Effett Ta' Phenylethanol Glycosides Fuq Il-Fattur tat-Tkabbir tat-Trasformazzjoni - Mogħdija ta' Sinjali P1/Smads fil-Fibroblasti taċ-Ċikatriċi Ipertrofiċi tal-Bniedem

Effett ta 'phenylethanoid glycosides fuq il-fattur tat-tkabbir tat-trasformazzjoni - mogħdija ta' sinjalazzjoni p1/Smads fil-fibroblasti taċ-ċikatriċi ipertrofiċi umani

Għal aktar informazzjoni:Ali.ma@wecistanche.com

[Astratt]Għan Ibbażat fuq il-fattur tat-tkabbir tat-trasformazzjoni - pl (TGF - pl)/passaġġ ta' sinjalar Smads biex jiġu investigati l-effetti ta'phenylethanoid glycosidesminncistanche tubulosa(CPhGs) fuq fibroblasts taċ-ċikatriċi ipertrofiċi umani (HSFbs) u l-mekkaniżmu possibbli. Metodi Minn Marzu sa Ġunju 2019, 9 pazjenti b'ċikatriċi ipertrofika wara bum ġew ammessi. Il-fibroblasts ġew iżolati minn ċikatriċi ipertrofika u kkultivati. Tneħħew ċikatriċi ipertrofiċi umani u l-fibroblasti ġew kultivati ​​in vitro. Il-grupp vojt, il-grupp mudell, il-grupp ta 'kontroll pożittiv (TGF - pl flimkien ma' 5 - fluorouracil), u l-grupp sperimentali (TGF - pl plus CPhGs) ġew stabbiliti. L-effetti ta 'phenylethanoid glycosidesminncistanche tubulosaf'konċentrazzjonijiet differenti fuq il-proliferazzjoni ta' HSFbs ġew skoperti mill-assaġġ tal-kit tal-għadd taċ-ċelluli {{0}} (CCK - 8). L-espressjoni ta 'Smad2, Smad3, Smad7, collagen I (COL -1) u collagen HI (COL -3) mRNA ġiet skoperta permezz ta' reverse reverse transcriptase kwantitattiva f'ħin reali - polymerase chain reaction (RT - qPCR) f' kull grupp. L-espressjoni tal-proteini Smad2, Smad3, Smad2 fosforilati (p - Smad2), Smad3 fosforilati (p - Smad3), Smad7, COL -1 u COL {{20}} ġiet skoperta minn Western blotting. Id-dejta tal-kejl ġiet espressa bħala medja ± devjazzjoni standard (Medja ± SD). Gruppi multipli tqabblu bl-użu ta' ANOVA f'direzzjoni waħda. Riżultati Ir-rata ta' inibizzjoni tal-fibroblasti wara t-trattament b'CPhGs f'60, 90, u 120 mg/L għal 48 siegħa kienet (36.87 ±0.06) fil-mija vs (43.52 ±0.04) fil-mija vs (78.11 ±0.03) fil-mija , valur F =45.070, P<0.01. the="" inhibitory="" effects="" of="" cphgs="" on="" fibroblasts="" increased="" with="" the="" increase="" of="" drug="" concentration="" and="" the="" prolonga­tion="" of="" action="" time.="" rt="" -="" qpcr="" results="" showed="" that="" as="" compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" expression="" of="" col="" -1,="" col="" -="" 3,="" smad2,="" smad3="" mrna="" was="" reduced,="" and="" the="" expression="" of="" smad7="" mrna="" was="" in­creased="" in="" the="" experimental="" and="" positive="" control="" groups="" (0.21="" ±="" 0.04="" vs.="" 0.3="" ±0.25="" vs.="" 1.56="" ±="" 0.01,="" f="" value="39.755,"><0.01), (0.55="" ±0.04="" vs.="" 0.27="" ±0.04="" vs.="" 1.66="" ±0.22,="" f="" value="61.991,">< 0.01),="" (0.55="" ±0.03="" vs.="" 0.78="" ±0.76="" vs.="" 1.06="" ±0.15,="" f="" value="17.769,"><0.01), (0.46="" ±0.08="" vs.="" 0.55="" ±="" 0.10="" vs.="" 2.05="" ±="" 0.29,="" f="" value="56.796," p="" <="" 0.01),="" (1.77="" ±="" 0.59="" vs.="" 0.11="" ±="" 0.02="">

{{0}}.04 ± 0.04, valur F=14.780, P < {{21="" }}.05)="" ;="" ir-riżultati="" tal-western="" blotting="" wrew="" li="" l-espressjoni="" tal-proteina="" ta="" 'p-smad2="" u="" p="" -smad3,="" col="" -="" 1,="" col="" -3,="" fil-grupp="" sperimentali="" u="" l-grupp="" ta'="" kontroll="" pożittiv="" kien="" ferm="" aktar="" baxx="" minn="" dak="" fil-grupp="" mudell,="" u="" l-espressjoni="" tal-proteina="" smad7="" kienet="" ogħla="" b'mod="" sinifikanti="" minn="" dik="" fil-grupp="" tal-mudell="" (0.="" 16="" ±="" 0.03="" vs.="" 0.="" 11="" ±="" 0.02="" vs.="" 0.06="" ±="" 0.{{="" 26}}),="" (0.="" 12="" ±="" 0.02="">

{{0}}.07 ± 0.{{10}}1 vs 0.04 ±{ {18}}.{{20}}1, valur F =7.670, P < 0.05), (0.12 ± 0.03 vs 0.15 ± 0.06 vs 0.23 土 0.05, valur F { {24}}.936, P<0.05), (0.27="" ±0.02="" vs.="" 0.08="" ±0.01="" vs.="" 0.05="" ±0.04,="" f="" value="34.291," p="" <="" 0.01),="" (0.33="" ±0.02="" vs.="" 0.16="" ±0.02="" vs.="" 0.17="" ±0.01="" f="" value="16.322,"><0.01). conclusion="" cphg="" inhibited="" hypertrophic="" scar="" fibroblasts="" proliferation="" and="" activation="" via="" blocking="" the="" tgf="" -="" pl/smad="">

[Kliem ewlenin] Phenylethanoid glycosidesminncistanche tubulosa; Fibroblasti taċ-ċikatriċi ipertrofiċi; Fattur tat-tkabbir tat-trasformazzjoni - mogħdija tas-sinjalar pl/Smads

Ikklikkja għal cistanche deserticola ma u prodotti Cistanche

Ċikatriċi ipertrofika (HS) hija marda fibrotika tal-ġilda kkaratterizzata minn proliferazzjoni eċċessiva ta 'fibroblasts (FBS), kif ukoll depożizzjoni ta' matriċi extraċellulari (ECM), li huma ċ-ċelloli ewlenin li jippermettu l-formazzjoni ta 'ċikatriċi, jistgħu inixxu ammonti kbar ta' kollaġen, u il-fattur tat-tkabbir tat-trasformazzjoni (TGF) - mogħdija ta 'sinjalazzjoni P / Smads hija relatata mill-qrib mal-formazzjoni ta' HS.Cistanchehija mediċina tradizzjonali Ċiniża tonika tradizzjonali, li l-estratt tagħha phenylethanoid acetic acid total (cphgs) huwa wieħed mill-ingredjenti ewlenin li jeżerċitaw effetti mediċinali u li għandhom diversi funzjonijiet bijoloġiċi bħal anti-infjammazzjoni, kontra t-tumur, kontra r-radjazzjoni, tneħħija ta 'radikali ħielsa. , Studji eċċ wrew li cphgs jistgħu jinibixxu l-proliferazzjoni taċ-ċelluli stellate tal-fwied, u li jista 'jagħmel dan billi jnaqqas l-espressjoni ta' Smad2, Smad3, Żieda fl-espressjoni ta 'Smad7 b'hekk imblukkata tgf-p / Smads trasduzzjoni tal-mogħdija tas-sinjalar u mbagħad ittardja l-progressjoni tal-fibrożi tal-fwied. L-għan ta 'dan l-istudju kien li josserva l-effetti fuq l-espressjoni ta' ġeni u proteini relatati ma 'fibroblasti ta' ċikatriċi ipertrofiċi umani (hsfbs) ibbażati fuq il-passaġġ ta 'sinjalazzjoni TGF PL / Smad.

materjali u metodi

1. Materjali:Cistanchecphgs inxtraw minn hechen pharmaceutical biotech Co., Ltd., Hetian, iċ-Ċina; Serum bovin fetali nxtara minn Clark Bioscience, l-Istati Uniti; Il-kit tal-għadd taċ-ċelluli TGF PL inxtara minn pepro tech, l-Istati Uniti; Il-kit PCR kwantitattiv tal-fluworexxenza nxtara minn Takara Corporation, il-Ġappun; Il-kits tat-traskrizzjoni inversa nxtraw kollha minn Thermo Fisher Scientific, l-Istati Uniti; L-antikorpi Smad2 / 3, p-Smad2 / 3 inxtraw mit-teknoloġija tas-sinjalar taċ-ċelluli, l-Istati Uniti; Antikorpi għal Smad7, COL-1, COL-3, glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (gap-dh) inxtraw minn abeam (UK); Membrani tal-polyvinylidene fluoride (PVDF) inxtraw minn millipore, l-Istati Uniti.

2. Il-każijiet intgħażlu kollha mid-Dipartiment tal-ortopedija, l-Ewwel Sptar Affiljat tal-Università Medika ta 'Xinjiang, u tliet kampjuni (li kollha kienu definittivament iddijanjostikati bħala ċikatriċi ipertrofika minn patoloġija) intgħażlu b'mod każwali għall-kultura primarja tal-FBS; Dan l-esperiment ġie approvat mill-kumitat tal-etika medika tal-Ewwel Sptar Affiljat tal-Università Medika ta 'Xinjiang (numru ta' approvazzjoni 20170214-71), u nkiseb kunsens infurmat mill-pazjenti u l-familji tagħhom.

3. Cell grouping: randomly divided into blank group; Model group: 5 |ug / L TGF - & 1; Positive control: 5|ug / L TGF PI + 250 mg / L 5-fluorouracil (5-FU); Experimental group: 5|ug / L TGF PL + (60 mg / L, 90 mg / L >, 120 mg / L) cphgso.

4. Il-proliferazzjoni taċ-ċelluli ġiet iddeterminata permezz tal-Kit tal-għadd taċ-ċelluli (CCK-8): ittieħdu hsfbs f'fażi ta' tkabbir logaritmiku, ċelluli minn kull grupp ġew ittrattati kif iddisinjat, u l-valur tal-assorbiment ta' kull bir ta' kull grupp ġie mmonitorjat b'mod sekwenzjali f' Wavelength ta' 450 nm bl-użu ta' microplate reader f'24, 48 u 72 siegħa.

5. Sejbien ta 'espressjoni ta' mRNA permezz ta 'RT qPCR: inġabru hsfbs minn kull grupp wara 48 siegħa ta' intervent, RNA ġie estratt u ġie determinat l-ammont ta 'espressjoni ta' mRNA.

6. L-espressjoni tal-proteina ġiet iddeterminata b'analiżi Western blot. Proteina ċellulari totali ġiet estratta 48 siegħa wara t-trattament minn kull grupp biex tiskopri l-espressjoni ta 'kull proteina.

7. Metodi statistiċi: is-softwer statistiku SPSS 22.0 intuża biex janalizza, u d-dejta tal-kejl ġiet espressa bħala medja ± devjazzjoni standard (medja ± SD), u ntużat analiżi one-way tal-varjanza għal tqabbil bejn gruppi multipli, u P <0.05 tqieset statistikament sinifikanti.

Riżultati

Ir-riżultati tal-proliferazzjoni taċ-ċelluli wrew li 60, 9{{10}}, u 120 mg / L cphgs għal 48 siegħa fuq fibroblasti, ir-rata ta' inibizzjoni kienet [(36.87 ± 0.06) fil-mija: (43.52) ±0.04) fil-mija :(78.11 ±0.03) fil-mija ,F=45.073,P< 0.01="" ],90="" mg/l="" cphgs.="" 24h-28h="" was="" [(26.29="" ±0.04)%="" :(43.52="" ±0.04)%="" :(64.11="" 土="" 0.03)%,f=""><0.01]. it="" indicated="" that="" the="" inhibition="" rate="" of="" cphgs="" on="" hsfbs="" was="" gradually="" elevated="" with="" time="" extension="" and="" increasing="" concentration,="" showing="" a="" proportional="">

Tqabbil tal-espressjoni tal-mRNA CoL-I, COL-3, Smad2, u Smad3 f'kull grupp: meta mqabbla mal-grupp mudell, kemm il-gruppi ta' kontroll pożittiv kif ukoll sperimentali jistgħu jnaqqsu l-fattur tat-tkabbir tat-trasformazzjoni - indott CoL-I, COL{{ 6}}, espressjoni ta 'mRNA Smad2, u Smad3, u tippromwovi espressjoni ta' mRNA Smad7, b'differenzi statistikament sinifikanti. (1.56 ±0.01:0. 3{0 ± 0.25: 0.21 ±0.04,F=39. 755, P<0.01; 1.66="" ±0.="" 22="" :="" 0.="" 27="" ±0.04="" :="" 0.="" 55="" ±0.="" 04.f="61." 991="" ,p=""><0. 01;="" 1.="" 06="" ±="" 0.15="" 比="" 0.="" 78="" ±="" 0.="" 76="" 比="" 0.="" 55="" ±="" 0.="" 03,="" f="17.769" ,p=""><0.01 ;2.05="" ±="" 0.29="" :="" 0.55="" ±="" 0.10="" :="" 0.46±="" 0.08,f=""><0.01 ;0.04="" ±0.04="" :="" 0.11="" ±0.02="" :="" 1.77±0.="" 59,f="14."><0.>

Tqabbil ta 'p-Smad2, p-smad3, col-l, COL-3 f'kull grupp: meta mqabbel mal-grupp vojt, l-espressjoni tal-proteina ta' p-Smad2, col-l fil-grupp mudell żdiedet, filwaqt li dik ta ' Smad7 naqas; Meta mqabbel mal-grupp mudell, il-grupp ta 'kontroll pożittiv jista' jirregola l-espressjoni tal-proteina ta 'p-smad3, COL-1, COL-3, u l-grupp sperimentali wera effett inibitorju fuq l-espressjoni elevata tal-proteini ta' p- Smad2, p-smad3, kol - 3. L-espressjoni ta' COL-3 ġiet inibita fi gradi varji, filwaqt li l-espressjoni ta' Smad7 żdiedet relattivament fiż-żewġ gruppi, u l-valuri ta' espressjoni tal-proteini ta' p-Smad2, p-smad3, Smad7, col-l, COL{{27} }} fil-grupp vojt, il-grupp ta' kontroll pożittiv, u l-grupp sperimentali kienu (0.{{30}}9 ±0.04,{ {38}}.16 ±{{40}}.03,{0.11 ± 0.{{5{0}}2 ,0.{06 ± 0.00),(0.07 ±0.03,0.12 ± 0.02,0.07 ± 0.01,0. 04 ±0. 01,F { {60}}.670,P<0. 05),="" (0.="" 22="" ±0.05,="" 0.12="" ±0.03,0.15="" ±0.06,0.23="" ±="" 0.05,="" f="3.936,">< 0.05),(0.19="" ±0.02,0.27="" ±="" 0.02,0.08="" ±0.01,0.05="" ±="" 0.04,f=""><0.01),(0.21 ±0.04.0.="" 33="" ±0.02,="" 0.16="" ±0.02,0.17="" ±0.01,f=""><>

Diskussjoni

HS huwa riżultat inevitabbli tat-tiswija tat-tessuti, u l-mekkaniżmu ta 'okkorrenza tiegħu prinċipalment iperproliferazzjoni FBS, degradazzjoni insuffiċjenti u l-bqija jwasslu għall-formazzjoni u l-iżvilupp ta' HS. Tgf-p1 huwa involut b'mod wiesa 'f'mard ċellulari, proliferazzjoni anormali tat-tessuti u differenzjazzjoni u jkompli matul il-fejqan tal-feriti; Jeżerċita l-effetti tiegħu prinċipalment permezz tal-mogħdija ta 'sinjalazzjoni tgf-p / Smads, li fiha l-fosforilazzjoni ta' proteini Smad2 / 3 twassal għal espressjoni akbar ta 'proteini fibroġeniċi intraċellulari u extraċellulari, tippromwovi l-produzzjoni tal-kollaġen, u taċċellera l-progressjoni tal-fibrożi; Smad7, bħala regolatur negattiv, jista 'jipprevjeni din il-mogħdija permezz ta' interazzjoni ma 'riċetturi tgf-p1 attivati, u b'hekk tnaqqas is-sintesi tal-fibra tal-kollaġen; Għalhekk jew iż-żieda tal-espressjoni Smad7 jew l-inibizzjoni tal-espressjoni Smad2 / 3 tista 'tipprevjeni l-iżvilupp ta' ċikatriċi ipertrofika.

Dan l-istudju applika Cistanche cphgs għal HS, marda fibrotika tal-ġilda, u sab li diversi dożi ta 'cphgs inibixxu l-proliferazzjoni ta' hsfbs indotti minn tgf-p1; Barra minn hekk, 90m & / L cphgs inibixxa s-sinjalar tal-mogħdija billi jippromwovi l-espressjoni Smad7 u jnaqqas l-espressjoni Smad2 / 3 kemm fil-livelli tal-espressjoni tal-ġeni kif ukoll tal-proteini, u naqqas il-produzzjoni ta 'CoL-I, COL-3, li mbagħad inibixxi l-progressjoni tal-HS. Ir-riżultati tagħna kkonfermaw li cphgs inibixxu l-produzzjoni tal-kollaġen billi jintervjenu fl-espressjoni ta 'proteini relatati mal-mogħdija ta' sinjalazzjoni tgf-p / Smads taħt stimulazzjoni tgf-p1. Ir-riżultati tal-istudju preżenti wrew li Cistanche cphgs inibixxi l-proliferazzjoni u naqqas b'mod effettiv is-sekrezzjoni tal-kollaġen ta 'fibroblasti ta' ċikatriċi ipertrofiċi permezz tal-mogħdija ta 'sinjalazzjoni tgf-p / Smads.