Effetti Ta' Partijiet Estratti Differenti Ta' Cistanche Deserticola Fuq Effetti Ipogliċemiċi Ta' Ġrieden Iswed Db / Db Ⅱ

2 Metodi sperimentali

2.1 Preparazzjoni tal-prodotti pproċessati Cistanche deserticola Cistanche deserticola:

Ħu materjali mediċinali Cistanche deserticola, aħsel l-impuritajiet, fwar f'borma bi pressjoni normali għal sagħtejn, aqta 'f'6 mm, u nixxef f'70 grad. Cistanche deserticola: Ħu biċċiet tad-decoction Cistanche deserticola, żid l-ammont xieraq ta 'inbid tar-ross, ħawwad sew, xarrab għal 8 sigħat (inbid isfar tar-ross: ilma=1: 1), fwar taħt pressjoni għolja għal 4 sigħat, u nixxef fi 70 grad. (Uża 30 mL ta 'inbid tar-ross għal kull 100 g ta' Cistanche deserticola).

ESTRAT TA' CISTANCHE ORGANIKU NATURALI

Servizz ta 'Appoġġ Ta Wecistanche-L-akbar esportatur ta' cistanche fiċ-Ċina:

Email:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Shop Għal Aktar Speċifikazzjonijiet Dettalji:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

2.2 Arrikkiment ta' partijiet estratti differenti ta' Cistanche deserticola/Cistanche deserticola

Ħu 30 g ta 'Cistanche deserticola/Tamarococcus deserticola trab, żid 10 darbiet l-ammont ta' ilma, sħana, u rifluss għall-estrazzjoni darbtejn, sagħtejn kull darba, għaqqad l-estratti, ikkonċentra, żid etanol sakemm il-kontenut ta 'alkoħol jilħaq 60%, preċipitat f' temperatura baxxa għal 12-il siegħa, u ffiltra bil-ġbid. , il-preċipitat huwa l-parti tal-polisakkarid mhux raffinat. Ikkonċentra s-supernatant għal konċentrazzjoni xierqa, applikaha għar-reżina ta 'adsorbiment makroporuża D101, u elużiha b'ilma u etanol ta' konċentrazzjonijiet differenti f'sekwenza. Iġbor l-eluate ta 'l-ilma u kkonċentra taħt pressjoni mnaqqsa għal pejst oħxon, li hija l-frazzjoni totali ta' oligosaccharide; aħsel b'40% etanol. Delikwida, ikkonċentra, u nixxef taħt pressjoni mnaqqsa, li hija l-frazzjoni glycoside totali ta 'Cistanche deserticola.

2.3 Determinazzjoni tal-kontenut ta' partijiet estratti differenti ta' Cistanche deserticola/Cistanche deserticola

2.3.1 Determinazzjoni tal-kontenut totali ta' polysaccharide ta' Cistanche deserticola/Cistanche deserticola.

Iżen il-kampjun tal-glukożju 20. 00 mg f'kunjett volumetriku ta' 5{0 mL biex tagħmel 0. Għal 4 mg·mL-1 soluzzjoni standard tal-glukożju, ippipetta 3, 4, 5, 6, u 7mL rispettivament fi flixkun volumetriku ta' 50 mL, iddilwixxi sal-volum bl-ilma, u agħmel pipetta 2.0 mL ta' kull soluzzjoni ta' glukożju gradjent ta' konċentrazzjoni f'tubu tat-test. Ħu ammont ugwali ieħor ta 'ilma distillat bħala kontroll vojt, żid 1 mL ta' 5% fenol ma 'kull tubu, ħawwad sew, malajr żid 5 mL ta' aċidu sulfuriku kkonċentrat, ħallih għal 10 minuti, poġġih f'banju ta 'ilma ta' 40 grad għal 15-il minuta, oħroġ, kessaħ malajr għat-temperatura tal-kamra, u Kejjel il-valur tal-assorbiment f'490 nm, ħu l-assorbenza (A) bħala l-ordinata u l-konċentrazzjoni tal-glukożju (C) bħala l-axxissa, iġbed kurva standard, u ħu l- ekwazzjoni ta' rigressjoni Y=8.37X-0.162 8 (R2=0.994 6). Iżen b'mod preċiż 1.0 g tat-trab tal-polisakkarid totali ta 'materja prima u prodotti, poġġihom f'garafini volumetriċi ta' 50 mL rispettivament, żid l-ilma biex dewweb u aġġusta l-volum għall-marka, iġbed b'mod preċiż 2.0 mL ġo tubu tat-test, u kejjel fl-istess mod bħala l-metodu ta 'preparazzjoni tal-kurva standard. , dak hu.

2.3.2 Determinazzjoni tal-kontenut ta' betaine f'Cistanche deserticola/Cistanche deserticola

2.3.2.1 Preparazzjoni tas-soluzzjoni ta' referenza:

Iżen b'mod preċiż 1.17 mg tas-soluzzjoni ta 'referenza tal-betaine, poġġiha f'kunjett volumetriku ta' 5 mL, żid 50% metanol biex jinħall u ħallat sal-volum, u tkun lesta.

2.3. 2. 2 Kundizzjonijiet kromatografiċi

Il-kolonna kromatografika hija Ecosil {{0}}kolonna kromatografika AMINO (4.6 mm×250 mm, 5 μm), fażi mobbli: aċetonitrile-ilma (99.5 ∶ 0.5) , temperatura tal-kolonna: 30 grad , wavelength ta 'skoperta: 194 nm, rata tal-fluss: 0.6 mL·min-1, volum ta' injezzjoni 10 μL, kromatogramma murija fil-Figura 1. 2.3.2.3 Preparazzjoni tas-soluzzjoni tat-test b'mod preċiż iżen it-trab tal-frazzjoni totali oligosaccharide ta 'prodotti nejjin u lesti 1.0 g, rispettivament imqiegħda fi flixkun volumetriku 5 mL, żid ilma distillat biex jinħall u ħallat għall-volum, ħawwad sew, jgħaddi minn 0.45 μL membrana tal-filtru mikroporuża, u hija lesta.

2.3.2.4 Determinazzjoni tal-Kontenut tal-Kampjun

Assorbi b'mod preċiż is-soluzzjoni totali tat-test oligosaccharide f'Cistanche deserticola nej u ppreparat, kejjelha skont il-kundizzjonijiet taħt "2.3.2.2", u kkalkula l-kontenut ta 'betaine fil-kampjun.

2.3.3 Determinazzjoni tal-kontenut ta' echinacoside, verbascoside, u heterocymicifugarin f'Cistanche deserticola/Cistanche deserticola

2.3.3.1 Preparazzjoni tas-soluzzjoni ta' referenza

Iżen preċiżament 4.50 mg ta 'echinacoside, 4.80 mg ta' verbascoside, u 5.05 mg ta 'comimicin eterologu fi fliexken volumetriċi 5 mL, żid 50% metanol biex dewweb u ħallat mal-marka, u ħu kull kontroll Poġġi 200 μL tas-soluzzjoni tal-kampjun fl-injezzjoni. kunjett, żid 400 μL ta '50% metanol, u ħawwad sew biex tagħmel soluzzjoni ta' referenza mħallta, ħawwad sew, u tkun lesta.

2.3.3.2 Kundizzjonijiet kromatografiċi

Il-kolonna kromatografika hija Ecosil C18 (4.6 mm × 250 mm, 5 μm), metanol huwa l-fażi mobbli A, 0.1% aċidu formiku huwa l-fażi mobbli B, eluzzjoni tal-gradjent, {{ 12}}~45 min, 30% A→ 70% A, ir-rata tal-fluss hija 1.0mL·min-1, it-temperatura tal-kolonna hija 30 grad, il-wavelength ta 'skoperta hija 330 nm, il-volum tal-injezzjoni huwa 10μL, u il-kromatogramma tidher fil-Figura 2.

2.3.3.3 Preparazzjoni tas-soluzzjoni tat-test

Iżen preċiżament 1.0 g tat-trab tal-glycoside totali tal-materja prima u l-prodotti, poġġihom f'garafini volumetriċi ta' 100 mL, żid 50% metanol biex dewweb aġġusta l-volum għall-marka, u ħawwad sew. Preċiżament iġbed 5 mL ta 'kull kampjun fi flixkun volumetriku ta' 10 mL, żid 50% metanol biex tagħmel il-volum, ħawwad sew, u għaddi minn membrana tal-filtru mikroporuża ta '0.45 μm biex tikseb.

2.3.3.4 Determinazzjoni tal-Kontenut tal-Kampjun

Iġbed b'mod preċiż il-kampjun ta' glikosidi totali ta' Cistanche deserticola u kejlu skond il-kondizzjonijiet taħt "2.3.3.2". Ikkalkula l-kontenut ta' echinacoside, verbascoside, u kompliċi eterologu fil-kampjun.

2.4 Raggruppament tal-annimali, immudellar, u amministrazzjoni tad-droga

Il-kamra tal-annimali għandha 12-il siegħa ta 'dawl u 12-il siegħa ta' dlam, umdità relattiva ta '50% sa 70%, u temperatura tal-kamra ta' 18 sa 22 grad. ġrieden iswed db/db u ġrieden iswed db/m (grupp ta 'kontroll normali) kienu mitmugħa b'mod normali b'għalf ordinarju, u l-esperiment beda fl-età ta' 9 ġimgħat. Ħlief għall-grupp ta 'kontroll normali, il-ġrieden suwed db/db li fadal ġew magħżula b'mod każwali skont il-livelli taz-zokkor fid-demm u l-piż tal-ġisem. Maqsuma fi 8 gruppi, jiġifieri grupp mudell, grupp ta 'kontroll pożittiv, grupp ta' polisakkaridi totali ta 'Cistanche deserticola, grupp ta' oligosakkaridi totali ta 'Cistanche deserticola, grupp ta' glukosidi totali ta 'Cistanche deserticola, grupp ta' polisakkaridi totali Tartschistanche deserticola, grupp ta 'oligosakkaridi totali Tarthouse deserticola, grupp totali ta' Tartschistanche deserticola. Ħlief għall-kontroll normali

Ħlief għall-grupp mudell u l-grupp mudell, il-firien fil-gruppi l-oħra ngħataw amministrazzjoni intragastrika f'doża ta '2 mL/100 g għal 4 ġimgħat konsekuttivi. Il-konċentrazzjoni tal-likwidu kienet 4.1 g·kg-1. Il-grupp ta 'kontroll normali u l-grupp mudell ġew ittrattati bl-istess mod. Agħti ċertu ammont ta 'melħ normali fl-istonku.

2.5 Effetti ta' partijiet estratti differenti ta' Cistanche deserticola fuq il-livelli ta' glucose fid-demm ta' ġrieden suwed db/db

2.5.1 Test tat-tolleranza tal-glukożju orali (OGTT).

Wara 26 jum ta' amministrazzjoni, huma sawmu għal 12-il siegħa, u 60 minuti wara l-għoti l-għada, il-ġrieden suwed f'kull grupp ingħataw 2.0 g·kg-1 glukożju fi 0, {{10}}.5, 1.0, u 2 rispettivament. .0 h demm tal-vini tad-denb ittieħed biex jitkejjel il-valur tal-glukożju fid-demm. Bil-valur tal-glukożju fid-demm bħala l-ordinat u l-ħin bħala l-axxissa, saret tabella tal-bidla tal-glukożju fid-demm, u l-erja taħt il-linja tal-kurva tal-glukożju fid-demm ta 'kull grupp sperimentali ġiet ikkalkulata skont il-formula (AUC, hmmoL·L{ {13}}) [19]. AUC=A × {{20}}.25 + B × 0.50 + C × 0.75 + D. Fil-formula: A, B, C, u D huma l-valuri tal-glukożju fid-demm f'0, 0.5, 1.0, u 2.0 sigħat rispettivament.

2.5.2 Kalkolu tal-indiċi tar-reżistenza għall-insulina u l-indiċi tal-arterjosklerożi

L-indiċi tar-reżistenza għall-insulina ġie kkalkulat skont il-metodu tal-letteratura [20]: HOMA-IR=Glukożju × Insulina / 22. 5. HOMA - =20 × Insulina / (Glukożju - 3}.5) × 100%. IR hija reżistenza għall-insulina u (%) hija -funzjoni taċ-ċelluli. L-unità molari tal-glukożju hija mmoL·L-1

. L-insulina tingħata f'mU·L-1. In-numri tal-glukożju u l-insulina jitkejlu waqt is-sawm. L-indiċi tal-arterjosklerożi (indiċi Ateroġeniku) ġie kkalkulat skont il-metodu deskritt minn Zheng et al. [21]. Metodu ta' kalkolu: Indiċi ateroġeniku=(TC-HDL-C) / HDL-C.

2.5.3 Effetti ta' partijiet estratti differenti ta' Cistanche deserticola/Cistanche deserticola fuq INS tas-serum u HbA1c ta' ġrieden suwed db/db

Ħu l-kampjuni tas-serum iffriżat u ġibhom għat-temperatura tal-kamra qabel tużahom għall-ittestjar b'kits ta' immunoassay marbuta mal-enzimi INS u HbA1c. Segwi b'mod strett il-metodi u l-passi fl-istruzzjonijiet tal-kit.

2.6 Effetti ta' partijiet estratti differenti ta' Cistanche deserticola/Cistanche deserticola fuq il-livell ta' stress ossidattiv tal-fwied ta' ġrieden suwed db/db

Ħu l-kampjuni tas-serum iffriżat u ġibhom għat-temperatura tal-kamra qabel ma tużahom għall-ittestjar b'kits ta' immunoassay marbuta mal-enżimi MDA u SOD. Segwi b'mod strett il-metodi u l-passi fl-istruzzjonijiet tal-kit.

2.7 Effetti ta' partijiet estratti differenti ta' Cistanche deserticola/Cistanche deserticola fuq il-metaboliżmu tax-xaħam tal-fwied ta' ġrieden suwed db/db

Il-livelli ta' TG, TC, HDL-C, u LDL-C fis-serum tal-firien ġew imkejla bl-użu ta' kits rilevanti. Għal passi speċifiċi tal-kejl, irreferi għall-istruzzjonijiet tal-kit.

2.8 Effetti ta' partijiet estratti differenti ta' Cistanche deserticola/Ratiana camphor fuq UA, Cr, u mALB fil-plażma u l-awrina ta' ġrieden suwed db/db

Ħu kampjuni ta' plażma u awrina ffriżati u ġibhom għat-temperatura tal-kamra qabel tużahom għall-ittestjar ta' kits ta' immunoassaġġi marbuta ma' enzimi UA, Cr, u mALB. Segwi b'mod strett il-metodi u l-passi fl-istruzzjonijiet tal-kit.

2.9 Osservazzjoni ta' sezzjonijiet patoloġiċi tal-frixa u tal-kliewi permezz ta' tbajja' HE

Il-frixa u t-tessuti tal-kliewi mxarrba f'10% fissattiv tal-paraformaldehyde għal 24 siegħa tneħħew, maħsula b'ilma distillat, u maħżuna f'70% etanol. Kampjuni ta 'tessut tneħħew, deidrati b'etanol gradat, imnaddaf, inkorporati fil-paraffin, qasmu, u mbagħad imtebbgħin b'ematossilin u eosina (tbajja' H&E). Wara li l-kolla tas-sezzjoni tkun nixef, uża sistema ta 'immaġni diġitali b'riżoluzzjoni għolja biex tosserva u tieħu ritratti tas-sezzjonijiet.

2.10 Determinazzjoni tal-kollaġen tat-tip IV tat-tessut tal-kliewi bl-immunoistokimika

Għall-espressjoni, sezzjonijiet tal-kliewi ġew dewaxed għall-ilma u mbagħad soġġetti għall-irkupru tal-antiġen. Ġew imblukkati b'10% serum tal-mogħoż u inkubati bl-antikorp primarju f'4 gradi matul il-lejl. Wara l-ħasil, l-antikorp sekondarju ġie inkubat. Is-soluzzjoni attwali kienet DAB għall-iżvilupp tal-kulur. Il-ħasil, id-deidrazzjoni u s-siġillar saru taħt mikroskopju ottiku. Osserva l-espressjoni tal-proteina tal-collagen tat-tip IV fit-tessut tal-kliewi.

2.11 Metodi statistiċi

L-użu ta' softwer GraphPad Prism Version 5.01 (2007, GraphPad Software re inc) biex tanalizza d-dejta u r-riżultati

Ir-riżultat huwa medju±SEM Jindika li d-differenza bejn iż-żewġ gruppi hija One-way

ＡＮＯＶＡ( ｏｌｌｏｅｄｅＢｏｎｅｒｒｎｎ′ test ta' par wieħed ta' kolonna), P<0.05 is a significant difference and has statistical significance.