Effetti Ta' Glycosides Totali Ta' Cistanche Deserticola Fuq il-Proliferazzjoni, l-Apoptożi U l-Espressjoni Ta' Proteina ta' Ċelloli HepG2 relatata mal-mogħdija tas-sinjalar Wnt/-Catenin

FENG Duo1,2, WANG Jing2 , JIANG Yong-jun3 , ZHOU Shi-qi1 , DUAN Hao1 ,GUO Yu1 , ZHAO Jian1 , YAN Wen-jie1,*

（1.Laboratorju Ewlenin ta 'Beijing ta' Sustanzi Bijoattivi u Ikel Funzjonali, Kulleġġ tal-Inġinerija Bijokimika, Beijing Union University, Beijing 100023, iċ-Ċina; 2. Istitut tal-Ikel u l-Iżvilupp tan-Nutrizzjoni, Ministeru tal-Agrikoltura u l-Affarijiet Rurali, Beijing 100081, iċ-Ċina; 3. Inner Mongolia Sankou Biotechnology Co., Ltd., Ordos, Inner Mongolia 017000, iċ-Ċina）

Astratt: Biex tesplora l-effett inibitorju ta 'totali Glycosides taCistanche deserticola(TG) fuq ċelluli HepG2 u l-mekkaniżmu tiegħu. F'dan id-dokument, konċentrazzjonijiet differenti (0, 3.5, 10.5, 21, 31.5, 42 ug/mL) ta' TG ġew ittrattati għal 24 siegħa fuq ċelluli tal-kanċer tal-fwied HepG2, u l-vijabbiltà taċ-ċelluli HepG2 ġiet skoperta bl-użu tal-assaġġ CCK8 . Il-metodu ta 'tebgħa doppja Hoechst33342/PI u Annexin V-FITC / PI intużaw biex jiskopru l-apoptosi taċ-ċelluli HepG2. Il-fenomenu tal-migrazzjoni taċ-ċelluli ġie skopert permezz ta 'assaġġ tal-migrazzjoni taċ-ċelluli. Sadanittant, bidliet fil-progressjoni taċ-ċiklu taċ-ċelluli ġew skoperti permezz taċ-ċitometrija tal-fluss. U l-espressjoni ta '-fetoprotein(AFP), -catenin, Disheveled (Dsh), u GSK-3 ġiet skoperta minn western blot. Ir-riżultati wrew li TG jista 'jnaqqas il-proliferazzjoni ta' ċelluli HepG2 b'mod dipendenti fuq il-konċentrazzjoni, b'vijabbiltà taċ-ċelluli ta '31.04 fil-mija biss meta TG kien 42 ug/mL. Barra minn hekk, TG jista 'jagħmel ħsara lill-istruttura taċ-ċelluli u jinduċi apoptożi taċ-ċelluli, u r-rata ta' apoptożi tista 'tkun għolja sa 32.44 fil-mija permezz ta' detection AV/PI. Barra minn hekk, TG jista 'wkoll jippromwovi nekrożi taċ-ċelluli, u jillimita l-migrazzjoni taċ-ċelluli. Kien hemm differenzi sinifikanti bejn il-grupp ittrattat u l-grupp ta 'kontroll. Sadanittant, konċentrazzjoni għolja ta 'TG tista' twaqqaf iċ-ċelloli HepG2 fil-fażi G2/M. Fl-aħħarnett, meta mqabbel mal-grupp ta 'kontroll, l-espressjoni relattiva ta' -catenin u Dsh naqset, filwaqt li GSK-3 żdiedet fil-gruppi ttrattati b'TG. Bħala konklużjoni, TG jista 'jinibixxi t-tkabbir taċ-ċelluli HepG2 billi jaffettwa l-progressjoni taċ-ċiklu taċ-ċelluli, jippromwovi l-apoptożi, u jillimita l-migrazzjoni taċ-ċelluli. Il-mekkaniżmu jista 'jkun permezz tal-mogħdija ta' sinjalazzjoni Wnt/-catenin, li attivat GSK-3 biex jiddegrada -catenin biex tikseb l-inibizzjoni tal-kanċer tal-fwied.

Kliem ewlieni: Cistanche deserticola; glikosidi totali; Ċellula HepG2; kontra l-epatoma; Mogħdija tas-sinjali Wnt/-Catenin

Cistanche deserticola majappartjeni għal sustanza omologa mediċinali u ta 'l-ikel u hija pjanta parassitika tal-ħxejjex perenni ta' l-Orobaceae.Għandu l-effetti ta 'antiossidazzjoni, kontra l-għeja, kontra t-tixjiħ, kontra t-tumur, protezzjoni tal-fwied, regolazzjoni endokrinali, ittejjeb il-kapaċità tal-memorja, u kontra l-osteoporożi. Huwa magħruf bħala "Ġinseng tad-deżert". Wara li kkonfermat li deserticola deserticola saret sustanza omologa mediċinali u tal-ikel fl-2018, ġibdet ħafna attenzjoni. Jista 'mhux biss jilgħab il-valur tal-applikazzjoni klinika tal-mediċina tal-ħxejjex Ċiniża iżda jaffettwa wkoll l-effett tal-intervent nutrittiv tal-ikel.Juri wkoll potenzjal kbir fl-iżvilupp ta' prodotti naturali ġodda kontra l-kanċer tal-fwied [2-3]. Ir-riċerka nutrizzjonali u l-effetti funzjonali tal-ikel deserticola deserticola qed isiru dejjem aktar fil-fond [4].

Cistanche għajxien fid-deżert

F'dawn l-aħħar snin, ġie rrappurtat li Cistanche deserticola għandhakontra t-tumureffett. Ye et al. [5]sabu li l-echinacea estratta mill-melħ ta 'Cistanche deserticola tista' tinibixxi l-proliferazzjoni ta 'ċelluli HepG2 billi tnaqqas l-espressjoni ta' TREM2 u timblokka l-mogħdija tas-sinjali PI3K/AKT; Xi studjużi sabu li phenylethanoid glycosides minn Cistanche deserticola jistgħu jinibixxu l-proliferazzjoni taċ-ċelloli HepG2 [6]; Echinoside għandu ċertu effett inibitorju fuq il-proliferazzjoni taċ-ċelloli tal-kanċer tal-kliewi 786-O [7] u ċ-ċelloli tal-kanċer tal-kolon SW480 [8]; Fi studju ieħor, phenylethanoid glycosides minn Cistanche deserticola intwera li jnaqqsu l-ħsara fil-fwied fil-ġrieden li jġorru tumuri H22, u jtejbu l-funzjoni immuni billi jnaqqsu l-livelli ta 'AFP, u b'hekk jaffettwaw ħażin it-tkabbir tat-tumur [9]. Kemm Cistanche deserticola decoction [10] kif ukoll polysaccharide [11] jistgħu jiġu mgħoddija permezz tal-passaġġ ta 'sinjalazzjoni Wnt/ - Catenin itejjeb is-sintomi kliniċi tal-firien ta' Parkinson u għandu rwol newroprotettiv. Barra minn hekk, studji sabu li l-echinacea tista 'tinibixxi Wnt minn/ - Il-mogħdija tas-sinjalar ta' Catenin għandha rwol kontra l-kanċer tas-sider [12]; Barra minn hekk, jista 'wkoll inaqqas iċ-ċelloli THP-1 fil-lewkimja akuta umana - espressjoni tal-proteina Catenin [13]. Kollox ma' kollox, il-passaġġ tas-sinjalar Wnt/ - Catenin irċeviet attenzjoni konsiderevoli [14]. Huwa rrappurtat li jista 'jiġi osservat f'20 fil-mija - 35 fil-mija tal-każijiet HCC [15] - Attivazzjoni ta' Catenin. Hemm evidenza dejjem akbar li l-passaġġ ta’ sinjalazzjoni Wnt/ - Catenin għandu rwol importanti fl-okkorrenza u l-iżvilupp tal-kanċer tal-fwied [16], iżda jekk il-glikosidi totali ta’ Cistanche deserticola jirregolawx Wnt/ - Hemm ftit rapporti dwar l-effett kontra l-epatoma ta’ il-mogħdija tas-sinjalar Catenin. Il-glikosidi totali ta 'l-estratt ta' Cistanche deserticola, inklużi phenylethanoid glycosides u glycosides oħra [17], ġew studjati f'dan l-esperiment billi studjaw il-proliferazzjoni, l-apoptożi, il-migrazzjoni, u l-livelli ta 'espressjoni ta' proteina relatati taċ-ċelloli HepG2 indotti minn Total Glycosides ta 'Cistanche deserticola (TG) , biex tesplora l-mekkaniżmu ta 'TG li jinibixxi l-kanċer tal-fwied, u biex tispjega l-mekkaniżmu potenzjali ta' TGs kontra l-kanċer tal-fwied, Biex tipprovdi ċerta bażi xjentifika biex tkompli tarrikkixxi l-applikazzjoni klinika ta 'Cistanche deserticola fil-qasam tal-kanċer tal-fwied.

Phenylethanol glycoside huwa l-komponent attiv ewlieni ta 'Cistanche deserticola

1.Materjal u Metodi

1.1 Materjali u Strumenti

Iċ-ċelloli HepG2 (Karċinomi Epatoċellulari tal-Bniedem) inxtraw miċ-Ċentru taċ-Ċelloli tal-Istitut tal-Mediċina Bażika, l-Università Medika tal-Unjoni ta 'Peking, iċ-Ċina.Il-glycosides totali ta 'Trab ta 'l-estratt ta' Cistanche(Frazzjoni tal-massa Akbar minn jew ugwali għal 75 fil-mija , flimkien ma 'echinacoside u poolside, ipprovduti minn Inner Mongolia Sankou Biotechnology Co., Ltd.) ġew maħlula f'medja DMEM għal konċentrazzjonijiet korrispondenti ta' TG għal esperimenti sussegwenti.

Trab ta 'l-estratt ta' Cistanche

Ikklikkja hawn biex tara l-prodotti tal-Fwied tal-Estratt ta' Cistanche

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

Serum bovin fetali nxtara minn Gibco, l-Istati Uniti; Antikorpi (soluzzjoni mħallta penicillin-streptomycin gentamicin), medju DMEM-H, apoptożi taċ-ċelluli u kit ta 'skoperta taċ-ċiklu taċ-ċelluli, Annexin V-FITC/soluzzjoni taż-żebgħa, u soluzzjoni taż-żebgħa apoptożi Hoechst 33342/PI ġew mixtrija minn Genview; Il-0.25 fil-mija trypsin u l-kitt tad-determinazzjoni tal-konċentrazzjoni tal-proteina BCA nxtraw minn Beijing Dingguo Changsheng Biotechnology Co., Ltd; Antikorpi anti - Catenin tal-fenek inxtraw minn ABclonal; Antikorp anti-Dsh tal-fenek (ADAR1) inxtara minn Bios; Antikorpi anti GSK3 tal-fenek u antikorpi anti-AFP tal-fenek inxtraw minn Affinity. Inkubatur taċ-ċelluli tas-CO2 (Innova CO-170), ċentrifuga tad-desktop b'temperatura baxxa b'veloċità għolja (3K15, Sigma, il-Ġermanja), strument multifunzjonali tal-ittikkettjar tal-enżimi (INFINITE M NANO TECAN), mikroskopju fluworexxenti (C-SHG1, Nikon, Ġappun) ), ċitometrija tal-fluss (FACSCALIBUR, BD, USA), apparat ta 'elettroforeżi (EN027015, BIO-RAD, USA), apparat ta' trasferiment tal-membrana (043BR57802, BIO-RAD, USA).

1.2 Metodu sperimentali

1.2.1 Passaġġ taċ-ċelluli

Iċ-ċelluli HepG2 ġew ikkultivati ​​f'medju komplet DMEM li kien fih 10 fil-mija serum bovin tal-fetu u 1 fil-mija ta' antikorpi tripli (100 U/mL penicillin, 100 mg/mL streptomycin, u gentamicin) f'inkubatur taċ-ċelluli ta' 5 fil-mija CO2 f'37. grad . Wara li ċ-ċelloli kibru għal konfluwenza ta' 80 fil-mija sa 90 fil-mija, ġew diġeriti b'0.25 fil-mija trypsin (- EDTA) u subkultivati ​​fi proporzjon ta' 1:2 sa 4. Wara 2-3 jiem ta' tkabbir taċ-ċelluli, tkabbir logaritmiku ċelluli tal-fażi ttieħdu għal subkultura jew esperimenti sussegwenti

1.2.2 Effett tat-TG fuq il-morfoloġija taċ-ċelloli HepG2

Iċ-ċelloli HepG2 tal-fażi tat-tkabbir logaritmiku ttieħdu u ġew mlaqqma fi 24-pjanċa bir-bir b'konċentrazzjoni taċ-ċelluli ta '5 għal kull bir × 104 biċċiet/mL, wara li ċ-ċelloli jaderixxu mal-ħajt, żid TG sal-konċentrazzjoni finali ta '0, 3.5, 10.5, 21, 31.5, 42 μ G/mL, 0.5 mL kull bir, ikkultivat għal 24 siegħa, u osservat il-morfoloġija taċ-ċelluli ta' kull grupp taħt mikroskopju tad-dawl.

1.2.3 Effett tat-TG fuq il-proliferazzjoni taċ-ċelloli HepG2

Ħu ċelluli HepG2 fl-istadju tat-tkabbir logaritmiku u aġġusta l-konċentrazzjoni taċ-ċelluli għal 1 × 104 biċċa/bir, imlaqqma fi pjanċi ta '96 bir, u żżid 100 biċċa għal kull bir μ 50. Inkuba f'inkubatur taċ-ċelluli. Wara li ċ-ċelloli jaderixxu mal-ħajt, huma ttrattati b'mediċini skond 1.2.2 hawn fuq, u kull grupp għandu sitt reperforazzjonijiet, ikkultivati ​​għal 24 siegħa. Ir-rata ta 'sopravivenza taċ-ċelluli kienet imkejla bl-użu tal-metodu CCK8, u l-valur ta' assorbiment (OD) kien imkejjel f'wavelength ta '450 nm. Ir-rata ta 'sopravivenza taċ-ċelluli u r-rata ta' inibizzjoni taċ-ċelluli ġew ikkalkulati bl-użu tal-formula li ġejja.

Fil-formula, il-grupp vojt fih biss likwidu CCK8, filwaqt li l-grupp ta 'kontroll fih grupp ta' trattament 0 μ G/mL, grupp sperimentali: grupp ta 'trattament 3.5, 10.5, 21, 31.5, 42 μ G/mL.

1.2.4 Effett tat-TG fuq iċ-ċiklu taċ-ċelluli HepG2

Ħu ċelluli tal-fażi ta 'tkabbir logaritmiku u agħfas 5 × A densità taċ-ċelluli ta' 105 ċelluli għal kull bir ġiet imlaqqma fi pjanċa ta 'sitt bir, u sistema ta' 2 mL għal kull bir li kien fih 5 × 105 ċelluli tqiegħdet f'kaxxa tal-kultura u soġġetta għal trattament tad-droga kif deskritt f'1.2.2 hawn fuq. Wara l-kultura, saru operazzjonijiet sussegwenti skont l-istruzzjonijiet tal-kit.

1.2.5 Effett tat-TG fuq il-Migrazzjoni taċ-Ċelloli HepG2:

Agħżel ċelluli tal-fażi tat-tkabbir logaritmiku u poġġihom fuq pjanċa b'sitt reċipjenti. Sistema ta' 2 mL għal kull bir li kien fiha 6 × 105 ċelluli tneħħiet meta l-adeżjoni taċ-ċelluli u l-aggregazzjoni taċ-ċelluli kienu ogħla minn 90 fil-mija. Kondotta trattament tad-droga skond 1.2.2 hawn fuq. F'0 h, agħżel b'mod każwali 5 oqsma tal-vista taħt il-mikroskopju għar-ritratti, poġġihom fl-inkubatur għal aktar kultivazzjoni għal 24 siegħa, ħu ritratti taħt il-mikroskopju ottiku, uża softwer Image J biex tanalizza ż-żona tal-grif taċ-ċelloli, u kkalkula l- rata ta' migrazzjoni skond il-formula li ġejja (2) [18].

1.2.6 Metodu ta' tbajja doppja Hoechst 33342/PI għall-iskoperta tal-apoptożi

Agħżel ċelluli tal-fażi tat-tkabbir logaritmiku u poġġihom fuq {{0}}pjanċa bir-bir, b'sistema ta '0.5 mL li fiha 3 × 104 ċelluli ġew ittrattati b'mediċini skond 1.2.2 hawn fuq, u 1 mL ta' buffer tat-tbajja taċ-ċelluli ġie miżjud, segwit minn 5 μ L żebgħa Hoechst u 5 μ LPI soluzzjoni taż-żebgħa għat-tbajja '. Inkuba fid-dlam f'temperatura ta' 37 grad għal 7-10min, oħroġ 24-pjanċa tat-toqob, xarrabha b'PBS, u ħu ritratti b'mikroskopju fluworexxenti għall-osservazzjoni.

1.2.7 Sejbien ta 'apoptożi taċ-ċelluli HepG2 permezz ta' tbajja doppja ta' Annexin V-FITC/PI

Agħżel ċelluli tal-fażi ta 'tkabbir logaritmiku u poġġihom fuq pjanċa ta' sitt bir, b'sistema ta '2 mL għal kull bir li fih ċelluli 2 × 105 ġew ittrattati b'mediċini skond 1.2.2 hawn fuq, u operazzjonijiet sussegwenti saru skond l-istruzzjonijiet tal-kit, iż-żieda ta '5 μ L Annexin V-FITC u 5 μ L PI tbajja soluzzjoni ġiet inkubata f'4 gradi fid-dlam u mbagħad imqiegħda fuq ċitometrija tal-fluss għall-iskoperta ta' apoptożi.

1.2.8 Effett tat-TG fuq l-espressjoni tal-proteini fiċ-ċelloli HepG2

Agħfas 2 × 106 ċelluli/ċellula ġew ittrattati b'mediċini skond 1.2.2 hawn fuq, bl-użu ta '80 μ L lysate (RIPA: PMSF=100:1) lyses proteins, u mbagħad bl-użu ta' elettroforeżi SDS-PAGE biex tissepara kull kampjun ta 'proteina (50 kampjun għal kull bir μ g) Imla t-trasferiment tal-proteina għall-membrana PVDF f'banju tas-silġ, billi uża 1 × Naddaf it-tejp b'soluzzjoni buffer TBST, issiġilla bil-mod il-mejda li tħawwad BSA f'temperatura tal-kamra għal siegħa, u żid antikorp (AFP, GSK3) fi proporzjon- , - Catenin, Dsh), inkuba f'4 gradi matul il-lejl, u mbagħad inkuba l-membrana PVDF bl-antikorp sekondarju dilwit f'temperatura ambjentali għal 1-2 sigħat. GAPDH jintuża bħala referenza interna. Wara li tiżviluppa u tiffissa l-membrana PVDF, osserva l-bidliet fl-espressjoni tal-proteina fil-mira [6].

1.3 Analiżi tad-dejta

L-analiżi tas-sinifikat ta' fattur wieħed ta' ANONA saret bl-użu ta' softwer statistiku SPSS 25.0 biex jesprimi; Id-dejta sperimentali taċ-ċitometrija tal-fluss ġiet analizzata bl-użu ta 'Flowjo; Uża Graphpad Prism 8.0.2 għat-tpinġija. P<0.05 indicates a statistically significant difference, while P<0.01 indicates a highly significant difference.

2.Riżultati u Analiżi

2.1 Effett tat-TG fuq il-morfoloġija taċ-ċelloli HepG2

figura 1 ċelluli hepg2 trattati b'konċentrazzjonijiet differenti ta' tg għal 24 siegħa (200x)

Matul il-proċess ta 'apoptożi, l-ewwelnett, il-volum tiegħu se jonqos u jiddeforma gradwalment, u mbagħad iċ-ċelloli aderenti se jgħaddu bil-mod minn proċessi bħal tnaqqis, arrotondament, twaqqigħ, u pyknosis tal-kromożomi intraċellulari. Xi nuklei se jgħaddu minn ksur, marġinalizzazzjoni, u l-formazzjoni ta 'vesicles apoptotic. Kif osservat fil-Figura 1, 3.5, u 10.5 μ Meta ċ-ċelloli HepG2 ġew ittrattati b'g/mL TG, il-volum taċ-ċellula naqas gradwalment; U mbagħad osserva viżwalment 21 μ F'g/mL, in-nukleu beda jiċkien u l-volum sar iżgħar; wieħed u tletin punt ħamsa μ F'g/mL, iċ-ċelloli kienu akkumpanjati minn fdalijiet f'wiċċ l-ilma u taċ-ċelluli; tnejn u erbgħin μ F'g/mL, il-membrana taċ-ċellula tinqasam kompletament, iċ-ċelluli jgħaddu minn liżi, isseħħ nekrożi, u l-konfini mhix ċara. Iċ-ċelloli jinsabu fi stat ta’ kollass u mewt imminenti.

2.2 Effett ta 'TG fuq il-proliferazzjoni ta' ċelluli HepG2

Figura 2 Effett ta 'TG fuq il-proliferazzjoni ta' ċelluli HepG2

Nota: * tirrappreżenta l-istess bħal 0 μ Id-differenza kienet sinifikanti f'g/mL (P<0.05), and * * indicates a significant difference (P<0.01).

Kif jidher mill-Figura 2, wara 24 siegħa ta 'trattament b'konċentrazzjonijiet differenti ta' TG, il-proliferazzjoni taċ-ċelloli HepG2 hija ristretta għal gradi differenti. Meta mqabbla mar-rata ta 'sopravivenza taċ-ċelluli fil-grupp ta' kontroll, ir-rata ta 'sopravivenza taċ-ċelluli fil-grupp ta' trattament turi xejra 'l isfel b'konċentrazzjoni dejjem tiżdied, li hija 96.95 fil-mija, 92.59 fil-mija, 92.78 fil-mija, 77.24 fil-mija, 31.04 fil-mija, u l-konċentrazzjoni hija 3.5, 10.5, u 21, rispettivament μ Ma kien hemm l-ebda differenza sinifikanti f'g/mL u t-tnaqqis kien żgħir, filwaqt li 31.5 fil-mija μ G/mL u 42 μ At g/mL, kien hemm differenza sinifikanti (P<0.01), with an IC50 of 37.77 after TG treatment μ g/mL. CCK8 test results indicate that when TG concentration is 21 μ When the concentration is above g/mL, the inhibitory effect on HepG2 cells is better.

2.3 Effett tat-TG fuq iċ-ċiklu taċ-ċelluli HepG2

Figura 3 Effetti ta 'konċentrazzjonijiet differenti ta' TG fuq iċ-ċiklu taċ-ċelluli taċ-ċelloli HepG2

Kif muri fil-Figura 3, wara 24 siegħa ta 'trattament b'konċentrazzjonijiet differenti ta' TG, instab li hekk kif il-konċentrazzjoni żdiedet, il-fażi G0/G1 naqset gradwalment, li tammonta għal 59.9 fil-mija, 56.7 fil-mija, 56 fil-mija, 54 fil-mija, 33.4 fil-mija, u 29.1 fil-mija, rispettivament, bi tnaqqis sinifikanti; Il-proporzjon tal-fażi S kien 14.3 fil-mija, 15.8 fil-mija, 16.8 fil-mija, 18.7 fil-mija, 25.1 fil-mija, u 27.6 fil-mija, rispettivament, bi gradi varji ta 'żieda; 3.5-21 meta mqabbel mal-grupp ta 'kontroll (23.88 fil-mija) μ F'g/mL, il-fażi G2/M għandha ftit bidla, li tammonta għal 25.85 fil-mija, 24.92 fil-mija, u 25.33 fil-mija, rispettivament. Meta TG huwa 31.5 μ G/mL u 42 μ At g/mL, żdied b'mod sinifikanti, 37.89 fil-mija u 39.42 fil-mija, rispettivament. Dan it-test sab li TG f'konċentrazzjonijiet baxxi (3.5-21 μ G/mL), ma jinibixxix id-diviżjoni u l-proliferazzjoni taċ-ċelluli bil-mod ewlieni li jaffettwa ċ-ċiklu taċ-ċelluli, u f'konċentrazzjonijiet għoljin (31.5 μ G/mL u 42 μ G/mL) jistgħu jinduċu l-arrest taċ-ċelluli fil-fażi S u l-fażi G2/M, u b'hekk jinibixxu l-proliferazzjoni taċ-ċelluli. Fl-istess ħin, meta TG huwa 31.5 μ G/mL u 42 μ At g/mL, subG1 żdied ukoll, li huwa konsistenti mar-riċerka minn Sun Qian et al. [19] li d-derivattivi tal-artemisinin jistgħu jżidu l-quċċata subG1 taċ-ċelloli HepG2 f'konċentrazzjonijiet għoljin. Huwa sab ukoll li biż-żieda fil-konċentrazzjoni ta 'artemisinin, il-proporzjon taċ-ċelloli tal-fażi G2/M jiżdied. Ir-riżultati taċ-ċiklu taċ-ċelluli jissuġġerixxu li TG jista 'jippromwovi l-inibizzjoni tal-progressjoni taċ-ċiklu taċ-ċelluli, u b'hekk jinduċi apoptożi taċ-ċelluli.

2.4 Effett tat-TG fuq il-migrazzjoni taċ-ċelluli HepG2

Figura 4 Effetti ta 'konċentrazzjonijiet differenti ta' TG fuq il-migrazzjoni taċ-ċelluli HepG2

Nota: * tirrappreżenta l-istess bħal 0 μ Id-differenza kienet sinifikanti f'g/mL (P<0.05), and * * indicates a significant difference (P<0.01).

Il-metastasi taċ-ċelluli tal-kanċer hija waħda miċ-ċwievet għat-trattament tal-kanċer, u r-rikorrenza tal-kanċer hija wkoll relatata mill-qrib magħha. Sabiex jiġi investigat jekk TG jistax jinibixxi l-migrazzjoni taċ-ċelloli HepG2, intuża metodu scratch biex josserva l-migrazzjoni taċ-ċelluli. Kif muri fil-Figura 4, biż-żieda tal-konċentrazzjoni ta 'TG, il-mobilità ta' 24-siegħa tonqos gradwalment, u l-effett ovvju ta 'inibizzjoni huwa. Il-mobilità hija 14.82 fil-mija, 13.42 fil-mija, 12.66 fil-mija, 10.11 fil-mija, 8.46 fil-mija, 7.24 fil-mija, 21 μ G/mL wrew differenzi sinifikanti (P<0.05), 31.5 μ G/mL and 42 μ G/mL showed a significant difference (P<0.01). The results of this experiment indicate that TG can inhibit the migration of liver cancer cells, thereby limiting the metastasis of cancer to other tissues.

2.5 Metodu ta' tbajja doppja Hoechst 33342/PI għall-iskoperta tal-apoptożi

Figura 5 Effetti ta' konċentrazzjonijiet differenti ta' TG fuq Hoechst 33342/PI fiċ-ċelloli HepG2

Tbajja nukleari twettqet b'Hoechst 33342 biex tiskopri l-kondensazzjoni tal-kromatina [20]. Iċ-ċelloli normali wrew blu baxx, ċelloli apoptotiċi wrew blu għoli / aħmar baxx u ċelloli nekrotiċi wrew blu baxx / aħmar għoli. Kif jidher mill-Figura 5, meta mqabbel mal-grupp ta 'kontroll, fil-grupp ta' trattament TG, ġew osservati konċentrazzjoni ta 'kromatina u frammentazzjoni nukleari. Fl-istess ħin, meta TG kien fi 3. 5-21, ġie osservat li μ Fil-medda ta 'g/mL, il-fluworexxenza blu żdiedet gradwalment, li tissuġġerixxi li TG prinċipalment jinibixxi l-proliferazzjoni taċ-ċelluli permezz ta' apoptożi f'konċentrazzjonijiet baxxi; U 'l fuq minn 21 μ F'g/mL, il-fluworexxenza ħamra tiżdied, li tissuġġerixxi li TG prinċipalment jagħmel ħsara u jeqred l-istruttura taċ-ċellula biex joqtol iċ-ċelloli f'konċentrazzjonijiet ogħla. Ir-riżultati ta 'dan l-esperiment jindikaw li t-trattament b'TG jista' jinduċi apoptożi u nekrożi taċ-ċelloli HepG2.

2.6 Tbajja doppja ta' Annexin V-FITC/PI biex tiskopri l-effett ta' TG fuq l-apoptosi taċ-ċelluli HepG2

Figura 6 Effett ta 'TG fuq tbajja doppja AV / PI taċ-ċelloli HepG2

Nota: * tirrappreżenta l-istess bħal 0 μ Id-differenza kienet sinifikanti f'g/mL (P<0.05), and * * indicates a significant difference (P<0.01).

Biex niddeterminaw aktar l-effett li jinduċi l-apoptożi ta 'TG fuq ċelluli HepG2, użajna l-metodu ta' tbajja doppja ta 'Annexin V-FITC/PI biex tebgħa ċelluli HepG2. Kif muri fil-Figura 6, biż-żieda tal-konċentrazzjoni, ir-rata tal-apoptożi turi xejra 'l fuq, 0, 3.5, 21, 41 μ Ir-rati apoptotiċi ta' g/mL kienu 5.63 fil-mija, 7.65 fil-mija, 10.93 fil-mija, u 32.44 fil-mija, rispettivament, b'mod dipendenti mid-doża. Ir-riżultati wrew li TG jista 'jikkaġuna apoptożi billi jeqred l-integrità tal-membrana taċ-ċelloli HepG2. Dan ir-riżultat huwa konsistenti mar-riżultati tat-tbajja AV/PI taċ-ċelloli HepG2 diskussi minn Qi Xinxin et al. [6].

2.7 Effett tat-TG fuq l-espressjoni tal-proteini fiċ-ċelloli HepG2

Figura 7 Espressjoni tal-proteina fiċ-ċelloli HepG2 ittrattati b'konċentrazzjonijiet differenti ta 'TG

Nota: * tirrappreżenta l-istess bħal 0 μ Id-differenza kienet sinifikanti f'g/mL (P<0.05), and * * indicates a significant difference (P<0.01).

Alpha-fetoprotein (AFP) tintuża bħala markatur tas-serum għad-dijanjosi u l-ittestjar tal-effikaċja tal-kanċer primarju tal-fwied [21]. Kif jidher mill-Figura 7, meta mqabbel mal-grupp ta 'kontroll, il-livell ta' espressjoni ta 'AFP fil-grupp ta' trattament naqas, li jissuġġerixxi li TG jista 'jinibixxi l-okkorrenza ta' kanċer tal-fwied sa ċertu punt, iżda l-probabbiltà ta 'rivers il-kanċer tal-fwied hija żgħira ħafna . Barra minn hekk, Dsh - Il-livell ta 'Catenin naqas b'mod lineari maż-żieda tal-konċentrazzjoni tad-droga; GSK-3 Żieda gradwalment, iżda mhux b'mod dipendenti mid-doża. Għalhekk, huwa spekulat li TG jista 'jirregola Dsh - Catenin u GSK-3 Espressjoni relattiva, permezz tal-passaġġ ta' sinjalazzjoni klassiku Wnt/ - Catenin biex jinduċi apoptożi fiċ-ċelloli HepG2.

3 .Diskussjoni u Konklużjoni

Il-kanċer tal-fwied huwa wieħed mill-aktar tumuri malinni komuni fiċ-Ċina u jikklassifika wkoll fost l-aqwa tliet mardiet b'mortalità[22]. Il-metodi ewlenin ta' trattament għall-kanċer tal-fwied jinkludu risezzjoni kirurġika, trapjant tal-fwied, kimoradjoterapija, u immunoterapija [23-25]. Huwa rrappurtat li fl-2016, ir-rata ta 'inċidenza ta' kanċer tal-fwied fiċ-Ċina kienet 9.57 fil-mija, u r-rata ta 'mortalità kienet għolja daqs 13.92 fil-mija [26]. "Minħabba s-sintomi mhux speċifiċi tal-kanċer tal-fwied bikri, ladarba jseħħu s-sintomi, huma l-aktar fl-istadji tan-nofs u tard. Għalhekk, in-nies huma aktar attivi fl-użu tal-mediċina tradizzjonali Ċiniża biex jikkuraw il-kanċer tal-fwied [27]." In-nies jemmnu li l-komposti naturali għandhom l-inqas tossiċità molekulari u wrew li huma ta 'benefiċċju għat-trattament tal-kanċer tal-fwied, u għalhekk qed jeżaminaw b'mod attiv komposti naturali ġodda għall-kanċer kontra l-fwied.

Il-glikosidi totali ta 'Cistanche deserticola jistgħu jinibixxu ċ-ċelloli tal-kanċer tal-fwied fl-istadju bikri tal-kanċer tal-fwied

F'dawn l-aħħar snin, l-effetti multipli ta 'Cistanche deserticolaġibdu ħafna attenzjoni u gradwalment saru wieħed mill-hot spots fl-iżvilupp ta 'ikel tajjeb għas-saħħa u riċerka dwar id-droga. L-esperimenti tal-morfoloġija taċ-ċelluli u CCK-8 ikkonfermaw li ċerta konċentrazzjoni ta 'TG tista' teqred il-morfoloġija taċ-ċelluli u tinibixxi t-tkabbir u l-proliferazzjoni taċ-ċelluli HepG2, u l-konċentrazzjoni hija fi proporzjon dirett mar-rata ta 'inibizzjoni taċ-ċelluli.

Iċ-ċiklu taċ-ċelluli jirreferi għall-proċess kollu li ċellula tgħaddi mit-tlestija ta 'mitosi waħda sat-tmiem tad-diviżjoni li jmiss. Huwa maqsum f'żewġ stadji: interfażi u diviżjoni. Iċ-ċitometrija tal-fluss tuża żebgħa fluworexxenti biex tiddistingwi l-fażi G0/G1, il-fażi S, u l-fażi G2/M. Permezz tas-sejbien taċ-ċiklu taċ-ċelluli, jinstab li wara t-trattament b'konċentrazzjonijiet differenti ta 'TG, jinstab li f'konċentrazzjonijiet għoljin ta' TG (31.5 μ G/mL u 42 μ G/mL) jistgħu jimblokkaw iċ-ċelloli milli jkunu fil-fażi G2/M u jaffettwa l-attività taċ-ċelloli HepG2, li jirriżulta f'ċitotossiċità, u b'hekk jinibixxi l-proliferazzjoni taċ-ċelluli. Matul il-progressjoni tal-kanċer, iċ-ċelluli tal-kanċer minn tumuri primarji jinvadu t-tessuti normali li jmissu magħhom, jagħmlu metastasi f'siti imbiegħda, u jiffurmaw kolonji ġodda. Huwa stmat li total ta '90 fil-mija tal-mortalità relatata mal-kanċer hija dovuta għal metastasi [28]. Il-mogħdija ta 'sinjalazzjoni Wnt hija involuta fil-proċess ta' trasformazzjoni ta 'ċelluli epiteljali għal mesenkimali u trasformazzjoni ta' ċelluli mesenkimali għal epiteljali biex tippromwovi metastasi tal-kanċer. Fil-karċinoma epatoċellulari (HCC), livelli għoljin ta '-Catenin huma assoċjati ma' metastasi mtejba u pronjosi ħażina [29]. F'dan l-istudju, instab li r-rata ta 'migrazzjoni ta' ċelluli HepG2 ittrattati b'TG għal 24 siegħa naqset gradwalment b'żieda fil-konċentrazzjoni, b'mod dipendenti fuq il-konċentrazzjoni.Dan jindika li TG jista 'jikkontrolla l-migrazzjoni taċ-ċelloli tal-kanċer u jipprevjeni t-tixrid ulterjuri tal-kanċer, possibbilment permezz tat-tnaqqis tal-mogħdija tas-sinjalar Wnt - Espressjoni ta' Catenin.B'mod ġenerali, in-nuklei affettwati jidhru iżgħar; Xi konċentrati jew aggregati tal-kromatina fil-periferija, filwaqt li oħrajn għandhom karatteristiċi tipiċi bħall-frammentazzjoni tal-kromatina nukleari u l-formazzjoni ta' korpi apoptotiċi [30-31]. Hoechst 33342 huwa żebgħa fluworexxenti blu li jista 'jippenetra l-membrana taċ-ċellula u għandu tossiċità baxxa għaċ-ċelloli. Xi studji sabu li l-karatteristiċi morfoloġiċi taċ-ċelloli apoptotiċi, inklużi l-koagulazzjoni nukleari u l-frammentazzjoni, ġew osservati f'ċelloli HepG2 imtebba b'Hoechst 33342 [32]. F'dan l-esperiment, instab li wara 24 siegħa ta 'trattament TG, il-proporzjon ta' ċelloli b'koagulazzjoni tal-kromatina u frammenti nukleari fluworexxenti żdied b'mod dipendenti fuq il-konċentrazzjoni, li huwa konsistenti mar-riżultati tal-istudju minn Yang et al. [33] fuq l-apoptosi indotta minn gingerol taċ-ċelloli HepG2. Bl-użu tal-metodu ta' tbajja doppja ta' Annexin V-FITC/PI biex jinstabu ċelluli HepG2 ittrattati b'TG għal 24 siegħa, instab liir-rata ta 'apoptosi taċ-ċelloli żdiedet gradwalment maż-żieda tal-konċentrazzjoni.

Biextal glycosides ta Cistanche deserticol

Dsh, - Catenin u GSK-3 Huwa Wnt tipiku/ - Disheveled (Dvl/Dsh) huwa regolatur importanti fil-mogħdija ta' sinjalazzjoni ta' Catenin, li hija proteina ewlenija fil-mogħdija ta' sinjalazzjoni Wnt u tista' tittrasmetti sinjali Wnt għal downstream effetturi [34]. Fil-mogħdija klassika tas-sinjalar Wnt, Dsh huwa msejjaħ għall-membrana taċ-ċellula mir-riċettur Frizzled, li jaġixxi bħala proto-oncogen u huwa assoċjat mal-fattur inibitorju tal-assi somatiku (Axin), il-ġene adenomatous polyposis coli (APC), u GSK. -3 Irbit biex jifforma kumpless ta' degradazzjoni li jinibixxi GSK-3 iva - Id-degradazzjoni tal-fosforilazzjoni ta' Catenin tikkawża - Catenin jidħol fin-nukleu u jiffunzjona [34-36]. - Catenin huwa prinċipalment espress fil-membrana taċ-ċelluli ta 'ċelluli normali u huwa relatat ma' l-adeżjoni taċ-ċelluli. Jipparteċipa wkoll fit-trażmissjoni ta 'informazzjoni ta' mogħdijiet ta 'sinjalazzjoni Wnt, li jirregola l-proliferazzjoni u d-divrenzjar taċ-ċelluli. Meta l-mogħdija tas-sinjalar Wnt tkun attivata b'mod anormali, - Ir-ridistribuzzjoni ta' Catenin tista' tkun waħda mir-raġunijiet għall-okkorrenza tat-tumur [37]. Allegatament, jista 'jiġi osservat f'20 fil-mija - 35 fil-mija tal-każijiet HCC [15] - Attivazzjoni ta' Catenin. Fl-istess ħin, huwa wkoll possibbli li jrażżan Wnt permezz/ - Il-passaġġ ta 'sinjalazzjoni ta' Catenin jattiva l-awtofaġija biex jinibixxi l-proliferazzjoni taċ-ċelloli HepG2 [38]. Dan l-istudju sab li wara t-trattament TG, ċelluli HepG2, Dsh - Il-livell ta 'Catenin naqas b'mod lineari maż-żieda tal-konċentrazzjoni tad-droga; GSK-3 Żieda gradwalment, iżda mhux b'mod dipendenti mid-doża. Għalhekk, jista 'jiġi dedott li TG jgħaddi passaġġ ta' sinjalazzjoni Wnt/ - Catenin biex jinduċi apoptożi fiċ-ċelloli HepG2.

Il-bijomarkaturi l-aktar użati tal-kanċer primarju tal-fwied madwar id-dinja huma - Alpha-fetoprotein (AFP) [39]. L-AFP għandu rwol importanti fil-monitoraġġ bikri, il-klassifikazzjoni patoloġika, l-għażla tat-trattament, u l-pronjosi ta 'pazjenti b'kanċer tal-fwied primarju 9. Irrispettivament mill-metodu ta 'trattament, meta l-livell AFP ikun ogħla minn 400 ng/mL, dan iwassal għal sopravivenza fqira [40]. Billi tiskopri l-livell ta' espressjoni tal-proteina AFP f'ċelloli ttrattati b'TG,instab li TG jista 'effettivament inaqqas l-espressjoni ta' AFP, li jindika li TG jista 'jkollu rwol fl-inibizzjoni taċ-ċelloli tal-kanċer tal-fwied fl-istadju bikri tal-kanċer tal-fwied.

Te Cistanche

Fil-qosor,glycosides totali ta 'Cistanche deserticola jinibixxu l-proliferazzjoni u t-tkabbir ta' ċelluli HepG2 billi jinfluwenzaw il-progressjoni taċ-ċiklu taċ-ċelluli, jeqirdu l-istruttura taċ-ċelluli, jippromwovu l-apoptożi, u jillimitaw il-migrazzjoni taċ-ċelluli.Il-mekkaniżmu ta 'azzjoni jista' jkun permezz tal-passaġġ tas-sinjal Wnt/ - Catenin, li jattiva GSK-3 Degradazzjoni - Catenin jista 'jinibixxi l-kanċer tal-fwied, iżda hija meħtieġa aktar riċerka. Fil-futur, esperti u studjużi jistgħu jesploraw fil-fond l-applikazzjoni ta 'Cistanche deserticola f'Wnt/ - Il-molekuli tal-proteini upstream u downstream tal-mogħdija ta' sinjalazzjoni Catenin jintużaw biex jivverifikaw il-ġeni fil-mira u jesploraw aktar il-mekkaniżmu ta 'azzjoni tal-glikosidi totali ta' Cistanche deserticola kontra ċelluli HepG2. Barra minn hekk, bħala sustanza omologa mediċinali u ta 'l-ikel, cistanche deserticola tista' tiġi kkunsmata fid-dieta ta 'kuljum biex tipprovdi kemm prevenzjoni kif ukoll trattament, u tipprovdi wkoll ċerta bażi teoretika għall-prattika tal-Gran Ikel Outlook, li tippromwovi l-kostruzzjoni ta' "Ċina b'saħħitha", u t-titjib tal-livell tas-saħħa tan-nies.

[1] FENG D, HE Y, JIANG YJ, et al. Progress tar-riċerka dwar il-funzjoni ta' kontra t-tixjiħ ta' Cistanches[J]. Journal of Food Safety & Quality, 2021, 12(11): 4429-4437.

[2] Ma G, Chen J, Wei T, et al. Jinibixxi r-rwoli ta' FOXA2 fil-migrazzjoni u l-invażjoni taċ-ċelluli tal-kanċer tal-fwied billi jrażżan it-traskrizzjoni tal-microRNA103a-3p u jattiva l-assi GREM2/LATS2/YAP[J]. Ċitoteknoloġija. 2021, 73:523-537.

[3] LI MQ, WANG K, ZHOU X. Inibizzjoni ta 'Mung Bean Peptides fuq il-Proliferazzjoni f'HepG2 Cell[J]. Ġurnal tal-Istitut Ċiniż tax-Xjenza u t-Teknoloġija tal-Ikel, 2018, 18(10): 52-57.

[4] HU Y, WANG S, WU X, et al. Komposti derivati ​​mill-mediċina tal-ħxejjex Ċiniża għat-terapija tal-kanċer: fokus fuq karċinoma epatoċellulari[J]. J Ethnopharmacol. 2013, 149(3):601-612. doi:10.1016/j.jep.2013.07.030.

[5] YE Y, SONG Y, ZHUANG J, et al. Effetti kontra l-kanċer ta 'echinacoside fil-mudell tal-ġrieden tal-karċinoma epatoċellulari u ċelloli HepG2 [J]. J Cell Physiol. 2019, 234(2): 1880-1888. doi:10.1002/jcp.27063

[6] QI XX, INTI SP, HE ZX, et al. Effett ta 'Cistanche deserticola phenylethanol glycoside fuq il-proliferazzjoni u l-apoptożi ta' ċelloli HepG2 in vitro[J]. Ġurnal tal-Università Medika ta' Xinjiang, 2021, 44(09): 1041-1047.

[7] XIE YT. Effetti ta' Echniacoside fuq 786-O Cells Apoptosis u Mekkaniżmi Induttivi in ​​Vitro[D]. Kulleġġ tal-Għalliema Baotou, 2020.

[8] HAN YM, JIN WM, ZENG H, et al, Effetti ta 'Echniacoside fuq Proliferazzjoni, Invażjoni u Metastasi ta' Ċelloli SW480 tal-Kanċer tal-Kolon in Vitro u in Vivo[J]. Ġurnal tal-Università ta 'Guangzhou tal-Mediċina Tradizzjonali Ċiniża, 2020,37(08):1542-1549.

[9] HU Q, YOU SP, LIU T, et al. Investigazzjoni dwar l-effett kontra l-kanċer tal-fwied ta' cistanche[J]. Karċinoġenesi, Teratoġenesi u Mutaġenesi, 2018,30(03):194-199.

[10] XU Q, QIN W, WU FZ, et al.Effect of Roucongrong(Herba Cistanches Deserticolae) decoction on the substantia nigra permezz tal-passaġġ ta’ sinjalazzjoni Wnt/-catenin fil-firien bil-marda ta’ Parkinson indotta minn 6-hydroxydopamine hydrochloride[ J]. Ġurnal tal-Mediċina Tradizzjonali Ċiniża,2021,41(05):762-770.

[11] YIN SL, WANG HB, YANG S. Effetti newroprotettivi ta 'Cistanche Deserticola Polysaccharide fuq il-firien ta' Parkinson Indotti minn 6-HODA Ikkawżat mill-Attivazzjoni tal-Mogħdija tas-Sinjali Wntt/-catenin[J]. Ċiniż 10 Journal of Integrative Medicine on Cardio-Cerebrovascular Disease, 2020,18(08):1227-1230.

[12] TANG C H. Echinacoside jinibixxi ċ-ċelloli tal-kanċer tas-sider billi jrażżan il-passaġġ tas-sinjalar Wnt/-catenin[D]. Università Medika ta 'Chongqing, 2020.

[13] FENG L, MA QL, SHI L, et al. Echinacein jinibixxi l-proliferazzjoni ta 'ċelluli ta' lewkimja majelojde akuta billi jrażżan is-sinjal SOX4/Wnt/beta-Catenin[J]. Immunological Journal, 2020,36(02):138-142.

[14] Clevers H, et al. Wnt/-catenin sinjalazzjoni u mard[J]. Ċellula. 2012, 149(6):1192-205.

[15] Russell JO, Monga SP. Wnt/ -Catenin Sinjali fl-Iżvilupp tal-Fwied, Omeostażi, u Patobioloġija[J]. Ann Rev Pathol. 2018, 13: 351-378. doi:10.1146/annurev-pathol-020117-044010

[16] LIU CY, CHEN KF, CHEN PJ. Trattament tal-Kanċer tal-Fwied[J]. Cold Spring Harb Perspect Med. 2015, 5(9):a021535.

[17] WANG F, LI R, TU P, et al. Glycosides totali ta 'Cistanche deserticola Jippromwovu l-Irkupru tal-Funzjoni Newroloġika billi Induċu Riġenerazzjoni Newrovaskulari permezz tal-Pathway Nrf-2/Keap-1 fil-Firien MCAO/R. Fruntieri fil-farmakoloġija 2020, 11, 236.

[18] GĦANJA QJ. Effett inibitorju tal-estratti tal-Frott Akebia fuq l-Adeżjoni, il-Migrazzjoni u l-Invażjoni taċ-Ċelloli tal-Epatoma HepG2 tal-Bniedem u l-Mekkaniżmi Relatati[D]. Università ta 'Shanghai tal-Mediċina Tradizzjonali Ċiniża, 2019.

[19] SUN Q, WANG J, LI Y, et al. Sinteżi u evalwazzjoni ta' attivitajiet ċitotossiċi tad-derivattivi ta' l-artemisinin[J]. Chem Biol Drug Des. 2017, 90(5): 1019-1028.

[20] ZHAO YM, SUN LN, ZHOU HY, et al. Il-kanali tal-potassju li jiddependu mill-vultaġġ huma involuti fl-apoptosi indotta mill-glutamate ta 'newroni tal-hippocampal tal-firien[J]. Neurosci Lett. 2006, 398(1-2):22-27.

[21] GALLE PR, FOERSTER F, KUDO M, et al. Bijoloġija u s-sinifikat ta 'alfa-fetoprotein fil-karċinoma epatoċellulari [J]. Liver Int, 2019, 39(12): 2214-2229.

[22] MA G, CHEN J, WEI T, et al. Jinibixxi r-rwoli ta' FOXA2 fil-migrazzjoni u l-invażjoni taċ-ċelluli tal-kanċer tal-fwied billi jrażżan it-traskrizzjoni tal-microRNA-103a-3p u jattiva l-assi GREM2/LATS2/YAP[J]. Ċitoteknoloġija. 2021, 73(4): 523-537.

[23] KAMARAJAH SK, FRANKEL TL, SONNNENDAY C, et al. Evalwazzjoni kritika tas-sistema ta' stadju tat-8 edizzjoni tal-Kummissjoni Konġunta Amerikana dwar il-Kanċer (AJCC) għal pazjenti b'Karċinoma Epatoċellulari (HCC): Analiżi ta' Sorveljanza, Epidemjoloġija, Riżultati Tmiem (SEER)[J]. J Surg Oncol. 2018, 117(4):644-650.

[24] EDGE SB, COMPTON CC. Il-Kumitat Konġunt Amerikan dwar il-Kanċer: is-7 edizzjoni tal-manwal tal-istadju tal-kanċer AJCC u l-futur ta 'TNM[J]. Ann Surg Oncol. 2010, 17(6):1471-1474.

[25] VAUTHEY JN, LAUWERS GY, ESNAOLA NF, et al. Stadju simplifikat għal karċinoma epatoċellulari[J]. Ġurnal tal-onkoloġija klinika : ġurnal uffiċjali tas-Soċjetà Amerikana tal-Onkoloġija Klinika. 2002, 20(6): 1527-36.

[26] ZHENG R, ZHANG S, ZENG H, et al. Inċidenza u mortalità tal-kanċer fiċ-Ċina, 2016. Ġurnal taċ-Ċentru Nazzjonali tal-Kanċer, 2022, 2(1), 1–9.

[27] ANWANWAN D, SINGH SK, SINGH S, et al. Sfidi fil-kanċer tal-fwied u approċċi possibbli ta' trattament[J]. Biochim Biophys Acta Rev Cancer. 2020, 1873(1): 188314.

[28] CHAFFER CL, WEINBERG RA. Perspettiva dwar metastasi taċ-ċelluli tal-kanċer[J]. Science, 2011, 331(6024): 1559-1564.

[29] ZHONG Z, YU J, VIRSHUP DM, et al. Wnts u l-karatteristiċi tal-kanċer[J]. Metastasi tal-Kanċer Rev 2020, 39: 625–645.

[30] SYAM S, ABDUL AB, SUKARI MA, et al. L-effetti li jrażżnu t-tkabbir ta 'girinimbine fuq HepG2 jinvolvu induzzjoni ta' apoptożi u arrest taċ-ċiklu taċ-ċelluli [J]. Molekuli. 2011, 16(8):7155-7170.

[31] ZHANG X, LUO W, ZHAO W, et al. Isocryptotanshinone Apoptosis Indotta u Sinjali MAPK Attivat fiċ-Ċelloli MCF-7 tal-Kanċer tas-Sider tal-Bniedem[J]. J Kanċer tas-Sider. 2015, 18(2):112-118.

[32] Ponselvi Induja M, Ezhilarasan D, Ashok Vardhan N. Evolvulus alsinoides estratt metanoliku jqajjem apoptosi fiċ-ċelloli HepG2[J]. Avicenna J Phytomed. 2018, 8(6): 504-512.11

[33] YANG G, WANG SP, ZHONG LF, et al. 6-Gingerol jinduċi apoptożi permezz tal-assi lisosomal-mitokondrijali fiċ-ċelloli G2 tal-epatoma umana[J]. Phytother Res. 2012, 26(11):1667-1673. doi:10.1002/ptr.4632

[34]  LI J, GUO G, FAN YM, et al. Disheveled jippromwovi l-proliferazzjoni tal-glijoma: Studju sperimentali[J]. Rimedji u Kliniki Ċiniżi, 2021, 21(18): 3077-3080.

[35] Fiedler M, Mendoza-Topaz C, Rutherford TJ, Mieszczanek J, Bienz M. Disheveled jinteraġixxi mal-interface tal-polimerizzazzjoni tad-dominju DIX ta 'Axin biex jinterferixxi mal-funzjoni tiegħu f'-catenin[J] li jirregola l-isfel. Proc Natl Acad Sci US A. 2011;108(5):1937-1942. doi:10.1073/pnas.1017063108.

[36]  SHI QQ, ZUO GW, FENG ZQ, et al. Studju dwar l-effett kontra l-epatoma ta' ginsenoside Rh2 u mekkaniżmu ta' degradazzjoni ta' -catenin permezz tal-attivazzjoni ta' GSK-3 [J]. Drogi Tradizzjonali u Veġetali Ċiniżi, 2016,47(18):3231-3238.

[37] HE S, TANG S. WNT/-catenin sinjalazzjoni fl-iżvilupp ta 'kanċer tal-fwied[J]. Biomed Pharmacother. 2020, 132: 110851.

[38] HU P, CHENG B, HE Y, et al. L-awtofaġija irażżan il-proliferazzjoni taċ-ċelluli HepG2 permezz ta' l-inibizzjoni tas-sinjalar glypican-3/wnt/-catenin[J]. Onco Targets Ther. 2018;11:193-200.

[39] GAO YX, YANG TW, YIN JM, et al. Progress u prospetti ta 'bijomarkaturi fil-kanċer primarju tal-fwied (Reviżjoni)[J]. Int J Oncol. 2020, 57(1): 54-66.

[40] Tangkijvanich P, Anukulkarnkusol N, Suwangool P, et al. Karatteristiċi kliniċi u pronjosi ta 'karċinoma epatoċellulari: analiżi bbażata fuq livelli ta' alfa-fetoprotein fis-serum[J]. J Clin Gastroenterol. 2000, 31(4):302-308.

[41] FENG D, DUAN H, LYU YN, et al. Applikazzjoni ta' Cistanche Deserticola Ma fl-Ikel Funzjonali fiċ-Ċina[J]. Xjenza u Teknoloġija tal-Ikel, 2021,46(12):76-81.