Coelomocytes Tal-Oligochaeta Earthworm Lumbricus Terrestris (Linnaeus, 1758) Bħala Ċavetta Evoluttiva tad-Difiża: Studju Morfoloġiku

Astratt

Metazoans għandhom diversi mekkaniżmi ta 'difiża interna għas-sopravivenza tagħhom. Is-sistema tad-difiża interna evolviet flimkien mal-organiżmi. Annelidae għandu coelomocytes li jiċċirkolaw li jwettqu funzjonijiet komparabbli maċ-ċelloli immuni fagoċitiċi tal-vertebrati. Diversi studji wrew li dawn iċ-ċelloli huma involuti fil-fagoċitosi, l-opsonizzazzjoni, u l-proċessi ta 'rikonoxximent tal-patoġeni. Bħal makrofaġi vertebrati, dawn iċ-ċelloli li jiċċirkolaw li jippermeaw l-organi mill-kavità coelomic jaqbdu jew jinkapsulaw patoġeni, speċi ta 'ossiġnu reattiv (ROS), u ossidu nitriku (NO). Barra minn hekk, jipproduċu firxa ta 'proteini bijoattivi involuti fir-rispons immuni u jwettqu funzjonijiet ta' ditossifikazzjoni permezz tas-sistema lisosomali tagħhom.

Il-koelomoċiti jistgħu jipparteċipaw ukoll f'reazzjonijiet litiċi kontra ċ-ċelloli fil-mira u r-rilaxx ta 'peptidi antimikrobiċi. L-istudju tagħna jidentifika b'mod immunohistokimiku coelomocytes ta 'Lumbricus terrestris imxerrda fis-saff epidermali u konnettiv hawn taħt, kemm fis-saff lonġitudinali kif ukoll fis-saff tal-muskoli lixxi, immunoreattivi għal TLR2, CD14, u -Tubulin għall-ewwel darba. TLR2 u CD14 mhumiex kompletament kolokalizati ma 'xulxin, li jissuġġerixxi li dawn il-koelomoċiti jistgħu jappartjenu għal żewġ familji distinti. L-espressjoni ta 'dawn il-molekuli immuni fuq Annelidae coelomocytes tikkonferma r-rwol kruċjali tagħhom fis-sistema ta' difiża interna ta 'dawn il-protostomi Oligochaeta, li tissuġġerixxi konservazzjoni filoġenetika ta' dawn ir-riċetturi. Din id-dejta tista' tipprovdi aktar għarfien dwar il-fehim tas-sistema ta' difiża interna tal-Annelida u l-mekkaniżmi kumplessi tas-sistema immuni fil-vertebrati.

Il-koelomoċiti huma relatati mill-qrib mal-immunità. Coelomocytes huma ċelluli relatati mas-sistema immuni. Jistgħu inixxu varjetà ta 'fatturi immuni, bħal ċitokini, interleukins, antiġeni, u antikorpi, biex jirregolaw u jtejbu l-kapaċità immuni tal-ġisem.

Il-koelomoċiti għandhom varjetà ta 'funzjonijiet immuni, inkluż ir-regolazzjoni tar-reazzjonijiet immuni ċellulari bħala ċelluli li jippreżentaw l-antiġenu, joqtlu direttament patoġeni u ċelloli anormali, u jipparteċipaw fir-regolamentazzjoni ta' infjammazzjoni u risponsi immuni. Barra minn hekk, xi studji wrew li coelomocytes jistgħu wkoll itejbu l-immunità għal patoġeni potenzjali billi jakkumulaw ċelluli tal-memorja immuni, u b'hekk itejbu l-immunità tal-ġisem.

Għalhekk, iż-żamma tal-funzjoni normali u l-kwantità ta 'coelomocytes hija kruċjali għall-immunità tal-ġisem. Fl-istess ħin, billi tirregola u tittejjeb il-funzjoni immuni tal-coelomocytes, l-immunità tal-ġisem tista 'titjieb ukoll, biex tipprevjeni u tikkura aħjar diversi mard. Minn dan, nistgħu naraw l-importanza tal-immunità. Cistanche jista 'jtejjeb l-immunità. Cistanche hija rikka f'varjetà ta 'sustanzi antiossidanti, bħal vitamina Ċ, vitamina Ċ, karotenojdi, eċċ Dawn l-ingredjenti jistgħu jneħħu r-radikali ħielsa, inaqqsu l-istress ossidattiv, u jtejbu l-immunità. reżistenza tas-sistema.

Ikklikkja benefiċċji cistanche tubulosa

Kliem ewlieni

Annelid, Coelomocytes, Ħniex, Evoluzzjoni, Immunità.

Introduzzjoni

Il-mekkaniżmi ta 'difiża interna jippermettu s-sopravivenza ta' l-ospitanti fil-metazoan. Dawn il-mekkaniżmi jsiru dejjem aktar kumplessi hekk kif jevolvu l-organiżmi. B'differenza dewterostomes vertebrati, protostomi m'għandhomx immunità adattiva, u jibbażaw id-difiża tagħhom fuq l-immunità intrinsika [56]. Il-linja inizjali ta 'difiża kontra batterji u mikro-organiżmi fil-vertebrati hija l-attivazzjoni ta' malajr ta 'ċelluli u molekuli immuni intrinsika. Riċentement, invertebrati saru kandidati għall-analiżi tal-immunità intrinsika biex jiżvelaw strateġiji u kumplessitajiet ta 'rispons immuni adattiv tal-vertebrati. L-invertebrati żviluppaw varjetà ta 'mekkaniżmi immuni attivi inklużi l-produzzjoni ta' peptidi antimikrobiċi, koagulazzjoni, fagoċitożi, u reazzjonijiet ta 'inkapsulament [20, 24]. Dawn il-mekkaniżmi jiddependu fuq "riċetturi ta' rikonoxximent tal-mudell" (PRRs), molekuli immuni intrinsiċi li jistgħu jiddiskriminaw "lilu nnifsu" minn komponenti tal-membrana "mhux awto".

Ir-rikonoxximent ta '"mudelli molekulari assoċjati mal-patoġenu" (PAMPs) jirregola l-bidu ta' mogħdijiet ta 'sinjalazzjoni essenzjali, sal-attivazzjoni ta' ġeni li jikkodifikaw medjaturi infjammatorji, peptidi antimikrobiċi, u regolaturi tal-fagoċitosi [32]. Oligochaetes annelids (earthworms) saru mudell għall-immunoloġija komparattiva, u, bħall-arlingi, huma użati għall-bijomonitoraġġ ambjentali terrestri u akkwatiċi (B.-T. [48, 52, 53, 72]. Ħniex huma pprovduti b'innate, żviluppati ħafna. , u mekkaniżmi ta 'difiża effettivi kontra mikro-organiżmi ambjentali perikolużi. L-ewwel linja mekkanika-bijoloġika ta' difiża, li tissepara l-korp ta 'annelids mill-ambjent estern huwa t-tegument, magħmul minn epidermide u saffi tal-muskoli. Għandu rita b'saff irqiq ta' mucopolysaccharides u proteini, li jaġixxu bħala barriera antimikrobika [20].

Fil-ħniex, is-sistemi immuni ċellulari u umorali jaħdmu flimkien għall-ewwel darba fl-evoluzzjoni tal-metazoan. Il-fluwidu fil-kavità coelomic huwa maħsub li huwa responsabbli għal attivitajiet immunoloġiċi umorali. Il-kavità coelomic tal-ħniex hija mimlija bi fluwidi li fihom coelomocytes ħielsa u wandering u l-aggregati pigmentati tagħhom, imsejħa korpi kannella, prodott ta 'l-inkapsulament ta' batterji invadenti u residwi ta 'partikuli. Diversi proċessi bijoloġiċi, inklużi emolitiċi, proteolitiċi, ċitotossiċi u antibatteriċi huma mwettqa mill-fluwidu coelomic tal-ħniex [19, 24, 29]. Il-coelom jikkomunika direttament mal-ambjent estern permezz tal-pori dorsali u t-tubuli nephridial akkoppjati, li jeħilsu l-metaboliti. Dawn il-pori huma wkoll involuti fl-eliminazzjoni ta 'batterji u coelomocytes eżawriti. F'kundizzjonijiet ta' stress, il-fluwidu coelomic u ċ-ċelloli sospiżi jistgħu jitkeċċew malajr biż-żieda fil-pressjoni intrakolonika [24].

Il-koelomoċiti tal-ħniex huma element essenzjali tal-immunità innata ċellulari. Dawn iċ-ċelloli jixbħu lewkoċiti vertebrati kemm fil-morfoloġija kif ukoll fil-funzjoni [33]. Il-koelomoċiti jwettqu firxa wiesgħa ta 'kompiti, inklużi ċ-ċitotossiċità taċ-ċelluli, l-inkapsulament u l-fagoċitożi. Jistgħu jinqasmu f'żewġ subpopolazzjonijiet primarji: melanocytes u amoebocytes (hyaline u granulari) [33]. Amoebocytes hyalin u granulari huma involuti fil-fagoċitosi u l-inkapsulament, li jesprimu diversi PRRs [23, 60]. Dawn iċ-ċelluli li jiċċirkolaw li jemigraw fit-tessuti mill-kavità coelomic huma simili ħafna għal makrofaġi vertebrati, patoġeni li jaħbtu jew jinkapsulaw, speċi ta 'ossiġnu reattiv (ROS), u ossidu nitriku (NO) [39]. L-eleoċiti jipproduċu firxa wiesgħa ta 'proteini bijoattivi li huma involuti fir-rispons immuni umorali u wkoll jidditossifikaw il-ġisem permezz tas-sistema lisosomali tagħhom [24]. Il-koelomoċiti jistgħu jieħdu sehem f'reazzjonijiet litiċi kontra ċ-ċelloli fil-mira u r-rilaxx ta 'peptidi antimikrobiċi. Fost il-mekkaniżmi immuni, esperimenti ta 'trapjant wrew l-eżistenza ta' awto-rikonoxximent fil-ħniex [28].

Il-koelomoċiti tal-anellidi jiffurmaw malajr mekkaniżmi immuni kontra batterji, parassiti u ħmira permezz ta' reazzjonijiet ċellulari [59]. Dan ir-rispons rapidu huwa medjat minn molekuli antibatteriċi solubbli, bħal lysozyme, lysenin, u lubricin [22, 42, 68]. Molekuli immunoloġiċi kkonservati ħafna, bħal indikaturi tal-wiċċ taċ-ċelluli, ġew skoperti fuq coelomocytes bl-użu ċitometriku għall-analiżi. B'mod partikolari, coelomocytes irreaġixxew ma 'antikorpi speċifiċi għall-mammiferi, u wrew pożittività superfiċjali għal antikorpi anti-CD11a, CD45RA, CD45RO, CDw49b, CD54, b2-M, u Ty-1 [30, 34].

L-istudju tagħna għandu l-għan li jevalwa b'mod immunoistokimiku l-preżenza ta' TLR2, CD14, u -Tubulin għall-ewwel darba f'celomocytes ta' Lumbricus terrestris (Linnaeus, 1758), dud tal-ħniex ċilindriku wiesa', multisegmentat u li jappartjeni għall-familja Lumbricidae (Annelida, Oligochaeta) , ermafrodita, 8 sa 10 ċm twil [55]. It-titjib tal-għarfien tas-sistema interna ta 'difiża invertebrata jista' jgħin fil-fehim tal-immunità aktar sofistikata tal-vertebrati u, konsegwentement, l-evoluzzjoni tar-rispons immuni [63].

materjali u metodi

Kampjuni u Preparazzjoni tat-Tessuti

Il-kampjuni tal-Lombricus terrestris ġejjin mill-histotheca tal-laboratorju tagħna. Preċedentement, kienu meħuda fl-għalqa miftuħa mhux ikkontaminata u akklimatizzati għal ġimgħatejn f'ħamrija friska, kif irrappurtat minn Licata et al. [51], u mbagħad ġew ippreparati bl-użu tal-metodi standard għall-mikroskopija tad-dawl. Il-kampjuni ġew mgħaddsa f'immune (paraformaldehyde 4 fil-mija) (05-W01030705, BioOptica Milano SpA, Milan, Italja) għal sagħtejn. Imbagħad, ġew ittrattati bi skala ta 'etanol deidratanti (minn 30 sa 100 fil-mija etanol), u mbagħad ippreparati għall-inklużjoni fil-paraffin bl-użu tal-xylene.

Ladarba inklużi, żewġ sezzjonijiet irqaq ta '3-5 μm maqtugħin b'mikrotomu li jdur tqiegħdu fuq kull slide.

Istoloġija

Tbajja morfoloġiċi u istokimiċi ntużaw biex jipproċessaw is-slajds [4, 6]. Il-flieli mbagħad ġew reidratati bl-użu ta’ soluzzjonijiet ta’ alkoħol progressiv (minn 100 sa 30 fil-mija etanol), għal ilma distillat wara li ġew deparaffinizzati fi xylene [17], G. [75], sussegwentement, ġew imtebba’ bl-użu ta’ Mallory trichrome u AB/PAS [3] . Wara t-tbajja 'slajds ġew immuntati bl-użu ta' Eukitt (BioOptica Milano SpA, Milan, Italja, Ewropa). Id-dejta dwar ir-razez użati f'dan l-istudju hija inkluża fit-Tabella 1.

Immunofluworexxenza

Sezzjonijiet deparafnizzati ġew ittrattati b'soluzzjoni ta '5 fil-mija ta' borohydride tas-sodju biex tiġi eliminata l-awtofluworexxenza, imbagħad intużat soluzzjoni ta '2.5 fil-mija ta' albumina tas-serum bovin (BSA), u mbagħad slices ġew inkubati matul il-lejl b'antikorpi primarji kontra TLR2, CD14, u -Tubulin [40 ]. Wara dan, saret l-inkubazzjoni ta 'antikorpi sekondarji. Biex jiġi evitat l-ibbliċjar, il-flieli ġew immuntati bl-użu ta ' Fluoromount™ Aqueous Mounting Medium (Sigma-Aldrich, Taufkirchen Ġermanja, Ewropa). L-esperimenti saru mingħajr l-antikorpi primarji bħala kontroll negattiv (dejta mhux murija). Biex tikkonferma li l-antikorpi primarji kienu immunopożittivi, it-tessuti tal-ġilda tal-firien ġew impjegati bħala kontroll pożittiv (dejta mhux murija) [5, 47, 74].

Is-sezzjonijiet ġew analizzati taħt mikroskopju tal-iskannjar tal-lejżer konfokali Zeiss LSM DUO b'modulu META (Carl Zeiss MicroImaging GmbH, Jena, Ġermanja, Ewropa) b'lejżers tal-elju-neon (543 nm) u argon (458 nm) ta' wavelengths differenti [7] . Biex jitjiebu l-istampi Zen 2011 (softwer LSM 700 Zeiss, Oberkochen, il-Ġermanja, l-Ewropa) intuża. Bl-użu ta 'Adobe Photoshop CC verżjoni 2019 (Adobe Systems, San Jose, CA, USA) l-immaġini diġitali ġew magħquda f'figura komposta. Il-kurvi tal-intensità tal-fluworexxenza mbagħad ġew evalwati bl-użu tal-karatteristika "Display profile" ta' Zen 2011 [58]. Id-dettalji dwar l-antikorpi huma miġbura fil-qosor fit-Tabella 2.

Analiżi Kwantitattiva

Id-dejta nġabret għall-analiżi kwantitattiva permezz tal-eżami ta 'għaxar sezzjonijiet u għoxrin qasam għal kull kampjun. Il-pożittività taċ-ċelluli u n-numru ġew evalwati bl-użu ta 'softwer ImageJ 1.53e. In-numru ta' coelomocytes li huma pożittivi għal TLR2, CD14, u -Tubulin kien magħdud bl-użu ta' SigmaPlot verżjoni 14.0 (Systat Software, San Jose, CA, USA). Id-dejta normalment distribwita ġiet analizzata bl-użu ta' ANOVA one-way u t-test ta' Student. Il-valuri medji u devjazzjonijiet standard (SD) tan-numru ta' celomoċiti immunoreattivi huma rrappurtati: ** p Inqas minn jew ugwali għal 0.01, * p Inqas minn jew ugwali għal 0.05.

Riżultati

Il-ħniex Lumbricus terrestris għandu epitelju mono-stratifikat u rita fibruża li tikkostitwixxi l-epidermide. Tessuti konnettivi u muskolari li jikkomponu l-biċċa l-kbira tal-ħajt tal-ġisem jinsabu taħt l-epidermide. L-epitelju epidermali jżomm il-rita tal-kollaġenu distinta mill-bqija tal-organiżmu u huwa responsabbli għall-produzzjoni ta 'dan il-kollaġen kutikulari. Ir-rita, l-epidermide, il-muskolu lonġitudinali, u l-muskolu ċirkolari huma kollha viżibbli permezz ta 'spezzjoni istoloġika tas-sezzjoni trasversali tal-ħajt tal-ġisem tal-ħniex. L-epidermide hija morfoloġikament definita tajjeb; huwa jew saff epiteljali wieħed jew pseudostratified; tikkonsisti f'ċelluli ta' sostenn, bażali, glandulari u sensorji (Fig. 1). Analiżi tal-immunofluworexxenza, fl-osservazzjoni tal-mikroskopju konfokali, juru coelomocytes pożittivi għal TLR2 (Figuri 2, 3), CD14 (Fig. 2), u -Tubulin (Fig. 3), imxerrda fis-saff epidermali u konnettiv hawn taħt, it-tnejn f' il-lonġitudinali u fis-saff tal-muskoli lixxi. TLR2 u CD14 mhumiex kompletament colocalized ma 'xulxin, li jissuġġerixxi li dawn coelomocytes jistgħu jappartjenu għal żewġ familji distinti (Fig. 2). Barra minn hekk, iċ-ċelluli glandulari mukużi kienu pożittivi għat-tubulina fl-epidermide (Fig. 3). Billi analizzat il-funzjoni tal-"profil tal-wiri" tal-mikroskopju konfokali, aħna kkonfermajna l-qċaċet tal-fluworexxenza tal-kolokazzjoni bejn l-antikorpi ttestjati.

Analiżi kwantitattiva żvelat numru simili ta 'koelomocytes pożittivi għall-antikorpi individwali ttestjati, kif muri fit-Tabella 3.

Diskussjoni

Ir-risponsi tal-ospiti kontra l-patoġeni li jinvaduh huma mekkaniżmi fiżjoloġiċi li jappartjenu lill-organiżmi ħajjin kollha. Minn meta dehru l-ewwel ċelluli ewkarjotiċi, diversi proċessi ta 'difiża evolvew biex jiggarantixxu l-integrità taċ-ċelluli, l-omeostażi u s-sopravivenza tal-ospiti [25]. L-invertebrati żviluppaw firxa ta 'risponsi ta' difiża li jirrikonoxxu u jneħħu b'mod effettiv materjali, mikrobi jew parassiti barranin. Filwaqt li l-kordati għandhom immunità adattiva, il-lophotrochozoans bħala ħniex jiddependu primarjament fuq ċelluli immuni intrinsiċi, bħal fagoċiti (amoebocytes, coelomocytes), li jinvolvu PRRs phylogenetikament konservati biex jimmedjaw ir-rispons immuni [41]. Riċetturi kenniesa, TLRs, u riċetturi Nod-like (NLRs) huma rappreżentanti prominenti fl-invertebrati. Wara l-irbit tar-riċettur-ligand, it-trasduzzjoni tas-sinjal tibda kaskata kumplessa ta 'reazzjonijiet ċellulari, li twassal għall-produzzjoni ta' molekuli effettur waħda jew aktar involuti fir-rispons immuni [61]. Il-proteina ċitolitika coelomic (CCF), il-proteina li torbot il-lipopolysaccharide (EaLBI/BPI), u r-riċettur EaTLR simili għal Toll huma t-tliet tipi ta 'PRRs li ġew identifikati fil-ħniex s'issa [65, 66]. CCF ġie identifikat u kkaratterizzat bħala molekula immuni tal-fluwidu coelomic u coelomocytes ta 'Eisenia foetida (Savigny, 1826). CCF, li jorbot mal-antiġeni mikrobjali, jista 'jikkawża l-kaskata tal-profenolossidasi, mekkaniżmu immuni invertebrat importanti li jeżerċita wkoll proprjetajiet opsonizzanti, u b'hekk jippromwovi l-fagoċitosi [18, 35].

TLRs huma riċetturi ta 'rikonoxximent tal-membrana kkonservati b'mod evoluttiv [9, 15] li jirrikonoxxu antiġeni barranin bl-użu ta' PAMPs [2] u jikkontribwixxu għall-modulazzjoni tar-rispons immuni [8, 9, 11, 36]. Bodó et al. [24] wera l-preżenza ta 'TLR fuq coelomocytes ta' annelid oligochaete Eisenia andrei (Bouché, 1972) [24]. Skanta et al. (2013) TLR tal-ħniex iżolat (EaTLR) minn E. andrei. Id-diversità għolja intraspeċi ta 'dan ir-riċettur tindika l-preżenza ta' diversi ġeni TLR fi ħdan il-ġenoma E. andrei. TLR mill-annelid polychaete Capitella teleta (Blake, Grassle, and Eckelbarger, 2009), EaTLR, u TLRs ta’ molluski u ekinodermi jaqsmu ħafna xebh, skont ir-riċerka filoġenetika [66]. Prochazkova et al. enfasizzat EaTLR u multiplu cysteine ​​cluster (MCC) EaTLR espress fit-tessuti tal-ġisem tal-ħniex. L-ewwel wieħed huwa partikolarment abbundanti fis-sistema diġestiva, filwaqt li t-tieni jista 'jaġixxi fl-iżvilupp embrijoniku u r-rispons kontra l-parassiti [61]. Barra minn hekk, il-preżenza tagħha fil-koelomoċiti tista 'tiġi espressa żżejjed minħabba akkumulazzjoni batterjali [66]. Il-koelomoċiti ta' Lumbricus terrestris setgħu jirrikonoxxu l-monoċiti in vitro bħala mhux lilhom infushom, u jikkonfermaw il-kapaċità tagħhom għar-rikonoxximent immuni [62]. Studji tat-traskriptomika jikkonfermaw il-preżenza ta '18-il TLRs fil-polychaete annelid Arenicola marina (Linnaeus, 1758) [67].

Preċedentement urejna l-preżenza ta 'TLR2 f'diversi vertebrati [4, 11, 12, 16, 46, 54] u urocordati [14, 45].

Wara din id-dejta, l-istudju tagħna kkaratterizza immunoistokimikament TLR2 f'celomocytes ta 'Lumbricus terrestris għall-ewwel darba. Aħna kollocalizzajna TLR2/CD14 u TLR2/-Tubulin, u kkonfermaw żewġ tipi ta 'ċelluli ta' coelomocytes, kif irrappurtat minn Engelmann [33]. Mhux il-coelomocytes kollha ġew kolokalizati għall-antikorpi ttestjati, li jissuġġerixxu diversifikazzjoni funzjonali u strutturali probabbli ta 'dawn iċ-ċelloli. Għalkemm m'hemm l-ebda evidenza sperimentali, il-preżenza ta 'coelomocytes colocalized TLR2/CD14 tista' tissuġġerixxi li dawn iċ-ċelloli jistgħu jkunu amoebocytes involuti fil-fagoċitosi, filwaqt li coelomocytes li jesprimu TLR biss jistgħu jkunu ċelluli melanocytes involuti fir-rispons immuni iżda li ma jwettqux funzjonijiet fagoċitiċi [1, 37]. , 38], SJ [49, 50], p.,[57, 71]. Minkejja Bodó et al. li jissuġġerixxi n-nuqqas ta' TLR f'melanoċiti ta' E. andrei bl-użu ta' qPCR [23], melanoċiti pożittivi TLR2- huma skoperti f'L. terrestris, li jissuġġerixxu differenza bejn l-ispeċi tal-ħniex, kif diġà ipotesizzat fuq bażi ġenomika nukleari [64].

Studju minn Eguielor et al. [31] f'arlinga Glossiphonia complanata (Linnaeus, 1758) identifika morfoloġikament u istokimikament tliet tipi ewlenin ta' ċelluli (ċelluli li jixbħu lill-makrofaġi, ċelluli li jixbħu NK, granuloċiti tip I u II) bl-użu ta' markaturi differenti kontra l-bniedem fil-ġrieden speċifiċi għall-makrofagi CD14 u CD61 [44], u ċelluli NK CD56 u CD57 [43]. Din ir-reattività inkroċjata għall-antikorpi ġġenerati kontra l-antiġeni CD tal-mammiferi taqbel mad-dejta tal-letteratura dwar il-korrelazzjonijiet filoġenetiċi bejn l-anellidi u l-vertebrati [21, 30] u tista 'tkun eżempju tal-konservazzjoni evoluttiva ta' dawn il-molekuli immuni.

Antikorpi tal-ġrieden kontra l-bniedem anti-CD24, kontra l-fattur tan-nekrożi tat-tumur (TNF)-, anti-CD45RA, u anti-CD45RO ġew lokalizzati fl-uċuħ coelomocyte tal-ħniex Eisenia foetida [30, 34], li jissuġġerixxi li dawn il-molekuli huma ikkonservat ħafna matul il-filoġenesi. Dawn l-istudji huma konsistenti ma’ riċerka preċedenti li turi li l-antiġeni tal-wiċċ coelomocyte huma cross-reactive ma’ antikorpi kontra CD14, CD11b, u CD11c prodotti fil-mammiferi Temiste petricola (Amor, 1964), li jikkaratterizzaw fagoċiti pożittivi għal antikorpi anti-CD14, CD11b u CD11c [21]. ]. Permezz ta 'din id-dejta, ir-riżultati tagħna wrew ċelluli fagoċitiċi immunoreattivi għal CD14 f'Lumbricus terrestris.

Barra minn hekk, urejna l-immunopożittività ta 'coelomocytes għal -Tubulin, colocalized ma' TLR2, li turi rabta bejn cytoskeleton, mikrotubuli, u rispons immuni intrinsiku medjat minn TLR2. Il-kolokalizzazzjoni ta 'TLR2 u -Tubulin tikkonferma l-involviment ta' tubulin fit-trasport ta 'TLRs fuq il-wiċċ tal-membrana. Studju minn Heli Uronen-Hansson et al. [70] urew espressjoni tubulovesicular estensiva ta 'TLR2 u TLR4 fuq monoċiti interni u esterni kif ukoll fiċ-ċelloli dendritiċi. Peress li dawn ir-riċetturi huma kolokalizati ma '-Tubulin u marbuta direttament mal-kumpless ta' Golgi, il-mikrotubuli jistgħu jservu bħala kondjuwit għat-trasferiment ta 'vesicles TLR [70]. Tubulin huwa wkoll preżenti fl-epidermide, jgħin biex iżżomm l-integrità tiegħu [27], u jintervjeni fil-fejqan tal-feriti [73], u b'hekk jgħin lis-sistema immuni intrinsika, kif ukoll irrappurtat minn studji dwar Nematoda Caenorhabditis elegans (Maupass, 1900) [27, 69].

Il-kolokalizzazzjoni, ikkonfermata mill-funzjoni "display profile" tal-mikroskopju konfokali, tikkorrobora r-riżultati miksuba, u tenfasizza l-quċċata tal-fluworexxenza li tikkorrispondi mal-irbit tal-antikorpi mal-antiġeni korrispondenti.

Bħala konklużjoni, l-istudju tagħna jidentifika permezz ta 'mikroskopija konfokali coelomocytes immunoreattivi għal TLR2, CD14, u -Tubulin għall-ewwel darba f'Oligochaeta annelid Lumbricus terrestris. Din id-dejta mhux biss tivvalida l-konservazzjoni evoluzzjonarja importanti ta 'dawn il-molekuli, iżda wkoll tapprofondixxi l-għarfien tagħna tas-sistema interna ta' difiża ta 'invertebrati, partikolarment l-anellidi, u tista' tipprovdi indikazzjonijiet utli għal studji futuri, ittejjeb l-istudju tal-mekkaniżmi immuni intrinsiċi kumplessi ta ' vertebrati ta' fuq.

Dikjarazzjoni tal-bord ta' reviżjoni istituzzjonali

Ir-reviżjoni etika u l-approvazzjoni tneħħew għal dan l-istudju minħabba li ma ġew applikati l-ebda proċeduri sperimentali għall-kampjuni.

Kontribuzzjonijiet tal-awturi

Kunċettwalizzazzjoni, Alessio Alesci; analiżi formali, Alessio Alesci u Angelo Fumia; investigazzjoni, Alessio Alesci, Gioele Capillo, Angelo Fumia, Marco Albano, Emmanuele Messina, Nunziacarla Spanò, Simona Pergolizzi, u Eugenia Rita Lauriano; data curation, Alessio Alesci, Gioele Capillo, Angelo Fumia, Marco Albano, Emmanuele Messina, Nunziacarla Spanò, Simona Pergolizzi, and Eugenia Rita Lauriano.; kitba—preparazzjoni tal-abbozz oriġinali, Alessio Alesci; kitba—reviżjoni u editjar, Alessio Alesci, Gioele Capillo, Nunziacarla Spanò, Simona Pergolizzi, u Eugenia Rita Lauriano; viżwalizzazzjoni, Alessio Alesci u Angelo Fumia; superviżjoni, Eugenia Rita Lautiano. L-awturi kollha qraw u qablu mal-verżjoni ppubblikata tal-manuskritt.

Finanzjament

Din ir-riċerka ma rċeviet l-ebda finanzjament estern.

Disponibbiltà ta 'data u materjali

Id-dejta ppreżentata f'dan l-istudju hija disponibbli fl-artikolu.

Dikjarazzjonijiet

Approvazzjoni etika u kunsens għall-parteċipazzjoni

Ma japplikax.

Interessi li jikkompetu

L-awturi ma jiddikjaraw l-ebda kunflitt ta' interess.

Referenzi

1. Aderem A, Underhill DM. Mekkaniżmi ta 'fagoċitożi fil-makrofaġi. Ann Rev Immunol. 1999;17(1):593–623. https://doi.org/10.1146/annur ev.immunol.17.1.593.

2. Akira S, Uematsu S, Takeuchi O. Rikonoxximent tal-Patoġeni u Immunità Innata. Ċellula. 2006;124(4):783–801. https://doi.org/10.1016/j.cell.2006.02.015.

3. Alesci A, Albano M, Savoca S, Mokhtar DM, Fumia A, Aragona M, Lo Cascio P, Hussein MM, Capillo G, Pergolizzi S, Spanò N, Lauriano ER. Identifikazzjoni konfokali ta 'molekuli immuni fiċ-ċelluli tal-klabb tal-ġilda ta' Zebrafsh (Danio rerio, Hamilton 1882) u r-rwol possibbli tagħhom fl-immunità. Bijoloġija. 2022;11(11):1653. https://doi.org/10.3390/biology11111653.

4. Alesci A, Capillo G, Fumia A, Messina E, Albano M, Aragona M, Lo Cascio P, Spanò N, Pergolizzi S, Lauriano ER. Karatterizzazzjoni konfokali ta 'Ċelloli Dendritiċi intestinali minn Myxines għal Teleosts. Bijoloġija. 2022;11(7):1045.https://doi.org/10.3390/biology11071045.

5. Alesci A, Capillo G, Mokhtar DM, Fumia A, D'Angelo R, Lo Cascio P, Albano M, Guerrera MC, Sayed RKA, Spanò N, Pergolizzi S, Lauriano ER. Espressjoni ta 'Peptide Antimikrobiku Piscidin1 f'Gills Mast Cells ta' Giant Mudskipper Periophthalmodon schlosseri (Pallas, 1770). Int J Mol Sci. 2022;23(22):13707. https://doi.org/10.3390/ijms232213707.

6. Alesci A, Cicero N, Fumia A, Petrarca C, Mangifesta R, Nava V, Lo Cascio P, Gangemi S, Di Gioacchino M, Lauriano ER. Analiżi istoloġika u kimika ta 'metalli tqal fil-kliewi u l-garġi ta' Boops Boops: Ċentri Melanomacrophages u Ċelloli Rodlet bħala Biomarkers Ambjentali. Tossiċi. 2022;10(5):218. https://doi.org/10.3390/toxics10050218.

7. Alesci, A., Fumia, A., Miller, A., Calabrò, C., Santini, A., Cicero, N., & Lo Cascio, P. (2022). Spirulina jippromwovi l-aggregazzjoni tal-makrofagi fil-fwied taż-zebrafish (Danio rerio). Nat Prod Res, 1–7. https://doi.org/10.1080/14786419. 2022.2089883.

8. Alesci, A., Gitto, M., Kotańska, M., Lo Cascio, P., Miller, A., Nicosia, N., Fumia, A., & Pergolizzi, S. (2022). L-immunoġeniċità, l-effettività, is-sigurtà u l-impatt psikoloġiku tal-vaċċini tal-mRNA COVID-19. Immunol uman, S0198885922001586. https://doi.org/10.1016/j.humimm.2022.08.004.

9. Alesci, A., Lauriano, ER, Aragona, M., Capillo, G., & Pergolizzi, S. (2020). Immarkar vertebrati ċelluli Langerhans, mill-ħut għall-mammiferi. Acta Histochemica, 122(7): 151622. https://doi.org/10.1016/j.acthis.2020.151622.

10. Alesci A, Lauriano ER, Fumia A, Irrera N, Mastrantonio E, Vaccaro M, Gangemi S, Santini A, Cicero N, Pergolizzi S. Relationship between Immune Cells, Depression, Stress, and Psorajisis: Could the Use of Natural Products Kun Għajnuna? Molekuli. 2022;27(6):1953.

11. Alesci, A., Pergolizzi, S., Capillo, G., Lo Cascio, P., & Lauriano, ER (2022). Ċelloli Rodlet fil-kliewi tal-ħut tad-deheb (Carassius auratus, Linnaeus 1758): Studju ta 'mikroskopija ħafifa u konfokali. Acta Histochemica, 124(3):151876.

12. Alesci, A., Pergolizzi, S., Fumia, A., Calabrò, C., Lo Cascio, P., & Lauriano, ER (2022). Ċelloli mast fl-imsaren tad-deheb (Carassius auratus): Karatterizzazzjoni immunoistokimika. Acta Zoologica.

13. Alesci A, Pergolizzi S, Fumia A, Miller A, Cernigliaro C, Zaccone M, Salamone V, Mastrantonio E, Gangemi S, Pioggia G, Cicero N. Immune System and Psychological State of Pregnant Women during COVID-19 .Pandemija: Huma Mikronutrijenti Kapaċi Jappoġġaw it-Tqala? Nutrijenti. 2022;14(12):2534. https://doi.org/10.3390/nu14122534. 14. Alesci, A., Pergolizzi, S., Lo Cascio, P., Capillo, G., & Lauriano, ER (2022). Lokalizzazzjoni ta 'peptide intestinali vażoattiv u ċelluli immunoreattivi tar-riċettur 2 simili għal toll fl-endostil ta' urochordate Styela plicata (Lesueur, 1823). Microsc Res Tech, https://doi.org/10.1002/jemt.24119.

15. Alesci A, Pergolizzi S, Lo Cascio P, Fumia A, Lauriano ER. Riġenerazzjoni newronali: Ħarsa ġenerali komparattiva tal-Vertebrati u perspettivi ġodda għal mard newrodeġenerattiv. Acta Zoologica. 2021. https://doi.org/10. 1111/azo.12397.

16. Alesci A, Pergolizzi S, Savoca S, Fumia A, Mangano A, Albano M, Messina E, Aragona M, Lo Cascio P, Capillo G, Lauriano ER. Issib Ċelloli Goblet intestinali tal-Broadgilled Hagfsh Eptatretus Cirrhatus (Forster, 1801): Evalwazzjoni tal-Mikroskopija Konfokali. Bijoloġija. 2022;11(9):1366.https://doi.org/10.3390/biology11091366.

17. Alturkistani HA, Tashkandi FM, Mohammedsaleh ZM. Tbajja Istoloġika: Reviżjoni tal-Letteratura u Studju ta' Każ. Globali J Saħħa Sci. 2015;8(3):72.https://doi.org/10.5539/gjhs.v8n3p72.

18. Beschin A, Bilej M, Brys L, Torreele E, Lucas R, Magez S, De Baetselier P. Evoluzzjoni konverġenti taċ-ċitokini. Natura. 1999;400(6745):627–8.https://doi.org/10.1038/23164.

19. Bilej M, De Baetselier P, Beschin A. Antimicrobial defense of the earthworm. Folja Microbiol. 2000;45(4):283–300. https://doi.org/10.1007/BF028 17549.

20. Bilej M, Procházková P, Šilerová M, Josková R (2010) Earthworm Immunity. Fi: Söderhäll K, edotiro. Immunità Invertebrata, Vol. 708. Boston: Springer; p. 66–79). https://doi.org/10.1007/978-1-4419-8059-5_4.

21. Blanco GAC, Escalade AM, Alvarez E, Hajos S. Stimulazzjoni indotta minn LPS ta 'fagoċitożi fid-dudu sipunkulan Themiste petricola: Involviment possibbli ta' molekuli reattivi inkroċjati CD14, CD11B, u CD11C tal-bniedem. Dev Comp Immunol. 1997;21(4):349–62. https://doi.org/10.1016/ S0145-305X(97)00007-4.

22. Bodó K, Boros Á, Rumpler É, Molnár L, Böröcz K, Németh P, Engelmann P. Identification of new lubricin homologs in Eisenia andrei earthworms. Dev Comp Immunol. 2019;90:41–6.

23. Bodó, K., Ernszt, D., Németh, P., & Engelmann, P. (2018). Marki tas-swaba 'molekulari immuni u relatati mad-difiża distinti f'sottosettijiet separati ta' coelomocyte tal-ħniex Eisenia andrei. Sopravivenza Invertebrata J, 338–345.

24. Bodó K, Kellermayer Z, László Z, Boros Á, Kokhanyuk B, Németh P, Engelmann P. Rispons Immune Innat Indott minn Korriment Waqt ir-Riġenerazzjoni tas-Segment tad-Dudu, Eisenia andrei. Int J Mol Sci. 2021;22(5):2363.

25. Buchmann, K. (2014). Evoluzzjoni tal-Immunità Innata: Ħjiel minn Invertebrati permezz tal-Ħut għall-Mammiferi. Fruntieri fl-Immunoloġija.

For more information:1950477648nn@gmail.com