche tubulosa, ġie ppruvat minn esperti li għandu wkoll effetti pożittivi fuq ir-regolamentazzjoni immuni. Skont id-dejta ta 'riċerka eżistenti fl-akkademja, jista' jitqies li l-funzjoni immunomodulatorja u l-funzjoni lassattiva tal-mediċina tradizzjonali Ċiniża Cistanche għandha sinifikat kliniku kbir għat-titjib tal-immunità tal-ġisem u l-irkupru ta 'pazjenti b'COVID-19.

Ikklikkja biex titgħallem cistanche nootropics

Introduzzjoni

Il-membri tal-phylum Apicomplexan huma patoġeni intraċellulari obbligati u jinkludu Toxoplasma Gondi, Plasmodium spp., u Cryptosporidium spp., Li jinfetta ħafna hosts vertebrati inklużi l-bnedmin, li jikkawżaw mard sever [9,25,33]. Il-parassiti Apicomplexan jgħaddu minn proċessi kkomplikati fl-istadji asesswali tagħhom inklużi l-invażjoni, ir-replikazzjoni u l-ħruġ [28]. Fost dawn il-proċessi, il-ħruġ huwa pass vitali li jippermetti lill-parassiti jinvadu ċellula ospitanti oħra għal aktar żvilupp [14]. Il-ħruġ normalment jirriżulta f'liżi taċ-ċelloli ospitanti, li jwassal għal konsegwenzi ta 'ħsara [5, 6]. Peress li l-proċess huwa kruċjali kemm għall-patoġeni ta 'dan il-phylum kif ukoll għall-ospiti, saru ħafna studji f'dan il-qasam [29, 30]. Madankollu, ħafna minn dawn ir-rapporti huma limitati għal Plasmodium spp. u Toxoplasma Gondi [6]. Eimeria spp. huwa ġeneru ieħor importanti ta 'parassiti apikomplexan li jikkawża impatti negattivi severi fuq l-industrija tat-tjur madwar id-dinja, iżda ftit huwa magħruf dwar il-proċess ta' ħruġ ta 'dan il-ġeneru [11].

Eimeria spp. jista' jwassal għal mard intestinali sever fit-tiġieġ, li jikkawża telf fl-industrija globali tat-tjur ta' madwar USD 3 biljun fis-sena [16, 31]. Nifhmu r-relazzjoni bejn Eimeria spp. u l-ospitanti tagħhom huwa ta 'interess kbir għall-kontroll tal-koċċidjożi. L-istudju preċedenti tagħna wera li t-tnixxija tal-joni tal-kalċju (Ca2t) u tal-proteina microneme 2 (EtMic 2) kienu kruċjali għall-ħruġ tal-parassiti eimerian [35, 36].

Bosta studji reċenti ffukaw fuq ħruġ li jinduċibbli stimulat minn molekuli immuni biex jiżviluppaw strateġiji għat-trattament tal-parassiti apicomplexan [12,27,37]. Pereżempju, il-mewt taċ-ċelluli kkaġunata mill-interferon-y twassal għal ħruġ bikri tat-tachyzoites T. Gondi, li jistgħu jfixklu ċ-ċiklu tal-ħajja taċ-ċelloli ospitanti u jippromwovu l-eliminazzjoni ta 'dan il-patoġenu [26]. Riċentement irrappurtajna li l-ossidu nitriku (NO) jista 'jistimula l-ħruġ rapidu ta' T. gondii tachyzoites minn makrofaġi infettati (ċelluli immuni) u ċelluli fibroblasti tal-prepuzju tal-bniedem (ċelluli mhux immuni)[19,34].

L-NO huwa prodott minn ħafna tipi ta’ ċelluli, bħal ċelluli dendritiċi, arbli, qattiel naturali u fagoċitiċi, b’reazzjoni għall-istimulazzjoni taċ-ċitokini u għandu rwoli importanti fil-protezzjoni immunoloġikament medjata kontra ħafna tipi ta’ patoġeni in vitro u f’mudelli ta’ annimali, inklużi protozoans[10]. ,17]. Waqt l-infezzjoni minn protozoans bħal Plasmodium spp. u Toxoplasma Gondi żiedet il-produzzjoni NO medjatur il-protezzjoni tal-host billi jew joqtol il-parassiti direttament jew tillimita t-tkabbir tal-parassiti [8]. Studji preċedenti rrappurtaw produzzjoni ogħla ta 'NO waqt l-infezzjoni primarja ta' E. tenella, b'tali mod li l-NO jaġixxi bħala effettur antikoċċidjali [1]. Għalhekk, ippruvajna niskopru jekk NO jistax jistimula l-ħruġ bikri ta 'E. tenella sporozoites minn ċelloli ospitanti in vitro biex jipprovdi aktar informazzjoni għall-istudju ta' Eimeria spp. ħruġ u ppreżenta għarfien ġdid dwar it-tneħħija ta 'patoġeni intraċellulari mill-ospiti.

materjali u metodi

Parassiti, tiġieġ, u kultura taċ-ċelluli

Ir-razza E. tenella M2e, razza transġenika li tesprimi b'mod stabbli proteina fluworexxenti safra msaħħa (EYFP)[21] użata f'dan l-istudju, inżammet permezz ta' propagazzjoni f'brojlers Arber Acres mingħajr coccidian li nxtraw minn Beijing Arbor Acres Poultry Breeding Co. , Ltd.; Beijing, iċ-Ċina. L-għasafar kollha kienu miżmuma f'iżolaturi biex tiġi evitata l-kontaminazzjoni minn speċi oħra ta' Eimeria spp. L-iżolament, il-purifikazzjoni u l-isporulazzjoni tal-oocysts twettqu skont protokolli stabbiliti [22]. L-esperimenti kollha fuq l-annimali twettqu skont il-proċeduri tal-etika tal-annimali approvati mill-Kumitat tal-Benessri tal-Annimali tal-Laboratorju tal-Università Agrikola taċ-Ċina u tal-Ispezzjoni Etika Sperimentali tal-Annimali (l-approvazzjoni Nru 20160921-2). Il-purifikazzjoni ta 'sporozoite saret kif deskritt qabel [35]. Sporozoites purifikati friski ġew sospiżi b'salina b'buffer bil-fosfat (PBS) u n-numru tal-parassiti kien magħdud bl-użu ta 'pjanċa tal-għadd taċ-ċelluli tad-demm. Ċelloli primarji tal-kliewi tat-tiġieġ (PCKs) ġew ippreparati kif deskritt qabel [12]u miżrugħa fi 24-pjanċi ta' kultura sew supplimentati bil-mezz ta' Eagle modifikat ta' Dulbecco (DMEM) li kien fih serum bovin tal-fetu (10 fil-mija, v/v), peniċillina ( 200 U/mL), u streptomycin (100 ug/mL). Id-densità taċ-ċellula ġiet aġġustata għal 1 × 10 gradi ċelluli/bir.

Kejl tal-konċentrazzjoni NO

Il-konċentrazzjoni ta 'NO rilaxxata minn SNP ġiet evalwata billi tkejjel l-NO,/NO; proporzjon permezz ta 'reazzjoni ta' Griess bl-użu ta 'kit ta' analiżi NO (Applygen Tech Inc., Beijing, iċ-Ċina), skond l-istruzzjonijiet tal-manifattur.

Assaġġ tal-ħruġ indott NO

Il-PCKs ġew ikkultivati ​​f'41 grad u 5 fil-mija CO, matul il-lejl segwit minn tliet ħasliet b'PBS biex jitneħħew ċelloli mhux aderenti. Wara jumejn, il-PCKs ġew inkubati bi sporozoites EtM2e f'multipliċità ta 'infezzjoni (MOIof 2.0(proporzjon parassita/ċellula ta' 2:1) f'37 grad għal 12-il siegħa. Sporozoites mhux invażivi tneħħew bil-ħasil Iċ-ċelloli mbagħad ġew inkubati jew b'diversi konċentrazzjonijiet (10,20, u 40 mM) ta 'sodium nitrofer-ricyanide (I) dihydrate (SNP; Sigma) jew trasportatur DMEM waħdu għal ħinijiet ta' trattament differenti (10,20, u 30). min).Wara t-trattament, parassiti egressed ġew sospiżi f'500 μL DMEM, u 10 uL sospensjonijiet ġew analizzati permezz ta 'ċitometrija tal-fluss (C6, Accuri Cytometers, Inc. Ann Arbor, MI, l-Istati Uniti).

Mikroskopija tal-vidjo

Il-PCKs ġew ittrattati b'40 mM SNP wara 12-il siegħa ta' inkubazzjoni bi sporozoites EtM2e f'MOI ta' 2.0. Il-progressjoni tal-ħruġ ġiet irreġistrata permezz ta 'mikroskopju tad-dawl (Carl Zeiss, Olympus).

Sejbien ta 'effett fuq l-istadju ta' żvilupp parassitiku

Qabel it-trattament b'40 mM SNP għal 30 min, sporozoites tħallew jiżviluppaw f'PCKs għal 24 jew 36 siegħa, li huwa l-istadju trophozoite ta 'dan il-parassita. Wara t-trattament, parassiti egressed ġew sospiżi f'500 uL DMEM, u 10 μL sospensjonijiet ġew analizzati permezz ta 'ċitometrija tal-fluss.

Determinazzjoni tal-vijabbiltà taċ-ċellula ospitanti

Il-PCKs ġew maħsula wara ħruġ indott minn NO, invażjoni ta 'sporozoite, trattament SNP, u fil-grupp mhux ittrattat, rispettivament, u l-vijabbiltà taċ-ċelluli ġiet imkejla bl-użu ta' propidium iodide (PI; eBioscience). Fil-qosor, il-PCKs f'kull grupp ġew maħsula b'PBS u bil-mod trypsinized wara t-trattament, u ċelloli singoli ġew imtebba 'b'PI, skond l-istruzzjonijiet tal-manifattur. Il-perċentwal ta 'ċelluli vijabbli ġie analizzat permezz ta' ċitometrija tal-fluss.

Assaġġ ta' inibizzjoni

Għal testijiet ta' inibizzjoni, l-intra Ca2 plus chelator BAPTA-AM (Sigma, St. Louis, MO, l-Istati Uniti) u l-inibitur speċifiku tal-fosfolipasi C tal-fosfoinositide U-73122(Sigma) intużaw biex jevalwaw l-effett ta' Ca2 plus fuq sporozoite ħruġ. F'esperiment ieħor, cytochalasin D(CyoD; MerckDarmstadt. Il-Ġermanja) intuża biex jimblokka l-motilità parassitika. PCKs infettati ġew ittrattati minn qabel b'10 μM BAPTA-AM. U-73122.or CytoD ippreparat f'dimethyl sulfoxide(Sigma) għal 30 min. Imbagħad, il-kulturi taċ-ċelluli ġew inkubati b'40 mM SNP għal 30 min. u n-numru ta 'sporozoites egressed ġie evalwat kif deskritt hawn fuq.

Virulenza ta 'parassiti egressed

Il-PCKs ġew inkubati bi sporozoites għal 12-il siegħa segwiti minn trattament b'40 mM SNP għal 30 min. Il-medju tal-kultura taċ-ċelluli li kien fih parassiti ħielsa wara t-trattament SNP inġabar u maħsul tliet darbiet bil-PBS. u l-vijabbiltà tal-parassiti ġiet ittestjata bl-użu ta '4 fil-mija esklużjoni taż-żebgħa blu trypan. Il-parassiti egressed ġew magħduda bl-użu ta 'pjanċi tal-għadd taċ-ċelluli tad-demm. Biex tiskopri l-virulenza, ġew ittestjati l-invażjoni mill-ġdid u l-abbiltajiet riproduttivi ta 'parassiti egressed wara t-trattament b'40 mM NO għal 30 min. PCKs ġew inkubati ma 'parassiti egressed fi

Virulenza ta 'parassiti egressed

Il-PCKs ġew inkubati bi sporozoites għal 12-il siegħa segwiti minn trattament b'40 mM SNP għal 30 min. Il-medju tal-kultura taċ-ċelluli li kien fih parassiti ħielsa wara t-trattament SNP inġabar u maħsul tliet darbiet bil-PBS. u l-vijabbiltà tal-parassiti ġiet ittestjata bl-użu ta '4 fil-mija esklużjoni taż-żebgħa blu trypan. Il-parassiti egressed ġew magħduda bl-użu ta 'pjanċi tal-għadd taċ-ċelluli tad-demm. Biex tiskopri l-virulenza, ġew ittestjati l-invażjoni mill-ġdid u l-abbiltajiet riproduttivi ta 'parassiti egressed wara t-trattament b'40 mM NO għal 30 min. Il-PCKs ġew inkubati b'parassiti egressed u ntużaw bħala kontroll. Biex tiġi evalwata l-abbiltà riproduttiva tal-ospitant, 2 × 10" sporozoites ippreparati friski u kwantità ugwali ta’ parassiti egressed ġew imlaqqma fi tiġieġ brojler AA ta’ ġimgħa permezz tar-rotta tal-kloak u l-għasafar kollha ġew miżmuma f’iżolaturi [13 ] L-output totali ta' ooċisti għal kull għasfur tkejjel bl-użu ta' kamra tal-għadd tal-bajd McMaster fi 6-9 ijiem wara l-infezzjoni [15].

Analiżi statistiċi

Is-softwer SPSS 20.0 (SPSS Inc.) intuża biex janalizza d-differenzi bejn il-gruppi ta' trattament u ta' kontroll. L-analiżi statistiċi l-oħra kollha twettqu bl-użu tas-softwer GraphPad Prisma 5.01 (Graphpad Software). Id-dejta hija espressa bħala mezz ± żball standard tal-medja (SEM). Gruppi sperimentali tqabblu bl-użu ta' analiżi tal-varjanza f'direzzjoni waħda (ANOVA).

Is-sinifikat statistiku ġie evalwat f'livelli ta' p < 0.05 (sinifikanti) u p<0.01 (highly="">

Riżultati

Ħruġ stimulat NO eżoġenu ta 'E. tenella sporOzoites

Qabel ma wettaq assays ta 'ħruġ, aħna vverifikati jekk il-konċentrazzjoni ta' NO rilaxxati minn SNP setgħetx tinżamm stabbli meta maħlula f'DMEM fi żmien 30 min permezz ta 'reazzjoni Griess (Fig. 1A). Imbagħad, inkubajna kulturi ta 'ċelluli infettati bl-isporozoite b'konċentrazzjonijiet differenti ta' SNP għal tul ta 'żmien differenti, kif deskritt hawn fuq. In-numru ta 'sporozoites ħielsa żdied meta l-PCKs infettati ġew inkubati ma' SNP (Fig. 1B). Osservajna wkoll il-proċess ta 'ħruġ tal-parassiti permezz ta' reġistrazzjoni bil-vidjo (Fig. 1C).

Effett tal-istadju tal-iżvilupp parassitiku fuq il-ħruġ stimulat mill-NO

Konna interessati jekk il-ħruġ indott minn NO jistax jiġi influwenzat mill-istadji ta 'żvilupp ta' dan il-parassita fil-PCKs. Qabel ma nittrattaw b'40 mM SNP għal 30 min, ħallejna l-isporozoites jiżviluppaw fiċ-ċelloli ospitanti għal 24 jew 36 siegħa, rispettivament, li huwa l-istadju trofozoite ta 'dan il-para-sit. Aħna sorpriżament sibna li n-numru ta 'parassiti egressed naqas b'mod sinifikanti bl-estensjoni tal-ħin ta' żvilupp tal-parassita (Fig. 2), li jindika li l-istadju ta 'żvilupp tal-parassita huwa element importanti ta' ħruġ indott mill-NO.

Ħruġ ta' parassiti dipendenti fuq Ca2 plus parassitiku u mobilità

Studju preċedenti wera li Ca2 intra-parassitiku kellu rwol vitali matul il-ħruġ ta 'l-esporozoites ta' E. tenella [12, 34]. Aħna wettaqna esperimenti biex niddeterminaw is-sinifikat ta 'Ca2t fil-ħruġ indott mill-NO tal-parassita. Kif muri fil-Figuri 3A u 3B, l-ħruġ indott mill-NO ġie mblukkat bi trattament minn qabel kemm b'BAPTA-AM kif ukoll b'U-73122, li jindika r-rwol vitali ta 'Ca2 plus intra-parassitiku u li s-sors ta' Ca2 plus fil-

retikulu endoplasmiku (ER). Barra minn hekk, trattament minn qabel b'Cyto-D biex jimblokka l-mobilità tal-parassita wera riżultati simili (Figuri 4A u 4B), li jindika li l-mobilità tal-parassita hija fattur importanti ieħor għall-ħruġ ta 'sporozoite.

Il-ħruġ tal-parassiti mhuwiex assoċjat mal-ħsara taċ-ċelluli ospitanti

Biex tiġi investigata l-possibbiltà li l-ħruġ indott mill-NO kien tossiku għaċ-ċelloli ospitanti, il-vijabbiltà taċ-ċelluli kienet imkejla permezz ta 'tbajja' PI. Ir-riżultati wrew li l-perċentwal ta 'ċelluli PI żdied wara t-trattament b'SNP, u ma kien hemm l-ebda differenza bejn gruppi mhux infettati u infettati, li jindika li l-inkubazzjoni ta' SNP irriżulta f'ħsara taċ-ċelluli, iżda mhux ħruġ tal-parassiti (Figuri 5A u 5B).

Il-virulenza tal-parassita mnaqqsa wara l-ħruġ indott mill-NO

Egressed parasites were collected and shown to remain viable by trypan blue exclusion (>85 fil-mija vijabbiltà). Imbagħad żidna l-parassiti egressed mal-PCKs jew inokulajnihom fi tiġieġ tal-brojlers AA ta' ġimgħa 3-individwalment permezz tar-rotta kloakali. Iż-żewġ effikaċja invażiva (p<0.01)(fig.6a)and productivity="" in="" chickens=""><0.01)(fig.6b)of the="" parasites="" after="" no-induced="" egress="" decreased="" dramatically="" compared="" to="" that="" of="" freshly="" prepared="">

Diskussjoni

F'dan l-istudju, sibna li NO eżoġenu stimula l-ħruġ bikri ta' sporozoites ta' E. tenella minn PCKs infettati fi proċess dipendenti fuq Ca2-. Il-ħruġ tal-parassiti ma rriżulta fl-ebda ħsara liċ-ċelloli ospitanti, u l-abbiltà u l-virulenza re-invażivi tal-parassiti egressed naqsu b'mod sinifikanti. Flimkien, dawn ir-riżultati jissuġġerixxu mudell ġdid għall-istudju tal-mekkaniżmu tal-ħruġ tal-parassiti eimerian u jipprovdu metodu ġdid, medjat minn NO, biex jitnaqqsu l-patoġeni intraċellulari fiċ-ċelloli ospitanti.

Il-ħruġ huwa proċess importanti li jippermetti lis-siti parasiti eimeriani joħorġu miċ-ċelloli ospitanti u jinvadu ċ-ċelloli ġirien biex jibdew ċiklu tal-ħajja intraċellulari ġdid; għalhekk, il-ħruġ għandu rwol kruċjali fil-patoġenesi fi ħdan l-ospitanti. Ir-rapporti preċedenti tagħna ffukaw fuq studji mekkanistiċi preliminari tal-ħruġ tal-parassiti eimerian [35,36]. F'dan l-istudju, NO ġie inkluż. Aħna sibna li NO jista 'jikkaġuna l-ħruġ tal-parassiti ftit wara t-tlestija tal-invażjoni, u ħafna qabel l-okkorrenza ta' ħruġ maturi ta 'mero-zoite, li ħarbat iċ-ċiklu tal-ħajja ta' dan il-patoġenu. Fl-istudju preżenti, il-PCKs infettati ma ġarrbu l-ebda ħsara waqt il-ħruġ, li huwa differenti minn rapporti ta 'nekrożi taċ-ċelluli ospitanti fi studji simili tal-ħruġ tat-tachyzoite T. Gondi [19, 20]. Spjegazzjoni plawżibbli waħda għal din id-differenza hija li l-isporozoites ma rreplikawx qabel ma sar l-assaġġ tal-ħruġ. Għalhekk, mhux aktar minn żewġ parassiti abitaw iċ-ċelloli ospitanti, valur ħafna inqas minn dak ta 'tachyzoites irrappurtat fi studji preċedenti [19, 32]. Spjegazzjoni oħra possibbli hija li, kuntrarjament għat-tachyzoites ta 'T.gondi jew merozoites eimerian, il-parassita m'għandhiex proteina speċifika biex jeqred iċ-ċelloli ospitanti għall-ħruġ naturali fl-istadju ta' sporozoite. Madankollu, ma sibna l-ebda evidenza diretta li tappoġġja dawn l-ipoteżi. Ir-riżultati tagħna wrew tnaqqis sinifikanti fil-virulenza ta 'sporozoites egressed, b'kuntrast mat-tachyzoites T. Gondi, li jżommu virulenza normali wara l-ħruġ [27, 37]. Aħna nassumu li l-parassita kien qed jiżviluppa minn sporozoites għal schizonts meta sar l-assaġġ tal-ħruġ u li l-espressjoni tal-ġeni li tirregola proteini speċifiċi għall-istadju fil-parassita setgħet inbidlet. B'kuntrast ma 'sporozoites eimerian, tachyzoites T. Gondi jgħaddu minn fissjoni binarja fiċ-ċelloli ospitanti, u b'hekk iżommu virulenza normali. Għalhekk, ħsibna li kieku kien hemm ċerti stimulaturi li jistgħu jinduċu l-ħruġ ta 'Eimeria spp. wara l-invażjoni allura l-parassiti egressed ma setgħux iżommu virulenza normali tagħhom in vivo, bħal esperimenti in vitro. Dan il-ħruġ medjat mill-immunità jista 'jfixkel iċ-ċiklu tal-ħajja tal-parassiti u eventwalment jippromwovi t-tneħħija tal-parassita minn ċelloli immuni.

Studji reċenti wrew ir-rwol kruċjali ta 'Ca2 fil-ħruġ ta' patoġeni apicomplexans[7,18]. Il-messaġġier sekondarju inositol 1,4,5-trifosfat (IP3) jistimula r-rilaxx ta' Ca2 mill-ER fiċ-ċitoplasma permezz tat-twaħħil tar-riċettur IP3 [3]. IP3 intwera li jinduċi r-rilaxx ta' Ca2 minn pools intraċellulari kemm f'T.gondi [24] kif ukoll f'Plasmodium falciparum [2]; madankollu, ftit huwa magħruf dwar il-preżenza ġenomika ta 'riċetturi IP3 fil-parassiti apicomplexan [4,23]. Fl-istudju preżenti, il-mogħdijiet intraċellulari ta 'Ca² u IP3 ġew imblukkati bl-użu ta' BAPTA-AM u U-73122 biex jiġi ttestjat jekk il-ħruġ indott ta 'NO ta' sporozoites huwiex dipendenti fuq Ca plus - u biex jiddetermina s-sors tal-Ca2t. Ir-riżultati tagħna wrew li l-ħruġ kien imrażżan kemm minn BAPTA-AM kif ukoll minn U-73122, li jindika li Caplays intraċellulari rwol vitali fil-ħruġ ta 'E. tenella sporozoite. Għalkemm urejna li Ca2 plus intraċellulari huwa vitali għall-ħruġ tal-parassiti, il-mogħdija u l-funzjoni ta 'proteini relatati jeħtieġu aktar studju bl-użu ta' metodi aktar avvanzati u preċiżi.

Fil-qosor, ir-riżultati ta 'dan l-istudju jindikaw li NO jista' jistimula l-ħruġ bikri ta 'l-esporozoites ta' E. tenella minn PCKs infettati u jipprovdi informazzjoni preliminari dwar il-mekkaniżmu ta 'dan il-ħruġ. Fi studji futuri, se nfittxu li nidentifikaw molekuli immuni addizzjonali li jinduċu l-ħruġ bikri ta 'E. tenella sporozoites u ninvestigaw jekk NO jistax jinduċi ħruġ bikri ta' parassiti eimerian minn ċelluli epiteljali intestinali tat-tiġieġ in vitro u in vivo.