Cistanche Tubulosa Tħares in-Newroni Dopaminerġiċi Permezz tar-Regolament tal-Apoptożi U Fattur Newrotrofiku Derivat Miċ-Ċelloli Gliali: in Vivo U in Vitro-Ⅱ

Testijiet tal-Imġieba

Test tal-Għawm (Zhu et al., 2014)

Il-koordinazzjoni tal-moviment tal-ġisem fil-ġrieden kienet imkejla permezz tat-test tal-Għawm. Il-ġrieden tpoġġew individwalment f'tank tal-ilma (25 ċm għoli u 10 ċm fid-dijametru) li kien fih 10 ċm ta 'ilma u ttestjati f'ambjent kwiet biex jirreġistraw it-tul stazzjonarju tagħhom fuq 5 min.

Test tal-Qasam Miftuħ (Kawai et al., 1998)

L-attività lokomotriċi ġiet imkejla bl-użu tat-test Open field. Il-ġrieden ġew ittestjati f'ambjent kwiet u mdawwal ħażin u mqiegħda individwalment f'kontenitur akriliku trasparenti ta '30 cm × 30 cm × 15 cm bi gradilja ta' separazzjoni ta '6 cm × 6 cm fil-qiegħ. Il-ġrieden ingħataw 10 minuti biex jadattaw għall-ambjent u mbagħad l-ambulanza tan-numru tal-grilja u l-frekwenza tat-trobbija tal-ġrieden individwali ġew imkejla ħames darbiet konsekuttivi biex jinkisbu valuri medji.

CISTANCHE TUBULOSA NATURALI GĦAT-TITJIB TAL-FUNZJONI SESSWALI PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Teħid ta' Kampjuni tat-Tessut tal-Moħħ

Qabel it-teħid ta 'kampjuni tat-tessuti, il-ġrieden ġew mitmugħa ad libitum b'aċċess ħieles għall-ilma u rċevew intervent tad-droga għal 14-il jum konsekuttiv. Erba 'ġrieden f'kull grupp ġew magħżula u malajr decapitated. L-SN (Bregma: -2.75 mm -2.92 mm) minn kull annimal ġie iżolat u mqiegħed fuq is-silġ. It-tessuti tal-moħħ ġew laħlaħ b'0.9% soluzzjoni ta 'klorur tas-sodju kiesaħ bis-silġ biex tneħħi kwalunkwe demm u mnixxfa fuq karta tal-filtru qabel ma tinħażen f'-80◦C. Erba 'ġrieden minn kull grupp ġew anestetizzati intraperitonealment u s-sidir tagħhom infetħu. Imbagħad iddaħħlet labra tal-infużjoni fil-ventrikul tax-xellug ta’ kull annimal. Biex tneħħi d-demm fis-sistema ċirkolatorja, l-appendiċi atrijali tal-lemin inqatgħet u l-annimal ġie infuż b'salina normali ta '4◦C sakemm il-fwied sar ċar biex jiżgura perfużjoni suċċessiva. Ladarba l-effluwent ta 'l-atriju tal-lemin sar ċar, kull annimal ġie mxerred b'4% fissattiv ta' paraformaldehyde. Wara l-perfużjoni, it-tessut tal-moħħ ta 'kull annimal imbagħad ġie mqassam bir-reqqa u ġie ffissat wara f'4% paraformaldehyde għal 24 siegħa. Tessuti tal-moħħ fissi mbagħad ġew laħlaħ taħt ilma ġieri, deidratati f'serje gradata ta 'soluzzjonijiet ta' etanol, u mneħħija f'soluzzjoni ta 'xylene. Dan kien segwit minn immersjoni u inkorporazzjoni tal-paraffin.

Bidliet tal-Kwantità DA Mkejla mill-HPLC

L-SN nanotrab minn kull grupp tpoġġa f'banju tas-silġ li kien fih 0.9% soluzzjoni tal-klorur tas-sodju (proporzjon 1:9). It-tessut tal-moħħ ġie omoġenizzat bl-użu ta 'disruptor taċ-ċelluli ultrasoniku u ċentrifugat f'1200 rpm għal 20 min f'4◦C biex jinkiseb is-supernatant. Għal HPLC, intużat kolonna Hypersil AA-ODS (2.1 mm × 200 mm, 5 µm) f'temperatura tal-kolonna ta '30◦C. L-iskoperta tal-fluworexxenza twettqet f'280 nm λex u 340 nm λem. Il-volum tal-injezzjoni kien 10 µL.

Espressjoni ta' TH, GDNF, GFR 1 u Ret Individwati mill-Immunoistokimika

Sezzjonijiet tal-paraffin (ħxuna ta '5 µm) ta' tessut tal-moħħ individwali ġew iżolati minn kull annimal u mqiegħda f'banju ta 'ilma sħun ta' 40◦C biex iċċattjaw u jeħel mal-pjastri tal-ħġieġ. Il-pjastri tat-tessuti kollha ġew inkubati f'forn ta '60◦C għal 3-6 sigħat, segwiti minn dewaxing tal-xylene, deidrazzjoni tal-etanol gradjent u rkupru tal-antiġeni billi inkubaw f'buffer tal-aċidu ċitriku u ssaħħan f'microwave għal 20 min. Il-pjastri tat-tessuti mbagħad ġew inkubati f'soluzzjoni ta '3% H2O2 f'temperatura tal-kamra għal 10 min. Wara li nħaslu tliet darbiet f'PBS, il-pjastri tat-tessut ġew inkubati b'serum normali f'kamra magħluqa f'temperatura tal-kamra għal 20 min. Tbajja immunoistokimika saret skond l-istruzzjonijiet tal-manifattur. Intuża analizzatur tal-immaġni Motic Med 6.0 biex jikkalkula l-valur tad-densità ottika integrata fiċ-ċelloli mtebbgħin b'mod pożittiv.

Western Blot Analiżi fit-Tessuti tal-Moħħ tal-ġrieden

Dan l-istudju vvaluta l-espressjoni tal-proteina ta 'tyrosine hydroxylase (TH), GDNF, GFR 1, Ret, Bcl2, u Bax. Il-lisat tal-moħħ minn kull grupp ġie omoġenizzat għal 3{{10}} min fuq is-silġ, segwit minn ċentrifugazzjoni f'temperatura baxxa, 20,000 rpm, f'4 ◦C għal 5 min biex tiġbor is-supernatant. Il-kampjuni tal-proteini ġew separati taħt pressjoni kostanti bl-użu ta' ġel SDS-PAGE ta' 10% kif deskritt hawn fuq. Il-konċentrazzjoni primarja tal-antikorpi: TH 0.15 mg/ml, GDNF 0.5 mg/ml, GFR 1 0.8 mg/ml, Ret 0.63 mg/ml, Bcl{-2 0.34 mg/ml, u Bax 0.11 mg/ml. Il-proċedura kienet l-istess bħal hawn fuq.

CISTANCHE TUBULOSA NATURALI GĦAL ANTI-Aging ANTI-ALZHEIMER PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Analiżi Statistika

Dan l-istudju uża softwer statistiku SPSS 20.0 għall-ipproċessar u l-analiżi tad-dejta. Il-valuri tal-parametri ġew espressi bħala medja ± devjazzjoni standard (¯x ± S). ANOVA intużat għall-analiżi tad-dejta b'fattur wieħed. LSD jew it-test tal-Logħob-Howell intuża biex iqabbel il-gruppi. P< 0.05 (or P < 0.01) was considered as a statistically significant difference.

RIŻULTATI

Il-Komponenti Attivi ta 'C. tubulosa Nanopowder

Fil-medda ta 'skanjar 200-400 nm, ECH f'C. tubulosa u VER f'330 nm kellhom il-quċċata ta' assorbiment massimu, li deher fi żmien 20 min. L-ICA kellha qċaċet massimi ta 'assorbiment f'270 nm u deher wara 20 min (Figura 1A). Ir-riżultati wrew li l-kampjuni negattivi ma interferixxewx mal-kxif (Figura 1B). Il-kampjuni u l-kontroll kellhom l-istess qċaċet kromatografiċi u l-kampjun negattiv ma kellu xejn. Dan wera li l-ingredjenti l-oħra fil-kampjun ma interferixx mal-komponent li qed jitkejjel. Barra minn hekk, it-tliet komponenti u l-qċaċet li jmissu magħhom jistgħu jilħqu l-linja bażi tas-separazzjoni u l-grad ta 'separazzjoni kien akbar minn 1.5.

C. tubulosa Nanotrab MPP Mnaqqas+ -Ċitotossiċità Indotta fiċ-Ċelloli MES23.5

Il-vijabbiltà taċ-ċelloli MES23.5 tnaqqset b'mod sinifikanti b'konċentrazzjonijiet dejjem jiżdiedu ta 'MPP+. Figura 2F turi ċ-ċitotossiċità sinifikanti ta 'konċentrazzjonijiet differenti ta' MPP +.

C. tubulosa nanopowder naqqas iċ-ċitotossiċità indotta MPP+-u saħħaħ il-vijabbiltà taċ-ċelloli MES23.5. Il-Figura 2G turi li dożaġġi ta 'nanotrab ta' C. tubulosa ta '10–250 µg/mL eżerċitaw effetti protettivi dipendenti fuq id-doża fuq iċ-ċelloli MES23.5 ittrattati MPP+-.

Effett Ċitomorfoloġiku ta 'C. tubulosa Nanopowder

Iċ-ċelloli MES23.5 normali kellhom adeżjoni tajba taċ-ċelluli u kienu f'forma ta 'magħżel b'konfini ċari taċ-ċelluli u sinapsi. Iċ-ċelluli MES23.5 bil-ħsara MPP+-urew adeżjoni u tnaqqis taċ-ċelluli fqir, u ħafna ġew sospiżi fil-midja b'sinapsi kkuntrattati. Dawn iċ-ċelluli ġew aggregati, imnaqqsa u tondi b'vakuoli ġewwa, u n-nuklei ġew diżintegrati jew imġarrfa. C. tubulosa nanopowder f'dożaġġi differenti tejbet iċ-ċitomorfoloġija taċ-ċelluli MES23.5 fi gradi differenti billi tejbet l-adeżjoni taċ-ċelluli u t-tneħħija sinaptika tal-grupp tal-vettura. Iċ-ċelloli MES23.5 fil-grupp ta 'trattament ta' C. tubulosa b'doża għolja wrew morfoloġija li kienet simili għall-grupp ta 'kontroll normali (Figuri 2A-E).

Effett ta 'C. tubulosa Nanopowder fuq Espressjoni TH u Apoptożi fiċ-Ċelloli

Il-Figura 3 turi tnaqqis sinifikanti fl-espressjoni tal-proteina TH fil-grupp tal-vetturi. L-espressjoni tal-proteina TH żdiedet b'mod differenti fi gruppi ttrattati b'dożaġġi differenti ta 'C. tubulosa. Madankollu, it-test LSD wera li ma kien hemm l-ebda differenza sinifikanti bejn it-tliet gruppi ttrattati.

Il-Figura 4 turi r-riżultati tal-valutazzjoni tal-apoptożi bl-użu taċ-ċitometrija tal-fluss. Ir-rata ta 'apoptożi fil-grupp tal-vetturi kienet ogħla b'mod sinifikanti milli fil-gruppi l-oħra. Ċelloli ttrattati b'dożaġġi differenti ta 'C. tubulosa nanopowder wrew gradi differenti ta' tnaqqis fir-rata apoptotika meta mqabbla mal-grupp tal-vettura. Ċelloli fil-grupp ta 'trattament ta' C. tubulosa tan-nofs u b'doża għolja kellhom l-aktar titjib sinifikanti fir-rata apoptotika meta mqabbla mal-gruppi ta 'trattament ta' C. tubulosa l-oħra. It-test tal-LSD wera li ma kien hemm l-ebda differenza sinifikanti bejn iż-żewġ gruppi ttrattati iżda wkoll differenza sinifikanti bejn il-grupp b'doża baxxa.

Effett ta 'C. tubulosa Nanopowder fuq l-espressjoni tal-proteina Bcl2/Bax fiċ-Ċelloli

Il-Figura 5 turi li l-espressjoni tal-proteina Bcl2 fiċ-ċelloli tal-grupp tal-vettura kienet sinifikament aktar baxxa meta mqabbla mal-grupp ta 'kontroll normali. B'kuntrast, l-espressjoni tal-proteina Bax fiċ-ċelloli tal-grupp tal-vetturi kienet ogħla b'mod sinifikanti milli fil-grupp ta 'kontroll normali. Gruppi ta 'trattament ta' C. tubulosa wrew żieda fl-espressjoni tal-proteina Bcl2 u tnaqqis fl-espressjoni tal-proteina Bax fiċ-ċelloli MES23.5 ittrattati MPP+-. Bejn it-tliet gruppi ttrattati, kien hemm differenzi sinifikanti fit-test tal-LSD. Dawn l-effetti kienu dipendenti fuq id-doża.

Testijiet tal-Imġieba

Ir-riżultati tat-test ta 'l-Għawm issuġġerew li l-ġrieden fil-grupp tal-vetturi kellhom tul ta' żmien wieqfa relattivament twil, li żdied maż-żmien. Fl-14-il jum, il-ġrieden fil-grupp tal-vetturi kellhom tul ta 'żmien stazzjonarju itwal b'mod sinifikanti mill-ġrieden fil-grupp ta' kontroll normali. It-tul stazzjonarju tal-ġrieden fi

id-doża baxxaC. tubulosagrupp ta 'trattament ma kienx differenti b'mod sinifikanti minn dak tal-ġrieden fil-grupp tal-vettura. Madankollu, it-tul ta 'żmien stazzjonarju tal-ġrieden fil-grupp ta' trattament b'doża għolja ta 'C. tubulosa kien sinifikament inqas minn dak tal-ġrieden fil-grupp tal-vettura.

Ir-riżultati tat-test Open field jissuġġerixxu li wara ħsara indotta mill-MPTP fil-ġrieden, il-ġrieden fil-grupp tal-vetturi wrew tnaqqis sinifikanti fil-kapaċità tagħhom għal attività spontanja kif muri mill-frekwenza tat-trobbija. Wara 14-jum amministrazzjoni taC. tubulosa nanotrab, il-ġrieden fil-gruppi ta 'trattament ta' doża moderata u għolja kellhom frekwenzi ta 'trobbija ogħla b'mod sinifikanti meta mqabbla mal-ġrieden fil-grupp tal-vetturi (Figuri 6A, B).

Effett ta 'C. tubulosa Nanopowder fuq il-Kontenut DA fil-Ġrieden

Bidliet fil-kontenut DA tal-SN ġew determinati mill-HPLC. Instab li l-kontenut DA fil-moħħ tal-grupp tal-vetturi kien imnaqqas b'mod sinifikanti. Il-kontenut DA fl-imħuħ tal-ġrieden PD fil-grupp ta 'trattament ta' C. tubulosa b'doża baxxa ma kienx differenti b'mod sinifikanti mill-ġrieden fil-grupp tal-vettura. Madankollu,Trattament ta 'C. tubulosażied il-livelli DA fl-imħuħ tal-ġrieden PD b'mod dipendenti mid-doża. L-imħuħ tal-ġrieden PD ittrattati b'doża għolja ta 'C. tubulosa kellhom kontenut ta' DA b'mod sinifikanti ogħla mill-imħuħ tal-ġrieden fil-grupp tal-vettura (Figura 6C).

Effett ta 'C. tubulosa Nanopowder fuq Espressjoni TH fil-Ġrieden

In-numru ta 'ċelluli TH-pożittivi u l-livell ta' espressjoni tal-proteina TH fl-SN ta 'ġrieden PD indotti minn MPTP kienu aktar baxxi meta mqabbla ma' ġrieden fil-grupp ta 'kontroll. Wara t-trattament ta 'C. tubulosa, in-numru ta' ċelluli TH-pożittivi u l-livell ta 'espressjoni tal-proteina TH fl-SN ta' ġrieden PD indotti minn MPTP żdiedu, b'differenza sinifikanti bejn il-grupp ta 'trattament ta' C. tubulosa b'doża għolja u l-grupp tal-vetturi permezz tat-test LSD; u kien hemm differenzi sinifikanti bejn it-tliet gruppi ttrattati (Figura 7).

Effett ta 'C. tubulosa Nanopowder fuq l-Espressjoni tal-Proteina ta' GDNF u r-Riċetturi tiegħu, GFR 1 u Ret fil-ġrieden

L-espressjoni tal-proteina ta 'GDNF u r-riċetturi tagħha, GFR 1 u Ret, fiċ-ċelloli mtebbgħin b'mod pożittiv, ġiet evalwata bl-użu ta' immunoistokimika. Analiżi Western blot intużat biex tevalwa l-livelli ta 'espressjoni tal-proteini fl-SN tal-gruppi differenti ta' ġrieden. Is-sejbiet għall-gruppi differenti kienu simili bl-użu taż-żewġ metodi ta 'skoperta. L-espressjoni ta 'GDNF u l-proteini tar-riċettur tagħha, GFR 1 u Ret, f'ċelluli mtebbgħin b'mod pożittiv fl-SN tal-ġrieden fil-grupp tal-vettura, kienet inqas b'mod sinifikanti milli fil-ġrieden fil-grupp ta' kontroll normali. Dożaġġi differenti ta 'trattament ta' C. tubulosa żiedu n-numru ta 'ċelluli GDNF-, GFR 1-, u Ret-pożittivi (Figuri 8A-S).

L-espressjoni tal-proteina ta 'GDNF, GFR 1, u Ret fl-SN tal-ġrieden fil-grupp tal-vettura kienet sinifikament aktar baxxa milli fil-ġrieden fil-grupp ta' kontroll. Żieda fil-konċentrazzjonijiet ta 'trattament ta'C. tubulosa nanopowertejbet b'mod sinifikanti l-espressjoni ta 'dawn il-proteini. L-espressjoni tal-proteina ta 'GDNF, GFR 1, u Ret fl-SN tal-ġrieden fil-grupp ta' trattament b'doża għolja C. tubulosa kienet ogħla b'mod sinifikanti milli fil-ġrieden fil-grupp tal-vettura (P< 0.01; Figures 8T, U). 

Effett ta 'C. tubulosa Nanopowder fuq l-espressjoni tal-proteina ta' Bcl2/Bax fil-ġrieden

L-espressjoni tal-proteina Bcl2 tnaqqset b'mod sinifikanti u l-espressjoni tal-proteina Bax tjiebet b'mod sinifikanti fl-SN tal-ġrieden fil-grupp tal-vetturi (P< 0.01) compared with the mice in the normal control group. High-dose C. tubulosa treatment significantly increased Bcl2 protein expression and significantly reduced Bax protein expression in the brains of the vehicle mice (P < 0.01; Figure 9). LSD test showed there was no significant difference between the middle-dose and high-dose groups but a significant difference between the low-dose group. 

DISKUSSJONI

PD u Apoptożi

PD huwa disturb newrodeġenerattiv. Skond Zhang et al. (2005), il-prevalenza hija 10.7% fil-popolazzjoni Ċiniża ta 'età 'l fuq minn 55 u 1.67% f'dawk ta' età 'l fuq minn 65. In-numru ta' pazjenti PD żdied kull sena bl-aċċelerazzjoni tat-tixjiħ globali, li jpoġġi piż finanzjarju kbir fuq il-familji tal-pazjenti. u s-soċjetà inġenerali. Fil-moħħ, newroni dopaminerġiċi huma prinċipalment involuti fis-sintesi u t-tnixxija tad-DA. Huma distribwiti b'mod wiesa 'fis-sistema nervuża ċentrali u jinsabu primarjament fl-SN (80%). TH hija l-enzima ewlenija li tillimita r-rata għas-sintesi DA. Għalhekk, l-inibizzjoni tal-attività TH tnaqqas is-sintesi DA (Huot and Parent, 2007). Il-bidliet patoloġiċi u bijokimiċi ewlenin tal-PD huma apoptosi ta 'newroni dopaminerġiċi fl-SN, tnaqqis sinifikanti ta' DA nigrostriatal, u l-formazzjoni ta 'korpi Lewy fin-newroni dopaminerġiċi (Dexter u Jenner, 2013). L-etjoloġija tal-PD tinvolvi fatturi ġenetiċi assoċjati, fatturi ambjentali, u tixjiħ tas-sistema nervuża (Allam et al., 2005). Il-patoġenesi tal-PD għadha mhux ċara fil-mediċina moderna. Sa mill-aħħar tas-snin sittin, it-terapija ta' sostituzzjoni bil-levodopa intużat b'suċċess biex tikkura l-PD u ġiet rikonoxxuta bħala punt ta' svolta ewlieni fit-trattament tal-PD. Madankollu, l-applikazzjoni fit-tul ta 'din it-terapija tikkawża effetti sekondarji u t-terapija ma tittrattax il-kawżi sottostanti tal-PD (Del Sorbo u Albanese, 2008). Għalhekk, riċerka attiva għal mediċini ġodda jew metodi ta 'trattament li jimmiraw il-protezzjoni tan-newroni dopaminerġiċi hija kruċjali għat-trattament tal-PD.

Fi studji preċedenti, l-applikazzjoni tat-tikkettar tat-tarf tal-nick dUTP medjat minn deoxynucleotidyl transferase terminali indikat li 0.6%-4.8% ta 'newroni dopaminerġiċi fl-SN ta' pazjenti PD wera apoptożi (Mochizuki et al., 1996). Il-mikroskopija elettronika wriet karatteristiċi apoptotiċi, inklużi kondensazzjoni kromatika u korpi apoptotiċi f'ċelloli dopaminerġiċi (Anglade et al., 1997). Tompkins et al. (1997) wettqu analiżi ultrastrutturali ta 'awtopsji tat-tessut tal-moħħ minn pazjenti b'PD, AD, u marda diffusa tal-ġisem Lewy (DLBD). Sabu korpi apoptotiċi fis-saff dens tal-SN f'pazjenti PD u DLBD, li jipprovdu evidenza konklużiva ta 'apoptosi newronali fil-PD u mard relatat. Għalhekk, it-tnaqqis jew is-soppressjoni tal-apoptożi fin-newroni dopaminerġiċi hija fundamentali għat-trattament tal-PD.

Studji preċedenti wrew li l-MPTP wassal għal sintomi bħal PD. MPTP jaqsam il-barriera tad-demm-moħħ u huwa metabolizzat minn monoamine oxidases tat-tip B fl-astroċiti. Sussegwentement jiġi kkonvertit għal MPP+ tossiku, li jakkumula fil-mitokondrija ta 'newroni dopaminerġiċi permezz tal-konsum tal-proteini tat-trasportatur DA. Għalhekk jiġġenera radikali ħielsa mill-ossiġnu żejjed li jinibixxu l-attività tal-kumpless I tal-katina respiratorja mitokondrijali u s-sinteżi tal-ATP. Dawn l-avvenimenti jippromwovu aktar il-formazzjoni ta 'radikali ħielsa u reazzjonijiet ta' stress ossidattiv, u eventwalment iwasslu għad-deġenerazzjoni u l-mewt ta 'newroni dopaminerġiċi. Għalhekk, dan l-istudju uża MPP + biex jistabbilixxi vettura in vitro f'newroni dopaminerġiċi MES23.5 u MPTP biex jinduċi ġurdien vettura għal verifika reċiproka. Skont ir-riżultati tal-assaġġ MTT, MPP + naqqas b'mod sinifikanti l-vijabbiltà taċ-ċelloli MES23.5, li jissuġġerixxi li MPP + kien ċitotossiku għan-newroni dopaminerġiċi. Ir-riżultati wrew ukoll li C. tubulosa saħħaħ b'mod effettiv l-espressjoni ta 'proteini anti-apoptotic u inibixxi ż-żieda ta' apoptosi indotta MPP+-.

PD u GDNF

GDNF huwa fattur newrotrofiku, li l-ewwel ġie iżolat minn Lin et al. (1993). Lin et al. (1993) wrew ukoll li l-GDNF kellu effetti nutrittivi speċifiċi fuq newroni dopaminerġiċi fil-midbrain tal-firien. GDNF, neurturin (NTN), persephin (PSP), u artemin (ART) jikkostitwixxu l-familja GDNF. Huma proteini sekretorji strutturalment simili u funzjonalment relatati (Kotzbauer et al., 1996; Baloh et al., 1998; Milbrandt et al., 1998; Woodbury et al., 1998).

Ir-riċettur tal-GDNF jikkonsisti f'żewġ komponenti. L-ewwel komponent, GFR, huwa ffissat mal-membrana ta 'barra ta' glycosylphosphatidylinositol (GPI) u ankrat mal-wiċċ ta 'connexin. It-tieni komponent huwa l-proteina Ret. Ir-riċerka wriet li hemm erba' tipi differenti ta' GFR: GFR 1, GFR 2, GFR 3 u GFR 4. GFR 1 huwa riċettur ta' affinità għolja ta' GDNF (Onochie et al., 2000; Chen et al., 2001; Lindahl; et al., 2001). Il-proteina ret hija riċettur funzjonali tal-GDNF. Il-molekula homodimer ta 'GDNF torbot direttament ma' GFR 1 biex tifforma kumplessi u tinteraġixxi ma 'Ret, li tirriżulta fid-dimerizzazzjoni u l-attivazzjoni ta' Ret. Minħabba l-awtofosforilazzjoni ta 'Ret, Ret jattiva diversi mogħdijiet ta' sinjalazzjoni TH komuni. Fin-nuqqas ta' proteina Ret, il-GDNF jikkawża fosforilazzjoni tal-proteini ta' MAPK, PI-3, u PLC- , minbarra l-espressjoni tal-mRNA u l-attività funzjonali ta' C-fos permezz tal-proteina riċettur tagħha, GFR 1 (He et al., 2008).

Studji wrew li GDNF kellu l-aktar effett protettiv qawwi fuq newroni dopaminerġiċi (Rangasamy et al., 2010; Campos et al., 2012). F'vetturi li jużaw MPTP u 6-hydroxydopamine (6-OHDA) biex jinduċu ħsara fin-newroni dopaminerġiċi, il-GDNF jipproteġi n-newroni dopaminerġiċi billi jnaqqas l-apoptożi u jippromwovi t-tkabbir assonali biex jinduċi differenzjazzjoni taċ-ċelloli staminali (Lucas et al., 2012; Littrell et al., 2013). Lin et al. (1993) wrew li l-GDNF ippromwova speċifikament il-vijabbiltà, id-divrenzjar u t-tkabbir assonali ta 'newroni dopaminerġiċi biex jippromwovi l-assorbiment ta' DA fin-newroni. L-istudju wera wkoll li l-GDNF mhux biss ipprevjeni t-tossiċità akuta iżda wkoll itaffi t-tossiċità fit-tul ta 'MPP+ jew 6-OHDA fin-newroni dopaminerġiċi, barra minn hekk jipprevjeni l-mewt taċ-ċelluli f'ċelloli stressati jew bil-ħsara (Yu et al., 2010). Barra minn hekk, GDNF ippromwova l-proliferazzjoni u d-differenzjazzjoni taċ-ċelluli staminali newrali lejn newroni dopaminerġiċi fil-midbrain (Lindsay, 1995) biex isalvaw newroni dopaminerġiċi minn deġenerazzjoni retrograda (Hong-Juan et al., 2011).

Studji wrew li l-espressjoni tal-GDNF fl-SN tnaqqset b'mod sinifikanti fil-vetturi tal-annimali (Yang et al., 2010). Dan jissuġġerixxi li jista 'jkun wieħed mill-mekkaniżmi tal-patoġenesi fil-firien PD. L-injezzjoni ta '5-15 µg/d GDNF fil-ventrikul laterali jew striatum ta' annimal vettura indott minn MPTP għal tliet xhur konsekuttivi ppromwoviet it-tiswija nigrostriatal tas-sistema dopaminerġika fl-annimal tal-vettura (Grondin et al., 2002). Studji tat-trattament tal-GDNF għall-PD f'vetturi tal-annimali wrew li l-injezzjoni intraċerebrali tal-GDNF f'reġjuni differenti tal-moħħ, bħall-SN, nukleu caudate, u ventrikul laterali, tejbu disturbi tal-moviment assoċjati ma 'mudelli tal-annimali PD, inkluż tnaqqis fl-attività tal-mutur, riġidità tal-muskoli u rogħda (Grondin et al., 2002). Madankollu, GDNF ma jistax jgħaddi direttament mill-barriera tad-demm-moħħ. Għalhekk, injezzjoni ċerebrali lokali ta 'GDNF tinvolvi riskju sostanzjali u diffikultajiet fl-applikazzjoni klinika. Applikazzjonijiet biex jintroduċu GDNF eżoġenu permezz ta 'mikrosferi ta' rilaxx kontrollat, kapsuli ta 'rilaxx sostnut u ġeni virali għadhom qed jiġu studjati (Liang et al., 2010; Yang et al., 2010; Qiao et al., 2012). Minħabba l-limitazzjonijiet ta 'diversi tekniki biex jintroduċu GDNF eżoġenu fil-moħħ, aġenti newroprotettivi li jippromwovu r-rilaxx ta' GDNF endoġenu huma sinifikanti għall-applikazzjoni klinika.

PD uC. tubulosaNanotrab

Il-PD hija aktar komuni f'adulti ta' età medja u fl-anzjani. It-teorija tat-TCM tqis li l-PD tinsab primarjament fil-moħħ u hija prinċipalment dovuta għal defiċjenza tal-fwied u tal-kliewi, minbarra l-enerġija vitali u l-insuffiċjenza tad-demm. Skont din it-teorija, it-trattament tal-PD għandu għalhekk jiffoka fuq it-tisħiħ tal-kliewi u l-mudullun.Yang et al. (2010)użaw provi kliniċi randomised, double-blind, u kkontrollati bil-plaċebo u sabet li terapija kombinata bl-użu ta 'Madopar u riċetti ta' tonifikazzjoni tal-kliewi ttaffi d-disfunzjonijiet tal-mutur ta 'pazjenti PD. Ir-riżultat tat-trattament kien aħjar minn terapija waħda bl-użu ta' Madopar. L-effikaċja tat-trattament tal-monoterapija tat-TCM jew il-preskrizzjoni komposta fil-PD ġiet ikkonfermata f'mudelli tal-annimali tal-PD u applikazzjonijiet kliniċi. L-applikazzjonijiet tat-TCM għat-tonifikazzjoni tal-kliewi u l-promozzjoni taċ-ċirkolazzjoni tad-demm naqqsu d-dożaġġ ta 'monoterapija għal PD bl-użu ta' Madopar. Xi studji ssuġġerew li t-TCM tejbet is-sintomi tal-PD u ipproteġi n-newroni dopaminerġiċi, li setgħu kienu relatati mill-qrib mal-promozzjoni tal-espressjoni endoġena tal-GDNF (Hong-Juan et al., 2011; Qiao et al., 2012).

Il-kompost għat-tonifikazzjoni tal-kliewi użat f'dan l-istudju,C. tubulosananotrab, li jinsabCistanche, epimedju, uRhizoma polygonati. Ir-riċerka moderna tissuġġerixxi li l-kompożizzjoni kimika ta 'Cistanchehuwa ECH, li jipproteġi n-newroni dopaminerġiċi fl-SN fil-ġrieden PD indotti minn MPTP u jinibixxi t-tnaqqis tad-DA u t-trasportatur DA (Zhao et al., 2010). Barra minn hekk, jipprevjeni 6-tnaqqis indott mill-OHDA fid-DA u jipproteġi n-newroni dopaminerġiċi strijatali (Chen et al., 2007). Epimedium jinibixxi l-attivazzjoni ta' caspase-3 u jeżerċita rwoli newroprotettivi (Liu et al., 2011). Flavonojdi Epimedium jippromwovu b'mod effettiv il-proliferazzjoni u d-divrenzjar taċ-ċelloli staminali newrali (Yao et al., 2010).

F'dan l-istudju,C. tubulosananotrab antagonizza ż-żieda ta 'MPP+-apoptożi indotta b'mod dipendenti mid-doża. Tejbet b'mod sinifikanti l-espressjoni TH fil-in vitrovettura u kellu effetti anti-apoptotiċi sinifikanti fin-newroni dopaminerġiċi. Il-ġrieden tal-vetturi indotti mill-MPTP wrew disturbi fl-imġieba u naqqsu b'mod sinifikanti l-espressjoni ta 'TH fit-tessuti tal-moħħ tan-nofs u l-livelli DA, li huma karatteristiċi patoloġiċi tipiċi tal-PD. Dożaġġi differenti ta 'C. tubulosananotrab qassar it-tul ta 'żmien stazzjonarju, attivitajiet awtonomi mtejba, disturbi fl-imġieba mtejba, livelli elevati ta' DA fil-moħħ, u espressjoni akbar ta 'TH fil-vetturi. Dawn ir-riżultati ssuġġerew liC. tubulosain-nanotrab eżerċita effetti protettivi fin-newroni dopaminerġiċi, u b'hekk tejjeb id-disturbi fl-imġieba tal-vetturi. Dożaġġi differenti ta 'C. tubulosananotrab żied l-espressjoni tal-proteina GDNF u l-proteini tar-riċetturi tagħha fil-moħħ tal-ġrieden tal-vetturi. Doża għoljaC. tubulosait-trattament irregola b'mod sinifikanti l-espressjoni Bcl2 u naqqas l-espressjoni Bax, li ssuġġeriet liC. tubulosananotrabjista 'jippromwovi l-espressjoni u t-tnixxija tal-GDNF fil-moħħ tal-ġurdien bil-ħsara mill-MPTP. Barra minn hekk, jista 'jeżerċita effetti newroprotettivi fin-newroni dopaminerġiċi u jimminimizza l-apoptożi newronali permezz tar-rwoli ta' appoġġ newrotrofiku ta 'GDNF.

Dan l-istudju wera liC. tubulosananotrab eżerċita effetti protettivi fin-newroni dopaminerġiċi fit-tnejnin vitrouin vivou żieda fl-espressjoni TH biex ittejjeb il-kontenut DA. Tejbet ukoll disturbi fl-imġieba fil-ġrieden tal-vetturi indotti mill-MPTP, irregolat l-espressjoni tal-proteina tal-GDNF u l-proteini tar-riċetturi tagħha fl-SN, u kellha effetti anti-apoptotiċi fil-ġrieden PD. Il-mekkaniżmu sottostanti l-effetti kliniċi taC. tubulosananotrab fil-PD jista 'jinvolvi li jiżdied il-kontenut ta' GDNF endoġenu fil-moħħ u b'hekk titnaqqas il-ħsara lin-newroni dopaminerġiċi.

CISTANCHE TUBULOSA NATURALI GĦAT-TITJIB TAL-FUNZJONI SESSWALI PHGS75% ECH 30% ATT 12