Cistanche Djetetika Mtaffi Ħsara Akuta Ileum Tal-Papra

Astratt: Aflatoxin B1 (AFB1) huwa metabolit tossiku stabbli li jhedded is-saħħa tal-bnedmin u l-annimali u l-għalf tal-annimali u l-ikel tal-bniedem kontaminati ħafna. Dan l-istudju preżenti kellu l-għan li jinvestiga l-effetti tacistanche tad-dietafuq il-korriment tal-ileum fil-papri indotti mill-amministrazzjoni ta 'AFB1 u tesplora l-mekkaniżmi sottostanti tagħha. Papri (N=450, raġel ta’ ġurnata) b’piż simili ġew assenjati b’mod każwali għal 3 gruppi, li kien fihom il-grupp ta’ kontroll, grupp AFB1 (60 µg AFB1 kg-1 piż tal-ġisem), u cistanche (500 mg dieta cistanche kg−1) flimkien mal-grupp AFB1. L-amministrazzjoni ta' AFB1 żiedet b'mod notevoli l-ħsara tal-ileum, l-adducts ta' AFB1-DNA fil-plażma, u stress ta' ossidazzjoni u infjammazzjoni. Iż-żieda ta' cistanche fid-dieta ipproteġiet l-ileum kontra l-ħsara fil-morfoloġija indotta mill-amministrazzjoni ta' AFB1, naqqset l-adducts ta' AFB1-DNA fil-plażma, u eliminat l-istress ta' ossidazzjoni u l-infjammazzjoni fl-ileum tal-papri.Anti-ossidazzjoniuanti-infjammatorji effetti ta' cistanchejista' jipproteġi l-ileum kontra ħsara akuta billi jattiva l-passaġġ tas-sinjalar Nrf2-ARE u jinibixxi l-mogħdija tas-sinjalar NF-κB. B'mod konklużiv,cistanchekien dietakontra l-ossidazzjoniukontra l-infjammazzjoniaġent permezz tal-attivazzjoni tal-passaġġ tas-sinjalar Nrf2-ARE u l-inibizzjoni tal-passaġġ tas-sinjalar NF-κB ħsara akuta indotta mill-amministrazzjoni tal-AFB1.

Kliem ewlieni:cistanche; ileum akut; Adducts AFB1-DNA; Nrf2-ARE;

Ikklikkja Hawn Biex Cistanche Prodotti Anti-aging

Staqsi għal aktar:

Email:wallence.suen@wecistanche.com Whatsapp flimkien ma' 86 15292862950

1. Introduzzjoni

Il-laħam huwa sors importanti ta 'proteina ta' kwalità għolja għan-nutrizzjoni tal-bniedem. Il-laħam tal-papra huwa kkunsmat b'mod abbundanti madwar id-dinja, speċjalment fl-Asja minħabba l-karatteristiċi nutrittivi mixtieqa tiegħu [1]. Għalhekk, it-trobbija tal-papri ġibdet l-attenzjoni tan-nies. Għall-papri, hemm Diversi żvantaġġi fil-proċess tat-tgħammir, bħal AFB1 li jheddu s-saħħa tal-papri. Aflatoxin B1 (AFB1) huwa wieħed mill-metaboliti tossiċi tal-mejda prodotti mill-ispeċi Aspergillus. AFB1 huwa rikonoxxut bħala l-aktar tossiku fost il-gruppi ta' aflatossini (AF), flimkien ma' varjetà ta' effetti tossiċi li jheddu s-saħħa tal-bnedmin u l-annimali [2].

Għal nies jew annimali, l-ikel jew l-għalf huwa mod komuni u importanti għall-espożizzjoni għal AFB1, iżda l-inalazzjoni u l-kuntatt dirett mal-ġilda jew il-kuntatt mal-mukoża huma wkoll magħduda u mhux injorati [3]. Studji preċedenti wrew li AFB1 jeżerċita tossiċità qawwija li hija kumplessa u qawwija ħafna, li tirriżulta f'ritard tat-tkabbir, malformazzjonijiet bijoloġiċi, tossiċità tal-fwied, disturbi fis-sistema diġestiva u anke kanċer [4,5]. AFB1 miksub minn kuntatt mal-ikel jew mal-mukoża kellu effetti negattivi fuq is-sistemi respiratorji, is-sistema diġestiva u t-tessuti u l-prestazzjoni tat-tkabbir [3,6,7]. Danni fit-tessuti u l-organi indotti mill-amministrazzjoni ta 'AFB1 relatati ma' stress ta 'ossidazzjoni u infjammazzjoni. L-amministrazzjoni ta' AFB1 immarkat żieda fil-kontenut ta' addotti ta' AFB1-DNA f'organu ferut [8]. L-assorbiment u l-konverżjoni ta 'nutrijenti u tossini seħħew fl-istonku u l-musrana ż-żgħira, għalhekk iż-żgħar

Is-sistema immuni tal-mukuża tal-imsaren hija l-ewwel linja li tipproteġi l-korpi kontra l-korriment [9]. Il-funzjonalità u l-morfoloġija tal-passaġġ gastrointestinali tas-saħħa jistgħu jinqerdu minn fatturi mhux favorevoli bħal tossiċi, batterji u viruses [10,11]. AFB1 indotta mill-qerda ta 'l-istruttura intestinali, manifestat bit-twaqqigħ ta' ċelluli epiteljali fil-villus jejunal u infiltrazzjoni taċ-ċelluli limfoċitiċi fl-imsaren tat-tiġieġ [12,13]. Il-funzjonalità tal-varjazzjoni u l-morfoloġija jistgħu jiġu attribwiti għall-proċess tal-metaboliżmu tat-tossini li spiss ikun akkumpanjat minn stress ossidattiv Infjammazzjoni. Hija kwistjoni urġenti li jinstab antidotu biex titnaqqas u timminimizza t-theddida ta 'AFB1 għan-nies u l-annimali.

Konsegwentement, AFB1 huwa wieħed mill-aktar tħassib fl-industrija tat-tjur minħabba t-tossiċità qawwija tiegħu. cistanche huwa tip ta 'komponent ta' polifenol li jseħħ fir-riżomi turmeric (Cur cuma Longa Linn) bħala addittiv tal-għalf funzjonali użat fl-għalf tal-bhejjem [14], u użat ħafna

bħala ħwawar aħdar u naturali, kolorant, preservattiv u togħma fl-industrija tal-ikel. Estratti tal-pjanti bħal cistanche li fihom il-polifenoli tejbu l-immunità tal-ġisem [15]. cistanche għandu rwol ewlieni kontra kundizzjonijiet u attivitajiet patoloġiċi-patoloġiċi medjati mill-istress ossidattiv meta jintuża bħala terapija għat-trattament u l-prevenzjoni ta 'mard kroniku [16,17]. Il-provi kliniċi indikaw li cistanche m'għandux effett tossiku jew sekondarju sever, u bi proprjetajiet anti-karċinoġeniċi u anti-tossikoġeniċi, li wasslu għal cistanche bħala aġent kimopreventtiv attraenti kontra l-ħsara fit-tessuti kkawżata minn AFB1-[18-20]. Il-letteratura wriet li cistanche għandha kapaċità ta' kontra l-infjammazzjoni, anti-apoptożi u antiossidazzjoni billi tattiva l-passaġġ Nrf2/HO-1, kapaċità antiox regolata 'l fuq biex telimina l-infjammazzjoni u l-istress ossidattiv fil-ġisem u telimina l-AFB1-indotta stress ossidattiv [21-25]. cistanche soppressa l-istress ta 'ossidazzjoni u l-formazzjoni ta' inflammasome billi attivat Nrf2-ARE u inibixxi l-passaġġ ta 'sinjalazzjoni NF-κB f'demoning tal-kliewi fdal [26], anti-ossidazzjoni u proprjetà anti-infjammatorja. Barra minn hekk, cistanche tad-dieta tejbet b'mod sinifikanti l-kapaċità antiossidant fil-brojlers [27] u l-papri [28]. Ma kien hemm l-ebda tentattiv biex tikkorrelata r-rwol ta' cistanche fil-mogħdija tas-sinjalar Nrf2-ARE u NF-κB u f'mudell ta' annimali ta' amministrazzjoni akuta ta' AFB1.

Dan l-istudju tefa' dawl fuq din il-kwistjoni u pprovda bażi teoretika għal cistanche bħala addittiv tal-għalf biex jipproteġi s-saħħa tal-papri kontra l-amministrazzjoni tal-AFB1 u jnaqqas it-telf ekonomiku tal-industriji tal-għalf u tat-trobbija kkawżat mit-tniġġis tal-AFB1.

2. Materjali u Metodi

2.1. Kimiċi

cistanche inxtara minn Nanjing Nutri-herb Biotech Co., Ltd. (Nanjing, Jiangsu, China, CAS: 458-37-7), il-purità tagħha kienet aktar minn 98 fil-mija mill-analiżi HPLC. AFB1 (purità akbar minn jew ugwali għal 98 fil-mija, CAS NO. 1162-65-8) inxtara minn Shanghai Yuan ye Bio-Technology Co., Ltd. (Shanghai, iċ-Ċina). Antikorpi użati f'dan l-istudju nxtraw minn Bey time Biotechnology, Shanghai, iċ-Ċina, inkluż GAPDH (Numru tal-Katalgu: AG019), Nrf2 (Numru tal-Katalgu: AF7623), Phospho-NF-κB p65 (Ser276) (Numru tal-Katalgu: AF5875), HRP Mogħoż tikkettat kontra l-Fenek IgG (H flimkien ma L) (Numru tal-katalgu: A0208) u Mogħoż tikkettat bl-HRP

Kontra l-Ġurdien IgG (H plus L) (Numru tal-Katalgu: A0216).

2.2. Papri u Trobbija

Il-protokoll sperimentali tmexxa skont il-prattiki deskritti fil-Gwida għall-Kura u l-Użu tal-Annimali Agrikoli fir-Riċerka u t-Tagħlim tal-Agrikoltura tal-Università Agrikola tal-Grigal (Numru tal-Protokoll: NEAU-[2011]-9).

Papri (n {{0}}, Anas platyrhynchos maskili ta’ ġurnata, 33.8 ± 0.2 g) bl-ebda piż differenti sinifikanti nxtraw minn mafqas kummerċjali u ġew assenjati b’mod każwali fi 3 gruppi (Tabella 1), b’10 pinen replikati (gaġeġ) għal kull grupp u 15-il papra għal kull pinna għal 70-jum

prova tal-għalf. Id-dieti bażali ġew ifformulati skont il-Kunsill Nazzjonali tar-Riċerka (1994). Il-papri fil-grupp T0 u T0 flimkien ma' AFB1 ġew mitmugħa b'dieta bażali qamħ-sojja (Tabella 2), papri fil-grupp T500 flimkien ma' AFB1 ġew mitmugħa bid-dieta bażali supplimentata b'500 mg ta'

cistanche kg-1 ta' dieta (T500) prova ta' 70-ġurnata. Fis-70 ijiem, papri b'piż simili tal-ġisem fil-gruppi T0 flimkien ma' AFB1 u T500 flimkien ma' AFB1 ġew mitmugħa 60 µg ta' AFB1 kg-1 ta' piż tal-ġisem, u papri fil-grupp T0 ġew mitmugħa l-volum ugwali ta 'soluzzjoni PBS. Il-papri ġew mitmugħa f'Acheng Experimental Base tal-Università Agrikola tal-Grigal u pprovduti b'aċċess ad libitum għall-ilma u dieti trab. Intgħażlu ħmistax-il papra b'piż simili tal-ġisem (1.4 ± 0.3 kg) minn kull grupp u sawmu għal 12-il siegħa, imbagħad mitmugħa soluzzjoni PBS lil papri fil-grupp T0 u 60 µg ta' AFB1 kg-1 ta' piż tal-ġisem lil papri f'T0 flimkien ma' AFB1 u T500 flimkien ma 'gruppi AFB1 fl-istess ħin. Wara 12-il siegħa, il-ħmistax-il papra f'kull grupp kellhom jiksbu kampjuni tal-papra.

2.3. Ġbir tal-Kampjuni

Kampjuni tad-demm (10 mL) inkisbu bl-użu ta 'tubi ta' l-eparina minn vini ta 'ġwienaħ tal-papra u ċentrifugati f'1000 × g għal 15-il minuta f'4 ◦C. Il-plażma miksuba ġiet isseparata immedjatament u maħżuna f'-80 ◦C għall-analiżi. Il-papri ġew anestetizzati billi jiġbdu l-etere u nqatlu biex jiksbu ileum. L-ileum inħasel 3 darbiet f'PBS, immedjatament, u nħażen individwalment f'tank tan-nitroġenu likwidu imbagħad f'-80 ◦C għal qRT-PCR u analiżi tal-kapaċità antiossidanti. Imbagħad, inkisbet madwar 0.125 cm3 ileum u tpoġġiet f'soluzzjoni ta' paraformaldehyde 4 fil-mija għat-taqsima tat-tessuti u madwar 1 mm3 ileum tpoġġa f'mikroskopju elettroniku

soluzzjoni f'4 ◦C għal osservazzjoni ultrastrutturali aktar tard.

2.4. Assaġġ tal-Livelli ta' Antiossidanti fil-Plażma

Il-livelli tal-plażma ta 'superoxide dismutase totali (T-SOD), glutathione peroxidase (GSH Px), Glutathione S-transferase (GSH-ST), u malondialdehyde (MDA) ġew imkejla b'kits ta' analiżi (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, iċ-Ċina) , rispettivament, bil

Spettrofotometru UV-VIS (UV1100, MAPADA, Shanghai, iċ-Ċina).

2.5. Assaġġ tal-Livelli tal-Adducts tal-AFB1-DNA fil-Plażma

Il-ġenerazzjoni ta 'ADducts AFB1-DNA fil-plażma ġew determinati bl-użu ta' kits ELISA skont l-ispeċifikazzjonijiet tal-kit (Istitut tal-Bijoinġinerija ta 'Nanjing Jiancheng, Nan jing, iċ-Ċina).

2.6. Assaġġ tal-Abbiltà Antiossidanti fl-Ileum

Ileum (100.00 mg) ġie devolut u mħallat f'0.9 mL soluzzjoni salina fiżjoloġika ta' puplesija (4 ◦C, 0.9 fil-mija NaCl, pH=7.2 –7.4) biex tikseb 10 fil-mija ileum/SPSS omoġenat. L-attività jew il-kontenut tas-superoxide dismutase totali (T-SOD U/mg Proteina), riduttiv Glu glutathione (GSH-PX µmol/mg Proteina), Glutathione S-transferase (GSH-ST U/mg Proteina) u Malondialdehyde (MDA nmol/ mg Proteina) fl-ileum ġew evalwati bl-użu ta’ kits ta’ Assay (Istitut tal-Bijoinġinerija ta’ Nanjing Jiancheng, Nanjing, iċ-Ċina), rispettivament, b’UV-VIS

spettrofotometru (UV1100, MAPADA, Shanghai, iċ-Ċina).

2.7. Iżolament tal-RNA u Reazzjoni Kwantitattiva tal-Katina tal-Polymerase f'ħin reali (qRT-PCR)

L-RNA totali tal-ileum tal-papra (100.00 mg) ġie iżolat bl-użu ta 'kit ta' reaġent (TaKaRa, il-Ġappun) skont il-protokoll rakkomandat mill-manifatturi. Il-konċentrazzjoni u l-purità tal-RNA totali ġew skoperti fil-proporzjon A260/A280 bi spettrofotometru (IMPLEN, il-Ġermanja). 1 µg RNA totali f'kull kampjun ġie kkonvertit fis-cDNA b'kit ta' reaġent Prime Script™ RT b'gDNA Eraser (TaKaRa, Dalian, iċ-Ċina) skont

għall-protokoll rakkomandat mill-manifatturi. Is-cDNA miksub minn kull ileum tal-papra intuża bħala mudell għal kit RT-PCR (qRT-PCR) TB Green™ Premix Ex Taq™ (TaKaRa, Dalian, iċ-Ċina). In-numru ta 'adeżjoni tal-ġeni ta' papri inkiseb minn NCBI u

il-primers tal-ġeni tal-papri ġew sintetizzati minn Sangon Biotech Co., Ltd. (Shanghai, iċ-Ċina) (Tabella 3). L-espressjoni tal-ġeni rilevanti fl-ileum tal-papra ġiet iddeterminata mill-apparat taċ-ċiklatur termali tal-ġene Quanta Q225. Il-qRT-PCR tmexxi f'Monad Selected Real-Time

Sistema PCR (ABI 7500 strument PCR f'ħin reali (USA)) li tiċċirkola għall-kundizzjoni: ċiklu wieħed f'95 ◦C għal 30 s, 40 ċiklu f'95 ◦C għal 5 s u f'60 ◦C għal 30 s. Il-proporzjon relattiv tal-espressjoni tal-ġeni tal-mRNA ta 'skoperta ġie skopert bl-użu tal-metodu 2−∆∆Ct u normalizzat għal espressjoni ta' -actin.

2.8. Western Blotting

L-ileum tal-papra ġie polverizzat u lysed fil-buffer RIPA li kien fih 1 mmol/L PMSF (Beyotime, Shanghai, iċ-Ċina) fis-silġ. Il-konċentrazzjoni totali tal-proteina tal-ileum ġiet iddeterminata b'kitt tal-assaġġ tal-aċidu bicinchoninic (BCA) (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, iċ-Ċina). 12 fil-mija u 10 fil-mija ġel SDS-polyacrylamide għall-elettroforesi kienu

użati biex jinkisbu proteini fil-mira b'piż molekulari differenti. Imbagħad, il-proteini fil-mira ġew trasferiti għal membrana tal-polyvinylidene-difluoride (PVDF) (Beyotime, Shanghai, iċ-Ċina) għal blots b'apparat trans blotting. Il-membrana PVDF ġiet maħsula 3 darbiet għal 10 min kull darba f'1 × PBST u mbagħad imblukkata 2 h f'5 fil-mija ħalib xkumat. Il-membrana PVDF reġgħet ġiet maħsula 3 darbiet, u inkubata b'antikorpi primarji GAPDH, Nrf2 u P-P65 (Beyotime Biotechnology, Shanghai, China) għal 8 –12 h f'4 ◦C, rispettivament. L-għada, il-membrana PVDF reġgħet ġiet maħsula 3 darbiet, u inkubata bl-antikorp korrispondenti bit-tikketta tal-perossidasi tar-ravanell f'37 ◦C għal siegħa, imbagħad maħsula 3 darbiet mill-ġdid.

Il-meded tal-proteini fil-mira ġew skoperti u viżwalizzati taħt l-azzjoni tal-kit imtejjeb ta 'skoperta ta' fluworexxenza BeyoECL Star (Beyotime Biotechnology, Shanghai, Ċina). Stampi ta’ blots ġew irreġistrati u analizzati mill-pjattaforma tal-immaġini Essential V6 (UVITEC, Cambridge,

l-Ingilterra). Proteina GAPDH serviet bħala proteina ta 'kontroll intern. Ir-riżultati kollha tal-esperiment ġew ripetuti fi tliet kopji. L-espressjonijiet relattivi tal-proteini fil-mira ġew espressi bħala l-proporzjon tal-intensitajiet tal-faxxa tal-proteini għal GAPDH.

2.9. Analiżi Statistika

Id-dejta tal-esperiment inkisbet mill-inqas sitt darbiet u kull kampjun tkejjel tliet darbiet. Analiżi tad-dejta tar-riċerka bl-użu ta' Independent-Samples T Test mill-SPSS (Verżjoni 22.0, SPSS Inc., Chicago, IL, USA) b'5 fil-mija Il-probabbiltà ta' żball u s-sinifikat statistiku kienet p < {{4} }.05 f'dan l-istudju