Evalwazzjoni tal-Proprjetajiet Antiossidanti, Whitening U Antiaging Ta 'Idrolisati tal-Proteina tar-Ross

Kuntatt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Hui-Ju Chen 1,2, Fan-Jhen Dai 2, Cheng-You Chen 3, Siao-Ling Fan 2, Ji-Hong Zheng 4, Yu-Chun Huang 2,Chi-Fai Chau 1, Yung-Sheng Lin 3, 4,5,* u Chin-Shuh Chen 1,*

Astratt:L-idrolisati tal-proteini derivati ​​mill-pjanti għandhom applikazzjonijiet potenzjali fin-nutrizzjoni. Il-proteini idrolisati tar-ross (RPHs), sors eċċellenti ta 'proteini, ġibdu l-attenzjoni għall-iżvilupp ta' kożmeċewtiċi. Madankollu, ftit studji rrappurtaw l-applikazzjoni potenzjali ta 'l-analiżi RPH, u dan l-istudju eżamina tagħhomantiossidantattivitajiet u l-attivitajiet inibitorji ta 'enzimi skinaging. Ir-riżultati indikaw li l-konċentrazzjonijiet totali ta' fenoliċi u flavonojdi kienu 2.06 ± 0.13 mg ekwivalenti ta' aċidu galliku/g RPHs u 25.96 ± 0.52 µg ekwivalenti ta' quercetin/g RPHs, rispettivament. RPHs wrew attività dipendenti fuq id-doża għat-tneħħija tar-radikali ħielsa minn 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl [konċentrazzjoni inibitorja nofs massima (IC50)=42.58 ± 2.1 mg/g RPHs] u 2 ,20-azino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) (IC{50=2.11 ± 0.88 mg/g RPHs), kapaċità ta' tnaqqis dipendenti fuq id-doża (6.95 ± 1.40 mg ekwivalenti ta' vitamina Ċ/g RPHs) u kapaċità ta' assorbiment radikali tal-ossiġnu (473 µmol ekwivalenti ta' Trolox/g RPHs). Il-konċentrazzjonijiet tas-soluzzjoni RPH meħtieġa biex tinkiseb inibizzjoni ta '50 fil-mija ta' hyaluronidase utyrosinaseattivitajiet kienu determinati li jkunu 8.91 u 107.6 mg/mL, rispettivament. Dan l-istudju wera li RPHs għandhomantiossidant,Attivitajiet antihyaluronidase, u antityrosinase għal applikazzjonijiet kosmetiċi futuri.

Kliem ewlieni:idrolisat tal-proteina tar-ross;antiossidant; hyaluronidase;tyrosinase; kosmetiċi

cistanchejbajdueffettfuq il-ġilda biexkontra l-ossidazzjoni

1. Introduzzjoni

L-espożizzjoni għar-radjazzjoni ultravjola hija responsabbli għal foto-tixjiħ (jew tixjiħ estrinsiku); B'kuntrast, speċi ta' ossiġnu reattivi prodotti fil-metaboliżmu taċ-ċelluli u d-deterjorazzjoni tal-funzjonijiet bijoloġiċi huma responsabbli għat-tixjiħ intrinsiku [1,2]. Ikel ipproċessat spiss ikun fih naturaliantiossidantibħal catechins, aċidu askorbiku, tocopherols, rosmarinic acid, andphenolic estratti minn diversi pjanti. Ir-riċerka li saret fl-antiossidanti naturali issa tqis provenjenzi mhux tradizzjonali. Miġbura b'mod naturaliantiossidantihuma aktar mixtieqa milli prodotti kimikamentantiossidantiperess li xi antiossidanti sintetiċi ġew irrappurtati li huma karċinoġeniċi [3]. Ir-ross (Oryza sativa) huwa staple tad-dieta ewlenija għan-nies madwar id-dinja, partikolarment dawk li jgħixu fl-Asja. Il-produzzjoni annwali tar-ross fid-dinja hija ta' madwar 741 miljun tunnellata [4]. Fil-pajjiżi Asjatiċi, ir-ross huwa rrappurtat is-sors ta '75 fil-mija tal-konsum tal-enerġija ta' aktar minn 2 biljun ruħ [5]. Il-produzzjoni estensiva tar-ross tirriżulta f'ammont korrispondenti ta' produzzjoni ta' prodotti sekondarji. Il-prodott residwu mill-proċess tal-produzzjoni tar-ross fih il-maġġoranza tal-proteina tal-qamħ (~60-85 fil-mija) iżda jintrema jew jintuża biex jitfgħu l-annimali [6-8]. Il-peptidi miksuba minn diversi idrolisati tal-proteini allegatament jaġixxu bħala potenzjalantiossidanti[9]. L-antiossidanti naturali u mhux tossiċi jistgħu għalhekk jiġu estratti mill-idrolisati tal-proteini tal-ikel. Bosta studjużi użaw mudelli b'ħafna lipidi u rrappurtaw idrolisati tal-proteini kif ukoll peptide tal-proteini tal-ħalib, zeina u tas-sojja biex ikollhom karatteristiċi antiossidanti kruċjali, inkluż it-tneħħija ta 'radikali ħielsa, inibizzjoni tal-ikel u perossidazzjoni tal-lipidi in vitro, u kelazzjoni ta' metalli ta 'tranżizzjoni [10– 12].

L-aċidu hyaluronic (HA) jgħin biex il-ġilda nifs ġdid għax iżid il-viskożità, fih l-umdità, u jagħmel il-fluwidi extraċellulari inqas permeabbli. Minħabba l-kapaċità eċċellenti tagħha li żżomm l-ilma, l-HA iżid iż-żgħożija, l-umdità u l-intoppi tal-ġilda u jnaqqas il-grad tat-tikmix [13,14]. Sfortunatament, il-livell ta 'HA fil-ġilda naturalment jonqos bl-età. Hyaluronidase hija enzima li teqred l-HA, li tikkawża telf ta 'saħħa tal-ġilda, flessibilità u umdità, li mbagħad twassal għal tixjiħ tal-ġilda. Għalhekk, it-tikmix jista' jiġi ttrattat billi jinibixxi l-hyaluronidase u jinżamm il-kontenut HA tal-ġilda [15,16]. L-enzima li tipproduċi l-melanintyrosinasejikkontribwixxi b'mod vitali għall-pass li jillimita r-rata tal-proċess li permezz tiegħu jiġi prodott il-melanin. Għalhekk, id-disturbi tal-pigmentazzjoni huma ttrattati b'mod komuni u t-tisfija tal-ġilda tinkiseb billi jinibixxi jew jirregola.tyrosinaseattività [17,18].

F'diversi studji, l-idrolisati tal-proteini tal-qamħ u l-peptidi li jistgħu jinkisbu minnhom ġew skoperti li għandhom attivitajiet antiossidanti, kontra l-pressjoni għolja u antitumorali [19,20]. Il-kontribuzzjonijiet pożittivi għas-saħħa tal-bniedem tal-peptidi u l-proteini li joriġinaw mill-ikel qed jiġu rikonoxxuti gradwalment [21]. Il-konsumaturi dejjem aktar jitolbu li l-industriji tal-kosmetiċi u tal-kura tas-saħħa jużaw komposti bijoattivi naturali. Il-proteini idrolisati tar-ross (RPHs) ġibdu l-attenzjoni bħala sors eċċellenti ta 'proteini. Madankollu, ftit studji rrappurtaw il-karatterizzazzjoni u l-analiżi funzjonali tal-RPHs. Għalhekk, dan l-istudju evalwa l-attività antiossidant u l-hyaluronidase utyrosinase-attivitajiet inibitorji ta 'RPHs.

2. Riżultati u Diskussjoni

2.1. Konċentrazzjoni Fenolika Totali (TPC) u Kontenut Totali ta' Flavonojdi (TFC)

L-istandard fl-assaġġ TPC kien aċidu galliku ta 'diversi konċentrazzjonijiet. Assorbanza ogħla indikat TPC ogħla. It-TPC tal-kampjuni RPH inkiseb billi ddaħħal il-valuri tal-assorbiment ottiku tal-kampjuni RPH fil-kurva tal-kalibrazzjoni tal-aċidu galliku. Byplotting tal-konċentrazzjoni RPH kontra l-konċentrazzjoni fenolika (Figura 1a), inkisbet TPC medju ta '2.06 ± 0.13 mg GAE/g RPHs. TFC ta' 25.96 ± 0.52 µg QE/gRPHs inkisbet billi segwiet proċedura simili (Figura 1b). Il-Figura 1c tirrelata aktar it-TPC u TFC tal-kampjuni RPHs. Jiżvela li r-relazzjoni bejn it-TPC u TFC tista' tiġi espressa bħala y=0.0121x flimkien ma' 0.0659, fejn x u y huma t-TPC u TFC, rispettivament.

It-TPC ta 'RPHs inkluda l-konċentrazzjonijiet ta' aċidi amminiċi fenoliċi u komposti fenoliċi tal-peptidi. L-interazzjoni proteina-kompost fenoliku ġeneralment tinvolvi rbit scovalenti u mhux kovalenti. Il-komposti fenoliċi huma rilaxxati waqt l-idrolisi enżimatika. Enżimi speċifiċi jistgħu jkunu l-aktar kapaċi jeqirdu kumplessi proteina-polifenol; dan jirriżulta f'numru akbar ta 'komposti fenoliċi u peptidi bi gruppi fenoliċi, bħal tyrosine, li jiġu rilaxxati [22]. Ġiet irrappurtata korrelazzjoni qawwija bejn il-kontenut totali ta' polifenoli tal-ħbub u l-attività bijoloġika tagħhom. Il-polifenoli huma magħrufa sew li għandhom attivitajiet antiossidanti qawwija [23]. Għalkemm jinstabu f'inqas ammont, terpeni [24] jewsesquiterpenes [25] fir-ross jistgħu wkoll jikkontribwixxu għal attivitajiet antiossidanti.

2.2. Attività ta' Antiossidanti

2.2.1. Radical Scavenging Attività ta' DPPH Free Radicals

Il-Figura 2 turi l-attività ta 'tneħħija tar-radikali ħielsa DPPH fis-soluzzjoni RPH. Konċentrazzjoni ogħla tas-soluzzjoni ġiet skoperta li tirriżulta f'attività ogħla. Il-konċentrazzjoni inibitorja nofs massima (IC50), li hija l-konċentrazzjoni tal-estratt li għaliha nofs ir-radikali ħielsa DPPH kollha jistgħu jiġu skavenged, kienet 42.58 ± 2.1 mg/mL ta 'peptidi tar-ross.

2.2.2. Attività ta' Tkessiħ ta' Radikali Ħieles tal-ABTS

L-attività ta' tneħħija tar-radikali ħielsa ABTS ta' RPHs, illustrata fil-Figura 3, kienet ogħla meta ġiet impjegata konċentrazzjoni akbar ta' estratt. L-IC50 kien 2.11 ± 0.88 mg/mL ta 'peptidi tar-ross. Dan ir-riżultat indika li l-RPHs kellhom attività qawwija ta 'tneħħija tar-radikali ħielsa ABTS. L-aċidi amminiċi li fihom il-kubrit, inklużi Met u Cys, u aċidi amminiċi idrofobiċi, inklużi Ala, Val, Ile, Leu, Met, Cys, Tyr, Phe, Try, u Pro, jistgħu jkunu fatturi importanti fir-rigward tar-radikali ħielsa ABTS attività ta' kennies.

F'dan l-istudju, il-valur IC50 ta 'l-attività ta' scavenging tar-radikali ħielsa ABTS kien inqas mill-attività ta 'scavenging tar-radikali ħielsa DPPH, li jaqbel mar-riżultati tal-qoxra u l-qalba taż-żerriegħa ta' Jatropha curcas L. [28] u żerriegħa tal-frott tal-jujube u polpa tal-qoxra [29]. Din is-sejba tikkorrispondi wkoll għar-rapport ta 'idrolisati tal-proteini tan-nuħħala tar-ross b'43.98–66.25 µmoL Trolox ekwivalenti/g kampjun u 403.28-430.12 µmoL Trolox ekwivalenti/g kampjun għall-attività ta' tkessiħ tar-radikali ħielsa DPPH u attività ta' tkessiħ tar-radikali ħielsa ABTS, rispettivament [27].

Raġuni waħda possibbli hija d-differenza fis-solubilità bejn ir-radikali ħielsa DPPH (solubbli fiż-żejt) u s-radikali ħielsa ABTS (solubbli fiż-żejt/ilma) [30,31]. Il-potenzjal antiossidant tal-idrolisati tal-proteini tan-nuħħala tar-ross kien influwenzat mill-profil tal-piż molekulari tiegħu, il-kompożizzjoni tal-aċidu amminiku u l-idrofobiċità [32].

2.2.3. Kapaċità ta 'Tnaqqis

Is-sejbiet tal-assaġġ tal-kapaċità tat-tnaqqis għall-RPHs huma ppreżentati fil-Figura 4. Il-kapaċità tat-tnaqqis żdiedet bil-konċentrazzjoni tal-RPHs. Il-kapaċità tat-tnaqqis kienet 6.95 ± 1.40 mg VCE/g RPHs, li tindika li RPHs huma antiossidant effettiv.

2.2.4. Kapaċità ta' Assorbiment Radikali ta' l-Ossiġnu (ORAC)

L-assaġġ ORAC għandu vantaġġi fuq approċċi oħra għad-determinazzjoni tal-attività antiossidanti, inklużi r-reaġenti użati huma radikali perossidi b'mekkaniżmu simili ta 'reazzjoni u potenzjal redox għal ossidanti fiżjoloġiċi; il-ħlas ġenerali u protonationstate li bihom il-antiossidantijirreaġixxu jixbħu dawk fil-ġisem tal-bniedem [33]. Il-metodu ORAC għandu wkoll rilevanza bijoloġika għall-effikaċja tal-antiossidanti fil-ġisem tal-bniedem. Il-Figura 5 turi r-riżultati tal-analiżi ORAC tal-RPHs u l-istandard Trolox f'diversi konċentrazzjonijiet. L-ORAC ġie derivat mill-ekwazzjoni tar-rigressjoni tal-kurva tal-kalibrazzjoni li tirrelata l-AUC nett mal-konċentrazzjoni ta' Trolox. Ir-riżultati indikaw li RPH kellu ORAC ta' 473 µmol TE/g RPHs.

Peptidi antiossidanti jew aċidi amminiċi jistgħu jinkisbu bl-idroliżi tal-proteini enżimatiċi, li jirriżultaw f'attivi ħafna kontra l-ossidanti [34]. Il-kelazzjoni tal-jone tal-metall, l-inibizzjoni tal-perossidazzjoni tal-lipidi, u t-tneħħija ta 'radikali ħielsa ta' peptidi bijoloġikament attivi huma responsabbli għall-attività antiossidant tagħhom. Ir-radikali ħielsa jistgħu jiġu mitfija u l-espressjoni ta 'proteini u enzimi li jnaqqsu l-istress ossidattiv jistgħu jiġu rregolati minn peptidi antiossidanti. L-effikaċja antiossidanti tal-idrolisati tal-proteini u l-peptidi huma rrappurtati dipendenti fuq is-sekwenza tal-aċidi amminiċi u d-daqs tal-peptide, li huma affettwati mill-kundizzjonijiet tal-idrolisi, is-sors tal-proteini, u t-tip ta 'protease [35]. Skont Adebiyi et al. [36], l-akbar proteina tan-nuħħala tar-ross diġestibbli tista 'tinqasam f'biċċiet iżgħar minn subtilisin, li jirriżulta f'rendiment u kontenut akbar ta' proteini. It-TPC ta' idrolisat u l-attività antiossidanti jistgħu jiġu affettwati mill-ispeċifiċità tal-enzimi. Għalhekk, l-attività anti-ossidanti ta 'peptide tista' tkun influwenzata mill-karatteristiċi tas-sors tal-proteina, l-ispeċifiċità tal-enzima, u l-livell ta 'idroliżi [37].

Hemm ħafna rapporti li jużaw proteases (bħal Alcalase, isem kummerċjali ta 'asubtilisin A mill-ispeċi Bacillus) biex idrolizza proteini derivati ​​mill-pjanti biex jiksbu antiossidanti. F'dan ir-rigward, il-proteina tas-sojja hija waħda mill-aktar proteini rrappurtati [38]. Barra minn hekk, tinstab ukoll idroliżi Alcalase tal-proteina tan-nuħħala tar-ross. Taħt kundizzjonijiet ottimali, Alcalasehydrolysis ta 'nuħħala tar-ross glutinoż ipproduċiet idrolisati ta' proteini bil-valur IC50 ta '0.87 ± 0.02 mg/mL fi tneħħija ta' radikali ħielsa DPPH [39]. Fl-istudju tagħna, il-valur IC50 ta 'RPHs kien 42.58 ± 2.1 mg/mL. Għalkemm il-valur IC50 fit-tneħħija tar-radikali ħielsa DPPH f'dan l-istudju ma kienx effettiv daqs dak mill-proteina tan-nuħħala tar-ross, it-tneħħija tar-radikali ħielsa ABTS (IC50=2.11 mg/mL) kienet aktar effettiva mill-idrolisati tal-proteini tas-sojja miksuba mill-Alcalasehydrolysis ( IC50=2.93 mg/mL) [40].

2.3. Attività Inibitorja tal-Hyaluronidase

Enżima proteolitika, hyaluronidase, tinsab fid-dermis u tikkatalizza d-degradazzjoni ta 'HA fil-matriċi extraċellulari [41]. Dan l-istudju uża l-aċidu tanniku bħala kontroll pożittiv għal skopijiet ta' tqabbil. Il-Figura 6 turi li l-aċidu tanniku kellu inibizzjoni ta 'attività ogħla ta' hyaluronidase; l-IC50 kien 0.14 mg/mL, simili għall-valur miksub minn Nishida et al. (0.121 mg/mL; 71.1 mM) [42]. B'kuntrast, IC50 ta' 8.91 mg/mL kien ikkalkolat għas-soluzzjoni RPH. Dan ir-riżultat tas-soluzzjoni RPH ikkorrispondi mal-valur IC50 preċedenti tagħna, 7.61 mg/mL [43]. Proteini, polisakkaridi, u komposti li joriġinaw mill-pjanti u sintetiċi huma fost il-firxa ta 'komposti li fihom inibituri ta' hyaluronidase huma preżenti. Dawn l-inibituri jgħinu biex iżommu l-bilanċ bejn is-sinteżi u d-degradazzjoni tal-HA [44]. Konċentrazzjoni baxxa ta 'HA fil-ġilda tirriżulta f'nixfa u t-tikmix. Għalhekk, l-inibizzjoni tal-attività tal-hyaluronidase hija rotta li permezz tagħha l-morfoloġija tal-ġilda tista 'titjieb u t-tixjiħ tagħha jittardja.

2.4. Attività Tyrosinase-Inibitorja

L-idrolisati tal-proteini minn sorsi naturali għandhom il-potenzjal li jinibixxuattività tyrosinase. It-test ta 'inibizzjoni tat-tyrosinase in-vitro normalment jintuża biex jevalwa kif l-aġenti li jbajdu l-ġilda jaffettwaw direttament l-attività tat-tyrosinase [45]. Billi tipparteċipa fil-pass li jillimita r-rata ta 'melaninsynthesis, tyrosinase jikkatalizza l-idrossilazzjoni ta' L-tyrosine f'L-DOPA u mbagħad l-ossidazzjoni ta 'dan ta' l-aħħar f'o-dopaquinone. Meta jkun mixtieq li tiġi evitata l-bijosintesi tal-melanin, l-inibizzjoni tal-attività L-tyrosinase tista 'tkun kruċjali. Hawnhekk,tyrosinaseintuża biex titkejjel l-attività antityrosinase RPH. Kif muri fil-Figura 7, il-konċentrazzjoni107.6 mg/mL kisbet inibizzjoni ta '50 fil-mija tal-attività tyrosinase. L-aċidu askorbiku wera attività inibitorja ta 'hightyrosinase (IC50=0.098 mg/mL), li kienet simili għall-0.102 mg/mLthat Seo et al. rrappurtati [46].

L-idrolisati tal-proteini tan-nuħħala tar-ross urew għoli b'mod sinifikantityrosinase-attività inibitorja [47,48]. L-attività inibitorja ta' tyrosinase tas-soluzzjoni RPH tista' tirriżulta mill-profili ta' l-amino acid ta' peptidi. Schurink et al. iddeskriva li effettivatyrosinase-inhibitorypeptides jikkonsistu f'residwi ta 'arginine u phenylalanine [49]. L-attività ta' inibizzjoni tat-tirosinażi tista' tittejjeb b'residwi idrofobiċi ta' aċidu amminiku (eż., alanina), u l-produzzjoni tal-melanin tista' tiġi mfixkla minn alanina [50]. Barra minn hekk, Zhang et al. irrapporta wkoll li l-idrolizzat tal-proteina tar-ross jista 'jnaqqas il-kontenut ta' melanin u l-attività ta 'tyrosinase fil-mudell taċ-ċelluli indotti mill-UVB [51].

bodybuilding cistanche

2.5. Profili ta 'Amino Acid u MWs ta' RPHs

Il-kontenut tal-proteina tar-ross wara t-tneħħija tal-lamtu fl-istudju preżenti kien 23.56 fil-mija tal-piż, u l-grad ta 'idroliżi tal-kampjun idrolizzat minn protease kien 9.36 fil-mija .Tabella 1 dettalji dwar il-kompożizzjoni ta' aċidi amminiċi fl-RPHs. Fil-kampjun, kull 100 g kien fih 5.18 g ta 'aċidi amminiċi. Rigward il-komponenti tal-aċidu amminiku, RPHs kienu richin alanine, leucine, arginine, glutamic acid, u aspartic acid. Kull 100 g tal-kampjun kien fih 1.73 g ta 'aċidi amminiċi idrofobiċi (alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, phenylalanine, u cysteine) b'kollox. Dan ir-riżultat kien kompletament differenti mir-rapport preċedenti tagħna [43] fis-soluzzjoni amylase u t-temperatura tat-trattament tagħha biex jitneħħa l-lamtu. Il-kontenut ta 'aċidi amminiċi idrofobiċi kien 1.90 darbiet ogħla mir-rapport preċedenti tagħna. It-temperatura ta 'trattament aktar baxxa (60 ◦C) f'dan l-istudju tista' tipprevjeni d-denaturazzjoni ta 'proteini fi kwantitajiet kbar, sabiex l-attività ta' aċidi amminiċi tista 'tiġi ppreservata aħjar. Barra minn hekk, konklużjoni simili tinkiseb ukoll minn amylase fungali u glucoamylase tosaccharify lamtu fin-nuħħala tar-ross abjad [52].

Ir-riċerka sabet li l-aċidi amminiċi idrofobiċi jixbħuantiossidantibilli tgħolli s-solubilità bbażata fuq il-lipidi f'idrolisati tal-proteini u peptidi minn diversi sorsi ta 'proteini, u b'hekk tippromwovi l-interazzjoni ma' radikali ħielsa [38,53]. Xi aċidi amminiċi ġew irrappurtati minn Chen et al. [54] li ġeneralment ikunuantiossidanti; l-aċidi msemmija kienu jinkludu tryptophan, cysteine, methionine, tyrosine, u histidine. Fl-istudju preżenti, aċidi amminiċi aromatiċi (phenylalanine, tyrosine, u tryptophan) kienu jinkludu 0.53 g/100 g RPHs. Għalhekk, dawn l-aċidi amminiċi li joriġinaw mill-peptidi kienu probabbilment responsabbli għall-attività antiossidant ta 'RPHs.

Barra minn hekk, proteini li huma idrolizzati f'peptidi iqsar għandhom distribuzzjoni MW differenti, u xi gruppi idrofobiċi mitwija fl-intern tal-molekuli naturali tal-proteini sħaħ huma ġeneralment esposti għall-fażi milwiema. Dan huwa relatat mal-molekuli tal-proteini li jiġu rranġati mill-ġdid strutturalment u għalhekk mal-proprjetajiet funzjonali tal-proteina [55,56]. Id-dejta tat-tricine-SDS-PAGE indikat li l-MW ta 'RPHs kien fil-medda 5-35 kDa (Figura 8a).

Figura 8b turi l-kontenut relattiv ta 'diversi MWs f'RPHs. B'mod ġenerali, 45.24 fil-mija tal-proteina kollha kienet fil-faxxa prinċipali (MW ≈ 2.4 kDa). Riżultati simili ġew miksuba fir-rigward tal-peptide tal-idrolisati tal-proteini tan-nuħħala tar-ross. L-ogħla attività antiossidant miksuba minn Thamnarathip et al. [37] kien dak għal peptidi ta' MW=6–50 kDa. Barra minn hekk, jeżistu relazzjonijiet bejn il-funzjoni tal-idrolisati tal-proteini u d-distribuzzjoni tal-MW u l-kompożizzjoni tal-aċidi amminiċi [57]. Dan jispjega l-attività antiossidanti ta 'RPHs osservati fl-istudju preżenti.

2.6. Test tat-Tossiċità taċ-Ċelloli

Tossiċità baxxa taċ-ċelluli hija meħtieġa għal applikazzjonijiet futuri. Biex tiġi evalwata ċ-ċitotossiċità u l-bijokompatibilità ta 'RPHs, il-vijabbiltà taċ-ċelluli ta' 264.7 ċelluli mhux ipproċessati f'soluzzjoni RPH ġiet imkejla permezz tal-metodu MTT. Kif muri fil-Figura 9, il-vijabbiltà taċ-ċelluli kienet ogħla minn 100 fil-mija meta ttrattata b'25–2000 µg/mL RPH għal 24 siegħa u 48 siegħa. Ir-riżultati jindikaw iċ-ċitotossiċità notevolment baxxa tal-RPHs. Għalhekk, RPHs jistgħu jintużaw potenzjalment bħala applikazzjonijiet kosmetiċi b'ċitotossiċità baxxa ħafna.

3. Materjali u Metodi

3.1. Reaġenti

Klorur tal-ħadid(III), 2,20-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) (ABTS), Trolox(6-hydroxy-2,5 ,7,8-tetramethylchroman-2-aċidu karboksiliku), l-3,4-dihydroxyphenylalanine (L-DOPA), 1,1-diphenyl-2- picrylhydrazyl (DPPH), u trichloroacetic acid ġew akkwistati minn Alfa Aesar (Tewksbury, MA, USA). 2,20-azobis(2-methylpropionamidine) dihydrochloride (AAPH), reaġent tal-fenol Folin–Ciocalteu, aċidu galliku, aċidu askorbiku, faqqiegħtyrosinase, u fluorescein sodium ġew akkwistati minn Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). Il-karbonat tas-sodju nkiseb minn Riedel-de Haën (Seelze, il-Ġermanja). Fl-aħħarnett, ferricyanide tal-potassju, fosfat tal-idroġenu tas-sodju, u fosfat diidroġenu tas-sodju ġew miksuba minn Showa Chemical (Tokyo, Ġappun).

3.2. Preparazzjoni ta' RPHs

L-RPHs ġew ippreparati kif deskritt qabel, ħlief li l-amylase fungali ġiet adottata biex jissakkarifika l-lamtu fid-dqiq tar-ross, biex tiġi evitata ħsara lill-aċidi amminiċi kkawżati mill-idroliżi tal-batterijalażi f'temperaturi għoljin [43,58]. Mitt gramma ta' dqiq tar-ross imxarrba f'1000 mL ta' ilma distillat li fih 0.5 fil-mija amylase fungali (Genencor, NY, USA); it-taħlita ġiet sussegwentement imsaħħan għal 24 siegħa sa 60 ◦C ( pH 4.2), wara li tħalla jiksaħ għat-temperatura tal-kamra. Iċ-ċentrifugazzjoni saret għal 10 minuti f'1968 × g biex tneħħi s-supernatant li kien fadal. Wara li 20-darbiet ilma u 2 mL ta' 0.1 fil-mija hydrolyticprotease (Healthmate, Changhua, Tajwan) ġew miżjuda mal-porzjon li ma jinħallx, is-soluzzjoni ġiet imħawwda u inkubata għal 4 sigħat f'55 ◦C. Il-metodu tal-pH-stat kien impjegat biex iżomm il-pH tas-soluzzjoni fil-livell ottimali, u mbagħad sar tisħin ta '85 ◦C għal 10 min inattivazzjoni tal-enzima. Il-frazzjoni li ma tinħallx li kien fadal tneħħiet permezz taċ-ċentrifugazzjoni għal 15-il minuta fi 3075 × g. Il-lijofilizzazzjoni saret fuq is-supernatant, li mbagħad inħażen f'-20 ◦C qabel l-użu.

3.3. Attivitajiet Antiossidanti ta 'RPHs

3.3.1. Konċentrazzjoni Fenolika Totali (TPC)

Intuża l-metodu Folin–Ciocalteu għall-iskoperta tat-TPC ta' RPHs [59].L-ewwel, 200 µL ta' reaġent tal-fenol ta' Folin–Ciocalteu (0.3M) tħallat b'mod uniformi permezz ta'5-min ta' tħawwad b'200 µL ta’ soluzzjoni RPH, u ma’ din it-taħlita, ġew miżjuda 400 µL ta’ ilma dejonizzat(DI) u 200 µL ta’ soluzzjoni ta’ karbonat tas-sodju ta’ 10 fil-mija (w/v). Is-soluzzjoni mħallta għaddiet minn 60 min ta' inkubazzjoni fid-dlam f'temperatura tal-kamra. Imbagħad ġie ċentrifugat għal 15-il minuta fi 3000 rpm. Il-kejl użat 100 µL ta' supernatant. Biex tiddetermina t-TPC (unità: mg) tal-ekwivalenti tal-aċidu galliku (GAE) għal kull gramma ta 'kampjun RPH niexef (unità: mg GAE/g RPHs), id-dejta tal-assorbenza ottika ġiet imdaħħla f'kurva standard li tirrappreżenta l-aċidu galliku. L-assorbanza nkisbet f'700 nm bl-użu tal-EpochMicroplate Spectrophotometer (BioTek, VT, USA).

3.3.2. Kontenut Totali ta' Flavonojdi (TFC)

TFC inkiseb wara l-approċċ ta 'Wathoni et al. b'modifiki minuri [60]. L-ewwel, 500 µL kull wieħed mill-kampjun u 2 fil-mija (w/v) soluzzjoni tal-klorur tal-aluminju tħalltu. Is-soluzzjoni ta 'reazzjoni tħallat sewwa u titħalla għal 10 min, u l-assorbiment f'415 nm ġie evalwat. Ir-riżultat huwa rrappurtat f'mikrogrammi ta' ekwivalenti ta' quercetin (QE) għal kull gramma tal-kampjun niexef RPH (µg QE/g RPHs).

bodybuilding cistanche

3.3.3. DPPH Ħieles Radical Scavenging Attività

L-ewwel, 198 µM DPPH soluzzjoni etanol (50 µL) u s-soluzzjoni RPH jew ilma DI (0.5 µL; il-kampjun u l-kontroll, rispettivament) tħalltu u mbagħad ħallew joqgħod għal 30 min indarkness f'temperatura tal-kamra. Sussegwentement inkisbet l-assorbiment tas-soluzzjoni f'517 nm. L-attività relattiva tat-tkessiħ ġiet ikkalkulata billi ġiet iddeterminata d-differenza ta 'assorbiment bejn il-kampjun u l-kontroll. L-attività ta ' scavenging ta ' radikali ħielsa DPPH għolja kienet riflessa minn assorbiment ottiku baxx. Fil-valutazzjoni tal-attività tat-tkessiħ tar-radikali ħielsa tad-DPPH tas-soluzzjoni RPH, l-istandard użat kien il-vitamina Ċ [61-63].

3.3.4. Attività ta' Tkessiħ ta' Radikali Ħieles tal-ABTS

L-approċċ irrappurtat minn Wu et al. kien impjegat biex jevalwa l-attività antiossidanti tas-soluzzjoni RPH [64]. L-ewwel, soluzzjoni ħażniet ta' 7 mM ABTS (250 µL) ġiet irreazzjoni ma' 2.45 mM persulfat tal-potassju (250 µL) biex tagħti l-katjoni radikali ħieles ABTS (ABTS• plus ), bit-taħlita tinżamm għal 16-il siegħa f'4 ◦C fid-dlam qabel ma kien impjegat. Wara ekwilibrazzjoni fid-dlam f'temperatura tal-kamra, 0.1 M phosphate-buffered saline (PBS; pH 7.4) intuża biex iddilwixxi s-soluzzjoni għal 0.70 ± 0.02 assorbenza f'734 nm. Imbagħad, ma' 180 µL ta' soluzzjoni ABTS dilwita, ġew miżjuda 20 µL ta' Trolox (kontroll pożittiv) jew is-soluzzjoni RPH (kampjun). It-taħlita mbagħad ġiet soġġetta għal 10 min ta 'inkubazzjoni f'temperatura tal-kamra. Dan l-istudju ddetermina l-assorbiment ottiku f'734 nm; assorbiment aktar baxx korrispondew tohigher ABTS ħielsa radical scavenging attività. L-istandard użat biex tiġi vvalutata l-attività ta ' scavenging radikali ħielsa ABTS tal-RPHsolution kien l-antiossidant Trolox.

3.3.5. Kapaċità ta 'Tnaqqis

L-assaġġ tal-qawwa antiossidant li jnaqqas il-ferriku ġie impjegat biex tiddetermina l-attività antiossidant totali tal-RPHsolution. Kif irrappurtat minn Lin et al. [29], is-soluzzjoni RPH (200 µL) tħallat b'mod uniformi ma' 1 fil-mija (w/v) K3Fe(CN)6 u 0.2 M PBS buffer (pH 6.6; 100 µL kull wieħed) .Għal 20 min, ġie użat banju ta 'l-ilma ta' 50 ◦C biex issaħħan it-taħlita; wara t-tneħħija tat-taħlita mill-banju, malajr tkessaħ għal 3 min. Sussegwentement, twettqet żieda ta '10 fil-mija (w/v) aċidu trikloroaċetiku (100 µL) u ċentrifugazzjoni 10-min fi 3000 rpm. Dan kien segwit minn estrazzjoni tas-supernatant (400 µL) u t-taħlit uniformi tiegħu ma'0. 1 fil-mija (w/v) FeCl3 (100 µL) u ilma DI (400 µL). Fe4[Fe(CN)6]3 inkiseb permezz ta'10-reazzjoni min ta' din it-taħlita fid-dlam. Sussegwentement, assorbiment ottiku ogħla (imkejjel f'700 nm) indikat kapaċità ta 'tnaqqis ogħla. Il-vitamina Ċ standard ġiet użata biex tiddetermina l-kontenut ekwivalenti ta 'vitamina Ċ (VCE) għal kull gramma ta' RPHs.

3.3.6. Kapaċità ta' Assorbiment Radikali ta' l-Ossiġnu (ORAC)

Dan l-istudju kiseb l-ORAC billi mmodifika metodu rrappurtat qabel [65]. Wara d-dissoluzzjoni tal-kampjun RPH f'ilma distillat, is-soluzzjoni RPH (50 µL) tħallat ma' fluworexxeina (10 µM) fi 96-platt ta' mikrotiter tajjeb. Is-soluzzjoni għaddiet minn inkubazzjoni ta' 15-min f'37 ◦C segwit biż-żieda ta' 50 µL ta' AAPH (500 mM). Kull 5 min u fuq total ta' 120 min, il-fluworexxenza ġiet irreġistrata (λex u λem=485 u 528 nm, rispettivament). Il-kapaċità antiossidant tal-RPHs ġiet skoperta mill-kinetika tat-tħassir tal-fluworexxenza billi kkalkolat iż-żona taħt il-kurva (AUC). ). Fil-komputazzjoni tal-RPH ORAC, l-istandard kien 15–250 µM Trolox. L-ORAC huwa rrappurtat bħala mikromoles ta' Trolox ekwivalenti (TE) pergram ta' kampjun ta' RPH niexef (µmol TE/g RPHs).

3.4. Attività Inibitorja tal-Hyaluronidase

It-test ta' inibizzjoni ta' hyaluronidase sar bl-użu ta' {{0}}mikroplate tajjeb u metodu rrappurtat qabel b'modifiki ħfief [40]. N-acetylglucosamine ġie rilaxxat billi jirreaġixxi hyaluronidase mas-sottostrat HA. Fil-preżenza ta 'kwalunkwe inibitur, ir-rilaxx ta' N-acetylglucosamine kien imnaqqas, b'din ir-rilaxx jinkixef billi tinkiseb l-assorbenza ta' 600-nm. HA ġie preċipitat b'soluzzjoni ta 'albumina aċiduża komposta minn 0.1 M buffer aċetat (pH 3.9) u albumina tas-serum bovin (1 mg/mL). Is-soluzzjoni tal-kampjun u 5 mg/mL hyaluronidase għaddew minn inkubazzjoni ta' 20-min f'37 ◦C. Għat-taħlita ta 'inkubazzjoni, HA (1{{20}}0 µL; 5.0 mg/mL f'0.1 M buffer aċetat) ġie miżjud sussegwentement. Twettqet aktar inkubazzjoni f'37 ◦C għal 40 min. 0.1 mL 0.4 M soluzzjoni ta 'borat alkalin ġiet miżjuda biex titwaqqaf ir-reazzjoni enżimatika.

3.5. Attività Tyrosinase-Inibitorja

L-istudju preżenti evalwa l-attività antityrosinase ta 'RPHs billi uża protokoll irrappurtat qabel b'modifiki [66]. Soluzzjoni ta 'enżima (135 U/mL) ġiet ippreparata billi tħoll tyrosinase f'20 mM phosphate buffer (pH 6.8). Barra minn hekk, DIwater kien impjegat għall-preparazzjoni ta 'soluzzjoni ta' 1.25 mM L-DOPA. Imbagħad, 40 µL ta’ konċentrazzjonijiet varji ta’ soluzzjonijiet ta’ kampjuni RPH tħalltu ma’ 40 µL ta’ soluzzjoni ta’ tyrosinase u 120 µL ta’ soluzzjoni L-DOPA. Għal 30 minuta, din it-taħlita nżammet f'37 ◦C fit-test tal-inibizzjoni ta' RPHstyrosinaseattività. Spettrofotometru (FLUOstar Omega MicroplateReader, BMG Labtech GmbH, il-Ġermanja) ġie impjegat biex tinkiseb l-assorbenza ta' 475-nm. Il-kejl kollu sar tliet darbiet. L-assorbiment tal-grupp korrispondenti metatyrosinasema kienx preżenti ġie mnaqqas. Ir-rata ta 'inibizzjoni ta' l-enżimi kienet iddeterminata bħala

3.6. Karatterizzazzjoni ta' RPHs

3.6.1. Profili ta 'Amino Acid

Dan l-istudju skopra l-kompożizzjoni tal-aċidu amminiku tal-RPHs. L-ewwel, għal 24 siegħa u f'115 ◦C, 4 M aċidu metansulfoniku ġie impjegat biex idrolizza l-kampjuni f'tubi ssiġillati evakwati. Żewġ sistemi ta' twassil tas-solvent Waters 510 u analizzatur ta' amino acid (L 8900; Hitachi, Tokyo, Ġappun) ġew impjegati għas-separazzjoni derivatizzata ta' amino acid fuq kolonna aSpherisorb ODS2 li tkejjel 25 m × 64.6 mm. Dan l-istudju impjega s-solventi li ġejjin: (a) sodium acetate (0.14 M) u triethylamine (850 µL/L; pH 5.6) u (b) 60 fil-mija acetonitrile, li għalihom il-gradjent kien 0 fil-mija għal 2 min; 0–42 fil-mija għal 15.5 min (kurva konvessa); u 100 fil-mija għal 4 min. Ittieħdu kampjuni duplikati għall-kejl ta 'profili ta' aċidi amminiċi f'254 nm [67,68].

3.6.2. Piż Molekulari (MW) tal-Proteina

Skont il-metodu ta' Schägger [69] u taħt kundizzjonijiet ta' tnaqqis, dan l-istudju kiseb id-distribuzzjoni tal-MW permezz ta' tricine–sodium dodecyl sulfate (SDS)–polyacrylamidegel electrophoresis (PAGE) b'modifiki żgħar. Buffer tal-kampjun (30 g/L SDS, 0.375 MTris-HCl, 0.125 g/L Coomassie Brilliant Blue G-250, u 75 g/ L glycerol; pH 7) intuża biex ixerred il-kampjun imnixxef bil-friża, b'ċentrifugazzjoni imbagħad imwettqa qabel it-tagħbija. Total ta' 20 µL 2-mercaptoethanol ġie miżjud ma' 1 mL tal-kampjun ta' tricine-SDS-PAGE. Il-kampjun kien imsaħħan f'100 ◦C għal 90 s. Tajjeb tal-kampjun ġie mgħobbi b'kull kampjun u Medda Wiesgħa Standard ta' Proteina Mhux Imtebba (Laboratorji Bio-Rad, il-Ġermanja) bl-użu ta' mikrosiringa. Imbagħad saret elettroforeżi—l-ewwel b'30 mV kostanti sakemm il-kampjun kollu kien jinsab fil-ġell tal-istivar u wara sakemm jitlesta b'100 mV kostanti. Sussegwentement, 0.02 fil-mija soluzzjoni Coomassie Brilliant Blue R-250 ġiet applikata għat-tbajja' tal-ġel. Tneħħija assoluta ta' l-isfond tal-ġellijiet kienet imwettqa billi tħawwad il-ġellijiet f'10 fil-mija aċidu aċetiku matul il-lejl. Fl-aħħarnett, l-immaġni tal-ġel ġiet analizzata biex tidentifika l-meded tal-proteini fil-korsiji; din l-analiżi saret f'ImageJ (USNational Institutes of Health, Bethesda, MD, USA). Intużaw markaturi standard biex tinkiseb kurva ta' kalibrazzjoni li minnha ġie stmat il-MW. Fil-qosor, l-ewwel pass kien biex jiddetermina t-tul ta 'kull medda ta' migrazzjoni (Rf) mill-parti ta 'fuq tal-ġel tas-separazzjoni. It-tieni pass kien il-kalkolu tal-kurva tal-kalibrazzjoni billi uża Rf u log (MW) għal markatur standard b'MW partikolari. Id-determinazzjoni tal-MW saret bl-użu tal-faxex tal-proteini Rf f'RPHs.

3.7. Assaġġ taċ-ċitotossiċità

Ċelluli mhux ipproċessati 264.7 ġew ikkultivati ​​f'glukożju għoli Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) li kien fih 10 fil-mija serum bovin tal-fetu (FBS), 4.5 g/L Glukożju, 1 fil-mija soluzzjoni antibijotika (100 unità/ mL penicillin u 100 µg/mL Streptomycin), 4 mM L-Glutamin u 1.5 g/Lsodium bicarbonate f'37 ◦C u 5 fil-mija CO2. It-tossiċità taċ-ċelluli ta' 264.7 ċelluli mhux ipproċessati għal RPHs kienet imkejla b'metodu ta' analiżi tal-proliferazzjoni ta' 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5 diphenyl-tetrazolium bromide (MTT) . Madwar 1 × 104ċelluli għal kull bir ġew ibbanjati fi 96-pjanċi tal-bir. Wara 24 siegħa, ġew miżjuda diversi konċentrazzjonijiet ta 'RPHs (0–2000 µg/mL) fiċ-ċelloli. Wara 24 u 48 siegħa ta 'inkubazzjoni, ġew miżjuda 100 µL ta' soluzzjoni MTT (0.5 mg/mL). Ġew osservati kristalli blu formazan meta ċċekkjati taħt mikroskopju. DMEM tneħħa u 100 µL ta 'dimethyl sulfoxide (DMSO) ġie miżjud għal kull bir. L-assorbiment kien imkejjel permezz ta 'qarrej tal-pjanċa mikrotiter. Il-vijabbiltà taċ-ċelluli ( fil-mija ) imbagħad ġiet ikkalkulata bħala [A570 (ċelluli trattati) − A570 (sfond)] / [A570 (ċelluli mhux trattati) − A570 (sfond)] × 100 fil-mija [70].

3.8. Analiżi Statistika

Ir-rapport għal kull kampjun idrolizzat kien il-valur medju minn tliet esperimenti u determinazzjonijiet ripetuti indipendenti. Ir-riżultati espressi f'medja ± devjazzjoni standard (SD) ġew analizzati b'ANOVA one-way u t-test post hoc ta' Duncan bl-użu tas-Sistema ta' Analiżi Statistika (verżjoni 20.0; SPSS, Armonk, NY, USA). Valuri ta' p < 0.05="" tqiesu="" li="" huma="" sinifikat="">

4. Konklużjonijiet

Dan l-istudju eżamina l-funzjonijiet tal-RPHs. Riżultati sperimentali wrew li RPHs kien fihom komposti fenoliċi u flavonoids u wrew firxa ta 'attivitajiet antiossidanti, bħal attivitajiet ta' tneħħija ta 'DPPH u ABTS, kapaċità ta' tnaqqis u ORAC. Barra minn hekk, RPHs effettivament inibittyrosinaseu attivitajiet ta' hyaluronidase. Il-protease kienet fattur kritiku li jaffettwa l-mudelli MW ta 'RPHs. L-analiżi tal-RPHs tindika l-potenzjal tagħhom għall-użu bħala ingredjent fil-kożmetiċi.

bodybuilding cistanche

Referenzi

1. Ichihashi, M.; Ando, ​​H.; Yoshida, M.; Niki, Y.; Matsui, M. Photoaging tal-ġilda. Anti-Aging Med. 2009, 6, 46–59. [CrossRef]

2. Kim, J.-S.; Kim, D.; Kim, H.-J.; Jang, A. Effett ta 'protezzjoni tal-idrolisati tal-ġelatina tal-ħmar tal-ħmar fuq fotoaging indott mill-UVB tal-fibroblasti tal-ġilda umana. Proċess. Biochem. 2018, 67, 118–126. [CrossRef]

3. Carocho, M.; Ferreira, IC Reviżjoni dwar antiossidanti, proossidanti u kontroversja relatata: Komposti naturali u sintetiċi, metodoloġiji ta 'screening u analiżi u perspettivi futuri. Chem tal-Ikel. Tossikol. 2013, 51, 15–25. [CrossRef]

4. Guo, X.; Zhang, J.; Ma, Y.; Tian, ​​S. Ottimizzazzjoni ta 'idroliżi limitata ta' proteini f'residwu tar-ross u karatterizzazzjoni tal-proprjetajiet thefunctional tal-prodotti. J. Ikel Proc. Preserv. 2013, 37, 245–253. [CrossRef]

5. Park, H.-Y.; Lee, K.-W.; Choi, H.-D. Kostitwenti tan-nuħħala tar-ross: Attivitajiet immunomodulatorji u terapewtiċi. Ikel Funct. 2017, 8,935–943. [CrossRef] [PubMed]

6. Zhou, K.; Canning, C.; Sun, S. Effetti ta 'idrolisati tal-proteini tar-ross ippreparati minn proteases mikrobjali u ultrafiltrazzjoni fuq freeradicals u ossidazzjoni tal-lipidi tal-laħam. LWT 2013, 50, 331–335. [CrossRef]

7. Piu', LD; Tassoni, A.; Serrazanetti, DI; Ferri, M.; Babini, E.; Tagliazucchi, D.; Gianotti, A. L-isfruttament tal-prodott likwidu tal-industrija tal-lamtu biex jipproduċi peptidi bijoattivi minn proteini idrolizzati tar-ross. Chem tal-Ikel. 2014, 155, 199–206. [CrossRef]

8. Ferri, M.; Graen-Heedfeld, J.; Bretz, K.; Guillon, F.; Michelini, E.; Calabretta, MM; Lamborghini, M.; Gruarin, N.; Roda, A.;Kraft, A.; et al. Frazzjonijiet tal-Peptidi Miksuba minn Prodotti sekondarji tar-ross permezz ta 'Proċess li jirrispetta l-Ambjent Show In VitroHealth-Bijoattivitajiet Relatati. PLOS ONE 2017, 12, e0170954. [CrossRef]

9. Wen, C.; Zhang, J.; Zhang, H.; Duan, Y.; Ma, H. Peptidi antiossidanti derivati ​​mill-proteini tal-pjanti: Iżolament, identifikazzjoni, mekkaniżmu ta 'azzjoni u applikazzjoni fis-sistemi tal-ikel: Reviżjoni. Xejriet Ikel Sci. Technol. 2020, 105, 308–322. [CrossRef]

10. Phelan, M.; Aherne, A.; FitzGerald, RJ; O'Brien, NM Peptidi bijoattivi derivati ​​mill-kaseina: Effetti bijoloġiċi, użi industrijali, aspetti ta' sikurezza u status regolatorju. Int. Dairy J. 2009, 19, 643–654. [CrossRef]

11. Udenigwe, CC; Aluko, RE Peptidi bijoattivi derivati ​​mill-proteini tal-ikel: Produzzjoni, ipproċessar, u benefiċċji potenzjali għas-saħħa. J.Ikel Sci. 2012, 77, 11–24. [CrossRef] [PubMed]

12. Fardet, A.; Rock, E. Potenzjal antiossidant in vitro u in vivo ta 'ħalib, jogurts, ħalib iffermentat u ġobon: Reviżjoni narrattiva ta' evidenza. Nutr. Riż. Rev 2018, 31, 52–70. [CrossRef]

13. Lissija, JB; Kathryn, AB; Charles, WPJ; Christine, ES Photocrosslinked Hyaluronic acid hydrogels: Scaffolds ta 'inġinerija tat-tessuti naturali, bijodegradabbli. Bijoteknoloġija. Bioeng. 2003, 82, 578–589. [CrossRef]

14. Jegasothy, SM; Zabolotniaia, V.; Bielfeldt, S. Effikaċja ta 'Aċidu Nano-hyaluronic Topiku Ġdid fil-Bnedmin. J. Clin. Aesthet.Dermatol. 2014, 7, 27–29.

15. Ndlovu, G.; Fouche, G.; Tselanyane, M.; Cordier, W.; Steenkamp, ​​V. Determinazzjoni in vitro tal-potenzjal kontra t-tixjiħ ta 'erba' pjanti mediċinali Afrikani tan-Nofsinhar. BMC Kumpliment. Alternattiv. Med. 2013, 13, 304. [CrossRef]

16. Jiratchayamaethasakul, C.; Ding, Y.; Hwang, O.; Im, S.-T.; Jang, Y.; Myung, S.-W.; Lee, JM; Kim, H.-S.; Ko, S.-C.; Lee, S.-H.Iscreening in vitro ta 'elastasi, collagenase, hyaluronidase, u attivitajiet inibitorji u antiossidanti ta' tyrosinase ta '22 estratt ta' halophyteplant għal kożmeċewtiċi ġodda. Ħut. Aquat. Sci. 2020, 23, 1–9. [CrossRef]

17. Kang, M.; Park, S.-H.; Oh, SW; Lee, SE; Yoo, JA; Nho, YH; Lee, S.; Han, BS; Cho, JY; Lee, J. Effetti anti-melanoġeniċi ta 'resorcinol huma medjati minn soppressjoni ta' sinjalar cAMP u attivazzjoni ta 'sinjalazzjoni p38 MAPK. Biosci. Bijoteknoloġija. Biochem.2018, 82, 1188–1196. [CrossRef]

18. Chatatikun, M.; Yamauchi, T.; Yamasaki, K.; Aiba, S.; Chiabchalard, A. Effett antimelanoġeniku tal-weraq ta 'Croton roxburghii u Crotonsublyratus f'ċelluli B16F10 stimulati -MSH. J. Tradit. Jikkumplimenta. Med. 2019, 9, 66–72. [CrossRef] [PubMed]

19. Rizzello, CG; Nionelli, L.; Coda, R.; Gobbetti, M. Sinteżi tal-Peptide Preventiv tal-Kanċer Lunasin minn Batterji tal-Aċidu Lattiku Waqt il-Fermentazzjoni tal-Għasa Moħda. Nutr. Cancer 2012, 64, 111–120. [CrossRef] [PubMed]

20. Rizzello, CG; Tagliazucchi, D.; Babini, E.; Rutella, GS; Saa, DLT; Gianotti, A. Peptidi bijoattivi minn matriċi ta 'ikel veġetali: Xejriet ta' riċerka u bijoteknoloġiji ġodda għas-sintesi u l-irkupru. J. Funct. Foods 2016, 27, 549–569. [CrossRef]

21. Coscueta, ER; Campos, DA; Osório, H.; Nerli, BB; Pintado, M. Idroliżi tal-proteina tas-sojja enżimatika: Għodda għall-produzzjoni tal-ingredjenti tal-ikel bijofunzjonali. Chem tal-Ikel. X 2019, 1, 100006. [CrossRef]

22. Aydemir, LY; Yemenicioglu, A. Huma Antiossidanti Fenoliċi marbutin mal-proteini f'Legumi li ma tidhirx Parti mill-Iceberg? J. Pjanta. Biochem.Physiol. 2013, 1, 1–3. [CrossRef]

23. Huang, SH; Ng, LT Kwantifikazzjoni ta 'kontenut polifenoliku u kostitwenti bijoattivi ta' xi varjetajiet ta 'ross kummerċjali fit-Tajwan. J. Food Compos. Anal. 2012, 26, 122–127. [CrossRef]

24. Yoshitomi, K.; Taniguchi, S.; Tanaka, K.; Uji, Y.; Akimitsu, K.; Gomi, K. Rice terpene synthase 24 (OsTPS24) jikkodifika monoterpene synthase li jirrispondu jasmonate li jipproduċi -terpinene antibatteriku kontra patoġenu tar-ross. J. Pjanta. Physiol. 2016, 191,120–126. [CrossRef]

25. Kamolsukyeunyong, W.; Sukhaket, W.; Pitija, K.; Thorngkham, P.; Mahatheeranont, S.; Toojinda, T.; Vanavichit, A. RiceSesquiterpene Jilgħab Rwoli Importanti fl-Antixenosis kontra Brown Planthopper fir-Ross. Pjanti 2021, 10, 1049. [CrossRef][PubMed]

26. Liu, Y.; Wang, Z.; Li, H.; Liang, M.; Yang, L. Attività antiossidanti in vitro ta 'proteina tar-ross affettwata minn grad alkalin u diġestjoni protease gastrointestinali. J. Sci. Ikel Agrikolu. 2016, 96, 4940–4950. [CrossRef] [PubMed]

27. Phongthai, S.; D'Amico, S.; Schoenlechner, R.; Homthawornchoo, W.; Rawdkuen, S. Il-frazzjonament u l-proprjetajiet antiossidanti tal-idrolisati tal-proteini tan-nuħħala tar-ross stimulati minn diġestjoni gastrointestinali in vitro. Chem tal-Ikel. 2018, 240, 156–164. [CrossRef][PubMed]

28. Huang, S.-L.; Wang, W.-H.; Zhong, X.-Y.; Lin, C.-T.; Lin, W.-S.; Chang, M.-Y.; Lin, Y.-S. Proprjetajiet Antiossidanti ta 'Jatropha curcas L.Qoxra taż-żerriegħa u Estratti tal-qalba. Appl. Sci. 2020, 10, 3279. [CrossRef]

29. Lin, Y.-S.; Lin, W.-S.; Tung, J.-W.; Cheng, Y.-C.; Chang, M.-Y.; Chen, C.-Y.; Huang, S.-L. Kapaċitajiet Antiossidanti taż-Żerriegħa tal-Frott Jujube u l-Polpa tal-Qaxxar. Appl. Sci. 2020, 10, 6007. [CrossRef]

30. Shahi, Z.; Sayyed-Alangi, SZ; Najafian, L. Effetti tat-tip ta 'enżima u l-ħin tal-proċess fuq il-grad ta' idroliżi, bandssand elettroforesi u proprjetajiet antiossidanti ta 'proteini idrolizzati derivati ​​minn Bunium persicum Bioss bla xaħam. kejk tal-istampa. Heliyon 2020, 6,e03365. [CrossRef] [PubMed]

31. Xie, H.; Huang, J.; Woo, MW; Hu, J.; Xiong, H.; Zhao, Q. Effett tad-diżattivazzjoni tal-enżimi kiesaħ u sħun fuq il-proprjetajiet strutturali u funzjonali tal-idrolisati tal-proteini tad-dreg tar-ross. Chem tal-Ikel. 2021, 345, 128784. [CrossRef]

32. Rani, S.; Pooja, K.; Pal, GK Esplorazzjoni ta 'idrolisati u peptidi tal-proteini tar-ross b'referenza speċjali għall-potenzjal antiossidant: Approċċi derivati ​​komputazzjonali għad-determinazzjoni tal-bijoattività. Xejriet Ikel Sci. Technol. 2018, 80, 61–70. [CrossRef]

33. Bisby, RH; Brooke, R.; Navaratnam, S. Effett tal-potenzjal ta 'ossidazzjoni antiossidanti fl-assay tal-kapaċità ta' assorbiment radikali tal-ossiġnu (ORAC). Chem tal-Ikel. 2008, 108, 1002–1007. [CrossRef]

34. Elias, RJ; Kellerby, SS; Decker, E. Attività Antiossidanti ta 'Proteini u Peptidi. Krit. Dun Ikel Sci. Nutr. 2008, 48, 430–441.[CrossRef] [PubMed]

35. Mini, Y.; Li-Chan, E.; Jiang, B. (Eds.) Proteini u Peptidi Bijoattivi bħala Ikel Funzjonali u Nutraċewtiċi; Wiley-Blackwell:Hoboken, NJ, l-Istati Uniti, 2010; pp. 29–42.

36. Adebiyi, AP; Adebiyi, AO; Yamashita, J.; Ogawa, T.; Muramoto, K. Purifikazzjoni u karatterizzazzjoni ta 'peptidi antiossidattivi derivati ​​minn idrolisati tal-proteini tan-nuħħala tar-ross. Eur. Ikel Res. Technol. 2008, 228, 553–563. [CrossRef]

37. Thamnarathip, P.; Jangchud, K.; Nitisinprasert, S.; Vardhanabhuti, B. Identifikazzjoni tal-piż molekulari tal-peptide mill-idrolizzat tal-branprotein tar-ross b'attività antiossidant għolja. J. Ċereali Sci. 2016, 69, 329–335. [CrossRef]

38. Tacias-Pascacio, VG; Morellon-Sterling, R.; Siar, E.-H.; Tavano, O.; Berenguer-Murcia, Á.; Fernandez-Lafuente, R. Użu ta 'Alcalasein il-produzzjoni ta' peptidi bijoattivi: Reviżjoni. Int. J. Biol. Makromol. 2020, 165, 2143–2196. [CrossRef] [PubMed]

39. Sarringkarin, W.; Laokuldilok, T. Ottimizzazzjoni tal-kundizzjonijiet tal-produzzjoni tal-idrolizzat tal-proteina tan-nuħħala tar-ross glutinoż bi proprjetajiet antiossidanti. CMU J. Nat. Sci. 2017, 16, 1–18. [CrossRef]

40. Zhang, Q.; Tong, X.; Qi, B.; Wang, Z.; Li, Y.; Sui, X.; Jiang, L. Bidliet fl-attività anti-ossidanti tas-sojja idrolizzata ta 'Alcalase-hydrolysate taħt diġestjoni gastrointestinali simulata u trasport transepiteljali. J. Funct. Ikel 2018, 42, 298–305. [CrossRef]

41. Tu, PTB; Tawata, S. Proprjetajiet Anti-Ossidant, Anti-Aging, u Anti-Melanogenic taż-Żjut Essenzjali minn Żewġ Varjetajiet ta 'Alpinia zerumbet. Molekuli 2015, 20, 16723–16740. [CrossRef]

42. Nishida, Y.; Sugahara, S.; Wada, K.; Toyohisa, D.; Tanaka, T.; Ono, M.; Yasuda, S. Effetti inibitorji tal-estratt tal-aċetat tal-etil mill-bozoz ta 'Scilla scilloides fuq attivitajiet lipoxygenase u hyaluronidase. Pharm. Biol. 2014, 52, 1351–1357. [CrossRef]

43. Chen, H.-J.; Dai, F.-J.; Fan, S.-L.; Huang, Y.-C.; Chau, C.-F.; Lin, Y.-S.; Chen, C.-S. Kinetika ta 'Inibizzjoni ta' Hyaluronidase minn Ross (Oryza sativa L.) Protein Hydrolysate. Appl. Sci. 2020, 10, 9087. [CrossRef]

44. Girish, K.; Kemparaju, K. Il-kolla magic hyaluronan u l-eraser hyaluronidase tagħha: Ħarsa ġenerali bijoloġika. Ħajja Sci. 2007, 80,1921–1943. [CrossRef] [PubMed]

45. Zolghadri, S.; Bahrami, A.; Khan, MTH; Munoz-Munoz, J.; Garcia-Molina, F.; Garcia-Canovas, F.; Saboury, AA Reviżjoni komprensiva dwar l-inibituri tat-tyrosinase. J. Enżima. Inib. Med. Chem. 2019, 34, 279–309. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Seo, EJ; Ħong, ES; Choi, MH; Kim, KS; Lee, SJ Effetti antiossidanti u li jbajdu l-ġilda ta 'estratti ta' Rhamnus yoshinoi. KoreanJ. Ikel Sci. Technol. 2010, 42, 750–754.

47. Ochiai, A.; Tanaka, S.; Tanaka, T.; Taniguchi, M. Proteina tal-Nuħħala tar-Ross bħala Sors Potenti ta 'Peptidi Antimelanoġeniċi b'Attività Inibitorja ta' Tyrosinase. J. Nat. Prod. 2016, 79, 2545–2551. [CrossRef] [PubMed]

48. Kubglomsong, S.; Theerakulkait, C.; Qasab, RL; Yang, L.; Maier, CS; Stevens, JF Iżolament u Identifikazzjoni ta 'Peptidi Inibitorji tat-Tyrosinase u Chelating tar-Ram minn Albumin Derivat mir-Ross Idrolizzat. J. Agri. Chem tal-Ikel. 2018, 66, 8346–8354.[CrossRef]

49. Schurink, M.; van Berkel, WJ; Wichers, H.; Boeriu, CG Peptidi ġodda b'attività inibitorja ta 'tyrosinase. Peptidi 2007, 28,485–495. [CrossRef]

50. Ishikawa, M.; Kawase, I.; Ishii, F. Kombinazzjoni ta 'Aċidi Amminiċi Tnaqqas il-pigmentazzjoni fiċ-Ċelloli tal-Melanoma B16F0. Biol. Pharm.Bull. 2007, 30, 677–681. [CrossRef] [PubMed]

51. Zhang, R.; Wei, Y.; Li, M.; Cai, M.; Gu, R.; Ma, Y.; Chen, L.; Wang, J. Effetti tal-melanogenesis tal-idrolizzat tal-proteina tar-ross u l-peptidi karatteristiċi tiegħu Leu-Leu-Lys, Leu-Pro-Lys, u pyroGlu-Lys fuq ċelluli melanoċiti epidermali umani indotti mill-UVB. FoodFunct. 2020, 11, 8757–8767. [CrossRef]

52. Wang, Y.; Cai, D.; Hu, M.; Wang, Z.; Qin, P.; Tan, T. Produzzjoni fermentattiva miftuħa ta 'l-aċidu lattiku bl-użu tan-nuħħala tar-ross abjad b'sakkarifikazzjoni u fermentazzjoni simultanja. Bioresour. Technol. 2015, 198, 664–672. [CrossRef] [PubMed]

53. Pan, M.; Jiang, TS; Pan, JL Attivitajiet Antiossidanti ta 'Idrolisati tal-Proteina tal-Kopa. Bijoproċess tal-Ikel. Technol. 2009, 4, 1144–1152.[CrossRef]

54. Chen, HM; Muramoto, K.; Yamauchi, F.; Nokihara, K. Attività antiossidanti ta 'peptidi ddisinjati bbażati fuq l-antioxidativepeptide iżolati minn diġesti ta' proteina tas-sojja. J. Agri. Chem tal-Ikel. 1996, 44, 2619–2623. [CrossRef]

55. Liu, Q.; Kong, B.; Xiong, YL; Xia, X. Attività antiossidanti u proprjetajiet funzjonali ta 'idrolizzat tal-proteina tal-plażma tal-majjal bħala influwenzat mill-grad ta' idroliżi. Chem tal-Ikel. 2010, 118, 403–410. [CrossRef]

56. Lemes, A.; Sala, L.; Minerali, JDC; Braga, ARC; Egea, MB; Fernandes, KF Reviżjoni ta 'l-Avvanzi Reċenti fil-Peptidi Bijoattivi Encrypted minn Skart Sinjur ta' Proteini. Int. J. Mol. Sci. 2016, 17, 950. [CrossRef] [PubMed]

57. Wang, J.-S.; Zhao, M.-M.; Zhao, Q.-Z.; Jiang, Y.-M. Proprjetajiet antiossidanti ta 'idrolisati tal-papain tal-glutina tal-qamħ f'sistemi ta' ossidazzjoni differenti. Chem tal-Ikel. 2007, 101, 1658–1663. [CrossRef]

58. Gao, M.-T.; Kaneko, M.; Hirata, M.; Toorisaka, E.; Hano, T. L-użu tan-nuħħala tar-ross bħala sors ta 'nutrijenti għall-produzzjoni tal-aċidu lattiku fermentattiv. Bioresour. Technol. 2008, 99, 3659–3664. [CrossRef] [PubMed]

59. Huang, WY; Lin, YR; Ho, RF; Liu, HY; Lin, YS Effetti ta 'soluzzjonijiet ta' l-ilma fuq l-estrazzjoni tal-weraq tat-tè aħdar. Sci. World J. 2013,2013, 368350. [CrossRef]

60. Wathoni, N.; Shan, CY; Shan, WY; Rostinawati, T.; Indradi, RB; Pratiwi, R.; Muchtaridi, M. Karatterizzazzjoni u attività antiossidanti tal-pektin mill-qoxra tal-mangostan Indoneżjan (Garcinia mangostana L.). Heliyon 2019, 5, e02299. [CrossRef]

61. Tsai, C.-C.; Chan, C.-F.; Huang, W.-Y.; Lin, J.-S.; Chan, P.; Liu, H.-Y.; Lin, Y.-S. Applikazzjonijiet ta 'Lactobacillus rhamnosus SpentCulture Supernatant fl-Applikazzjonijiet Kosmetiċi Antiossidazzjoni, Whitening u Żamma ta' Umdità. Molekuli 2013, 18, 14161–14171.[CrossRef]

62. Huang, W.-Y.; Lee, P.-C.; Hsu, J.-C.; Lin, Y.-R.; Chen, H.-J.; Lin, Y.-S. Effetti tal-Kwalità tal-Ilma fuq ix-Xoljiment tal-Yerba Mate ExtractPowders. Sci. World J. 2014, 2014, 1–6. [CrossRef] [PubMed]

63. Chan, C.-F.; Wu, C.-T.; Huang, W.-Y.; Lin, W.-S.; Wu, H.-W.; Huang, T.-K.; Chang, M.-Y.; Lin, Y.-S. Antiossidazzjoni u MelanogenesisInibizzjoni ta 'diversi Estratti ta' Dendrobium tosaense. Molekuli 2018, 23, 1810. [CrossRef] [PubMed]64. Wu, C.-T.; Agrawal, DC; Huang, W.-Y.; Hsu, H.-C.; Yang, S.-J.; Huang, S.-L.; Lin, Y.-S. Analiżi tal-Funzjonalità ta' Estratti ta' CoffeeGround Eżawriti Miksuba bil-Metodu Idrotermali. J. Chem. 2019, 2019, 1–8. [CrossRef]

65. Dorta, E.; Rodríguez-Rodríguez, EM; Jiménez-Quezada, A.; Fuentes-Lemus, E.; Speisky, H.; Lissi, E.; López-Alarcón, C. Użu tal-Assaġġ tal-Kapaċità ta' Assorbiment Radikali tal-Ossiġenu (ORAC) biex Tbassar il-Kapaċità tal-Prodotti sekondarji tal-Mango (Mangifera indica L.) biex Inibixxi l-Ossidazzjoni tal-Proteini tal-Laħam. Ikel Anal. Metodi 2016, 10, 330–338. [CrossRef]

66. Lin, Y.-S.; Chen, H.-J.; Huang, J.-P.; Lee, P.-C.; Tsai, C.-R.; Hsu, T.-F.; Huang, W.-Y. Kinetika ta 'l-Attività Inibitorja tat-Tyrosinase Bl-użu ta' Estratti tal-werqa ta 'Vitis vinifera. BioMed Res. Int. 2017, 2017, 5232680. [CrossRef] [PubMed]

67. Bidlingmeyer, BA; Cohen, SA; Tarvin, TL Analiżi rapida ta 'aċidi amminiċi bl-użu ta' derivatizzazzjoni ta 'qabel il-kolonna. J. Chromatogr. BBiomed. Sci. Appl. 1984, 336, 93–104. [CrossRef]

68. Asai, TT; Oikawa, F.; Yoshikawa, K.; Inoue, N.; Sato, K. Peptidi tal-collagen derivati ​​mill-ikel, Prolyl-Hydroxyproline (Pro-Hyp), andHydroxyprolyl-Glycine (Hyp-Gly) Ittejjeb it-Tkabbir tal-Fibroblast tal-Ġilda tal-Ġurdien Kultivata Primarja Bl-użu tas-Serum Fetali Bovini Freefrom Hydroxyprolyl Peptide. Int. J. Mol. Sci. 2019, 21, 229. [CrossRef]

69. Schägger, H. Tricine–SDS–PAĠNA. Nat. Protoc. 2006, 1, 16–22. [CrossRef]

70. Diao, J.; Chi, Z.; Guo, Z.; Zhang, L. Idrolizzat tal-proteina tal-fażola Mung jimmodula r-rispons immuni permezz tal-mogħdija NF-kB inlipopolysaccharide stimulata RAW 264.7 makrofaġi. J. Ikel Sci. 2019, 84, 2652–2657.[CrossRef]