Differenza ta' Phenylethanol Glycosides f'Tabella Cistanches Herba Minn 2 Ospiti BaDifferenza ta 'Phenylethanol Glycosides f'Tabella Cistanches Herba Minn 2 Hosts Ibbażat fuq UPLC-QQQ-MS U PLS-DA Analiżi Fuq Analiżi UPLC-QQQ-MS U PLS-DA
May 30, 2025
Cistanche deserticolahija pjanta oloparassitika perenni li tappartjeni għall-familja Orobanchaceae. Huwa iz-zokk imnixxef imlaħħam miksi bi weraq bħal skala ta 'Cistanche deserticola YC Ma[1-2]. Dan l-impjant huwa mqassam prinċipalment fil-Mongolja ta 'ġewwa, Xinjiang, u Gansu, fejn parasitizesHaloxylon ammodendron (CA Mey.) Bunge, pjanta xerofitika tad-deżert Chenopodiaceae [3-4]. Il-komponenti attivi primarji taCistanche deserticolajinkludu phenylethanoid glycosides, iridojdi, u polysaccharides [5-7], li juru proprjetajiet bħal protezzjoni tal-funzjoni riproduttiva, antiossidazzjoni, u protezzjoni tal-fwied [8-10]. B'aktar minn 2,000 sena ta 'użu fiċ-Ċina, huwa l-ewwel fil-preskrizzjonijiet tal-mediċina tradizzjonali Ċiniża mmirati lejn it-tisħiħ tal-vitalità u t-tieni fil-formulazzjonijiet kontra t-tixjiħ [11]. Madankollu, minħabba ħsad żejjed u qerda ambjentali, riżorsi selvaġġi ta 'Cistanche deserticolajinsabu f'xifer l-estinzjoni, li jwassal għall-klassifikazzjoni tagħha bħala pjanta protetta nazzjonalment (Kategorija II) u l-inklużjoni tagħha fil-Lista Internazzjonali tal-Protezzjoni tal-Pjanti Selvaġġi[12]. Biex jiġi indirizzat l-iżbilanċ bejn il-provvista u d-domanda fis-suq mediċinali, il-kultivazzjoni artifiċjali saret essenzjali għall-iżvilupp sostenibbli tal-Cistanche deserticolaindustrija.
Cistanche deserticola Estratt Għall-Bejgħ
Studji reċenti rrappurtaw tilqim b'suċċess ta 'Cistanche deserticolafuqAtriplex canescens[13], arbuxxell Evergreen tal-familja Chenopodiaceae. Komunement imsejjaħ "desalinator bijoloġiku,"Atriplex canescenshija speċi ta’ siġar ta’ kwalità għolja għat-titjib tal-ħamrija salina-alkali [14]. KultivazzjoniCistanche deserticolafuqAtriplex canescensjoffri vantaġġi sinifikanti, bħal rendiment għoli u kwalità superjuri. Bħala riżultat, l-evalwazzjoni tal-kwalità taAtriplex canescens-Cistanche deserticolasar hotspot tar-riċerka [15-16]. Ir-riċerka preċedenti ffokat prinċipalment fuq il-proprjetajiet mediċinali ta 'imnixxefCistanche deserticola, filwaqt li studji dwar il-komponenti attivi fil-forma friska tagħha għadhom skarsi. B'mod partikolari, wara l-inklużjoni ta'Cistanche deserticolabħala ikel u sustanza mediċinali taħt is-sistema ta' ġestjoni tal-prova (Avviż Nru. 9 tal-Kummissjoni Nazzjonali tas-Saħħa, 2023), l-iżvilupp u l-użu tagħha bħala ħxejjex mediċinali b'għan doppju kisbu attenzjoni sinifikanti fil-qasam tal-mediċina tradizzjonali Ċiniża [17]. FriskCistanche deserticolahija favorita għat-togħma u l-konvenjenza eċċellenti tagħha, li tagħmilha promettenti ħafna għall-iżvilupp. Materjali mediċinali friski jirreferu għal pjanti friski, annimali, jew sustanzi fungali mhux ipproċessati bi proprjetajiet terapewtiċi jew li jippromwovu s-saħħa. Fost l-2,000 ħxejjex mediċinali Ċiniżi użati komunement, 486 huma varjetajiet friski [18].
Il-metodu ta 'kromatografija likwida ta' prestazzjoni ultra-triple quadrupole tandem spettrometrija tal-massa (UPLC-QQQ-MS) huwa sensittiv ħafna, li jagħmilha adattata għall-iskoperta ta 'komponenti ta' konċentrazzjoni baxxa u kumplessi [19]. Biex tiġi indirizzata l-kwistjoni ta’ kontenut għoli ta’ ilma fiCistanche deserticola, fejn phenylethanoid glycosides huma suxxettibbli għal idroliżi enżimatika li tirriżulta f'kontenut imnaqqas, metodu ta 'tnixxif ta' inattivazzjoni ta 'enżimi jippreserva b'mod effettiv il-kontenut ta' phenylethanoid glycoside [20]. Dan l-istudju jimpjega UPLC-QQQ-MS biex jevalwa 8 phenylethanoid glycosides, inklużi echinacoside u acteoside, bħala komponenti attivi ewlenin fil-friskCistanche deserticolaminn żewġ pjanti ospitanti [21-22]. L-istudju jeżamina d-differenzi fil-kontenut tal-komponenti tal-meraq u l-fdal minn friskCistanche deserticolaimkabbra fuq żewġ ospiti. Barra minn hekk, ir-residwu kien soġġett għal trattament ta 'inattivazzjoni ta' l-enżimi fi 80 grad għal 5 minuti, segwit minn tnixxif, biex ikompli jitqabbel iż-żamma ta 'komponenti attivi f'Cistanche deserticola. Is-sejbiet għandhom l-għan li jipprovdu evidenza xjentifika u appoġġ tekniku għall-valur ta' skop doppju ta' friskCistanche deserticolau l-ottimizzazzjoni tat-tekniki tal-ipproċessar tagħha.
1 Strumenti u Materjali
1.1 Strumenti
1290-6460 spettrometru tal-massa tandem ta 'kromatografija likwida ta' prestazzjoni ultra-triple quadrupole (Agilent Technologies, USA).
AL104 bilanċ analitiku elettroniku (Mettler-Toledo, l-Isvizzera).
H-2050R ċentrifuga (Changsha Xiangyi Centrifuge Instrument Co., Ltd.).
Cleaner ultrasoniku SB25-12DTD (Ningbo Xinzhi Biological Technology Co., Ltd.).
1.2 Materjali
Il-Atriplex canescens-Cistanche deserticolauHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticolakampjuni nġabru f'Marzu, April, u Mejju tal-2024 mill-Cistanche deserticolabażi ta 'kultivazzjoni fil-Belt ta' Xiquan, Kontea ta 'Jingtai, Provinċja ta' Gansu. Il-kampjuni ġew identifikati mill-Professur Sun Xuegang mill-Università Agrikola ta 'Gansu bħala zkuk imlaħħam ta'Cistanche deserticola YC Mabil-weraq tal-iskala.
Standards ta' referenza:
Echinacoside (numru tal-lott: 23031605; purità: 99.74%).
Acteoside (numru tal-lott: 21102103; purità: 98.83%).
Cistanoside A (numru tal-lott: 23041703; purità: 98.30%).
Isoacteoside (numru tal-lott: 23052508; purità: 99.90%).
2'-Acetylatteoside (numru tal-lott: 210053102; purità: 97.12%).
Salidroside (numru tal-lott: 22051208; purità: 98.43%).
Cistanoside B (numru tal-lott: 20120903; purità: 98.57%).
Tubuloside A (numru tal-lott: 21060302; purità: 93.24%).
Kollha nxtraw minn Chengdu Pfeide Biotechnology Co., Ltd.
Reaġenti:
Metanol (numru tal-lott: O1140576, kromatografikament pur).
Aċetonitrile (numru tal-lott: S3641440, kromatografikament pur). It-tnejn inxtraw minn Shanghai Anpu Experimental Technology Co., Ltd.
L-aċidu formiku (numru tal-lott: 20230710, kromatografikament pur) inxtara minn Tianjin Kermio Chemical Reagent Co., Ltd.
Ilma purifikat (Hangzhou Wahaha Group Co., Ltd.).
2 Metodi u Riżultati
2.1 Metodi
2.1.1 Preparazzjoni tal-Kampjun
Tliet lottijiet taAtriplex canescens-Cistanche deserticola(numri tal-lott: 20240330-1, 20240420-1, 20240510-1) u tliet lottijiet ta’Haloxylon ammodendron-Cistanche deserticola(numri tal-lott: 20240330-2, 20240420-2, 20240510-2), li jammontaw għal sitt lottijiet, b'ħames pjanti għal kull lott, inġabru. Il-pjanti ġew maħsula nodfa bl-ilma.
Ipproċessar:
Il-kampjuni kienu mgħaffġa u mqaxxra, li rriżultaw f'meraq u residwu miż-żewġ ospiti derivatiCistanche deserticola.
Ir-residwi ġew imnixxfa taħt żewġ kundizzjonijiet:
Mingħajr inattivazzjoni tal-enzimi.
B'inattivazzjoni ta 'enżimi (5 minuti f'80 grad f'forn).
Ir-residwi mnixxfa ġew maħżuna għal aktar analiżi. Kull lott ta 'materjal mediċinali kien maqsum f'erba' gruppi, kif muri fit-Tabella 1.
Tab. 1 Kampjun ta' informazzjoni dwar il-grupp
| Grupp | Tip | Atriplex canescens-Cistanche deserticola | Haloxylon ammodendron-Cistanche deserticola |
|---|---|---|---|
| ① | Residwu | C1 | S1 |
| ② | Meraq | C2 | S2 |
| ③ | Residwu inattivat bl-enżimi (5 min tnixxif, imfarrak) | C3 | S3 |
| ④ | Residwu mhux inattivat bl-enżimi (imnixxef u mgħaffeġ) | C4 | S4 |
2.1.2 Kundizzjonijiet Kromatografiċi
Kolonna: Kolonna Agilent Zorbax Eclipse Plus C18 (2.1 mm × 150 mm, 1.8 μm).
Rata tal-fluss: 0.3 mL/min.
Volum ta' injezzjoni: 1 μL.
Temperatura tal-kolonna: 35 grad .
Fażi mobbli: 0.1% aċidu formiku fl-ilma (A) u aċetonitrile (B).
Ħin tal-analiżi: 12-il minuta.
Grajjent ta' elużjoni:
0–1.5 min: 10% → 20% B.
1.5–3 min: 20% → 30% B.
3–5 min: 30% → 32% B.
5–8 min: 32% → 38% B.
8–9.6 min: 38% → 10% B.
9.6–12 min: 10% B.
Il-kromatogrammi tal-istandards ta' referenza mħallta u l-kampjuni tat-test huma murija fil-Figura 1.(Jekk jogħġbok ikkonferma jekk il-fażi mobbli hijiex 0.01% aċidu formiku fl-ilma (A) u aċetonitrile (B).)
Fig. 1 Kromatogrammi ta' sustanzi ta' referenza(A) u kampjun(B) 1-salidroside; 2−echinacoside; 3−cistanosideA; 4−tubulosideA; 5−acteoside; 6-isoacteoside; 7−2'-acetylatteoside; 8-tubuloside B.
2.1.3 Kundizzjonijiet tal-Ispettrometrija tal-Massa
Tip ta' sors ta' joni: Ionizzazzjoni elettrospray (ESI).
Modalità: Monitoraġġ ta' reazzjoni multipla (MRM) fil-modalità tal-jone negattiv.
Temperatura tas-sors tal-jone: 350 grad .
Pressjoni tan-nebulizzatur: 35 psi.
Gass tal-ħabta: Nitroġenu, issettjat għal livell medju.
Il-parametri tal-ispettrometrija tal-massa għall-komponenti li għandhom jiġu analizzati huma murija fit-Tabella 2.
2.1.4 Preparazzjoni ta' Soluzzjoni Standard Imħallta
Iżen b'mod preċiż ammonti xierqa tal-istandards ta' referenzaechinacoside, acteoside, cistanoside A, isoacteoside, 2'-acetylatteoside, salidroside, cistanoside B, utubuloside A, u poġġihom fi fliexken tar-reaġent ambra ta’ 10 mL. Żid 50% metanol biex tipprepara soluzzjoni standard mħallta b'konċentrazzjoni ta '0.2 mg·mL⁻¹ u aħżenha għal użu aktar tard.
2.1.5 Preparazzjoni tas-Soluzzjonijiet tat-Test
Iżen preċiż 0.2 g friskAtriplex canescens-Cistanche deserticolaresidwu (C1), friskHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticolaresidwu (S1), imnixxefAtriplex canescens-Cistanche deserticolaresidwi (C3, C4), u mnixxfaHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticolaresidwi (S3, S4). Poġġi l-kampjuni fi fliexken volumetriċi ta’ 10 mL ambra, żid 50% metanol, ġib għall-volum, u rreġistra l-massa. Xarrab għal 0.5 sigħat, ultrasonika għal 40 minuta (250 W, 35 kHz), kessaħ għat-temperatura tal-kamra, u erġa' rreġistra l-massa. Uża 50% metanol biex tikkumpensa għal kwalunkwe telf ta 'piż, ħawwad sew, ċentrifuga, u ħalli s-soluzzjoni toqgħod. Iffiltra s-supernatant minn membrana mikroporuża ta’ 0.22 μm biex tikseb il-filtrat.
Għal friskAtriplex canescens-Cistanche deserticolameraq (C2) u friskHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticolameraq (S2), ħu 10 mL minn kull wieħed, iżen b'mod preċiż, ħawwad sew, ċentrifuga, u ħalli s-soluzzjoni toqgħod. Iffiltra s-supernatant minn membrana mikroporuża ta’ 0.22 μm biex tikseb il-filtrat.
2.1.6 Studju tal-Linearità
Ammonti xierqa tas-soluzzjoni standard mħallta ppreparati fis-sezzjoni 2.1.4 ġew dilwiti biex jinħoloq gradjent ta' konċentrazzjoni ta'51.2, 128.0, 320.0, 800.0, 4,000.0, u 20,000.0 ug·L⁻¹. Il-kampjuni ġew injettati b'mod sekwenzjali minn konċentrazzjonijiet baxxi għal għoljin skond il-kundizzjonijiet deskritti fit-taqsimiet 2.1.2 u 2.1.3. Twettqet rigressjoni lineari, bl-użu tal-konċentrazzjoni tal-injezzjoni bħala l-assi X u ż-żona tal-quċċata bħala l-assi Y. Ir-relazzjonijiet lineari tat-tmien komponenti huma murija fit-Tabella 3.
Tab. 3 Riżultati ta' eżami tar-relazzjoni lineari ta' 8 komponenti fit-tabella Cistanches Herba
| Komponent | Ekwazzjoni ta' Rigressjoni | r | Medda Lineari (ug·L⁻¹) |
|---|---|---|---|
| Echinacoside | Y = 16.410 × X − 0.804 | 0.9996 | 51.2–20,000.0 |
| Acteoside | Y = 102.794 × X − 55.793 | 0.9998 | 51.2–20,000.0 |
| Isoacteoside | Y = 31.007 × X − 45.169 | 0.9999 | 51.2–20,000.0 |
| 2'-Acetylatteoside | Y = 110.235 × X − 8.953 | 0.9992 | 51.2–20,000.0 |
| Salidroside | Y = 19.678 × X − 0.557 | 0.9993 | 51.2–20,000.0 |
| Tubuloside A | Y = 26.785 × X − 13.630 | 0.9997 | 51.2–20,000.0 |
| Tubuloside B | Y = 71.810 × X − 0.993 | 0.9998 | 51.2–20,000.0 |
| Cistanoside A | Y = 0.578 × X + 1.531 | 0.9994 | 51.2–20,000.0 |
2.1.7 Test ta' Preċiżjoni
Is-soluzzjoni standard mħallta ppreparata taħt il-kundizzjonijiet fit-taqsima 2.1.4 ġiet dilwita b'50% metanol u injettata sitt darbiet konsekuttivi taħt il-kundizzjonijiet tat-taqsimiet 2.1.2 u 2.1.3. Id-devjazzjonijiet standard relattivi (RSDs) tal-ogħla żoni għalechinacoside, acteoside, isoacteoside, 2'-acetylatteoside, salidroside, cistanoside B, tubuloside A, ucistanoside Akienu 0.95%, 1.47%, 0.56%, 1.05%, 0.93%, 1.08%, 1.19%, u 0.91%, rispettivament, li jindikaw preċiżjoni tajba.
2.1.8 Test ta' Stabbiltà
Kampjun wieħed ta'Cistanche deserticola(S4) ġie ppreparat taħt il-kundizzjonijiet deskritti fit-taqsima 2.1.5. Is-soluzzjoni tat-test ġiet injettata u analizzata fi 0, 2, 4, 8, 12, u 24 siegħa taħt il-kundizzjonijiet deskritti fit-taqsimiet 2.1.2 u 2.1.3. L-RSDs taż-żoni peak għalechinacoside, acteoside, isoacteoside, 2'-acetylatteoside, salidroside, cistanoside B, tubuloside A, ucistanoside Akienu 1.46%, 0.79%, 0.95%, 1.29%, 1.22%, 0.56%, 0.49%, u 1.18%, rispettivament, li jindika li s-soluzzjoni tal-kampjun kienet stabbli fi żmien 24 siegħa.
2.1.9 Test tar-Ripetibbiltà
Lott wieħed ta 'Cistanche deserticolaIl-kampjun (S4) (numru tal-lott: 20240420-2) ġie ppreparat f'sitt soluzzjonijiet tat-test paralleli taħt il-kundizzjonijiet deskritti fit-taqsima 2.1.5. Il-kampjuni ġew injettati u analizzati taħt il-kundizzjonijiet deskritti fit-taqsimiet 2.1.2 u 2.1.3. L-RSDs tal-kontenut għalechinacoside, acteoside, isoacteoside, 2'-acetylatteoside, salidroside, cistanoside B, tubuloside A, ucistanoside Akienu 1.26%, 0.98%, 1.55%, 1.06%, 1.33%, 0.99%, 1.65%, u 0.95%, rispettivament, li juru ripetibbiltà tajba.
2.1.10 Test tal-Irkupru
Disa' kampjuni mill-istess lott ta'Cistanche deserticola(S4, numru tal-lott: 20240420-2) ġew ippreparati, b'0.1 g għal kull kampjun. Il-kampjuni ġew maqsuma fi tliet gruppi, bi tliet repliki għal kull grupp. Kull grupp kien miżjud bi 80%, 100%, u 120% tal-kontenut standard ta 'referenza fil-Cistanche deserticolakampjun. Is-soluzzjonijiet tat-test ġew ippreparati skond il-metodu deskritt fit-taqsima 2.1.5 u analizzati taħt il-kondizzjonijiet fit-taqsimiet 2.1.2 u 2.1.3. L-irkupri tat-tmien phenylethanoid glycosides ġew ikkalkulati, u r-riżultati huma murija fit-Tabella 4.
Tab. 4 Ir-rati ta' rkupri ta' 8 komponenti ttestjati f'Cistanches Herba
| Komponent | Kontenut tal-Kampjun (mg) | Spiked (mg) | Mkejla (mg) | Irkupru medju (%) | RSD (%) |
|---|---|---|---|---|---|
| Echinacoside | 0.513 8 | 0.410 1 | 0.911 2 | 99.85 | 1.37 |
| Echinacoside | 0.513 8 | 0.513 8 | 1.015 2 | 99.88 | 0.95 |
| Echinacoside | 0.513 8 | 0.616 5 | 1.129 4 | 99.85 | 1.06 |
| Acteoside | 0.421 5 | 0.337 2 | 0.759 6 | 99.90 | 1.02 |
| Acteoside | 0.421 5 | 0.421 5 | 0.843 5 | 99.87 | 1.18 |
| Acteoside | 0.421 5 | 0.505 8 | 0.926 7 | 99.84 | 1.24 |
| Isoacteoside | 0.327 1 | 0.261 7 | 0.588 6 | 99.85 | 0.86 |
| Isoacteoside | 0.327 1 | 0.327 1 | 0.654 2 | 99.86 | 1.05 |
| Isoacteoside | 0.327 1 | 0.392 5 | 0.719 1 | 99.84 | 1.13 |
| 2'-Acetylatteoside | 0.110 2 | 0.088 2 | 0.198 3 | 99.87 | 1.15 |
| 2'-Acetylatteoside | 0.110 2 | 0.110 2 | 0.220 1 | 99.86 | 1.09 |
| 2'-Acetylatteoside | 0.110 2 | 0.132 2 | 0.242 4 | 99.85 | 1.21 |
| Salidroside | 0.081 6 | 0.065 3 | 0.146 7 | 99.84 | 1.18 |
| Salidroside | 0.081 6 | 0.081 6 | 0.163 1 | 99.85 | 1.02 |
| Salidroside | 0.081 6 | 0.097 9 | 0.179 7 | 99.84 | 1.17 |
| Tubuloside B | 0.072 3 | 0.057 9 | 0.130 0 | 99.86 | 1.09 |
| Tubuloside B | 0.072 3 | 0.072 3 | 0.144 1 | 99.86 | 1.05 |
| Tubuloside B | 0.072 3 | 0.086 8 | 0.159 2 | 99.84 | 1.24 |
| Tubuloside A | 0.043 8 | 0.035 0 | 0.078 5 | 99.86 | 1.16 |
| Tubuloside A | 0.043 8 | 0.043 8 | 0.087 5 | 99.86 | 1.02 |
| Tubuloside A | 0.043 8 | 0.052 5 | 0.096 2 | 99.84 | 1.15 |
