Elastin Jikkostitwixxi Il-Proteina Elastika Ta 'Tessuti Konnettivi Epidermali Bil-Kallaġen

Jekk jogħġbok ikkuntattjaoscar.xiao@wecistanche.comgħal aktar informazzjoni

Astratt:Xanthone glycoside,135,6-tetrahydroxyxanthone-C-4-D-glucopyranoside ġdid ġie iżolat mill-estratt tal-metanol tal-weraq Mangifera Indica (Anacardiaceae) li qed jikber fl-Eġittu. L-istruttura ġiet iċċarata b'dejta spettroskopika 1D u 2D-NMR. Il-proprjetajiet fiżikokimiċi tal-kompost bħalma huma l-lipofiliċità, is-solubilità, u l-kunsiderazzjonijiet tal-formulazzjoni kienu mbassra permezz tat-teknika ADMET in silico bl-użu tas-server SwissADME. Din it-teknika pprovdiet ir-regola ta 'ħamsa ta' Lipinski, bħall-assorbiment, id-distribuzzjoni, il-metaboliżmu u l-permeazzjoni tal-ġilda tal-GIT. L-attivitajiet inibitorji in vitro kontra enzimi medjati mit-tixjiħ bħal collagenase, elastase, hyaluronidase, u tyrosinase ġew ivvalutati. Il-kompost wera effetti notevoli ta 'anti-collagenase, anti-elastase, anti-hyaluronidase, u anti-tyrosinase b'valuri IC50 ta' 1.06,419.10,1.65, u 0.48 ug/mL, rispettivament, meta mqabbla mal-kontroll pożittiv. Il-kompost wera solubilità milwiema mbassra promettenti u penetrazzjoni raġonevoli tal-ġilda li tissuġġerixxi l-adegwatezza tal-kompost għal formulazzjoni topika bħala aġent kontra t-tixjiħ għal preparazzjonijiet kosmetiċi.

Kliem ewlieni:xanthone; Mangifera indica; tixjiħ; ceollagenase; elastase; tyrosinase; hyaluronidase; in silico ADMET

1. Introduzzjoni

Il-proċess tat-tixjiħ huwa proċess bijokimiku kumpless assoċjat ma 'stress ossidattiv immexxi minn radikali ħielsa mill-ossiġnu u n-nitroġenu endoġenu ġġenerati matul l-istennija tal-ħajja, li jistgħu jikkontribwixxu għall-progressjoni ta' manifestazzjonijiet assoċjati mal-età [1]. Patoloġiji tat-tixjiħ tal-ġilda bħal tikmix, iperpigmentazzjoni, spots li qed jixjieħu, tikmix, melasma, freckles, lentigo, ephelides, nevus, kannella, u melanoma jitressqu bl-attivazzjoni ta 'speċi ta' ossiġnu reattiv (ROS) [2]. Radikali ħielsa jew ROS jistgħu potenzjalment jinduċu bidla fil-kompożizzjoni strutturali taċ-ċelluli tal-ġilda u jagħmlu ħsara lill-membrani taċ-ċelluli billi jistimulaw l-ossidazzjoni tal-lipidi u l-proteini, li jwasslu għal ħsara fid-DNA u mewt taċ-ċelluli [3,4]. Barra minn hekk, ROS għandhom rwol sinifikanti fil-proċess tat-tixjiħ tal-ġilda billi jagħmlu ħsara lill-proteini ewlenin tal-ġilda bħall-collagen u l-elastin bl-attivazzjoni tal-enżimi collagenase u elastase. Barra minn hekk, ir-radikali ħielsa jikkawżaw degradazzjoni tal-aċidu hyaluronic permezz tal-attivazzjoni tal-hyaluronidases, li twassal għal idratazzjoni mhux xierqa tal-ġilda [5,6]. L-antiċipazzjoni ta' dawn il-proċessi dinamiċi hija meqjusa bħala kwistjoni ewlenija għall-qasam dermo-kosmetiċi u xogħol sostanzjali ta' riċerka qed jintefaq biex jiskopru formulazzjonijiet protettivi ġodda[7]. L-antiossidanti huma l-enzimi naturali tad-difiża preżenti fil-ġilda u jikkontrobattu r-radikali ħielsa eċċessivi prodotti fil-ġisem. Madankollu, il-bilanċ ossidattiv jista 'jiġi mfixkel minn diversi fatturi inklużi d-dieta u t-tniġġis tal-arja li jwasslu għal stress ossidattiv. F'dan l-istress ossidattiv, it-tagħbija ta 'radikali ħielsa fil-ġisem hija ogħla b'mod sinifikanti mill-antiossidanti naturali. Għalhekk, huwa importanti ħafna li jintużaw antiossidanti esterni minn sorsi bħal dieta, kożmetiċi, jew farmaċewtiċi biex jinnewtralizza r-radikali ħielsa u jiġġieled il-proċess tat-tixjiħ tal-ġilda [5,8]. Studji moderni wrew li diversi metaboliti sekondarji naturali, prinċipalment flavonoids u polyphenolics jikkontribwixxu b'mod sinifikanti għall-attività antiossidant totali ta 'ħafna pjanti [9]. Dan wassal għall-interess fl-investigazzjoni tal-attività antiossidanti ta 'ħafna pjanti [10]. Frott ġie rrappurtat għar-rikkezza tiegħu f'dawn il-fenoliċi u flavonoids kif ukoll vitamini [11].

Jekk jogħġbok ikklikkja hawn biex tkun taf aktar

Elastin jikkostitwixxi l-proteina elastika tat-tessuti konnettivi epidermali bil-kollaġen u jirrappreżenta rwol sostanzjali fil-prevenzjoni tat-tikmix u l-fermezza tal-ġilda[12]. Waqt it-tixjiħ taċ-ċelluli, il-metalloproteinases tal-matriċi bħal collagenase, elastase, u hyaluronidase huma rregolati [13]. Is-soppressjoni ta 'dawn l-enzimi hija waħda mill-aktar strateġiji terapewtiċi effettivi biex timmaniġġja d-deterjorament tal-kundizzjonijiet tal-ġilda waqt it-tixjiħ [14]. Komposti fenoliċi derivati ​​mill-pjanti ġew deskritti bħala medjaturi qawwija li jbajdu minħabba l-proprjetajiet inibitorji tagħhom tat-tyrosinase [15] u xi wħud (minnhom jista 'jkollhom rwol fir-rimodelizzazzjoni tal-matriċi permezz ta' effett inibitorju elastase [16).

Mangifera indica L. hija waħda mill-aktar pjanti li jittieklu importanti li jappartjenu għall-familja Anacardiaceae mqassma f'ħafna pajjiżi, partikolarment reġjuni tropikali [17]. Il-frott tal-mango wera rwol imperattiv fl-oqsma agrikoli, alimentari, farmaċewtiċi u nutraċewtiċi għal aktar minn 4000 sena [18]. Barra minn hekk, il-frott tal-mango jinsab fit-tieni pożizzjoni fost l-uċuħ tar-raba’ industrijali, wara l-balana, f’termini ta’ produzzjoni u kopertura [19]. Partijiet differenti ta 'Mangifera indica jirrappreżentaw sors għani ta' fitokostitwenti differenti inklużi flavonoids, xanthonoids, phenolic acids, u triterpenoids b'valur potenzjali bħala molekuli funzjonali [18]. Barra minn hekk, il-frott jipprovdi lill-ġisem tal-bniedem b'komponenti vitali bħal karboidrati, proteini, xaħmijiet, minerali, vitamini, aċidi amminiċi essenzjali, karotenojdi, fibri tad-dieta u fenoliċi [20]. Tradizzjonalment, kulturi differenti rrappurtaw li l-infużjoni tal-weraq ġiet utilizzata għal diversi mard bħal dijarea, diżinterija bid-demm, anemija, ażma, bronkite, pressjoni għolja, insomnja, rewmatiżmu, indiġestjoni, epatite, tetnu, korriment u emorraġija [21]. Barra minn hekk, id-dħaħen tal-weraq tal-ħruq ġew inalati għal sulluzzu u affezzjonijiet tal-griżmejn [18]. Il-qoxra kienet użata bħala dijuretiku u fi dressings antirewmatiċi. Iż-żrieragħ huma magħrufa sew għat-trattament ta 'irjiħat, ażżma, dijarea, u munzelli ta' fsada. Ġew irrappurtati attività antiossidanti, fenoliċi totali għolja (TPC), kontenut totali ta' flavonojdi (TFC), 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) attività ta' tneħħija, u kapaċità ta' inibizzjoni linolejka tal-partijiet tal-pjanti Mangifera indica [ 22].

Cistanche jista 'anti-aging

Dan l-istudju kien iddisinjat biex jinvestiga l-proprjetajiet inibitorji in vitro ta 'kompost ġdid ta' xanthone miksub mill-estratt metanoliku ta '70 fil-mija ta' Mangifera indica L.leaves kontra collagenase, elastase, tyrosinase, u hyaluronidase. Barra minn hekk, proprjetajiet farmakokinetiċi bħall-assorbiment, id-distribuzzjoni, il-metaboliżmu u t-tossiċità (in silico ADMET tbassir) saru bl-użu ta 'SwissADME u r-regola ta' ħamsa ta 'Lipinski biex jevalwaw is-solubilità tal-mediċina, il-permeabilità u l-ħtiġijiet tal-formulazzjoni.

2.Riżultati u Diskussjoni

2.1. L-Eluċidazzjoni tal-Istruttura tal-Kompon Iżolat

Il-kompost inkiseb bħala kristalli sofor (18.29mg). L-analiżi kromatografika żvelat spot ta' lewn oranġjo ċar fuq TLC taħt dawl UV twil (365 nm) f'sistemi ta' solvent DCM:MeOH (7:3) u BAW. Meta l-post ġie ttrattat b'soluzzjoni ta 'klorur ferriku metanoliku ta' 1 fil-mija, sar aħdar skur u ta isfar bi bexx ta 'soluzzjoni ta' ammonja. Id-dejta spettrali lH-NMR, APT, u HMBC tal-kompost huma kkompilati fit-Tabella 1. L-analiżi spettrali lH-NMR (DMSO-dg, temperatura tal-kamra) (Figuri Sl u S2) wriet il-preżenza ta 'żewġ sinjali ta' doublet aromatiċi downfield f'oH 7.57 u 6.79 b'kostanti ta 'akkoppjar ta' 8.24 Hz li jindikaw il-preżenza ta 'żewġ protoni orto-akkoppjati. Barra minn hekk, ir-reġjun aromatiku tal-ispettru H-NMR wera l-preżenza ta 'sinjal singlet f'Su 5.96, li jindika l-preżenza ta' proton wieħed fiċ-ċirku aromatiku. Il-proton anomeriku tal-unità C-glucosyl ġie skopert f'Su 4.60 ppm b'valur kostanti ta 'akkoppjar ta' 7 Hz assenjat għal -anomer. Dan il-mudell ta 'protoni aromatiċi fl-ispettru H-NMR tal-kompost iżolat jixbah l-istruttura xanthone. Barra minn hekk, il-preżenza ta 'proton -anomeriku f'ou 4.60 b'ċaqliq kimiku karatteristiku ta' glukosju f'3.21 sa 4.60 ta 'lH-NMR (reġjun taz-zokkor) indikat li hemm rabta C-glycosidic bejn iz-zokkor u x-xanthone. Kif muri fil-Figura S3, l-ispettru APT tal-kompost żvela l-preżenza ta 'dsatax-il sinjal tal-karbonju, li jirrappreżentaw ix-xanthone u l-istruttura C-glucoside.reviżjonijiet cistanche tubulosaL-esperiment APT identifika tliet gruppi CH (C-8,131.95;C-7,115.10;C-2, 95.35 ppm) fil-frazzjoni xanthone u l-anomeriku C-1' tas-C-glucose f'SH75.13 ppm. Aħna wettaqna esperimenti NMR bidimensjonali (HMBC; Figura S4) biex nikkonfermaw ir-rabta glycosidic tas-C-glucose f'C-4tax-xanthone. Sinjali abbundanti ta' korrelazzjoni ta' medda log 2,3JCH ikkorroboraw is-sinsla tax-xanthone b'qċaċet inkroċjati osservati minn H-1'(6) 4.60) sa C{-4(6c 104.13 ppm) u C-3 (6c 158.95).bijoflavonojdi taċ-ċitruGħall-parti xanthone, ġiet skoperta wkoll korrelazzjoni ta' medda twila ta' 2,3JCH minn H-2(8) sa C-4(6c 104.13 ppm), C-3 (8c 158.95), u C-4b(6c 107.45). Barra minn hekk, kien hemm 2-37-korrelazzjoni fuq medda twila misjuba minn H-8(8)7.57)għall-grupp karbonil C-9( 6c 195.14),C-8a(6c 131.22),u C-6 （6c161.87）.Għall-istess ċirku, aJcH jagħmel sinjali minn H-7（6μ 6.79) sa C{{ {39}}a（6c 131.22） ġew osservati. Dawn il-korrelazzjonijiet huma illustrati fl-istruttura tal-kompost fil-Figura 1. HSQC tal-kompost wera korrelazzjonijiet 1JcH bejn kull proton u l-karbonju jinsab tiegħu kif muri fil-Figura S5. L-esperiment H,H COSY (Figura S6) wera korrelazzjoni cross-peak qawwija bejn H-7 （δu 6.79）u H-8（8H7.57）. Barra minn hekk, il-kompost wera quċċata tal-jone pseudomolecular[MH]- f'm/z 421, li tindika formula molekulari ta 'CgHngOrin fil-mod negattiv tal-analiżi ESI-MS (Figura S7). Id-dejta minn 1H-NMR, APT, IH, H COSY, HMBC, u HSQC wasslitna biex nippopolaw li l-kompost jista' jkun 1,3,5,6-tetrahydroxyxanthone-C-4- -D-glucopyranoside. Dan kien ikkonfermat b'paragun mad-dejta NMR rrappurtata ta 'isomangiferin fil-letteratura [23,24].

2.2.In Silico Pharmacokinetics Tbassir tal-Kompost Iżolat

Is-server onlajn ta' SwissADME intuża biex jevalwa l-abbiltà tad-droga tal-kompost iżolat billi ġie stmat ir-regola ta' ħamsa ta' Lipinski (RO5) għax-xebh tad-droga[25]. Lipinski irrapporta li 90 fil-mija tal-mediċini attivi oralment li laħqu l-istatus kliniku tal-fażi II għandhom MWT Inqas minn jew ugwali għal 500,logp Inqas minn jew ugwali għal 5, donaturi ta' bonds H Inqas minn jew ugwali għal 5, u aċċettaturi ta' bonds H Inqas minn jew ugwali għal 10[26].SwissADME tbassar sitt parametri fiżikokimiċi addizzjonali assoċjati max-xebh tad-droga bħal lipofiliċità [27], daqs, polarità [28], solubilità [29,30], flessibilità, u saturazzjoni [31,32] kif muri fil-Figura 2 u t-Tabella 2.cistanche UKIl-plott SWISSADME tax-xebh tad-droga tal-kompost iżolat wera li l-biċċa l-kbira tal-proprjetajiet fiżikokimiċi tal-kompost huma fil-medda mixtieqa [33] ħlief għan-numru ta 'aċċettaturi ta' bonds H, donaturi ta 'bonds H, u polarità tal-kompost peress li il-valur PSA huwa 201.28 A2 (medda mixtieqa (bejn 20 u 130 A2)[28]. Din il-polarità għolja tista' tiġi attribwita għall-preżenza ta' porzjon taz-zokkor. Il-kompost iżolat wera log S(Ali) ta' solubilità fl-ilma topoloġika mbassra promettenti [29 ] u Log S (ESOL)[30]. Dan se jiffaċilita l-formulazzjoni futura ta’ dan il-kompost. Il-farmakokinetika mbassra wriet li l-kompost għandu assorbiment baxx imbassar GIT mingħajr ebda permeazzjoni għal BBB skont il-mudell tal-bajd mgħolli Dania [34] adottat minn is-server onlajn SwissADME[33].cistanche wirkungBarra minn hekk, il-kompost ma wera l-ebda effett ta 'inibitur fuq ħames iżoformi ta' ċitokromu P450 (1A2,2C19,2C9,2D6, u 3A4) [35], li jindika possibbiltà baxxa ta 'interazzjonijiet mediċina-droga. Il-permeazzjoni tal-ġilda mbassra hija kkalkulata minn mudell ta 'rigressjoni lineari multipla li jikkorrelata d-daqs molekulari u l-lipofiliċità mal-permeabilità tal-ġilda [36]. Iktar ma jkun negattiv il-log Kp (b'Kp f'ċm/s), inqas tkun il-molekula permeanti tal-ġilda [33,36].estratt ta' cistanche tubulosaIl-log Kp tal-permeazzjoni tal-ġilda mbassar f'ċm/s huwa -9.14 ċm/s.

2.3.Valutazzjoni tal-Proprjetajiet Kontra x-Xjuħija tal-Ġilda

2.3.1.Determinazzjoni ta 'Attivitajiet ta' Anti-Collagenase u Anti-Elastase

Il-kollaġen u l-elastin huma proteini strutturali vitali tal-epidermide li jsostnu l-elastiċità, it-ton kapillari, u s-saħħa tal-shkin flimkien mal-aċidu hyaluronic [39]. Matul il-proċess ta 'tixjiħ, stress ossidattiv, u espożizzjoni eċċessiva għad-dawl UV iwasslu għall-attivazzjoni ta' enzimi idrolizzanti bħal elastase, collagenase, u hyaluronidase, b'hekk jintilfu s-saħħa u l-flessibilità tal-ġilda, u t-tikmix jidher[40] . L-inibizzjoni ta 'attivitajiet ta' collagenase u elastase hija waħda mill-istrateġiji effettivi biex tipproteġi l-ġilda minn manifestazzjonijiet ta 'tixjiħ tal-ġilda [41]. Kif iċċarat fil-Figura 3A, il-kompost wera proprjetà anti-collagenase moderata b'valur ICso ta '419.10 ug/mL, meta mqabbel ma' phenanthroline （IC50=182.80ug/mL） bħala standard. Rigward l-effett inibitorju elastase (Figura 3B), wera effett notevoli b'valur ICso ta '1.06 ug/mL, filwaqt li l-kontroll pożittiv, N-methoxysuccinyl-Ala-Pro-Val-chloromethyl ketone, eżerċita valur ICso ta' 0.63 ug /mL.Skond dawn ir-riżultati, studju minn qabel irrapporta li l-estratt tal-weraq tal-metanol tal-mango kien 10-inibitur ta 'elastasi qawwi mill-tocopherol standard attribwit għall-proprjetà ta' inibizzjoni mhux kompetittiva ta 'mangiferin[42]. Barra minn hekk, rapporti preċedenti wrew l-attività anti-elastase ta 'komposti polifenoliċi minħabba l-preżenza ta' gruppi idrofiliċi bħal hydroxyl jew carboxyl li jistgħu jinfluwenzaw b'mod pożittiv l-inibizzjoni kompetittiva ta 'enzimi [43].

2.3.2.Determinazzjoni ta 'Attivitajiet ta' Anti-Hyaluronidase u Antityrosinase

L-aċidu hyaluronic huwa l-glycosaminoglycan prevalenti tal-ġilda li jippreserva l-kontenut ta’ umdità tiegħu[44]. Huwa idrolizzat enżimatikament mill-hyaluronidase li jirriżulta fi tqassim tal-integrità tal-istruttura tal-ġilda u t-tfixkil tal-permeabilità tat-tessuti [45]. Is-soppressjoni tal-hyaluronidase iżżomm l-integrità tal-ġilda, ittardja l-progressjoni tat-tixjiħ tal-ġilda, u żżomm l-idratazzjoni tal-ġilda [13]. Studji preċedenti infurmaw li l-inibituri naturali tal-hyaluronidase jistgħu jservu tajjeb bħala aġenti kontra t-tixjiħ għall-iżvilupp ta' prodotti relatati mas-saħħa tal-ġilda[46]. Kif muri fil-Figura 4A, il-kompost iżolat jista' jnaqqas b'mod notevoli l-attività tal-hyaluronidase b'valur ICso ta' 1.65 ug/mL, meta mqabbel ma' 6-O-palmitoyl L-ascorbic acid bħala kontroll pożittiv (2.55 ug/mL).

Fost il-manifestazzjonijiet kliniċi tas-senescence tal-ġilda, l-iperpigmentazzjoni tal-ġilda tista 'tiġi aċċelerata mill-enzima tyrosinase fil-preżenza ta' speċi ta 'ossiġnu reattiv (ROS)[46]. Tyrosinase, glikoproteina li fiha r-ram, għandha funzjoni kruċjali fis-sintesi tal-melanin permezz ta' idrossilazzjoni ta' L-tyrosine għal 3,4-dihydroxyphenylalanine (DOPA), segwita minn ossidazzjoni ta' DOPA għal DOPAquinone [47]. Għalhekk, is-soppressjoni tal-attività tyrosinase potenzjalment tnaqqas l-iperpigmentazzjoni tal-ġilda [48]. Minn din il-fehma, il-kompost inibit b'mod potenzjali tyrosinase b'valur ICso ta' 0.48 ug/mL, meta mqabbel mal-aċidu kojic bħala kontroll pożittiv (0.82 ug/mL) kif muri f' Figura 4B. Studju preċedenti dwar l-estratt taż-żerriegħa ta 'Mangifera indica wera riżultati anti-tyrosinase u anti-hyaluronidase pendenti korrelatati mal-kontenut polifenoliku [47]. Fil-livell molekulari, kemm tyrosine kif ukoll DOPA fihom gruppi hydroxyl li jesprimu bħala donaturi ta 'protoni essenzjali għall-attivazzjoni tat-tyrosinase [49]. Bl-istess mod, il-kompost iżomm erba' partijiet idroksil fl-iskeletru tiegħu li jistgħu jġibu ruħhom bħala inibituri kompetittivi billi jirreaġixxu bħala sottostrati għal tyrosinase.

3.Materjal u Metodi

3.1.Materjal tal-Pjanti

Il-weraq friski tal-weraq Mangifera indica L. inkisbu fl-istadju tal-frott minn ġnien privat fiż-żona ta 'Abo-Zabal (N 30 grad 1743.5336"E 3128.254), il-gvern ta' Qualiobya, l-Eġittu, fl-20 ta' Lulju 2021. Ġew awtentikati minn ġentilment Is-Sinjura Treize Labib, l-ispeċjalista tat-tassonomija fil-Ġnien Botaniku El-Orman, Giza, l-Eġittu. Kampjuni ta' vawċers bil-kodiċi PHG-P-MI-362 tqiegħdu fil-gallarija tad-Dipartiment tal-Farmakognożija, Fakultà tal-Farmaċija, Università ta' Ain Shams.

3.2.Estrazzjoni u Iżolament Kromatografiku

Il-weraq imnixxef bl-arja ta' Mangifera indica L. (1.56 kg) ġew imnixxfa f'70 fil-mija metanol (27L) għal 5 ijiem, imbagħad iffiltrati. Il-filtrat kien totalment evaporat fil-vakwu f'47 grad sa nixfa biex jipproduċi fdal imnixxef (90.36 g; 5.79 fil-mija w/w); ir-rendiment tal-estrazzjoni ġie kkalkulat bħala l-ekwazzjoni li ġejja: [piż totali tal-estratt imnixxef/piż totali tal-pjanta tar-resh] × 100. Imbagħad, l-estratt miksub ġie applikat fuq il-frazzjonament Diaion HP-20. L-elużjoni tal-gradjent (ilma/metanol) ġiet utilizzata. Ħames frazzjonijiet ewlenin inkisbu: 100 fil-mija ilma, 25 fil-mija metanol, 50 fil-mija metanol, 75 fil-mija metanol, u 100 fil-mija metanol. Il-frazzjoni li tinħall fil-metanol ta' 50 fil-mija (26.38 g) ġiet esposta għal poliamide u eluwit inizjalment b'100 fil-mija ilma, imbagħad gradjent eluwit bl-ilma/metanol (minn 100:0 sa 0:100,w/o) biex jinkisbu sitt subfrazzjonijiet: 100 fil-mija ilma,20 fil-mija,40 fil-mija,60 fil-mija,80 fil-mija u 100 fil-mija metanol. Is-subfrazzjoni ta' 40 fil-mija li tinħall fil-metanol (2.36 g) ġiet applikata fuq Sephadex LH-20 bl-użu ta' MeOH (eluzzjoni isokratika)Frazzjonijiet simili ġew magħquda u evaporati biex jinkisbu erba' subfrazzjonijiet prinċipali (A1-A4), Is-subfrazzjoni A3(0.86 g) ġie applikat fuq pjanċi preparattivi tal-kromatografija ta' saff irqiq (TLC) bl-użu ta' aċidu butanolaċetiku: ilma (BAW;4:1:5) bħala żviluppatur tal-fażi mobbli biex jiġi iżolat il-kompost bħala sustanza ħafifa. trab amorfu isfar.

3.3.Spettrometru tar-Reżonanza Manjetika Nukleari (NMR).

Intuża spettrometru Bruker Ascend 400/R (Burker Avance Ⅲ, Fallanden, l-Isvizzera) fiċ-Ċentru għall-iskoperta, ir-Riċerka u l-Iżvilupp tad-Droga, il-Fakultà tal-Farmaċija, l-Università ta 'Ain Shams. 3.4.Spettrometrija tal-Massa

Spettrometru tal-massa Finnigan LCQ-DECA (San Jose, CA, USA) imqabbad ma 'ditekter PDA intuża għall-analiżi spettrometrika tal-massa. Il-kampjuni ġew maħlula f'HzO:MeOH bħala taħlita u injettati direttament fis-sistema HPLC/ESI-MS. Kemm il-modi ta 'jonizzazzjoni tal-ESI negattivi kif ukoll dawk pożittivi ġew applikati taħt il-kundizzjonijiet li ġejjin: gass tat-tnixxif u tan-nebulizzar, N2; temperatura kapillari, 250 grad; vultaġġ sprej,4.48 kV; vultaġġ kapillari, 39.6 V; vultaġġ tal-lenti tat-tubu,10.00 V; u l-modalità tal-iskannjar sħiħ fil-medda tal-massa m/z 100-2000. L-analiżi ESI-MS għall-kompost iżolat twettqet fuq spettrometru tal-massa Waters Xevo TQD b'modalità UPLC Acquity (Milford, CT, USA) fiċ-Ċentru għall-Iskoperta tad-Droga, Riċerka u Żvilupp, Fakultà tal-Farmaċija, Università ta 'Ain Shams.

3.5.Tbassir Farmakokinetiku In-Silico

Ir-regola ta 'Lipinski ta' ħames, parametri fiżikokimiċi bħal lipofiliċità, solubilità, u proprjetajiet farmakokinetiċi bħala assorbiment GIT, distribuzzjoni, metaboliżmu, u perme-azzjoni tal-ġilda tal-kompost iżolat twettqu bl-użu tas-server onlajn SwissADME [36]. 3.6. Valutazzjoni tal-Proprjetajiet Kontra x-Xjuħija tal-Ġilda

3.6.1.Determinazzjoni tal-Attività Anti-Collagenase

Il-kapaċità inibitorja tal-kompost iżolat kontra l-attività tal-collagenase ġiet evalwata bl-użu ta 'kit ta' screening ta 'inibituri tal-collagenase fluworimetriku (BioVision, katalgu Nru. # K833-100) skond il-metodu deskritt qabel [50]. Il-kontroll ta' referenza kien (1,10)-phenanthroline. Il-kompost ittestjat u l-kontroll ta 'referenza ġew ippreparati f'konċentrazzjonijiet ta' 1,10,100, u 1000 ug/mL għall-analiżi. Il-kompost ittestjat ġie ppreparat fi 96-pjanċa tal-bir b'qiegħ ċatt. L-ewwel, is-sottostrat tal-collagenase ġie maħlul fil-buffer tal-assaġġ tal-collagenase (CAB). Il-kampjun għall-analiżi kien ippreparat billi tħallat il-kompost kemm mal-collagenase kif ukoll mal-CAB. Il-preparazzjoni ta 'kampjuni ta' kontroll ta 'inibitur saret billi tħallat l-inibitur((1,10)-phenanthroline (80 mM)) ma' l-enzima collagenase dilwita u buffer CAB. Il-kontroll tal-enżimi ġie ppreparat billi tħallat il-collagenase dilwit ma' CAB. Il-buffer CAB intuża bħala l-kontroll fl-isfond. Il-kampjuni kollha ġew inkubati f'temperatura tal-kamra għal 15-il minuta. Matul dan iż-żmien, it-taħlita ta 'reazzjoni ġiet ippreparata billi tħallat il-collagenase ma' CAB. Fil-pass li ġej, it-taħlita ta 'reazzjoni tħallat sewwa mal-kampjuni ppreparati. Il-fluworexxenza kienet imkejla immedjatament f'tul ta 'mewġ ta' eċċitazzjoni ta '490 nm u tul ta' mewġ ta 'emissjoni 520 nm bl-użu ta' qarrej tal-mikroplate (FilterMax F5, Thermo Fisher). Il-kejl sar fil-mod kinetiku f'37 grad għal 60 min. Il-kampjuni ġew ippreparati f'żewġ kopji u l-effett inibitorju tal-collagenase tal-kompost ittestjat ġie kkalkulat bl-applikazzjoni tal-ekwazzjoni li ġejja:

3.6.2.Determinazzjoni tal-Attività Kontra l-Elastase

L-attività anti-elastase tal-kompost ġiet investigata bl-użu tal-EnzChek§Elastase Assay Kit (E-12056) skont il-metodu rrappurtat qabel [51]. Il-kompost ittestjat u l-kontroll ta' referenza ġew ippreparati f'konċentrazzjonijiet ta' 0.1,10, u 100 ug/mL għall-analiżi. Il-kompost kien ippreparat fi 96-pjanċi ta' bir b'qiegħ ċar għall-assaġġ fluworometriku. Fil-qosor, soluzzjonijiet ta 'enżimi elastase, sottostrat ta' elastase, u kontroll ta 'inibitur ġew ippreparati kif rakkomandat. Soluzzjoni dilwita elastase mbagħad ġiet miżjuda mal-bjar. Il-kompost ittestjat, il-kontroll tal-inibitur, u l-kontroll tal-enżimi ġew miżjuda mal-bjar sussegwenti. Il-kampjuni tħalltu fuq shaker u mbagħad inkubati għal 5 minuti f'37 grad. Assay buffer tħallat mas-sottostrat biex tipprepara t-taħlita ta 'reazzjoni fluworometrika, li mbagħad ġiet miżjuda u mħallta sewwa ma' kull kampjun. Il-fluworexxenza tkejjel immedjatament f'tul ta 'mewġ ta' eċċitazzjoni ta '400 nm u tul ta' mewġ ta 'emissjoni 505 nm bl-użu ta' qarrej tal-mikroplate (FilterMax F5, Thermo Fisher, Waltham, MA, USA). Il-kejl sar f'mod kinetiku f'37 grad għal 30min protett mid-dawl. Il-kampjuni ttestjati kollha ġew ippreparati u ttestjati f'żewġ kopji u l-effett inibitorju tal-elastasi tal-kompost ittestjat ġie kkalkulat bl-applikazzjoni tal-ekwazzjoni li ġejja:

fejn:

△RFU=bidla fl-unitajiet relattivi tal-fluworexxenza EC=kontroll tal-enżimi

3.6.3.Determinazzjoni tal-Attività Anti-Tyrosinase

L-attivitajiet inibitorji taż-żjut ġew ittestjati kontra collagenase bl-użu Abcam@Tyrosinase Inhibitor Screening Colorimetric Assay Kit (katalgu # ab204715). L-assaġġ sar skont il-manwal ipprovdut. L-inibitur standard tat-tyrosinase kien kojic acid. Il-kompost ittestjat ġie ppreparat f'konċentrazzjonijiet li jvarjaw minn 0.1 sa 10 ug/mL għall-analiżi. Madwar 2 uL ta 'tyrosinase ipprovdut tħalltu ma' 48 uL ta 'buffer tal-assaġġ ta' tyrosinase. Il-kampjuni ta 'żjut essenzjali jew stand (20 uL) tħalltu mat-taħlita ta' enżimi (50 μL) u inkubati f'25 grad għal 10 min. Imbagħad, 30μL ta 'soluzzjoni ta' substrat ta 'tyrosinase ġiet miżjuda mal-bjar ta' żjut essenzjali u standard. Wara, il-pjanċa tkejjel spettrofotometrikament f'wavelength ta '510 nm għal 30-60 min f'25 grad.

3.6.4.Determinazzjoni tal-Attività Kontra l-Hyaluronidase

L-attività ta 'hyaluronidase ġiet evalwata b'mod spettrofotometriku billi tkejjel l-ammont ta' N-acetylglucosamine iffurmat minn hyaluronate tas-sodju [52]. Il-kompost ittestjat u l-kontroll ta' referenza ġew ippreparati f'konċentrazzjonijiet li jvarjaw minn 0.1 sa 10 ug/mL għall-analiżi. Ħamsin mikrolitru ta' hyaluronidase bovina (7900 unità mL-1,(Sigma, St. Louis, MO, USA) maħlul f'0.1 M acetate buffer （pH{=3}.5) tħallat ma' 100 μL ta' aċetat magħżul. konċentrazzjoni tal-kompost maħlul f'5 fil-mija DMSO u mbagħad inkubat f'banju ta' l-ilma f'37 grad għal 20min.Il-grupp ta 'kontroll ġie ttrattat b'100 μL ta' 5 fil-mija DMSO minflok il-kampjun. Id-densità ottika tat-taħlita ta 'reazzjoni ġiet imkejla f'585 nm bl-ispettrofotometrija.

3.7.Analiżi Statistika

L-esperimenti kollha saru fi tliet kopji. Id-dejta għall-ICso tal-attività in-ibitorja tal-enzima ġiet eżaminata statistikament bl-użu ta' analiżi tal-varjanza f'direzzjoni waħda (ANOVA). Analiżi statistiċi saru bl-użu ta' GraphPad Prism 5.0. 4. Konklużjonijiet u Perspettivi Futuri

Prodotti naturali derivati ​​mill-pjanti huma f'domanda kbira fis-suq globali għall-iżvilupp ta' aġenti ġodda għal disinji kożmeċewtiċi[4]. F'dan l-istudju, kompost ġdid ta 'xanthone, 1.3.5,6-tetrahydroxyxanthone-C-4- -D-glucopyranoside, ġie iżolat mill-estratt tal-weraq ta' M. indica. Ibbażat fuq testijiet inibitorji ta 'enżimi, dan il-kompost jista' possibilment juri proprjetajiet tajbin kontra l-collagenase, anti-elastase, aanti-hyaluronidase, u anti-tyrosinase, u b'hekk jagħti effett attenwanti komprensiv kontra enzimi relatati mat-tixjiħ tal-ġilda. Barra minn hekk, parametru fiżikokimiku in silico u studju ADME jappoġġjaw l-inkorporazzjoni tiegħu f'forom ta 'dożaġġ topiċi peress li juri solubilità milwiema promettenti u penetrazzjoni tal-ġilda mbassra raġonevoli. Għalhekk, dan il-kompost jista 'jiġi applikat bħala aġent bijoattiv multifunzjonali awspiċju għal formuli nutraċewtiċi u kożmeċewtiċi. Madankollu, valutazzjonijiet tossikoloġiċi u kliniċi huma potenzjalment promettenti.

Dan l-artikolu huwa estratt minn Molecules 2022, 27, 2609. https://doi.org/10.3390/molecules27092609 https://www.mdpi.com/journal/molecules