Effetti Ta 'Cistanche Deserticola Glycosides Totali Fuq Korriment ta' Stress Ossidattiv U Apoptożi taċ-Ċelloli fil-Firien B'Iskemija Ċerebrali-riperfużjoni Ⅰ

Abstract

Għan: Tesplora l-effetti u l-mekkaniżmi possibbli ta'Cistanche deserticola glikosidi totali(GCs) fuq ħsara mill-istress ossidattiv u apoptosi taċ-ċelluli tan-nervituri fil-firien b'ċerebraliiskemija riperfużjoni korriment(CIRI).

Metodi: Il-mudell tal-okklużjoni tal-arterja ċerebrali tan-nofs (MCAO) inbena f'firien mudell bl-użu tal-metodu tal-embolizzazzjoni tas-sutura. Wara li l-mudell ġie stabbilit b'suċċess, il-firien fil-grupp tad-droga (GCs) ingħataw GCs 50 mg/(kg · d) permezz ta 'gavage għal 14-il jum konsekuttiv; il-firien fil-grupp ta 'operazzjoni finta (Sham) u l-grupp mudell (Mudell) ingħataw l-istess volum ta' salina normali. Amministrazzjoni orali. Wara l-amministrazzjoni, intuża l-metodu tal-punteġġ Longa biex jiġi evalwat id-defiċit newroloġiku; il-firien imbagħad ġew sagrifikati, u t-tbajja’ TTC saret biex jiġi kkalkulat il-perċentwal taż-żona tal-infart ċerebrali; Il-metodu ELISA intuża biex jinstab is-serummalondialdehydekontenut (MDA),superoxide dismutase(SOD) uGlutathione peroxidase (GSH-Px)attività; Western blot biex tiskopri l-fattur nukleari E2-fattur 2 relatat (Nrf2), heme oxygenase-1 (HO{-1) u B fit-tessut tal-moħħLimfoma/lewkimja ċellulari-2 (Bcl-2), Bcl-2-proteina X assoċjata (Bax), u espressjoni ta' caspase-3 (Caspase-3).

Riżultati: Meta mqabbel mal-grupp Sham, il-grupp Mudell kellu punteġġ ta 'defiċit newroloġiku miżjud, perċentwali akbar taż-żona ta' infart ċerebrali,żied il-kontenut ta' MDA, naqas l-attivitajiet ta' SOD u GSH-Px, u naqas il-livell ta' espressjoni tal-proteini Nrf 2, HO -1 u Bc l-2 Il-livelli ta' espressjoni tal-proteini ta' Bax u Caspase-3 żdiedu; meta mqabbel mal-grupp Mudell, il-punteġġ tad-defiċit newroloġiku tal-firien fil-grupp GCs naqas, il-perċentwal taż-żona ta 'infart ċerebrali naqas, il-Il-kontenut tal-MDA naqas, L-attività SOD u GS H-Px tiżdied, Il-livelli ta 'espressjoni ta' proteini ta 'Nrf 2, HO -1 u Bcl - 2 żdiedu, u l-livelli ta' espressjoni ta 'proteini ta' Bax u Caspase - 3 naqsu. Konklużjoni: GCs jistgħu jnaqqsu b'mod effettiv il-korriment ta 'iskemija-riperfużjoni ċerebrali, u l-mekkaniżmu tiegħu jista' jkun relatat mal-attivazzjoni tal-mogħdija Nrf 2 / HO - 1, u b'hekk inaqqas il-livelli ta 'stress ossidattiv u jinibixxi l-apoptosi taċ-ċelluli tan-nervituri.

[Kliem ewlenin]Cistanche deserticola glikosidi totali; iskemija ċerebrali-riperfużjoni; stress ossidattiv; apoptożi taċ-ċelluli

ESTRAT TA' CISTANCHE ORGANIKU NATURALI

Ikklikkja biex tikseb aktar dettalji

Servizz ta 'Appoġġ Ta Wecistanche-L-akbar esportatur ta' cistanche fiċ-Ċina:

Email:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Shop Għal Aktar Speċifikazzjonijiet Dettalji:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

Iskemija-riperfużjoni ċerebrali,

CIS hija marda bil estremamentmorbidità għolja, diżabilitàurati ta' mortalità. Iċ-ċelloli tal-moħħ huma estremament sensittivi għall-iskemija u l-ipoksja, għalhekk ir-rikanalilizzazzjoni tal-vini tad-demm ċerebrali kemm jista 'jkun malajr hija l-aktar mod effettiv biex tittratta puplesija iskemika akuta. Trombolisi ġol-vini u trombectomy mekkanika bħalissa huma metodi użati ħafna, iżda minħabba relattivament tagħhom.

Minħabba t-tieqa tal-ħin dejqa u fatturi oħra inkontrollabbli, biss<10% of stroke patients can achieve vascular recanalization within an effective time. Riperfużjoni ta' iskemija ċerebrali, CIRI huwa tip ta 'rkupru ta' vini ċerebrali minn stenosi A ħsara patoloġika sovrapposta li sseħħ waqt il-fluss tad-demm. Bħalissa huwa maħsub li l-mekkaniżmu patoloġiku tiegħu jista 'jkun relatat ma' tossiċità ta 'aċidu amminiku eċċitatorju, tagħbija żejda tal-kalċju, rilaxx ta' fatturi infjammatorji, u akkumulazzjoni ta 'radikali ħielsa mill-ossiġnu kkawżati minn ħsara mitokondrijali [1], li finalment iwassal għal qerda tal-barriera tad-demm-moħħ, disturbi fil-mikroċirkolazzjoni. , apoptożi taċ-ċelluli tan-nervituri, u nekrożi [1] 2] u serje ta 'reazzjonijiet, u b'hekk jaggravaw aktar id-defiċits newroloġiċi.

Cistanche deserticola glycosides totali (glycosides of cistanche, GCs) huma derivati ​​mill-mediċina tradizzjonali Ċiniża Herba Cistanche L-ingredjent attiv ewlieni huwa estratt miż-zkuk u l-għeruq ta 'pulzieri). Studji preċedenti wrew li GCs jistgħu jinibixxu b'mod effettiv il-perossidazzjoni tal-lipidi, itejbu l-funzjoni mitokondrijali, jnaddfu radikali ħielsa mill-ossiġnu żejjed, jinibixxu r-rilaxx ta 'ċitokini infjammatorji, inaqqsu ċitotossiċità, aggregazzjoni kontra l-plejtlits, jinibixxu l-proliferazzjoni taċ-ċelluli, jinibixxu l-apoptożi newronali, u Naqqas il-livelli tal-ormoni, b'hekk ikollha kontra t-tixjiħ, kontra t-tumur, kontra d-dipressjoni, ittejjeb l-immunità, ittejjeb il-mard iskemiku kardjovaskulari u ċerebrovaskulari, ittejjeb l-abbiltajiet tat-tagħlim u l-memorja u l-funzjonijiet konjittivi, u ttejjeb ir-riproduzzjoni [3].

Studji wrew li l-GCs jistgħu jnaqqsu l-ħsara ossidattiva liċ-ċelloli u jżommu l-integrità tal-barriera tad-demm-moħħ.

[4]; Il-GCs jistgħu jtejbu b'mod effettiv il-vijabbiltà taċ-ċelluli u jimblokkaw l-infjammazzjoni u l-apoptożi indotta wara iskemija-riperfużjoni [5]; Nrf 2 għandu rwol importanti fil-proċessi anti-infjammatorji u antiossidanti [6]. Ibbażat fuq l-isfond ta 'hawn fuq, dan l-artikolu għandu l-għan li jistudja aktar l-effetti u l-mogħdijiet possibbli ta' GCs fuq stress ossidattiv u apoptosi wara CIRI billi jirreplika l-mudell CIRI.

1 Materjali u metodi

1. 1 Drogi u reaġenti GCs (SN-5692, purità 98%, tal-Punent

Anshenong Biotechnology Co., Ltd.), 2% triphenyltetrazolium chloride (TTC) soluzzjoni taż-żebgħa (Beijing Solebao Technology Co., Ltd.), kit ELISA (Beijing Boosen Co., Ltd.), kit ta 'analiżi kwantitattiva tal-proteini BCA (USA Cell Signaling Technology Company), antikorpi tal-fenek kontra l-ġrieden Bcl-2, Bax, Caspas Antibodies bħal e-3, Nrf 2, HO{-1, u antikorpi sekondarji tal-mogħoż kontra l-fenek kienu kollha mixtrija mingħand Proteintech Company tal-Istati Uniti.

1. 2 strumenti

Ċentrifuga (Mudell: TDL{0}}B, Shanghai Anheng Scientific Instrument Factory), Microplate reader (Mudell: Max-M5, American Molecular Devices Company), strument elettroforeżi SDS-PAGE (mudell: DYY-7C, Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. Company), skaner tal-ġel (Mudell: 4466611, US BIO-RAD Company).

1. 3 annimali

Firien Wistar maskili [SCXK (Beijing) 2019-0010], grad nadif, 8 ġimgħat, piż tal-ġisem 250-280 g.

1. 3 metodi

1. 3. 1 Raggruppament u mmudellar

Il-firien ġew maqsuma fi grupp sham (Sham), grupp mudell (Mudell), u grupp tad-droga (GCs) bl-użu ta 'metodu ta' randomizzazzjoni sempliċi. Kien hemm 15-il far f'kull grupp. Ġew mkabbra b'mod adattiv għal ġimgħa 1 u mbagħad immudellati. Sawm strettament u sawm 12-il siegħa qabel l-operazzjoni, il-grupp Mudell u l-grupp GCs użaw il-metodu ta 'embolizzazzjoni tas-sutura [7] biex joħolqu okklużjoni ta' l-arterja ċerebrali tan-nofs (okklużjoni ta 'l-arterja ċerebrali tan-nofs). okklużjoni, MCAO) mudell tal-far, it-tneħħija tal-embolus saret wara sagħtejn ta 'iskemija biex tinkiseb riperfużjoni. , irreġistra l-ħin tal-bidu tar-riperfużjoni. Il-ferita ġiet suturata, il-ġilda ġiet iddiżinfettata b'jodophor, u l-annimali ġew ritornati fil-gaġġa u mrobbija, u mbagħad imxerrda għal 24 siegħa. L-operazzjoni għall-firien fil-grupp Sham kienet l-istess bħal dik għall-firien mudell, iżda ma sar l-ebda plagg. Fl-aħħarnett, 10 firien f'kull grupp inżammu għal esperimenti sussegwenti.

1. 3. 2. Metodu ta' amministrazzjoni

Ħu trab tal-GCs u żid ilma pur biex tħejji soluzzjoni ta' 15 mg/mL. Studji preliminari wrew li d-doża ta '50 mg/(kg·d) hija aħjar minn gruppi ta' doża oħra [8], għalhekk id-doża magħżula għal dan l-esperiment hija l-istess bħal qabel. Il-firien fil-grupp GCs ingħataw GCs permezz ta 'gavage wara 24 siegħa ta' iskemija u riperfużjoni, u l-firien fil-grupp Sham u l-grupp Mudell ingħataw volum ugwali ta 'salina normali b'gavage għal 14-il jum.

1. 3. 3 Punteġġ tad-defiċit newroloġiku

Il-metodu tal-punteġġ Longa [7] intuża biex jiskorja 24 siegħa wara l-kirurġija, u l-firien mudell b'punteġġi ta '1 sa 3 inżammu għal esperimenti sussegwenti. Score wara l-aħħar doża. 0 punti: Xejn

Sintomi newroloġiċi; 1 punt: defiċit newroloġiku żgħir, ir-riġlejn ta 'quddiem kontralaterali jitgħawweġ u jgħolli meta d-denb jitneħħa, u l-ispalla tgħaqqad; 2 punti: defiċit newroloġiku moderat, ir-riġlejn ta 'quddiem kontralaterali jitgħawweġ u jgħolli meta d-denb jitneħħa, adduzzjoni ta' l-ispalla, iduru f'ċrieki lejn in-naħa opposta tal-leżjoni meta timxi; 3 punti: defiċit newroloġiku sever, jegħleb lejn in-naħa opposta tal-leżjoni meta timxi; 4 punti: attivitajiet inkonxji u awtonomi.

1. 3. 4 Determinazzjoni tal-perċentwal taż-żona ta' infart ċerebrali

Wara l-aħħar amministrazzjoni, 4 firien minn kull grupp ġew magħżula b'mod każwali, anestetizzati profondament, decapitated, u l-imħuħ tagħhom tneħħew malajr.

Iffriża malajr it-tessut tal-moħħ fi friġġ ta' -20 grad għal 20 minuta. Wara li t-tessut tal-moħħ ikun relattivament fiss, oħroġ. Tibda mill-intersezzjoni tal-arblu anterjuri tal-moħħ għall-chiasm ottiku, u mill-forehead għall-occiput, aqta 'l-moħħ tal-firien tul il-pjan korol. Aqta 'f'5 flieli tal-moħħ bi ħxuna ta' 2 mm, għaddishom f'2% soluzzjoni TTC, poġġihom f'banju ta 'ilma ta' 37 grad għaż-żebgħa għal 15-il minuta, aqlebhom, u żebgħahom għal 15-il minuta oħra. Fl-aħħarnett, il-flieli tal-moħħ ġew mgħaddsa f'soluzzjoni ta '4% paraformaldehyde u ffissati għal 12-il siegħa qabel ma ġew fotografati. It-tessut normali tal-moħħ intwera bl-aħmar u t-tessut tal-moħħ infart intwera bl-abjad. Uża softwer tal-immaġini biex tanalizza u tikkalkula r-rata ta 'infart ta' kull porzjon tal-moħħ. Rata ta' infart=żona ta' infart/erja totali tal-biċċa tal-moħħ × 100%.

1. 3. 5 Sejbien ta' indikaturi relatati mal-istress ossidattiv

Anestetizza l-far, ħu 4 mL ta' demm ta' l-aorta addominali, alikwot f'tubi EP nodfa u poġġih fi friġġ ta' 4 gradi għal 0. Iċċentrifuga fi 3 500 r/min għal 5 sigħat f'4 gradi għal 15-il minuta, ħu s-supernatant, u finalment żomm is-serum ta '3 firien f'kull grupp. Il-kontenut ta 'malondialdehyde (MDA) u superoxide dismutase (superoxide dismutase) ġew determinati skont il-metodu operattiv tal-kit ELISA. e dismutase,

SOD), attività tal-glutathione peroxidase (glutathione peroxidase, GSH-Px).

1. 3. 6 Sejbien Western blot

Stress ossidattiv u proteini relatati mal-apoptosi tkejlu biex titkejjel l-espressjoni tal-proteini Nrf 2, HO -1, Bcl -2, Bax, u Caspase -3 fit-tessut tal-moħħ. Ġew magħżula tliet firien minn kull grupp, u ttieħed ammont xieraq ta 'kortiċi ċerebrali miż-żona morda, soluzzjoni ta' liżi ġiet miżjuda magħha, u l-konċentrazzjoni tal-proteina ġiet ikkalkulata wara l-estrazzjoni tal-proteini. Wara l-elettroforeżi tal-ġel tal-proteina, ittrasferixxi għall-membrana, imblokka b'soluzzjoni ta 'imblukkar għal 2 sigħat, tlaħliħ, u mbagħad inkubata b'antikorp primarju f'4 gradi matul il-lejl, l-għada, it-TBST tneħħa, laħlaħ, u ġie miżjud antikorp sekondarju għall-inkubazzjoni għal 2 h. Poġġi l-faxxa fil-mira fuq l-analizzatur tal-immaġini biex tanalizza l-valur tal-griż. Ikkalkula l-valur tal-griż tal-istrixxa relattiva, il-valur tal-griż tal-istrixxa relattiva=valur tal-griż tal-istrixxa fil-mira / valur tal-griż tal-istrixxa ta 'referenza interna.

1. 4 Metodi ta' analiżi statistika

Applikazzjoni tad-dejta SPSS 25. 0 Softwer għall-analiżi tad-dejta, u l-grafiċi statistiċi f'dan l-artikolu tfasslu bis-softwer GraphPad Prism 8. Ir-riżultati tad-dejta konsistenti mad-distribuzzjoni normali huma espressi bħala medja ± devjazzjoni standard. Intużat analiżi tal-varjanza b'fattur wieħed għal tqabbil bejn kampjuni multipli, u LSD-t intuża għal tqabbil bejn żewġ kampjuni indipendenti. Test, bi P < 0. 05 jindika li d-differenza hija statistikament sinifikanti.