Echinacoside Tippromwovi l-Proliferazzjoni taċ-Ċelloli Epiteljali Tubulari Renali Umani Billi Imblokka l-Passaġġ tas-Sinjali NF-κB medjat minn HBX/TREM2
Mar 06, 2022
Kuntatt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com
YuFan ZHanG, QinFanG Wu, liMin ZHonG, donGWei GonG
Astratt.
Il-proteina tal-virus X tal-epatite B (HBX) hija meħtieġa għar-replikazzjoni tal-HBV u għandha rwol fil-progressjoni tal-epatite fil-bnedmin. Madankollu, il-funzjoni sottostanti ta 'HBX waqt glomerulonefrite kronika indotta minn HBV (HBV-Gn) mhix magħrufa. (echinacoside minn cistanche)(ecH) huwa phenylethanoid glycoside mill-ġeneru Cistanche, li jippossjedi antiapoptosi qawwija u attivitajiet newroprotettivi. fl-istudju preżenti, il-funzjoni ta 'HBX u r-relazzjoni bejn HBX u ecH fiċ-ċelloli epiteljali tubulari tal-kliewi umani (rTecs; linja taċ-ċelluli HK-2) ġew esplorati. Pcr u analiżi kwantitattivi tat-traskrizzjoni inversa u western blot intużaw biex jikkwantifikaw il-livelli ta' espressjoni ta' mRNA u proteina ta' HBX fiċ-ċelloli HK-2, rispettivament. L-assaġġ tal-Kit tal-għadd taċ-ċelluli-8 sar biex janalizza l-proliferazzjoni taċ-ċelluli. Intużat analiżi taċ-ċitometrija tal-fluss biex tiddetermina r-rata ta 'apoptożi. HBX wera effetti antiproliferattivi u proapoptotiċi fiċ-ċelluli HK-2 u kien assoċjat b'mod pożittiv ma' riċettur ta' attivazzjoni espress fuq l-espressjoni taċ-ċellula majelojde 2 (TreM2). Barra minn hekk, l-ECH ħarbat il-funzjoni ta' HBX fiċ-ċelloli HK-2, li jiffunzjona bħala suppressor tal-HBX. Barra minn hekk, inibitur speċifiku NF-κB, PdTc, intuża biex jeżamina aktar ir-relazzjoni bejn HBX u nF-κB. Ir-riżultati ssuġġerew li nF-κB kien involut fil-mogħdija ta 'sinjalazzjoni HBX/TreM2 u espressjoni TreM2 regolata b'mod negattiv f'RTECS. L-istudju preżenti pprovda għarfien ġdid dwar il-funzjoni tal-HBX, u indika wkoll il-valur potenzjali tal-ECH bħala aġent terapewtiku għall-HBV-Gn.
Introduzzjoni
Il-virus tal-epatite B (HBV) huwa virus Hepadnaviridae, li jwassal għal epatite akuta u kronika fil-bnedmin (1). L-HBV, mhux biss jikkawża infezzjoni persistenti jew temporanja fil-fwied iżda wkoll jinfetta tessut extraepatiku, inkluż il-frixa, il-kanal tal-bili, is-sistema limfojde u l-kliewi (2). Barra minn hekk, l-infezzjoni HBV hija assoċjata mill-qrib ma 'glomerulonefrite kronika (HBV-Gn); madankollu, il-mekkaniżmi molekulari ta 'HBV matul HBV-Gn mhumiex kompletament mifhuma (3,4).
Il-proteina regolatorja tal-virus X tal-epatite B tal-HBV (HBX) hija meħtieġa għar-replikazzjoni tal-HBV (5,6). għadd ta' studji rrappurtaw li l-HBX jippromwovi l-proliferazzjoni taċ-ċelluli waqt epatokarċinoma assoċjata mal-infezzjoni tal-HBV (7-9). Iċ-ċelloli epiteljali tubulari tal-kliewi tal-bniedem (rTecs) huma parti ewlenija mill-interstizju tubulari tal-kliewi u għandhom rwol attiv fl-infjammazzjoni tal-kliewi (10). L-apoptosi rTec hija assoċjata mill-qrib mal-funzjoni ħażina tal-interstizju tubulari, li sussegwentement twassal għall-progressjoni ta 'HBV-Gn (10). HBX huwa primarjament espress fiċ-ċelloli rTec u jikkawża apoptożi rTec u leżjonijiet fit-tubi tal-kliewi f'pazjenti b'HBV-Gn (11,12). Barra minn hekk, HBX ġie rrappurtat li jrażżan il-proliferazzjoni ta 'rTecs tal-firien (13), u l-espressjoni żejda ta' HBX taċċellera l-progressjoni taċ-ċiklu taċ-ċellula minn G1 għal fażi S f'rTecs primarji, li twassal għal arrest taċ-ċiklu taċ-ċelluli fil-fażi S (14). Għalhekk, l-identifikazzjoni ta 'inibitur HBX tista' tipprovdi terapewtika ġdida għall-HBV-Gn. Madankollu, in-netwerk molekulari preċiż ta 'HBX fl-rTecs tal-bniedem mhuwiex mifhum kompletament.(echinacoside minn cistanche)(ecH) huwa kompost naturali estratt minnCistanchepjanti, li juri effetti antiapoptotiċi u anti-infjammatorji (15,16). Studju preċedenti rrapporta li ecH jinduċi l-proliferazzjoni u jipprevjeni l-apoptosi taċ-ċelloli epiteljali intestinali (17). Barra minn hekk, ecH ġie rrappurtat li taċċellera r-riġenerazzjoni tal-għadam billi żżid il-proliferazzjoni taċ-ċelluli osteoblasti (18). ecH jista 'wkoll inaqqas ir-replikazzjoni tal-HBV, l-espressjoni tal-antiġen u l-infjammazzjoni fiċ-ċelloli epiteljali intestinali tal-firien (16,19). Madankollu, l-effett bijoloġiku ta 'ecH fuq rTecs ma ġiex spjegat għal kollox.
L-espressjoni żejda TreM2 ippromwoviet il-proliferazzjoni ta 'ċelluli glijoma (22). B'kuntrast, il-knockdown TreM2 inaqqas it-traslokazzjoni ta 'nF-κB għan-nukleu f'ċelluli deġenerattivi tan-nukleu pulposus tal-bniedem (23). Barra minn hekk, TreM2 ġie identifikat bħala mira terapewtika ġdida għad-deġenerazzjoni tad-diska intervertebrali tal-bniedem (23). Madankollu, il-funzjoni bijoloġika ta' TreM2 f'rTecs umani ma ġietx irrappurtata. fl-istudju preżenti, l-espressjoni żejda ta 'HBX (oeHBX) ġiet indotta f'rTecs umani (linja taċ-ċelluli HK-2) u sussegwentement, l-effett ta' ecH(echinacoside minn cistanche) fuq ċelluli oeHBX trasfettati ġie investigat. L-għan tal-istudju preżenti kien li jinvestiga l-funzjonijiet tal-HBX u l-valur potenzjali tal-ecH bħala aġent terapewtiku effettiv għall-HBV-Gn.
Materjali u metodi
Ċellula kultura.Il-linja taċ-ċelluli rTec tal-bniedem HK-2 inxtrat minn Shanghai Yaji Biotechnology co., Ltd. Iċ-ċelluli HK-2 ġew ikkultivati f'midja DME/F12 (cat. nru SH30023.01B; Hyclone; cytiva) supplimentati b'10 fil-mija serum bovin tal-fetu (kat. nru. 16000-044; Gibco; Thermo Fisher Scientific, inc. .), 2 mM l-glutamina u 1 fil-mija penicillin/streptomycin (cat. nru. P1400-100; Beijing Solarbio Science & Technology co., Ltd.) f'37˚C b'5 fil-mija CO2.
RNA iżolament u reverse traskrizzjoni-kwantitattiva PCR (RT-qPCR).L-rna totali ġie estratt minn ċelluli HK-2 bl-użu ta' Trizol® (nru tal-kat. 1596 -026; Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, inc.), skont il-protokoll tal-manifattur. L-RNA totali ġie traskritt b'lura f'cDNA bl-użu tal-kit ta 'Sinteżi ta' cDNA First-Strand skont il-protokoll tal-manifattur (cat. nru K1622; Thermo Fisher Scientific, Inc.). qPCR twettqet bl-użu ta’ taħlita minn qabel ta’ SYBr-Green skont il-protokoll tal-manifattur (cat. nru. K0223; Thermo Fisher Scientific, Inc.) fuq ditekter f’ħin reali ABI-7300 (Applied Biosystems; Thermo Fisher Scientific, Inc.). Il-kundizzjonijiet tal-PCR kienu: 95˚C għal 10 min segwiti minn 40 ċiklu ta’ 95˚C għal 15 sek, 60˚C għal 45 sek. Kienu meħtieġa tliet ripetizzjonijiet għal kull reazzjoni. Il-pari ta' primers li ġejjin intużaw għall-qPCR: HBX 'il quddiem, 5'-GGcTGcTaGGTTGTacTG-3' u lura, 5'-caGaGGTGaaGcGaaGTG -3'; TreM2 'il quddiem, 5'-TGGcacTcTcaccaTTacG-3' u lura, 5'-ccTccc aTcaTcTTccTTcac-3'; u GaPdH 'il quddiem, 5'-AAT cccaTcaccaTcTTc-3' u lura, 5'-aGGcTGTTG TcaTacTTc-3'. Il-livelli ta' mRNA ġew ikkwantifikati bl-użu tal-metodu 2-ΔΔCq u normalizzati għall-ġene ta' referenza internaGAPDH (24).
Espressjoni żejda u knockdown.Biex jinduċi l-espressjoni żejda ta 'HBX u TreM2, is-sekwenzi ta' cDNA HBX jew TreM2 full-length ġew imdaħħla fil-vettur plVX-puro (laboratorji cleantech, inc.) b'diġestjoni doppja (Hindiii uEcoRI). Sussegwentement, il-plasmid rikombinat (1.5 µg) ġie trasfettat f'ċelluli HK-2 (2x105). Il-plażmid finta (vettur vojt, 1 µg) ġie trasfettat b'mod temporanju f'ċelluli HK-2 (2x105) bħala kontroll negattiv (oenc) bl-użu ta' lipofectamine® 2000 (nru tal-kat 11668-027, Invitrogen, Thermo Fisher Scientific, inc.). ecH(echinacoside minn cistanche)(kat. nru. 82854-37-3; Biopurify Phytochemicals, ltd.) ġie maħlul f'DMSO (kat. nru. d2650; Sigma-Aldrich; Merck KGaa) fil-konċentrazzjoni ta' 1, 2.5, 5, 10, 20 u
50 mg/l rispettivament; u miżjuda mal-kultura ta' ċelluli oeHBX jew oeTreM2 trasfettati. L-esperimentazzjoni sussegwenti bdiet 48 siegħa wara.
Biex twaqqa 'l-espressjoni TreM2, ġew sintetizzati tliet (si)RNAs ta' interferenza żgħar (siTreM2-1, siTreM2-2 u siTreM2-3; 20 µM) immirati għal TreM2 (Shanghai Majorbio Bio-Pharm Technology co .ltd.) u sussegwentement trasfettati f'ċelluli HK-2 (2x105) bl-użu ta' lipofectamine® 2000 skont il-protokoll tal-manifattur (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.). Sekwenza siRNA scrambled mhux speċifika (5'uucuccGaacGuGucacGu3, 25 nM) kontroll si-negattiv (nc) intuża bħala l-kontroll negattiv. Il-locus u s-sekwenzi mmirati tas-sirnas TreM2 huma pprovduti fit-Tabella Si. L-esperimentazzjoni sussegwenti twettqet 48 siegħa wara.
Punent blotting.Proteina totali ġiet estratta miċ-ċelloli HK-2
bl-użu ta' buffer ta' liżi RIPA (nru tal-kat BYl40825; Jrdun Biotech Co., Ltd.). Il-proteina totali ġiet ikkwantifikata bl-użu tal-kit tal-assaġġ tal-Aċidu Bicinchoninic (cat. nru PICPI23223; Thermo Fisher Scientific, inc.) skont il-protokoll tal-manifattur u 20 µg proteina/korsija ġew separati permezz ta 'SDS-PaGe fuq ġel ta' 15 fil-mija. Id-densitometrija tal-kampjuni ġiet iddeterminata bl-użu ta' microplate reader (dnM-9602, Pulangxin). Sussegwentement, il-proteini separati ġew trasferiti fuq membrana PVDF. Wara l-imblukkar b'5 fil-mija ħalib xott bla xaħam għal siegħa f'temperatura tal-kamra, il-membrana ġiet inkubata b'antikorpi primarji (Tabella SII) f'4˚C matul il-lejl u re-inkubata bl-antikorp sekondarju kontra l-ġrieden igG (1:1, 000, kat nru a0216, Beyotime Institute of Biotechnology) għal siegħa f'37˚C. Il-meded tal-proteini immunoreattivi ġew viżwalizzati bl-użu ta 'sistema ecl (cytiva). Il-blots saru fi tliet kopji.GAPDHu H3 intużaw bħala l-kontrolli tat-tagħbija għall-proteini ċitoplasmiċi u nukleari, rispettivament.
Riżultati
ECH (echinacoside minn cistanche)irażżan il-funzjoni ta HBX fi HK-2 ċelloli.Biex tevalwa
il-funzjoni ta' HBX, espressjoni żejda ta' HBX ġiet indotta fiċ-ċelloli HK-2. Il-livelli relattivi ta 'mrna u proteina ta' HBX kienu rregolati b'mod sinifikanti f'ċelloli oeHBX meta mqabbla ma 'ċelloli oenc (Fig. 1a u B). Sussegwentement, ċelluli oeHBX ġew ikkultivati b'konċentrazzjonijiet differenti ta 'ecH (1, 2.5, 5, 10, 20 u 50 mg/l; e1, e2.5, e5, e10, e20 u e50, rispettivament). L-espressjoni żejda ta 'HBX naqqset b'mod sinifikanti l-proliferazzjoni ta' ċelluli HK-2, u dan it-tnaqqis kien imreġġa 'lura minn ecH b'mod dipendenti fuq id-doża f'24 u 48 siegħa (Fig. 1c).
Barra minn hekk, ir-rata ta 'proliferazzjoni taċ-ċelluli oeHBX ma wriet l-ebda differenza sinifikanti meta mqabbla ma' ċelloli ttrattati bl-E1 (Fig. 1c). B'kuntrast, it-trattament e10 żied b'mod sinifikanti r-rata ta 'proliferazzjoni ta' ċelluli oeHBX meta mqabbel ma 'trattament E20 u E50 li ma wera l-ebda differenza sinifikanti (Fig. 1c). Għalhekk, l-effett ta' ecH fuq l-apoptożi ġie eżaminat f'ċelluli ttrattati e2.5, e5 u e10-. L-espressjoni żejda ta 'HBX żiedet b'mod sinifikanti l-apoptożi ta' ċelluli HK-2, u r-rata ta 'apoptożi ta' ċelluli oeHBX naqset bit-trattament ecH b'mod dipendenti fuq id-doża (Fig. 1d). b'mod ġenerali, ir-riżultati ssuġġerew li ecH inibixxi l-funzjoni ta 'HBX fiċ-ċelloli HK-2 b'mod dipendenti mid-doża.
TREM2 espressjoni huwa inibit minn ECH(echinacoside minn cistanche) fi trasfettat oeHBX
ċelloli.rT-qPcr u western blotting intużaw biex jeżaminaw il-livelli relattivi ta 'mrna u espressjoni tal-proteini ta' TreM2 fiċ-ċelloli oeHBX, rispettivament. TreM2 mrna u l-livelli ta 'espressjoni tal-proteini kienu rregolati b'mod sinifikanti fiċ-ċelloli oeHBX meta mqabbla ma' ċelloli oenc (Fig. 2a u B). Madankollu, ecH naqqas il-livelli ta 'espressjoni ta' TreM2 f'ċelluli oeHBX trasfettati b'mod dipendenti mid-doża (Fig. 2a u B). Għalhekk, ir-riżultati ssuġġerew li l-espressjoni HBX kienet assoċjata b'mod pożittiv mal-espressjoni TreM2, u indikaw aktar l-effett soppressiv ta 'ecH fuq HBX fiċ-ċelloli HK-2.
Knockdown u espressjoni żejda ta TREM2 fi HK-2 ċelloli.Biex tiġi vvalutata aktar il-funzjoni ta 'TreM2, it-tnaqqis u l-espressjoni żejda ta' TreM2 ġew indotti f'ċelloli HK-2 bl-użu ta 'interferenza rna u vettur lentivirali, rispettivament. Għall-assaġġ knock-down, tliet siRNAs immirati lejn il-ġene umanTREM2(siTreM2-1, siTreM2-2 u siTreM2-3) ġew trasfettati f'ċelloli HK-2, u siRNA mhux speċifiku ntuża bħala kontroll negattiv (sinc). it-tliet sirnas TreM2 kollha knocked down l-espressjoni endoġena ta 'TreM2 fiċ-ċelloli HK -2 (Fig. 3a u B). Madankollu, l-inqas livelli relattivi ta' TreM2 mrna u espressjoni tal-proteini ġew osservati fiċ-ċelloli siTreM2-1 u siTreM2-2-trasfettati (Fig. 3a u B), għalhekk, siTreM2-1 u siTreM{{13 }}ċelluli trasfettati ġew magħżula għal esperimentazzjoni sussegwenti. Għall-esperimenti ta' espressjoni eċċessiva, inbena plasmid li kien fih is-sekwenza ta' TreM2cdna tal-bniedem fit-tul sħiħ u sussegwentement ġie trasfettat f'ċelluli HK-2 (oeTreM2). a
mock plasmid serva bħala kontroll negattiv (oenc). Il-livell ta 'espressjoni TREM2 żdied b'mod sinifikanti fiċ-ċelloli oeTREM2 meta mqabbla ma' ċelloli oenc (Fig. 3c u d). Għalhekk, iċ-ċelloli oeTreM2 intużaw għal esperimentazzjoni sussegwenti.
TREM2 sajlenser jonqos il apoptożi ta oeHBX ċelloli.Il-profil tal-apoptożi taċ-ċelloli oeHBX trasfettati b'siTREM2 jew sinc ġie vvalutat. Ir-rata ta 'apoptożi ta' oeHBX flimkien ma 'ċelluli sinc kienet ogħla b'mod sinifikanti meta mqabbla ma' ċelloli miftuħa. Madankollu, ir-rata ta 'apoptożi naqset b'mod sinifikanti fiċ-ċelloli oeHBX flimkien ma' siTreM2-1 jew siTreM2-2 meta mqabbla ma 'ċelluli oeHBX flimkien ma' sinc (Fig. 4a). Ir-riżultati ssuġġerew li knockdown TreM2 inibixxi l-funzjoni ta 'HBX waqt l-apoptosi taċ-ċelluli HK-2.
Survivin jappartjeni għall-inibitur ta 'familja ta' proteini apoptożi, li jinibixxi l-attività apoptotika u jrażżan il-mewt taċ-ċelluli (25). Targeting Survivin ġie identifikat bħala approċċ ġdid għat-trattament tal-karċinoma taċ-ċelluli renali (26). nF-κB huwa wkoll inibitur tal-apoptożi li għandu rwol fil-proċessi tat-tumur antiapoptotiku (27). Barra minn hekk, l-attivazzjoni ta 'caspase3 hija assoċjata mill-qrib ma' apoptożi (28). fl-istudju preżenti, il-kontenut ta 'proteini ta' TreM2, Survivin u caspase3 cleaved fiċ-ċelloli HK-2 ġie kkwantifikat. Il-livell ta' espressjoni TREM2 naqas b'mod sinifikanti f'ċelluli oeHBX flimkien ma' siTreM2-1/2 meta mqabbla ma' ċelluli oeHBX flimkien ma' sinc (Fig. 4B). Il-livell ta' espressjoni ta' Survivin żdied b'mod sinifikanti fiċ-ċelloli oeHBX flimkien ma' siTreM2-1/2 meta mqabbla maċ-ċelloli oeHBX. barra minn hekk, il-livell ta 'espressjoni ta' caspase3 cleaved naqas b'mod sinifikanti f'ċelluli oeHBX flimkien ma 'siTreM2-1/2 meta mqabbla ma' ċelluli oeHBX flimkien ma 'sinc (Fig. 4B). Barra minn hekk, oeHBX naqqas b'mod sinifikanti t-traslokazzjoni ta 'NF-κB għan-nukleu, u t-trasfezzjoni ta' siTREM2-1/2 żiedet b'mod sinifikanti t-traslokazzjoni nukleari ta 'nF-κB (Fig. 4B). Meħuda flimkien, ir-riżultati ssuġġerew li TreM2 kien fattur downstream ta 'HBX fiċ-ċelloli HK-2, għalhekk, HBX jista' jippromwovi l-apoptożi billi jirregola l-espressjoni TreM2 f'rTecs umani.
TREM2 espressjoni żejda irażżan il traslokazzjoni taNF-κB biex il nukleu fi HK-2 ċelloli.L-effett ta 'ech(echinacoside minn cistanche)fuq ċelluli oeTreM2-trasfettati ġie analizzat. L-espressjoni żejda TreM2 ippromwoviet l-apoptożi taċ-ċelloli HK -2 (Fig. 5a). L-apoptosi taċ-ċelluli oeTREM2 naqset b'mod sinifikanti bit-trattament ECH (E10; Fig. 5A). Barra minn hekk, ECH naqqas b'mod sinifikanti l-espressjoni ta 'TreM2 fiċ-ċelloli oeTreM2. L-espressjoni żejda TREM2 naqqset b'mod sinifikanti l-livelli ta 'espressjoni ta' Survivin, madankollu, dan it-tnaqqis fl-espressjoni kien imreġġa 'lura minn ecH. barra minn hekk, il-livelli ta 'espressjoni tal-proteini ta' caspase3 cleaved żdiedu b'mod sinifikanti fiċ-ċelloli oeTreM2 meta mqabbla ma 'ċelloli oenc; effett li kien imnaqqas b'mod sinifikanti bit-trattament ECH. Barra minn hekk, ech ippromwoviet it-traslokazzjoni ta 'nF-κB għan-nukleu fiċ-ċelloli oeTreM2 (Fig. 5B). Meħuda flimkien, ir-riżultati indikaw li ecH irażżan ukoll il-funzjoni ta 'TreM2 fiċ-ċelloli rTec umani.
HBXfunctions huma mrażżan minn il NF-κB inibitur PDTCfi uman RTECs.Biex tivvaluta aktar ir-relazzjoni bejn
Ċelloli HBX u nF-κB, HK-2 ġew ikkultivati b'inibitur speċifiku nF-κB, PdTc (10 µmol/l; P10). Ir-rata ta 'apoptosi taċ-ċelluli taċ-ċelloli oeHBX żdiedet b'mod sinifikanti meta mqabbla ma' ċelloli oenc (Fig. 6a). Madankollu, iċ-ċelloli oeHBX flimkien ma 'PdTc wrew rata ta' apoptożi miżjuda b'mod sinifikanti meta mqabbla maċ-ċelloli oeHBX. Barra minn hekk, l-mRNA relattiv u l-livelli ta 'espressjoni tal-proteini ta' TreM2 naqsu f'ċelloli oeHBX flimkien ma 'ċelluli PdTc meta mqabbla ma' ċelloli oeHBX (Fig. 6B). Għalhekk, ir-riżultati
issuġġerixxa li nF-κB irregola b'mod negattiv l-espressjoni TreM2 f'ċelluli trasfettati b'oeHBX.
NF-κB inibitur PDTC irażżan TREM2 promotur attività fi oeHBX ċelloli.reporter tal-luċiferażi (pGl3-enhancer-luc2) li fih is-sekwenza promotur tat-tip selvaġġ ta' TreM2 (pGl{3-enhancer-luc{2-pTreM2) ġie mibni u sussegwentement trasfettat f'oenc , oeHBX u oeHBX flimkien ma' ċelluli kkultivati P10.
L-attività tal-luċiferażi tal-vector reporter li fih il-promotur TREM2 tat-tip selvaġġ żdiedet b'mod sinifikanti fiċ-ċelloli oeHBX meta mqabbla maċ-ċelloli oenc. Madankollu, PdTc soppressa b'mod sinifikanti l-attività luciferase tar-reporter fiċ-ċelloli oeHBX (Fig. 7). b'mod ġenerali, ir-riżultati indikaw li PdTc inibixxi t-traskrizzjoni ta 'TreM2 billi irażżan l-attività promotur ta' TreM2 fiċ-ċelloli oeHBX.
Diskussjoni
HBX huwa primarjament espress f'rTecs ta 'pazjenti b'HBV-Gn, u jiffunzjona bħala determinant tal-patoġenesi virali (11,29). Għalhekk, iż-żieda fl-għarfien tal-funzjoni tan-netwerk tal-molekula HBX hija pass kritiku fl-iżvilupp ta 'approċċ ġdid għat-trattament ta' HBV-Gn. L-għan tal-istudju preżenti kien li jeżamina aktar il-funzjoni tal-HBX u li jesplora n-netwerk molekulari potenzjali tiegħu f'rTecs umani.
HBX jinibixxi l-proliferazzjoni ta 'rTecs (11). fl-istudju preżenti, ġew identifikati funzjonijiet ta 'antiproliferazzjoni u pro-apoptożi ta' HBX f'RTECs umani, li jissuġġerixxu li HBX irażżan l-iżvilupp ta 'rTecs umani. studju preċedenti indika li ecH(echinacoside minn cistanche)jinibixxi r-replikazzjoni tal-HBV u l-espressjoni tal-antiġenu (19). fl-istudju preżenti, ecH(echinacoside minn cistanche)it-trattament ħarbat il-funzjoni ta' HBX fiċ-ċelloli HK-2, għalhekk, HBX jista' jiġi affettwat minn ecH fiċ-ċelloli HK-2.
RAPPORTI TAL-MEDIĊINA Molekulari 22: 1137-1144, 2020 1143
Barra minn hekk, ir-riżultati ssuġġerew li ecH(echinacoside minn cistanche)jista' jservi bħala aġent terapewtiku potenzjali għall-HBV-Gn.
TreM2 huwa riċettur immuni intrinsiku li għandu rwol fir-rispons infjammatorju (30). Fl-istudju preżenti, l-espressjoni HBX kienet assoċjata b'mod pożittiv mal-espressjoni TreM2 f'RTECS tal-bniedem. Barra minn hekk, il-knockdown TREM2 naqqas b'mod sinifikanti r-rata ta' apoptożi taċ-ċelloli oeHBX, u ecH(echinacoside minn cistanche)it-trattament naqqas l-effett ta' oeTreM2 fuq l-apoptosi taċ-ċelluli. Meħuda flimkien, dawn ir-riżultati ssuġġerew li TreM2 kien immirat minn HBX fiċ-ċelloli HK-2. Għalhekk, ecH(echinacoside minn cistanche)jista 'jinibixxi l-apoptożi ta' rTecs umani billi jimblokka l-attività tal-mogħdija tas-sinjalar HBX/TreM2.
Rapport preċedenti wera li nF-κB, mhux biss għandu rwol fl-apoptożi taċ-ċelluli iżda huwa wkoll involut fir-regolazzjoni tar-risponsi immuni u l-infjammazzjoni (31). Barra minn hekk, TreM2 huwa medjat mill-microRNA sensittivi għal nF-κB-34a waqt il-marda ta 'Alzheimer u d-deġenerazzjoni makulari (32,33). fl-istudju preżenti, ir-rata apoptotika taċ-ċelloli oeHBX żdiedet b'mod sinifikanti fil-preżenza ta 'PdTc. Sa fejn nafu, l-istudju preżenti ssuġġerixxa għall-ewwel darba li, l-inibitur NF-κB PdTc irażżan l-attività promotur ta 'TreM2. Barra minn hekk, ir-riżultati ssuġġerew li TreM2 irregola b'mod negattiv it-traslokazzjoni ta 'nF-κB għan-nukleu fiċ-ċelluli HK-2, iżda kien assoċjat b'mod pożittiv ma' livelli ta 'espressjoni ta' caspase3 cleaved. TreM2 kellu rwol oppost fiċ-ċelloli HK-2 għar-rwol tiegħu fiċ-ċelluli tal-pulposus tan-nukleu deġenerattiv uman u l-glioma (22,23). Għalhekk, l-istudju preżenti ssuġġerixxa li TreM2 jista 'jkollu funzjonijiet differenti f'tipi differenti ta' ċelluli umani.
Meħuda flimkien, l-istudju preżenti, mhux biss indika li nF-κB kien komponent ġdid tal-mogħdija ta 'sinjalazzjoni HBX/TreM2 iżda ssuġġerixxa wkoll li nF-κB jirregola b'mod negattiv l-espressjoni TreM2 fl-rTecs tal-bniedem. Madankollu, il-limitazzjonijiet ewlenin ta 'l-istudju preżenti kienu n-nuqqas ta'fi vivoesperimenti u data klinika. Għalhekk, aktarfi vivou studji kliniċi huma meħtieġa biex jikkonfermaw is-sejbiet tal-istudju preżenti.
fl-istudju preżenti, il-funzjoni ta 'ecH(echinacoside minn cistanche)ġie investigat u r-riżultati ssuġġerew l-effetti potenzjali tal-ecH(echinacoside minn cistanche)fuq il-mogħdijiet tas-sinjalar fl-rTecs tal-bniedem. Barra minn hekk, l-istudju preżenti saħħaħ l-għarfien eżistenti tal-funzjoni bijoloġika ta 'ecH fiċ-ċelloli rTec umani u ssuġġerixxa wkoll il-potenzjal tiegħu bħala aġent terapewtiku ġdid għall-HBV-Gn.
Referenzi
1. Karayiannis P: Virus tal-epatite B: viroloġija, bijoloġija molekulari, ċiklu tal-ħajja, u tixrid intraepatiku. Hepatology international 11: 1-9, 2017.
2. Seeger c u Mason WS: Bijoloġija tal-virus tal-epatite B. Microbiol Mol Biol rev 64: 51-68, 2000.
3. Usama e, ana Maria S, W ray K u Fervenza Fc: Trattament ta 'nefropatija assoċjata mal-virus tal-epatite B. nephron clin Pract 119: c41-c49, 2011.
4. Zhang Y, li J, Peng W, Yu G, Wang l, chen J u Zheng F: Glomerulonefrite akuta Postinfectious assoċjata mal-HBV: rapport ta '10 każijiet. PloS one 11: e0160626, 2016.
5. Slagle Bl u Bouchard MJ: Epatite B Virus X u regolament tal-espressjoni tal-Ġene Viral. Cold Spring Harb Perspect Med 6: a021402, 2016.
6. Guerrieri F, Belloni l , d'andrea d, Pediconi n, le Pera l , Testoni B, Scisciani c, Floriot o, Zoulim F, Tramontano a,et al: Identifikazzjoni madwar il-ġenoma ta' miri ġenomiċi diretti HBx. BMc genomics 18: 184, 2017.
7. Shi T, Hua Q, Ma Z u lv Q: ir-regolazzjoni 'l isfel ta' mir-200a-3p indotta mill-proteina tal-virus tal-epatite B X (HBx) tippromwovi l-proliferazzjoni taċ-ċelluli u l-invażjoni fl-infezzjonijiet assoċjati mal-HBV epato-karċinoma. Pathol res Pract 213: 1464-1469, 2017.
8. Tian Y, Xiao X, Gong X, Peng F, Xu Y, Jiang Y u Gong G: HBx jippromwovi l-proliferazzjoni taċ-ċelluli billi jfixkel il-cross-talk bejn mir-181a u PTen. Sci rep 7: 40089, 2017.
9. Idris Me, Hachem H, Koering c, Merle P, Thénoz M, Montreux F, u Wattel e: HBx iqajjem jew senescenza ċellulari jew proliferazzjoni taċ-ċelluli skont il-fenotip ċellulari. J Viral Hepat 23: 130-138, 2016.
10. Wang X, Wang l, Zhu n, Zhou Y, Gu lJ u Yuan WJ: Il-proteina X tal-virus tal-epatite B timmodula r-rispons taċ-ċelluli T u makrofaġi indotti miċ-ċelluli epiteljali tubulari renali. Immunol cell Biol 94: 266-273, 2016.
11. He P, Zhang d, li H, Yang X, li d, Zhai Y, Ma l u Feng G: Il-proteina X tal-virus tal-epatite B timmodula l-apoptosi f'ċelluli epiteljali tubulari prossimali renali umani billi tattiva l-mogħdija tas-sinjalar JaK2/STaT3. int J Mol Med 31: 1017-1029, 2013.
12. Yang Y, Wang X, Zhang Y u Yuan W: Il-proteina X tal-virus tal-epatite B u ċ-ċitokini proinfjammatorji jissinerġizzaw biex itejbu l-apoptosi indotta minn Trail taċ-ċelloli tubulari tal-kliewi permezz ta 'upregulation ta' dr4. int J Biochem cell Biol 97: 62-72, 2018.
13. He P, Zhou G, Qu d, Zhang B, Wang Y u li d: HBx jinibixxi l-proliferazzjoni u jinduċi apoptożi permezz ta 'regolazzjoni 'l fuq ta' Fas / Fasl f'ċelluli epiteljali tubulari renali tal-firien. J nephrol 26: 1033, 2013.
14. Han W, luo M, He M, Zhu Y, Zhong Y, ding H, Hu G, liu l , chen Q u lu Y: It-trasfezzjoni tal-ġeni HBx taffettwa ċ-ċiklu taċ-ċelluli epiteljali tubulari tal-kliewi primarji permezz tar-regolazzjoni tal-espressjoni taċ-ċiklin. Mol Med rep 18: 1947-1954, 2018.