Tqabbil tad-differenzi fil-kontenut ta' tmien komponenti kimiċi fi prodotti mhux ipproċessati u pproċessati bl-inbid ta' żewġ tipi ta' Cistanche Deserticola Ibbażat fuq UPLC Ⅱ

2. Metodi u Riżultati

2.1 Kundizzjonijiet Kromatografiċi

L-analiżi UPLC saret bl-użu ta' aKolonna Waters ACQUITY UPLC™ BEH C18 (100 mm × 2.1 mm, daqs tal-partiċelli 1.7 μm). Il-fażi mobbli kienet tikkonsisti minnmetanol (A)u0.1% soluzzjoni milwiema ta 'aċidu formiku (B)bl-elużjoni tal-gradjent li ġejja:

0–4 min: 10% → 26% A

4–18 min: 26% → 40% A

18–20 min: 40% → 50% A

Rata tal-fluss:0.3 mL/min
Volum ta' injezzjoni:3 μL
Temperatura tal-kolonna:35°C
Wavelength ta' sejbien:330 nm

2.2 Preparazzjoni ta' Soluzzjonijiet

2.2.1 Soluzzjoni ta' Referenza Mħallta

Iżen preċiż il-komposti standard li ġejjin:cistanoside F, echinacoside, cistanoside A, verbascoside, tubuloside A, isoverbascoside, 2'-acetylverbascoside, utubuloside B. Dewweb f'50% metanol biex tipprepara taħlita ta' referenza bil-konċentrazzjonijiet li ġejjin (µg·mL⁻¹):

Cistanoside F: 32.7

Echinacoside: 102.4

Cistanoside A: 50.2

Verbascoside: 80.6

Tubuloside A: 25.6

Isoverbascoside: 86.3

2'-Acetylverbascoside: 77.3

Tubuloside B: 60.8

2.2.2 Soluzzjoni tal-Kampjun

Flieli ta' Cistanche nejjinġew ippreparati billi trattib il-ħaxix, it-tqattigħ, u t-tnixxif.
Cistanche tal-inbidġiet ippreparata billi tgħaddis flieli nejjin f'inbid tar-ross ta '30%, it-taħlita bil-fwar għal 12-il siegħa, tkessaħ, u terġa' tnixxif.

Bejn wieħed u ieħor0.2 gta 'trab imnixxef (mgħoddi minn għarbiel ta' 65 malja) ġie miżun f'kunjett volumetriku ambra ta '50 mL, estratt b'25 mL ta' 50% metanol, ivvibrat għal 40 minuta (250 W, 35 kHz), u miġjub lura għall-piż. Is-soluzzjoni ġiet iffiltrata minn a0.22 μm membrana, u l-filtrat intuża għall-analiżi.

Nota: H. Deżert Cistanche; G. Tubulosa Cistanche; RH. Cistanche deserticola flieli nejjin; RG. Cistanche tubulosa flieli nejjin; WH. Cistanche deserticola stewed bl-inbid; WG. Cistanche tubulosa stewed bl-inbid; Figuri 4 sa 7 huma l-istess.
Figura 1 Stampi ta' materjali mediċinali Cistanche deserticola u Cistanche tubulosa, flieli nejjin, u stewed bl-inbid

inbid cistanche famuż mibjugħ fiċ-Ċina

Ixtri Issa

Servizz ta 'Appoġġ Ta' Wecistanche-Ikkuntattjana Biex Ikseb Dettalji kampjun jew Bejgħ bl-ingrossa
Email:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Tel:+86 15292862950

2.3 Analiżi Kwantitattiva ta '8 Komposti Maġġuri f'Cistanche mhux ipproċessat u pproċessat bl-inbid

2.3.1 L-Idoneità tas-Sistema

Taħt il-kundizzjonijiet kromatografiċi deskritti, numru tal-pjanċa teoretiku għalechinacoside exceeded 6000 with good resolution (>1.5). Il-kromatogrammi tal-istandard imħallat, il-kampjuni mhux ipproċessati tad-deżert Cistanche, u l-inbid huma murija fil-Figura 2.

Identifikazzjoni tal-Oqsma:

Cistanoside F

Echinacoside

Cistanoside A

Verbascoside

Tubuloside A

Isoverbascoside

2'-Acetylverbascoside

Tubuloside B

cistanche deserticola

cistanche tubulosa

2.3.2 Linearità u Limiti ta' Sejbien

Il-kurvi ta' kalibrazzjoni standard ġew stabbiliti bl-użu ta' dilwizzjonijiet serjali tat-taħlita ta' referenza f'konċentrazzjonijiet ta' 0.1 sa 5.0 mL. Il-kurvi tal-kalibrazzjoni ġew iġġenerati permezz tal-plottkonċentrazzjoni (X)kontrażona tal-quċċata (Y). Limiti ta' skoperta (LOD, S/N=3) u limiti ta' kwantifikazzjoni (LOQ, S/N=10) ġew determinati u kkonfermati linearità tajba fil-meded ittestjati.

2.3.3 Preċiżjoni

Urew sitt injezzjonijiet replikati tas-soluzzjoni ta' referenza mħalltadevjazzjonijiet standard relattivi (RSDs)ta’ żoni peak li jvarjaw minn0.48% sa 2.14%, li jindika preċiżjoni ta 'strument eċċellenti.

2.3.4 Stabbiltà

Soluzzjonijiet kampjun ta 'trab ta' Cistanche nej (Lott Nru. 160901)ġew analizzati fi 0, 2, 4, 8, 12, u 24 siegħa. L-RSDs taż-żoni peak għat-8 komposti kollha varjaw minn0.71% sa 1.93%, tikkonfermastabbiltà tas-soluzzjoni fi żmien 24 siegħa.

Tabella 1. Informazzjoni tal-Kampjun ta 'Materjali Cistanche

2.3.5 Ripetibbiltà

Sitt repliki mħejjija b'mod indipendenti tal-istess lott Cistanche wrew ripetibbiltà tajba. Kontenut medju (mg·g⁻¹) u RSDs kienu kif ġej:

2.3.6 Test tal-Irkupru

L-irkupru ġie ttestjat permezz ta 'spikingsitt repliki ta' trab Cistanche (0.1 g)b'konċentrazzjonijiet magħrufa tat-8 komposti ta' referenza. L-irkupri medji varjaw minn95.56% sa 102.71%, b'RSDs bejn1.44% u 2.97%, li jindikaestrazzjoni eċċellenti u affidabilità ta 'kwantifikazzjoni.

Nota: A. Referenza mħallta; B. Cistanche deserticola nej; C. Stewed Cistanche deserticola fl-inbid; 1. Cistancheside F; 2. Echinacoside; 3. Cistancheside A; 4. Verbascoside; 5. Tubuloside A; 6. Isoverbascoside; 7. 2΄-acetylverbascoside; 8. Tubuloside B.

2.3.7 Kwantifikazzjoni ta' Komposti Attivi f'Cistanche Nej vs Ipproċessat bl-Inbid

Kull kampjun ġie ttestjat f'żewġ kopji. It-8 komposti fil-mira ġew ikkwantifikati fi10 lottijiet ta' Cistanche deserticola(nejjin u pproċessati bl-inbid) u10 lottijiet ta' Cistanche tubulosa. Ir-riżultati huma miġbura fil-qosor fit-Tabella 3, li toffri għarfien dwar:

Differenzi speċifiċi għall-ispeċi fil-kompożizzjoni

Bidliet fil-kontenut fitokimiku wara l-ipproċessar tal-inbid

Marki tas-swaba 'analitiċi għall-kontroll tal-kwalità ta' Cistanche

Tabella 2. Kurvi ta' Kalibrazzjoni, Koeffiċjenti ta' Korrelazzjoni (r), Meded Lineari, LOD u LOQ għal Tmien Komposti

2.4 Analiżi Komparattiva tal-Kompożizzjoni Kimika Bejn Speċi Cistanche

Biex tinvestiga l-differenzi fitokimiċibejnCistanche deserticolauCistanche tubulosa, il-konċentrazzjonijiet ta 'tmien ewleninphenylethanoid glycosidesminn10 lottijiet ta 'kampjuni nejjin u pproċessati bl-inbidta kull speċi ġew viżwalizzati bl-użukaxxi plottijiet (Figura 3). L-analiżi statistika wriet li, ħlief għal2'-acetylverbascosideutubuloside B, il-biċċa l-kbira tal-komposti l-oħra wrewdifferenzi sinifikanti (P ​​< 0.05)bejn iż-żewġ speċi kemm f'forom nejjin kif ukoll ipproċessati.

Speċifikament:

FilCistanche nej, il-kontenut ta'cistanoside F, echinacoside, isoverbascoside, tubuloside A, u verbascosidekienaktar baxxi b'mod sinifikantifiC. deserticolameta mqabbla ma 'C. tubulosa(P <0.05).

Il-kampjuni pproċessati bl-inbidrifless xejriet simili.

Notevolment,cistanoside Ainstab filivelli ogħla fiC. deserticolau kienma jinstabxfiC. tubulosa, jissuġġerixxi li jista' jservi bħala akompost marker potenzjaligħad-divrenzjar tal-ispeċi.

PLS-DA Analiżi Kimometrika ta 'Speċi Cistanche

A Analiżi Diskriminanti Parzjali ta' l-Inqas Kwadri (PLS-DA)twettqet bl-użu tad-dejta tal-konċentrazzjoni tat-tmien komposti. Ir-riżultatpunteġġ plottijiet (Figura 4A)wera li kampjuni nejjin u pproċessati miż-żewġ speċi għamluma jinġabrux fi gruppi separati b'mod ċar.

Madankollu,testijiet tal-permutazzjoni każwali (Figura 4B)żvelat li l-mudell kienmhux iżżejjed, bħala l-valuri veri taR²Y u Q²kienu ogħla minn dawk tal-mudelli permuted. Il relattivamentvaluri Q² baxxijissuġġerixxiprevedibbiltà limitata, probabbli minħabbavarjabilità fi ħdan il-gruppufirxiet komposti li jikkoinċidubejn forom mhux ipproċessati u pproċessati.

Aktar Immudellar PLS-DA u Analiżi VIP

Inbnew mudelli PLS-DA separati għal kampjuni mhux ipproċessati u pproċessati bl-inbid taż-żewġ speċi biex jiġu esploratidifferenzi kimiċi speċifiċi għall-ispeċi. Ġew osservati dawn li ġejjin:

Score plots (Figuri 5A u 5C)weraraggruppament distintbejnC. deserticolauC. tubulosakemm f'forom mhux ipproċessati kif ukoll f'forom ipproċessati.

Validazzjoni tal-mudell (Figuri 5B u 5D)ikkonfermat saħħa ta 'tbassir tajba mingħajr żżejjed.

Plottijiet ta' Importanza Varjabbli fil-Projezzjoni (VIP) (Figuri 6A u 6B)identifikaw komposti ewlenin li jikkontribwixxu għad-diskriminazzjoni tal-ispeċi:

Għalkampjuni mhux ipproċessati: Cistanoside A, cistanoside F, echinacoside, uverbascosidekienu l-aktar informattivi.

Għalkampjuni pproċessati bl-inbid: Cistanoside Autubuloside Bkellha rwoli dominanti.

2.5 Impatt tal-Ipproċessar tal-Inbid fuq il-Fitokimika ta' Cistanche

Minħabba varjazzjoni sostanzjali fil-kontenut tal-kompost bejn il-lottijiet,paraguni pairedsaru bejn kampjuni nejjin u pproċessati bl-inbid tal-istess lott. Ir-riżultati, viżwalizzati bl-użuplots tal-vjolin (Figura 7), żvelat dan li ġej:

FilC. deserticola, livelli ta'2'-acetylverbascoside, cistanoside A, cistanoside F, echinacoside, tubuloside A, u verbascoside naqas b'mod sinifikantiwara l-ipproċessar (P < 0.05), filwaqt litubuloside B żdied.

FilC. tubulosa, livelli ta'2'-acetylverbascoside, echinacoside, u verbascosideukollnaqas, filwaqt liisoverbascoside u tubuloside B żdiedb'mod sinifikanti (P ​​<0.05).

Dawn is-sejbiet jissuġġerixxu li l-ipproċessar tal-inbid jista 'jwassal għalidroliżi, isomerizzazzjoni, jewtrasformazzjoni kimikata' ingredjenti attivi.

3. Diskussjoni

Skond il-Edizzjoni 2020 tal-Farmakopea Ċiniża, Cistanche deserticolagħandu jkun fih mhux inqas minn0.3%tal-kontenut magħqud ta'echinacoside u verbascoside, billiCistanche tubulosagħandu jkun fih mhux inqas minn1.5%minn dawn iż-żewġ komposti. F'dan l-istudju, il-kampjuni kollha nejjin u pproċessati - ħlief lott wieħed (180710) - issodisfaw dawn l-istandards.

Minkejjavarjabilità minn lott għal lottfi ħdan kull speċi (xi komposti kienu differenti sa 10 darbiet, bħal tubuloside A u isoverbascoside), differenzi statistikament sinifikanti fil-kontenut kompost kienu osservati b'mod konsistenti bejn iż-żewġ speċi. Dan jikkonferma lil-oriġini tal-ispeċi hija fattur ewlienijinfluwenzaw il-kompożizzjoni fitokimika.

Barra minn hekk,cistanoside Akienmisjuba biss fiC. deserticolau assenti filC. tubulosa, li jagħmilha amarkatur siewi għall-awtentikazzjoni tal-ispeċi, speċjalment f'ambjenti farmakognostiċi jew ta 'kontroll tal-kwalità.

🔬 Effett ta 'l-Ipproċessar ta' l-Inbid fuq Kompożizzjoni Kimika

Wara l-ipproċessar tal-inbid, iż-żewġ speċi wrew xejra konsistenti:

Livelli mnaqqsata':
Cistanoside F, echinacoside, cistanoside A, verbascoside, tubuloside A, u 2'-acetylverbascoside

Livelli miżjudata':
Tubuloside B u isoverbascoside

Dawn ix-xejriet jistgħu jirriżultaw minnidroliżi kimika, degradazzjoni, jewriarranġament strutturalimatul il-proċess tal-fwar. Interessanti, il-il-kobor u d-direzzjoni tal-bidliet varjaw bejn il-lottijiet, probabbli minħabba differenzi fi:

Konċentrazzjonijiet tal-kompost inizjali

Morfoloġija tal-ħxejjex (daqs, ħxuna)

Sensittività għall-kundizzjonijiet tal-ipproċessar

Dan jenfasizza l-importanza ta 'l-istandardizzazzjoni tal-parametri tal-ipproċessaru t-tmexxijavalutazzjonijiet tal-kwalità speċifiċi għall-lottwaqt il-preparazzjoni tal-ħxejjex.