Effetti Ta' Polygona-polysaccharose Fuq Ferroptożi fil-Firien Nefropatiċi Dijabetiċi

Kliem ewlieni:nefropatija dijabetika;polygona-polysaccharose; ferroptosi; transferrin; FTH1; GPX4

 

Nefropatija dijabetika(DN) hija kumplikazzjoni mikrovaskulari serja ta 'dijabete mellitus[1] DN huwa serjukumplikazzjoni mikrovaskulari tad-dijabetemellitus [1], normalment jippreżentaw bħala mikroalbuminurja fl-istadji bikrija, segwit minn żvilupp progressiv ta 'L-istadju bikri ġeneralment jippreżenta mikroalbuminurja, segwit minn żvilupp progressiv ta' proteinurja massiva, tnaqqis progressiv fir-rata ta 'filtrazzjoni glomerulari, u żieda progressiva fil-krejatinina tad-demm [2] ]. żieda progressiva fil-krejatinina[2] . Jekk titħalla mhux ittrattata, il-marda tista 'twassal għal mard kroniku. Jekk ma tiġix ittrattata, tista 'twassal għal ħsara renali progressiva kronika u eventwalment mard fl-aħħar stadju. Jekk ma tiġix ittrattata, tista' twassal għal ħsara renali progressiva kronika u eventwalment insuffiċjenza renali fl-aħħar stadju[3] . Mewt tal-ħadid Il-mewt tal-ħadid hija akkumulazzjoni dipendenti fuq il-ħadid ta 'aċidu xaħmi mhux saturati mewt tal-ħadid hija akkumulazzjoni dipendenti fuq il-ħadid ta' ossidazzjoni tal-fosfolipidi tal-aċidu xaħmi mhux saturati li twassal għall-mewt taċ-ċelluli, prinċipalment manifestata mill- Il-manifestazzjoni ewlenija tal-mewt tal-ħadid hija l-akkumulazzjoni ta 'dipendenti mill-ħadid. perossidi tal-lipidi intraċellulari[4] . [4] . Studji Instab li l-ħsara taċ-ċelluli epiteljali tubulari tal-kliewi hija assoċjata mill-qrib mal-mewt tal-ħadid[5] . Wang et al.

Wang et al[6] sabu li l-espressjoni tal-glutathione peroxidase 4 (GPX4) fl-espressjoni interstizjali tubulari renali (GPX4) hija relatata mill-qrib mas-severità u l-progressjoni tal-marda DN. GPX4, bħala mira importanti biex tiskatta programm ta 'mewt tal-ħadid, huwa sensor ta' stress ossidattiv u sinjalazzjoni ta 'mewt taċ-ċelluli, u espressjoni mnaqqsa ta' GPX4 twassal għal żieda sinifikanti fl-espressjoni GPX4 ħaj tonqos, li tirriżulta f'żieda sinifikanti fl-ossiġnu ħaj fil-ġisem [ 7] . . Għalhekk, l-inibizzjoni tal-mewt taċ-ċelluli epiteljali tubulari tal-kliewi permezz tar-regolamentazzjoni tal-mewt tal-ħadid Għalhekk, l-inibizzjoni tal-mewt taċ-ċelluli epiteljali tubulari tal-kliewi permezz tar-regolamentazzjoni tal-mewt tal-ħadid biex ittaffi l-ħsara renali DN tista 'tkun strateġija effettiva biex tikkura DN Għalhekk, inibizzjoni ta' tubulari renali Il-mewt taċ-ċelluli epiteljali permezz tar-regolamentazzjoni tal-mewt tal-ħadid tista 'tkun strateġija effettiva għat-trattament tad-DN.
Il-polisakkaridtaC. flavushuwa l-aktar farmakoloġiku abbundanti u importanti Huwa wieħed mill-aktar komponenti farmakoloġiċi abbundanti u importanti ta 'C. flavus. L-istudju sperimentali sab li għandu rwol importanti fit-titjib tal-funzjoni renali ta 'DN u ttaffi r-rispons infjammatorju. Li et al[8] . Li et al[9] . sab li Li et al[9] sabu li l-intervent ta 'C. flavus polysaccharide tejjeb b'mod sinifikanti d-disturbi tal-metaboliżmu tal-glukolipid u t-tolleranza għall-insulina fil-ġrieden dijabetiċi. Li et al. Studju ieħor sab li t-tolleranza tal-glukożju, tal-glukożju ta '24 siegħa u tal-insulina tal-ġrieden b'nefropatija dijabetika tjiebu b'mod sinifikanti wara l-intervent tal-polisakkarid tal-estratt isfar. Studju ieħor sab li l-glukożju fid-demm, 24-h mikroalbumina tal-awrina, kreatinina tad-demm (SCr) u nitroġenu tal-urea fid-demm (BUN) fil-ġrieden mudell ta 'nefropatija dijabetika tjiebu b'mod sinifikanti wara l-intervent ta' Fructus flavus polysaccharide. u l-livelli ta' nitroġenu ta' l-urea fid-demm (BUN) tnaqqsu b'mod sinifikanti f'mudell ta' nefropatija dijabetika[10] . It-trattament ta 'DN b'polysaccharide minn Flos Chrysanthemi Madankollu, il-mekkaniżmu speċifiku ta' l-azzjoni tiegħu mhuwiex ċar. Għalhekk, il-preżent F'dan l-istudju, intużat dieta b'ħafna xaħam flimkien ma 'injezzjoni ta' streptozotocin (STZ) biex jiġi stabbilit mudell ta 'far DN.
Għalhekk, f'dan l-istudju, waqqafna mudell ta 'firien DN b'dieta b'ħafna xaħam flimkien ma' injezzjoni ta 'streptozotocin (STZ), u osservajna l-effett ta' C. flavus polysaccharide fuq il-mewt tal-ħadid fil-firien. Għalhekk, l-istudju preżenti sar biex josserva l-effett ta 'C. flavus polysaccharide fuq il-mewt tal-ħadid fil-firien mitmugħa b'dieta b'ħafna xaħam flimkien ma' injezzjoni ta 'streptozotocin (STZ), u biex jiċċara l-mekkaniżmu ta' azzjoni ta 'C. flavus polysaccharide fuq DN.

materjali u metodi
1.1 Annimali
Ħamsin firien SD maskili b'saħħithom b'massa tal-ġisem ta' (200±20) g kienu miżmuma fl-Istitut tar-Radjoloġija, l-Akkademja Ċiniża tax-Xjenzi Mediċi, Beijing, iċ-Ċina, taħt ċiklu ta' 12-h dawl-dlam f'temperatura ta ' (25±2) grad u umdità relattiva ta '(50±15) fil-mija , u mitmugħa ad libitum. Zokkor għoli u dieta b'ħafna xaħam (10 fil-mija lardu, 20 fil-mija sukrożju, 2.5 fil-mija kolesterol, 67.5 fil-mija għalf konvenzjonali), (4.8 fil-mija xaħam, 20 fil-mija proteina u 59.4 fil-mija zokkor totali), Beijing Huafukang Biotechnology Co. Dan l-esperiment kien approvat minn l-Isptar tal-Mediċina Integrattiva ta' Cangzhou (CZX2022-KY-023).

1.2 Droga u preparazzjoni
PolysaccharidetaFlos Astragalus(purità 70 fil-mija, numru tal-lott S27804), Shanghai Yuanye Biotechnology Co. Ltd. Ltd ġiet ippreparata b'salina fil-konċentrazzjoni ta '200, 800 mg/mL, rispettivament. 800 mg/mL soluzzjoni. Pilloli Irbesartan (lott 8A411), Sanofi (Hangzhou) Pharmaceutical Co. (Hangzhou) Pharmaceutical Co., Ltd ġiet ippreparata fis-salina f'30 mg/mL. soluzzjoni.

 

1.3 Reaġenti u strumenti ewlenin
Proteina tal-awrina (numru tal-lott C035-2-1), SCr (numru tal-lott C011-2-1), BUN (numru tal-lott C013-2-1) BUN (numru tal-lott C013-2-1), malondialdehyde ( MDA, numru tal-lott C003-1- 2), glutathione (GSH, lott C006-2-1), kontenut totali tal-jone tal-ħadid (numru tal-lott A{039-2-1), Nanjing Jiancheng Biological Engineering Research Institute of Biological Engineering Institute , Nanjing, iċ-Ċina; Transferrin (numru tal-lott ab278498), ferritin Transferrin (lott ab278498), ferritin heavy chain (FTH1, lott ab75973), GPX4 (lott ab252833), u -ferritin (lott ab252833). ab252833), -actin (lott ab179467), Abcam, UK. Marker tal-enzimi multifunzjonali iMark680, Bio-Rad, USA. Ċentrifuga Fresco17, Thermo, l-Istati Uniti; 5810 ċentrifuga ffriżata fuq il-bank, Eppndorf, il-Ġermanja; Kwantifikazzjoni tal-fluworexxenza ABI Prism® 7500 Applied Biosystems, USA; Tank tal-elettroforeżi vertikali DYCZ-24DN, Beijing Liuyi Instrument Factory, Beijing, iċ-Ċina; SH-523 chemiluminescence imaging Ltd, Hangzhou Shenhua Technology Co.

 

1.4 Immudellar, raggruppament u amministrazzjoni tad-droga
Wara ġimgħa 1 ta 'tmigħ adattiv, 10 firien ġew magħżula b'mod każwali bħala normali L-40 firien li jifdal ġew riferuti għall-metodu tal-letteratura [11] biex jiġi stabbilit il-mudell tal-firien DN. Il-firien ġew mitmugħa b'dieta għolja ta 'zokkor u xaħam għal ġimgħat 7, u mbagħad sajmu għal 12-il siegħa mingħajr ilma. Il-firien ġew mitmugħa b'dieta għolja ta 'zokkor u xaħam għal ġimgħat 7, imbagħad sajmu bl-ikel u l-ilma għal 12-il siegħa. STZ ġie injettat intraperitonealment b'30 mg/kg. Wara 72 siegħa, id-demm inġabar mill-vina tad-denb biex jinkixfu l-glukożju fid-demm bl-addoċċ, u glukożju fid-demm ta 'Ikbar minn jew ugwali għal 16.7 mmol/L kien ikkunsidrat bħala mudellar ta' suċċess tad-dijabete. Il-firien ġew mitmugħa b'dieta b'ħafna zokkor u xaħam għal ġimgħa, u 24-h awrina nġabret mill-gaġġa metabolika.

 

 

1.5.5 Assaġġ Western blot
Iġbor it-tessuti tal-kliewi, żid 150 μL ta' RIPA lysis buffer, omoġenizza Is-supernatant tal-proteina nżamm wara ċ-ċentrifugazzjoni. Il-konċentrazzjoni totali tal-proteina ġiet iddeterminata bl-użu tal-kit tal-assaġġ tal-proteini BCA. Il-konċentrazzjoni totali tal-proteina ġiet iddeterminata bl-użu ta 'kit ta' analiżi tal-proteina BCA, u l-konċentrazzjoni tal-proteina ġiet omoġenizzata. Ammonti ugwali ta 'proteina 20 ug, 8 fil-mija -12 fil-mija SDS-PAGE intużaw għas-separazzjoni tal-proteini, u l-proteina ġiet trasferita Il-membrani ġew magħluqa b'5 fil-mija trab tal-ħalib xkumat f'temperatura ambjentali għal 2 sigħat. Antikorp primarju kontra l-firien tal-fenek Transferrin (1:2 000), FTH1 (1:3 000) u GPX4 (1:3 000) ġew miżjuda. 3,000), GPX4 (1:3,000), -actin (dilwit 1:5,000), u inkubat matul il-lejl f'4 gradi . Inkuba matul il-lejl f'4 gradi. Il-membrana ġiet maħsula, antikorp sekondarju (1:9 000) ġie miżjud u inkubat għal 2 sigħat f'temperatura tal-kamra. Il-membrani ġew maħsula b'TBST, żviluppati minn kimiluminixxenza ECL u skoperti bl-użu
Intuża softwer Image J biex janalizza l-valuri tal-griż tal-meded.

 

1.6 Metodi statistiċi
SPSS Statistics25.0 Intuża softwer statistiku għall-analiżi. Esperiment Ir-riżultati ġew espressi bħala xˉ±s, u d-dejta kollha ġiet ittestjata għan-normalità u l-chi-square. Id-dejta kollha ġiet ittestjata għan-normalità u l-chi-square, u t-testijiet intużaw jekk kienu sodisfatti, u ntużaw testijiet mhux parametriċi jekk ma kinux sodisfatti. P<0.05 indicates that the difference is statistically significant.

 

2 Riżultati
2.1 Effetti ta' Flavopiridium polysaccharide fuq il-massa tal-ġisem u l-glukożju fid-demm waqt is-sawm ta' firien mudell Imqabbel mal-grupp normali, il-massa tal-ġisem tal-firien fil-grupp mudell tnaqqset b'mod sinifikanti (P<0.01) and FBG was significantly increased (P<0.01); compared with the model group, the body mass of rats in the positive drug group was significantly increased (P<0.05), and the differences in FBG of rats in each group were not statistically significant (P>0.05). Ara t-Tabella 2.

2.2 Effetti ta' Flavopiridium polysaccharide fuq indiċi tal-funzjoni renali ta' firien mudell
Meta mqabbel mal-grupp normali, l-SCr, il-livell BUN u l-kontenut tal-proteina tal-awrina ta’ 24 siegħa tal-firien fil-grupp mudell kienu ogħla b’mod sinifikanti (P<0.01); compared with the model group, the Cr, BUN level and 24 h urine protein content of rats in the positive drug group and the high dose group of Flavopiridium polysaccharide were significantly lower (P<0.05, P<0.01). See Table 3.

2.3 Effetti tal-polysaccharide tal-estratt isfar fuq il-morfoloġija istopatoloġika tal-kliewi tal-firien mudell
Il-glomerulus u l-istruttura tubulari tal-firien tal-grupp normali ma wrew l-ebda anormalitajiet, u l-membrana thylakoid u stroma thylakoid ma kinux proliferati, u ma kien hemm l-ebda infiltrazzjoni taċ-ċelluli infjammatorji, eċċ.; il-mudell Fil-firien mudell, ġew osservati deġenerazzjoni tubulari fokali u atrofija, u l-membrana tal-kantina glomerulari kienet kemmxejn Il-firien fil-grupp mudell wrew deġenerazzjoni tubulari fokali u atrofija, membrana tal-kantina glomerulari kemmxejn mħaxxna, iperplażja tilakojde, u deġenerazzjoni tax-xaħam tal-glomeruli u tubuli. Il-firien f'kull grupp ta 'amministrazzjoni tad-droga wrew leżjonijiet imnaqqsa, u t-titjib kien aktar ovvju fil-grupp tad-droga pożittiva u d-doża għolja ta' Flavopiridium polysaccharide. It-titjib kien aktar ovvju fil-grupp tad-droga pożittiva u d-doża għolja ta 'Flavopiridium polysaccharide. Ara l-Figura 1.