Cistanche Tubulosa Aqueous Extract Fuq Il-Mikrobijota tal-Imsaren tal-ġrieden b'disturbi intestinali

1. Introduzzjoni

Il-mikro-organiżmi intestinali prinċipalment jikkolonizzaw il-lumen intestinali u s-saff tal-mukuża u jimmutawlizzaw mal-ospitanti permezz ta 'skambju ta' materjal u enerġija, trasformazzjoni u proċessi oħra [1]. Huma ċentri ta' sinjalar li jintegraw messaġġi ambjentali, bħad-dieta, b'sinjali ġenetiċi u immuni, u b'hekk jaffettwaw il-metaboliżmu, l-immunità, is-sistema nervuża u r-rispons għall-infezzjonijiet tal-ospitanti [2]. Normalment, hemm bilanċ dinamiku bejn il-flora intestinali u l-ospiti; madankollu, dysbiosis tal-musrana tista 'tirriżulta f'bidliet fil-bilanċ tas-saħħa/mard, disturbi immuni, u numru kbir ta' mard [3]. Bidliet moderati fil-mikrobijota tal-musrana huma aċċettabbli għall-ospitant; madankollu, dan xorta jista 'jipprovdi opportunitajiet biex jiġu amplifikati l-bidliet f'fatturi aggravanti oħra, bħal batterjofaġi, batterjoċini, u stress ossidattiv [4].

CISTANCHE TUBULOSA GĦAT-TITJIB TAL-MIKROBIOTA INTESTINAL GUTS PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Studji preċedenti wrew lil-estratt ta' l-etanol ta' Cistanche tubulosa(CT), formula tal-ħxejjex tradizzjonali Ċiniża, tista 'tirregola l-kompożizzjoni tal-mikrobi tal-musrana fil-firien [5], u l-glikosidi totali ta' CT jaġġustaw il-mikrobijota tal-musrana diżordinata [6]. L-ispeċi Cistanche, li prinċipalment jipparassitaw fuq l-għeruq ta 'speċi Tamarix, jissejħu wkoll "ġinseng tad-deżert," u toniku li jikkonsisti fiz-zkuk ta' Cistanche deserticola (CD) u Cistanche tubulosa (CT) jintuża bħala rimedju erbali [7] ]. Il-komponenti kimiċi ewlenin ta 'CT phenylethanol glycosides (PHGs), li huma sustanzi antiossidanti [8, 9], instabu li jtejbu disfunzjoni riproduttiva [10], jrażżnu l-attivazzjoni taċ-ċelluli stellate tal-fwied, jimblukkaw il-konduzzjoni ta' mogħdijiet ta 'sinjalazzjoni f'TGF {{6} }/ SMAD [11], u jipprevjeni fibrożi tal-fwied indotta mill-albumina tas-serum bovin fil-firien [12]. Fost aktar minn 100 komponent f'CT, polysaccharide hija wkoll waħda mis-sustanzi importanti b'kontenut abbundanti [13, 14]. Studji preċedenti wrew li C. deserticola polysaccharides jinduċu melanoġenesi fil-melanoċiti, inaqqsu l-istress ossidattiv [15], itaffu disfunzjoni konjittiva billi jirregolaw proċessi antiossidanti u anti-infjammatorji fil-firien [16], jipproteġu ċ-ċelloli PC12 kontra korriment indott minn OGD/RP [17] ],ittejjeb l-assorbiment ta 'echinacoside in vivo, u jaffettwaw il-mikrobijota tal-musrana [18].

Il-probijotiċi huma mikro-organiżmi ħajjin mhux patoġeniċi li għandhom benefiċċji għas-saħħa u jagħtu bilanċ mikrobjali fil-passaġġ gastrointestinali meta jingħataw f'ammonti adegwati [19]. Jistgħu jtejbu risponsi immuni ċellulari mhux speċifiċi kkaratterizzati mill-attivazzjoni ta 'makrofaġi, ċelluli naturali killer (NK), u limfoċiti T ċitotossiċi speċifiċi għall-antiġen u r-rilaxx ta' diversi ċitokini b'mod speċifiku għar-razza u dipendenti fuq id-doża [20]. Razez probijotiċi jtejbu l-proprjetajiet tal-epitelju intestinali permezz tal-modulazzjoni TJ, u razez probijotiċi speċifiċi ġew murija li jirregolaw l-espressjoni tal-muċina, u b'hekk jinfluwenzaw il-proprjetajiet tas-saff tal-mukus u jirregolaw indirettament is-sistema immunitarja tal-musrana [21]. Razez ta 'batterji tal-aċidu lattiku (LAB) u Bifidobacterium huma probijotiċi ewlenin li ntużaw f'ħafna oqsma [22-26]. Il-benefiċċji għas-saħħa tagħhom huma numerużi, bil-kapaċità antiossidant tagħhom hija fattur importanti fil-funzjonijiet tagħhom relatati mas-saħħa [27]. Il-probijotiċi jistgħu jikkelaw joni tal-metall biex jipprevjenuhom milli jikkatalizzaw l-ossidazzjoni [28, 29]; jistgħu wkoll iżidu l-espressjoni ta’ enzimi antiossidanti [30, 31], jipproduċu diversi metaboliti b’attività antiossidanti [32, 33], jimmedjaw mogħdijiet ta’ sinjalazzjoni antiossidanti [34-36], u jirregolaw l-enzimi li jipproduċu speċi ta’ ossiġnu reattiv (ROS) u l- rispons tal-mikro-organiżmi intestinali għal stress ossidattiv [37].

Studju reċenti wera li l-polisakkaridi ta 'CD jistgħujistimulaw it-tkabbir ta 'xi batterji tal-aċidu lattiku, li jista' jkun ta' benefiċċju għas-saħħa tal-bniedem [38]. Madankollu, il-kontenut ta 'polisakkaridi fis-CD huwa differenti minn dak f'CT [7, 39], u din id-differenza tista' twassal għal effetti differenti fuq mikro-organiżmi intestinali. Barra minn hekk, għalkemm CD polysaccharides jistgħu jnaqqsu l-istress ossidattiv billi jattivaw il-passaġġ NRF2/HO-1 [15], l-effetti ta 'polisakkarid wieħed jistgħu jvarjaw mill-effett ġenerali ta' kompożizzjonijiet multipli f'CT. Għalhekk, huwa meħtieġ li jiġu definiti b'mod preċiż l-effetti ta 'estratti milwiema CT fuq mikro-organiżmi intestinali. Barra minn hekk, il-PHGs jistgħu wkoll jirreżistu l-istress ossidattiv [40] u jrażżnu r-risponsi infjammatorji medjati minn lipopolysaccharide billi jattivaw il-mogħdija Keap1/Nrf2/HO-1 [41]. Għalhekk, id-determinazzjoni tal-effett tal-estratt milwiema CT hija ta 'valur kbir. Barra minn hekk, l-effetti ta 'ċerti kostitwenti tal-estratt ta' CD akweju fuq l-istress ossidattiv u l-flora intestinali jissuġġerixxu li r-reżistenza għall-istress ossidattiv tista 'tkun korrelata ma' bidliet fil-flora intestinali.

Biex timla l-lakuni fl-għarfien dwar is-suġġetti msemmija hawn fuq, investigajna l-effetti tal-estratt milwiema CT fuq il-mikrobijota tal-musrana tal-ġrieden b'disturbi fil-flora intestinali.ThDawn ir-riżultati se jipprovdu informazzjoni siewja dwar il-mekkaniżmi possibbli li permezz tagħhom CT tbiddel il-flora intestinali u tagħti reżistenza tal-musrana għall-istress ossidattiv.

2. Materjali u Metodi

2.1. Annimali Sperimentali.

Total ta '18-il ġrieden maskili tal-klassi SPF C57BL/6J, li jiżnu 18-22 g, inxtraw miċ-Ċentru tal-Annimali Sperimentali tal-Università Medika ta' Xinjiang bin-numru tal-liċenzja SCXK (ġdid) 2018-0003. Kienu miżmuma f'gaġeġ taħt kundizzjonijiet standardizzati: 12-il siegħa fotoperjodu dawl/dlam, temperatura ta '23 ± 2 gradi, u umdità ta' 55 ± 5%. L-annimali ġew mitmugħa b'dieta kummerċjali (51% estratt mingħajr nitroġenu, 25% proteina mhux raffinata, 4.6% xaħam mhux raffinat, 6.5% irmied mhux raffinat, 4.0% fibra mhux raffinata, u 8.9% umdità) u ilma tal-vit. L-annimali ġew ittrattati skont ir-rakkomandazzjonijiet deskritti fil-Gwida għall-Kura u l-Użu tal-Annimali tal-Laboratorju tal-Istituti Nazzjonali tas-Saħħa.

CISTANCHE TUBULOSA NATURALI GĦAT-TITJIB TAL-IMMUNITÀ PHGS75% ECH 30% ACT 12%

2.2. Estrazzjoni ta' l-Estratt Aqueous.

Flieli mnixxfa ta 'C. tubulosa, ipprovduti minn Hotan Dichen Pharmaceutical Biotechnology Co., Ltd., ġew mitħun fi trab, u granuli b'daqsijiet ta' partiċelli bejn 2{{10}} u 40 malji kienu magħżula. Il-kundizzjonijiet tal-estrazzjoni kienu kif ġej: proporzjon solidu likwidu ta '1:19, temperatura ta' 80 grad, ħin microwave ta '6 min, ħin ultrasoniku ta' 16 min, qawwa microwave ta '400 W, u qawwa ultrasonika ta' 400 W. Il- il-kontenuti tal-komponenti ewlenin tal-estratt milwiema tkejlu bl-HPLC (Agilent 1260 Infinity II, California, USA). Fil-qosor, is-sustanzi standard ta 'echinacoside (0.2 mg/mL) u acteoside (0.2 mg/mL) ġew maħlula f'50% metanol biex iservu bħala soluzzjoni ta' sustanza ta 'referenza. Imbagħad, 1 g ta 'l-estratt milwiema CT ġie maħlul f'100 mL 50% metanol u jitħalla jiffissa għal 30 min. Is-soluzzjoni tal-estratt ġiet ittrattata bl-ultrasound f'250 W u 35 kHz għal 10 min u sussegwentement ċentrifugata fi 12,000 rpm/min. Is-supernatant ġie ffiltrat b'membrana tal-filtru mikroporuża ta '0.45 μm. Is-soluzzjoni tas-sustanza ta' referenza u l-filtrat imbagħad ġew skoperti mill-HPLC fil-kundizzjonijiet li ġejjin: octadecyl silane bonded silica gel bħala mili, metanol bħala fażi mobbli A, u 0.1% aċidu formiku bħala fażi mobbli B. It-temperatura tal-kolonna ġiet issettjata bħala 30 grad , il-wavelength ta 'skoperta ġie stabbilit bħala 330 nm, u l-volum ta' injezzjoni kien 10 μL.

2.3. Esperimenti.

Wara ġimgħa ta 'adattament, it-18-il ġrieden ġew maqsuma b'mod każwali f'sitt gruppi: A (normali b'doża tan-nofs ta' estratt milwiema CT miżjud), B (normali mingħajr l-estratt milwiema CT), C (mudell mingħajr l-estratt milwiema), D ( mudell b'estratt milwiema CT b'doża għolja miżjud), E (mudell b'estratt milwiema CT b'doża medja miżjuda), u F (mudell b'estratt milwiema CT b'doża baxxa miżjud). Il-gruppi ġew ittrattati kif ġej: il-grupp normali kien imxarrab b'soluzzjoni salina normali, il-grupp mudell kien imxarrab b'cefixime (30 mg/kg, Shiyao Group Ouyi Pharmaceutical Co., Ltd., Shijiazhuang, iċ-Ċina) u soluzzjoni salina normali, għolja -grupp tad-doża kien imxarrab minn cefixime u 221.14 mg/kg ta 'l-estratt milwiema CT, grupp ta' doża tan-nofs kien imxarrab minn cefixime u 165.54 mg/kg ta 'l-estratt milwiema, u grupp ta' doża baxxa kien imxarrab minn cefixime u 110.57 mg/kg tal-estratt milwiema. Il-grupp A kien imxarrab b'165.54 mg/kg tal-estratt milwiema, u ma ġie miżjud l-ebda cefixime. Cefixime kien mogħti kuljum f'nofsinhar, u sustanzi oħra kienu amministrati kuljum fil-15:00 h. Matul l-esperimenti, il-gruppi C, D, E, u F inżammu fl-istat mudell ta 'disturbi intestinali. Il-ħmieġ inġabar kull sebat ijiem fuq mejda sterili li tista' titħaddem u nħażen f'-20 grad.

2.4. Osservazzjoni istopatoloġika tal-Kolon Ġrieden.

Fl-aħħar tal-esperiment, il-ġrieden inqatlu permezz ta 'dislokazzjoni ċervikali, u l-kontenut tal-kolon tagħhom inġabar fuq mejda operabbli sterili u maħżuna f'-80 grad C; fl-istess ħin, kampjuni tat-tessut tal-kolon ġew iffissati f'formalin newtrali ta '10%. Imbagħad, il-kampjuni ġew deidratati bl-użu ta 'konċentrazzjoni gradjent ta' etanol, hyalinized bl-użu ta 'xylene, inkorporati fil-paraffin, sezzjoni, u mtebbgħin b'ematossilin-eosina. Bidliet morfoloġiċi fil-mukuża tal-kolon ġew osservati u mqabbla bl-użu ta 'mikroskopju ottiku. It-tul tal-villus u l-fond tal-kripta fil-kolon ġew imkejla, u ġie kkalkulat il-proporzjon tat-tul tal-villus għall-fond tal-kripta (valur V/C) (51).

2.5. Estrazzjoni tad-DNA u Kostruzzjoni tal-Librerija.

Id-DNA ġie estratt mill-ħmieġ bl-użu tal-Kit tad-DNA tal-Ħamrija EZNA ® (Omega Bio-Tek, Norcross, GA, USA) skont il-protokoll tal-manifattur. Il-kwalità tad-DNA ġiet iddeterminata bl-użu ta’ fluworometru (QuantiFluor™–ST, Promega Corporation, USA). Primers imqabbla fir-reġjun V3-V4 ta' 16s rDNA ġew iddisinjati biex jamplifikaw ir-reġjun u jipproduċu frammenti tad-DNA ta' 466 bp. Il-primer bil-quddiem kien 341F (-5- CCTACGGGNGGCWGCAG-3-), u l-primer reverse kien 806R (-5-GGACTACHVGGGTATCTAAT-3-). Kull volum PCR kien 25 μL, li fih 2.5 μL ta '10 × PCR buffer, 2 μL ta' dNTPs, 1 μL ta 'kull primer, u 20-30 ng ta' DNA template. Imbagħad, l-adapters indiċjati ġew imwaħħla mat-tarf ta 'l-amplicons biex jiġġeneraw libreriji ta' sekwenzar. Il-libreriji ġew ivvalidati bl-użu ta' fluworometru QuantiFluor™ u kkwantifikati għal 10 nmol.

2.6. 16s rRNA Gene Sequencing u Analiżi tal-Komunità Mikrobika.

Il-pjattaforma Illumina (Illumina MiSeq) intużat biex tinkiseb data ta '2 × 250 bp paired-end. Unitajiet tassonomiċi operattivi (OTUs) inkisbu bl-użu ta 'softwer Uparse permezz ta' clustering standard b'xebh ta '97%. L-algoritmu naive ta 'assenjazzjoni Bayesian tal-klassifikatur RDP intuża biex jallinja l-OTUs mad-database Greengene Rilaxx 13.5 u jwettaq annotazzjoni tal-ispeċi. Id-diversità alfa tal-mikrobijota tal-musrana ġiet ikkalkulata bl-użu tal-indiċijiet ta 'Shannon u Simpson, u d-differenzi bejn il-gruppi ġew analizzati b'Analiżi diskriminanti Linear Effect Size (LEfSe). Id-diversità beta ġiet analizzata permezz ta' analiżi tal-koordinati prinċipali (PCoA) tad-dissimilaritajiet Bray-Curtis. PICRUSt2 intuża biex tiġi stmata l-kapaċità metabolika mikrobjali tal-mikrobijoma tal-musrana [42].

2.7. Analiżi tad-Dejta Statistika.

SPSS 20 intuża għal ANOVA one-way, u d-dejta sperimentali ġiet espressa bħala X ± S; X jindika l-valur medju, u S jindika d-devjazzjoni standard.

CISTANCHE TUBULOSA NATURALI GĦALL-MODERAZZJONI TAL-BIDLIJIET METABOLIĊI PHGS75% ECH 30% ACT 12%

3. Riżultati

3.1. 8e Effett tal-Estratt Aqueous CT fuq il-Morfoloġija tal-Kolon.

Il-komposti rappreżentattivi (echinacoside u acteoside) u l-konċentrazzjonijiet tagħhom tal-estratt CT ġew ivvalidati mill-HPLC (Figura S1). Biex niddeterminaw l-effett tal-estratt milwiema fuq l-imsaren, investigajna t-tul tal-villi tal-kolon u l-fond tal-kaxxi wara t-trattament bl-estratt milwiema CT. Il-villi tal-kolon fil-gruppi normali u ta' doża għolja (A, B, u D) kienu itwal u qishom is-swaba', filwaqt li l-villi tal-kolon fil-gruppi mudell u b'doża baxxa (C u F) kienu qosra, u l-ponot tal-kolon. villi kienu miksura (Figura 1). Għaldaqstant, estratt akweju CT b'doża għolja żied b'mod sinifikanti t-tul tal-villi tal-kolon u naqqas il-fond tar-reċess fil-ġrieden b'disturbi intestinali meta mqabbel mal-ġrieden fil-grupp mudell (P <0.01). B'kuntrast, il-fond tar-reċess ma kienx differenti b'mod sinifikanti bejn il-grupp ta 'doża għolja u l-grupp normali (P> 0.05) (Tabella S1). Dawn ir-riżultati indikaw li d-doża għolja tal-estratt milwiema CT tista 'ttejjeb il-morfoloġija ġewwa l-kolon tal-ġrieden b'disturbi intestinali.

3.2. 8e Effett tal-Estratt Aqueous CT fuq id-Diversità tal-Mikrobijota tal-Imsaren.

Aħna wettaqna sekwenzar tal-ġeni rRNA 16s biex ninvestigaw il-kawża potenzjali tal-bidliet morfoloġiċi ġewwa l-kolon u ninvestigaw il-bidliet fil-mikrobijota tal-musrana wara t-trattament bl-estratt milwiema CT. Medja ta '100,553 tikketti effettivi, li jvarjaw minn 77,734 sa 125,144, inkisbet mid-dejta mhux ipproċessata (Tabella S2). Dawn it-tikketti kienu miġbura f'4932 OTUs (Tabella S3). Imbagħad analizzajna d-diversità tal-mikrobijota tal-musrana bbażata fuq dawn l-OTUs. L-indiċi Shannon u Simpson ma wrew l-ebda differenza bejn il-grupp A (normali bl-estratt milwiema CT) u l-grupp B (normali mingħajr l-estratt milwiema CT) (Figura 2(a)). Dan indika li, fil-ġrieden mingħajr it-trattament ta 'cefixime, l-estratt milwiema CT seta' ma kellu l-ebda effetti addizzjonali ta 'benefiċċju jew ta' ħsara fuq id-diversità tal-mikrobijota tal-musrana. Madankollu, id-diversità fil-grupp mudell (C) wriet tendenza ta 'tnaqqis meta mqabbla ma' dik fil-gruppi normali. Il-ġrieden ittrattati b'estratti ta 'l-ilma CT b'doża għolja u medja wrew sinjali ta' rkupru tad-diversità, filwaqt li tali fenomenu ma kienx osservat fil-ġrieden ittrattati bl-estratt akweju CT b'doża baxxa (Figura 2(a)). Sadanittant, il-PCoA wriet li l-gruppi normali (A u B) u l-gruppi ta 'disturb intestinali amministrati estratti milwiema ta' doża għolja (D) u doża tan-nofs (E) CT kellhom it-tendenza li jkollhom distanzi iqsar bejn il-kampjuni minn dawk fil-grupp mudell u fil- grupp ta' supplimenti ta' estratt milwiema ta' doża baxxa CT (F) (Figura 2(b)). Dawn ir-riżultati indikaw li l-estratt milwiema CT jista 'jgħinittejjeb id-diversità tal-mikrobijota tal-musranafil-ġrieden b'disturbi intestinali.

3.3. Bidliet fil-Kompożizzjoni tal-Mikrobijota tal-Imsaren Ittrattati bl-Estratt Aqueous CT.

Il-profili tal-kompożizzjoni tal-mikrobijota tqabblu fost gruppi differenti. Fil-livell tal-phylum, l-abbundanza relattiva ta 'Proteobacteria fil-grupp mudell kienet ogħla minn dik fil-gruppi l-oħra (Figura 3(a)). Iż-żieda fil-Proteobacteria ssuġġeriet li l-mikrobijoma tal-ġrieden mudell inbidel minn cefixime u li l-estratt akweju CT jista 'jibbenefika l-mikrobijota intestinali peress li ż-żieda fil-prevalenza ta' Proteobacteria hija markatur ċentrali ta 'flora intestinali diżordinata [43-45]. Barra minn hekk, fil-livell tal-ġeneru, l-abbundanza relattiva ta 'Lactobacillus fil-grupp mudell naqset meta mqabbla ma' dik fil-gruppi normali u ta 'doża għolja; madankollu, żdied meta mqabbel ma 'dak fil-grupp ta' doża medja u baxxa (Figura 3(b)). Dawn ir-riżultati indikaw li l-estratt akweju CT b'doża għolja jista 'jippromwovi t-tkabbir ta' xi batterji mill-ġeneru Lactobacillus.

Il-mikrobijota differenzjali bejn il-gruppi studjati ġiet determinata aktar skont l-analiżi LEfSe. Din l-analiżi wriet li, wara t-trattament b'cefixime, l-abbundenzi relattivi ta' Turicibacter, Alphaproteobacteria, Acidobacteria, Betaproteobacteriales u Chloroflexi żdiedu b'mod sinifikanti, filwaqt li l-abbundenzi relattivi ta' Lactobacillus, Eubacterium_nodatum{{1}group, Pseudonocardiales , u Christensenellaceae_R-7_grupp naqas b'mod sinifikanti meta mqabbel ma' dawk fil-grupp normali (Figura 4(a)). B'mod impressjonanti, meta l-grupp mudell ġie supplimentat bl-estratt akweju CT b'doża għolja, l-abbundenzi relattivi ta 'Muribaculaceae, Lactobacillus, Kineosporiaceae, Eubacterium nodatum grupp, u Pedobacter żdiedu b'mod sinifikanti meta mqabbla ma' dawk fil-grupp mudell. Sadanittant, l-abbundenzi relattivi ta 'Rhodobacter, Ruminococcaceae UCG_013, Roseburia, Ruminiclostridium_9, u Candidatus Stoquefichus naqsu b'mod sinifikanti meta mqabbla ma' dawk fil-grupp mudell (Figura 4(b)).

3.4. Funzjonijiet tal-Mikrobijota tal-Imsaren Relatati mat-Trattament bl-Estratt Aqueous CT.

Aħna użajna softwer PICRUSt2 biex inbassru l-mogħdijiet metaboliċi tal-mikrobijota tal-musrana, u l-grupp normali ntuża bħala referenza biex janalizza l-bidliet fi gruppi oħra. Taħt it-trattament ta 'cefixime, l-abbundanza relattiva ta' degradazzjoni ta 'ethylbenzene, bijosintesi ta' peptidi nonribosomal tal-grupp siderophore, u metaboliżmu ta 'ksenobijotiċi permezz ta' mogħdijiet ta 'cytochrome P450 żdiedu; wara t-trattament b'estratti milwiema CT b'doża għolja u medja, l-abbundanza relattiva tagħhom reġgħet lura għal-livelli normali. Sadanittant, l-abbundanza relattiva tal-mogħdija tal-metaboliżmu tal-aċidu cyanoamino naqset taħt it-trattament ta 'cefixime; madankollu, żdied wara t-trattament bl-estratt akweju CT b'doża għolja. Barra minn hekk, b'mod ġenerali, il-bidliet fil-mogħdijiet differenti tal-metaboliti wara t-trattament b'cefixime kienu sinifikanti meta mqabbla ma' dawk fil-grupp normali; madankollu, iż-żieda tal-estratt milwiema CT kienet kapaċi tipprevjeni bidliet eċċessivi (Figura 5).

4. Diskussjoni

Il-morfoloġija tal-kolon tista 'tiġi mibdula bit-tkabbir, id-diġestjoni u l-assorbiment, ir-regolamentazzjoni immuni, u t-tiswija tal-ħsara intestinali [46-50]. Il-proporzjon V/C jista 'jirrifletti b'mod komprensiv l-istatus diġestiv tal-passaġġ intestinali u huwa direttament proporzjonali għall-kapaċità diġestiva u ta' assorbiment tal-passaġġ tal-musrana [51, 52]. Fl-istudju preżenti, il-bijopsija tal-villi u d-daħliet u d-dejta statistika wrew li l-estratt akweju b'doża għolja jista 'jtejjeb parzjalment il-morfoloġija difettuża ġewwa l-kolon.

Biex tinvestiga kif l-estratt milwiema jibdel il-morfoloġija tal-imsaren u jaffettwa l-mikrobijota intestinali, ħdimna lura minn bidliet fil-flora intestinali. Sibna li l-abbundanza relattiva ta 'Proteobacteria, markatur tal-buttun ta' flora intestinali diżordinata, żdiedet taħt it-trattament b'cefixime meta mqabbel ma 'dak mingħajr trattament b'cefixime. L-abbundanti relattivi ta’ markaturi oħra ta’ hub, Bacteroidetes u Firmicutes, ma kellhom l-ebda tibdil sinifikanti, għalkemm dawn

il-gruppi huma predominanti fl-imsaren tal-bniedem; il-proporzjon ta 'Bacteroidetes/Firmicutes instab li naqas f'nies obeżi meta mqabbel ma' dak f'nies dgħif, u dan il-proporzjon instab li jiżdied b'telf ta 'piż f'nies fuq żewġ tipi ta' dieta b'kaloriji baxxi [38, 41, 43-45, 48, 53, 54]. Sadanittant, Turicibacter, li huwa assoċjat mal-obeżità [55], kien elevat b'mod sinifikanti fil-grupp mudell meta mqabbel ma 'dak fil-gruppi l-oħra. Notevolment, id-diversità tal-mikrobijota tal-musrana fil-ġrieden mudell tjiebet biż-żieda tal-estratt milwiema CT. Aħna nnutaw xi batterji intestinali speċifiċi fil-ġrieden taħt trattamenti differenti; pereżempju, Lactobacillus u Muribaculaceae kienu ż-żewġ ġeneri batterjali ewlenin li żdiedu fil-grupp ittrattat bl-estratt akweju CT b'doża għolja meta mqabbel ma 'dawk fil-grupp mudell (Figura 4). Studji reċenti indikaw li l-polisakkaridi ta 'estratti milwiema CT jippossjedu sinifikanti

tkabbir ta’ xi batterji tal-aċidu lattiku, li jistgħu jibbenefikaw is-saħħa tal-ospitanti [43]. B'mod parallel, Muribaculaceae huma organiżmi probijotiċi marbuta mal-lonġevità [57].ThEse issuġġerixxa li l-mekkaniżmu li bih l-estratt milwiema CT itejjeb il-mikrobijota tal-musrana jista 'jkun il-promozzjoni jew il-protezzjoni tat-tkabbir ta' organiżmi probijotiċi. Batterju ieħor denju ta' nota kien il-batterju YE57. Għalkemm l-estratt milwiema CT b'doża għolja ppromwova l-abbundanza relattiva tal-batterju YE57 fl-istudju preżenti (Figura 4), studji preċedenti sabu li l-abbundanza tiegħu kienet ogħla fl-imsaren normali minn dik fl-imsaren ittrattat b'residwu tat-te tal-ħxejjex ta 'konċentrazzjoni għolja. [58] u li l-abbundanza tagħha tnaqqset wara l-intervent b'Bacillus licheniformis flimkien ma' XOS (xylooligosaccharides) [59].Thmagħna, ir-rwol ta 'dan il-batterju fil-mikrobijota tal-musrana jistħoqqlu aktar studju. Barra minn hekk, in-numru tal-kampjun relattivament żgħir f'dan l-istudju jista 'jikkawża miżura ta' pożittiv falz u negattiv falz, u studju futur fuq kampjuni akbar huwa ssuġġerit biex jivvalida l-markaturi batterjali identifikati.

Il-kompożizzjoni tal-estratt milwiema CT tista 'tkun importanti għall-effetti tagħha fuq il-kompożizzjoni u l-bidliet funzjonali fil-mikrobijota tal-musrana tal-ġrieden b'disturbi intestinali. Il-PHGs huma komponenti attivi komuni misjuba f'CD u CT, u echinacoside ġie identifikat bħala l-PHG ewlieni f'CT [60]. Fl-aħħar deċennji, echinacoside intwera li jippossjedi ħafna attivitajiet farmakoloġiċi, bħal effetti kontra t-tixjiħ u newroprotettivi, titjib tal-funzjoni tal-qalb, tnaqqis ta 'iperlipidemija u ipergliċemija, u prevenzjoni ta' dijabete kkaġunata mill-obeżità u sindromu metaboliku [53, 61-65] . Aħna skoprejna bidliet fil-mogħdijiet metaboliċi tal-mikrobijota tal-musrana.ThIt-trattament ta 'cefixime wassal għall-arrikkiment ta' batterji relatati mad-degradazzjoni tal-ethylbenzene u l-bijosintesi ta 'peptidi nonribosomal tal-grupp siderophore, filwaqt li t-trattamenti bl-estratt akweju CT b'doża għolja u medja jistgħu jtaffu dawn il-bidliet, u jindika li dan l-estratt immodera l-komunità batterjali relatata għal dawn il-funzjonijiet. Barra minn hekk, l-arrikkiment batterjali miżjud relatat mal-mogħdija tal-metaboliżmu tal-aċidu cyanoamino taħt it-trattament bl-estratt milwiema ta 'doża għolja u l-arrikkiment imnaqqas tiegħu fil-ġrieden mudell indika li l-estratt milwiema CT jista' jippromwovi l-metaboliżmu tal-aċidu amminiku cyano.ThIl-bidliet fil-metaboliti rilevanti jistgħu jipprovdu dan l-estratt milwiema b'attivitajiet farmakoloġiċi.

Għalkemm il-mekkaniżmu li bih l-estratt milwiema CT jibdel il-kompożizzjoni u l-funzjoni tal-mikrobijota intestinali huwa kumpless, hemm xi ħjiel biex jispekula dwar il-mekkaniżmu potenzjali. Ġie rrappurtat li kemm il-batterja tal-aċidu lattiku kif ukoll l-estratti milwiema CT jistgħu jantagonizzaw l-istress ossidattiv. L-istress ossidattiv li jseħħ waqt l-infjammazzjoni huwa fattur komuni li jaggrava d-disturbi intestinali billi jnaqqas bil-qawwa d-diversità tal-mikrobi tal-musrana u jippromwovi ż-żieda ta 'batterji speċifiċi (4). Għall-kuntrarju, speċi ta 'ossiġnu reattivi jippromwovu wkoll it-tkabbir selettiv ta' gruppi batterjali permezz tan-nitrat u t-tetrathionate respirazzjoni [66-68]; pereżempju, batterji mill-familja Enterobacteriaceae jistgħu jikbru malajr bħala konsegwenza ta 'bidliet fil-kompożizzjoni tal-flora intestinali taħt kundizzjonijiet ossidattivi waqt l-infjammazzjoni [69, 70]. Il-biċċa l-kbira tal-organiżmi ħajjin jevolvu difiżi enżimatiċi, difiżi antiossidanti mhux enżimatiċi, u mekkaniżmi ta 'tiswija biex ineħħi r-radikali tal-ossiġnu [71]. Madankollu, dawn is-sistemi antiossidanti indiġeni ġeneralment mhumiex biżżejjed biex jipprevjenu ħsara ossidattiva fl-organiżmi ħajjin. Diversi antiossidanti sintetiċi addizzjonali, inklużi butylated hydroxyanisole u butylated hydroxytoluene, intużaw ħafna biex inaqqsu l-ossidazzjoni, iżda s-sigurtà tagħhom ġiet dubitata [72, 73]. Għalhekk, ir-riċerkaturi daru biex isibu antiossidanti aktar sikuri u naturali miksuba minn sustanzi li jseħħu b'mod naturali. Minħabba l-kapaċità kemm tal-polisakkaridi kif ukoll tal-batterji tal-aċidu lattiku li jeliminaw l-istress ossidattiv, id-determinazzjoni tal-mekkaniżmu antiossidattiv preċiż tal-estratti akwei CT fuq il-mikrobijota intestinali teħtieġ aktar investigazzjoni fil-futur.

Bħala konklużjoni, sibna li l-estratt milwiema CT kien kapaċiittejjeb il-mikrobijota intestinalifil-ġrieden b'disturbi intestinali billi jippromwovu d-diversità,jimmodera l-bidliet metaboliċi, u remodeling tal-istruttura tal-mikrobijota tal-musrana, u dawn ir-riżultati jistgħu jipprovdu referenza għall-iżvilupp ta 'mediċini relatati fil-futur.

CISTANCHE TUBULOSA NATURALI GĦAR-RIMODELLARE L-ISTRUTTURA TAL-MIKROBIOTA TAL-IMSARA PHGS75% ECH 30% ACT 12%