Cistanche Polysaccharides Inibixxi l-Proliferazzjoni taċ-Ċelloli tal-Kanċer tal-Prostata U Jinduċi Apoptosi Permezz tal-Ġenerazzjoni ROS U Soppressjoni tal-Ġeni Antiossidanti

 

Astratt:
Għan:Biex tinvestiga l-effetti u l-mekkaniżmi sottostanti taCistanche polysaccharidesdwar il-proliferazzjoni u l-apoptożi taċelluli tal-kanċer tal-prostata.

Metodi:
Iċ-ċelloli DU145 tal-kanċer tal-prostata tal-bniedem ġew ittrattati b'konċentrazzjonijiet baxxi, medji u għoljin ta 'Cistanche polysaccharides(20, 40, u 80 mg/mL, rispettivament). Il-proliferazzjoni taċ-ċelluli ġiet evalwata bl-użu tal-Assaġġ MTT, u l-apoptożi ġiet ivvalutata minnċitometrija tal-fluss. Intraċellularispeċi reattivi tal-ossiġnu (ROS)livelli ġew imkejla permezz taċ-ċitometrija tal-fluss, filwaqt liglutatjoni (GSH)livelli ġew determinati bl-użuELISA. L-mRNA u l-livelli ta 'espressjoni tal-proteini ta'subunità katalitika tal-glutamate-cysteine ​​ligase (GCLC), subunità tal-modifikatur tal-glutamat-cysteine ​​ligase (GCLM), uthioredoxin reductase 1 (TXNRD1)ġew analizzati minnRT-PCRuWestern blot, rispettivament.

Riżultati:
Il-konċentrazzjoni inibitorja nofs massima (IC₅₀) taCistanche polysaccharidesfuq iċ-ċelloli DU145 kien 40.35 mg/mL, għalhekk 40 mg/mL intgħażlet bħala d-doża medja għal esperimenti sussegwenti. Id-dożi baxxi, medji u għoljin ġew definiti bħala 50%, 100%, u 200% tal-IC₅₀, rispettivament.

Il-gruppi kollha ta 'trattament urew żieda sinifikanti fir-rati ta' apoptożi meta mqabbla mal-grupp ta 'kontroll. Il-grupp ta' Cistanche b'doża għoljawera l-akbar inibizzjoni tal-proliferazzjoni taċ-ċelluli u l-ogħla rata ta 'apoptożi, segwita mill-gruppi ta' doża medja u baxxa (P< 0.01). Il-livelli ta 'ROS kienu elevati b'mod sinifikanti, u l-livelli ta' GSH tnaqqsu b'mod sinifikanti b'kolloxGruppi trattati bi Cistanchekontra l-kontroll. Notevolment, il-grupp b'doża għoljakellu ROS ferm ogħla u livelli aktar baxxi ta' GSH mill-gruppi ta' doża medja u baxxa (P< 0.05); il-grupp ta' doża medja wera differenzi simili meta mqabbel mal-grupp ta' doża baxxa (P< 0.05).

Livelli ta' espressjoni ta'GCLC, GCLM, uTXNRD1(kemm mRNA kif ukoll proteina) kienu rregolati b'mod sinifikanti fil-gruppi kollha kkurati b'Cistanche meta mqabbla mal-kontroll (P< 0.05). Il-grupp b'doża għoljawera l-aktar soppressjoni sinifikanti ta’ dawn il-ġeni u l-proteini relatati mal-antiossidanti, segwiti mill-gruppi ta’ doża medja u baxxa (P< 0.05).

 

Konklużjoni:
Cistanche polysaccharidesjinibixxi l-espressjoni ta 'fatturi antiossidantiGCLC, GCLM, uTXNRD1, u b'hekk tnaqqasSintesi tal-GSH, promozzjoniAkkumulazzjoni ta' ROS, u fl-aħħar mill-aħħar jinduċuapoptożi fiċ-ċelloli tal-kanċer tal-prostata. Dawn is-sejbiet jissuġġerixxu liCistanchejista' jservi bħala aaġent terapewtiku naturaligħall-kanċer tal-prostata permezzmekkaniżmi medjati mill-istress ossidattiv.

Polisakkaridi Għoli Cistanche Estratt

Ixtri Issa

 

---

Servizz ta 'Appoġġ Ta' Wecistanche-Ikkuntattjana Biex Ikseb Prezz bl-ingrossa
Email:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Tel:+86 15292862950

 

Sfond u Metodi

Kanċer tal-prostatajammonta għal madwar7.1% tal-tumuri malinni kollha maskili, bl-ogħla inċidenza sseħħ wara l-età ta '60. Hekk kif il-popolazzjoni taċ-Ċina tkompli tixjieħ, l-inċidenza ta' din il-marda hija mistennija li tiżdied aktar [1]. Studji jissuġġerixxu li l-prevalenza għolja tal-kanċer tal-prostata fl-irġiel anzjani tista 'tkun relatata ma'bidliet deġenerattivi fil-prostata, predispożizzjoni ġenetika, drawwiet tad-dieta, ufatturi tal-istil tal-ħajja [2].

Risezzjoni kirurġikajibqa' pedament fit-trattament tal-kanċer tal-prostata, bil-għan li tneħħi l-biċċa l-kbira tal-massa tat-tumur. Madankollu, huwa assoċjat ma 'kumplikazzjonijiet sinifikanti, bħalinkontinenza urinarja, disfunzjoni sesswali, u l-aktar kritiku,rikorrenza tat-tumur u metastasi, li huma kawżi ewlenin ta 'pronjosi ħażina [3].

Fis-snin riċenti,Mediċina Tradizzjonali Ċiniża (TCM)kisbet attenzjoni dejjem akbar għar-rwol tagħha fit-terapija tal-kanċer. TCM jista 'jgħinisaħħaħ l-immunità, jikkontrobattu l-effetti sekondarji tal-kimoterapija/radjoterapija, uittejjeb id-ditossifikazzjoni. Xi ħwawar mediċinali juru wkollproprjetajiet diretti kontra t-tumur, inkluż l-inibizzjoni tat-tkabbir tat-tumur uinduzzjoni ta' apoptożi fiċ-ċelloli tal-kanċer [4].

Fost dawn,Cistanche (Cistanche deserticola)hija ħaxixa tonika tradizzjonali magħrufa għal tagħhaimmunomodulatorju, antiossidant, ueffetti kontra t-tumur. Il-komponenti bijoattivi ewlenin tiegħu humapolisakkaridiuphenylethanoid glycosides. Dan l-istudju jinvestiga l-effetti u l-mekkaniżmu sottostanti ta 'Cistanche polysaccharidesfuqproliferazzjoni u apoptożi taċ-ċelloli DU145 tal-kanċer tal-prostata.

 

1. Materjali u Metodi

1.1 Materjali Maġġuri u Reaġenti

Ċelluli tal-kanċer tal-prostata tal-bniedem DU145nkisbu minn Tongpai Biotech (Shanghai, iċ-Ċina).

Cistanche polysaccharides(Nru tal-lott: 0287181) inxtraw minn Weikeqi Bio Co., Ltd. (Sichuan, iċ-Ċina).

Serum bovin tal-fetu, peniċillina/streptomycin, uDMEMġew ipprovduti minn Zeta Life (USA).

Assaġġ MTT, Kitts tal-apoptosi tal-Annexin V/PI, RIPA lysis buffer, Kitts ta' kwantifikazzjoni tal-proteini BCAnkisbu minn Elabscience (Shanghai, iċ-Ċina).

Kit ta 'skoperta ta' speċijiet ta 'ossiġnu reattiv (ROS).uGSH ELISA kitsinxtraw minn BioLab (Shanghai, iċ-Ċina).

Reaġent Trizol, kits ta' traskrizzjoni inversa, uKits PCRinkisbu minn NeuroSym (Hangzhou, iċ-Ċina).

Antikorpi kontraGCLC, GCLM, TXNRD1, -aktina, u antikorpi sekondarji korrispondenti nxtraw minn UnivBio (Shanghai, iċ-Ċina).

1.2 Assaġġ tal-Kultura taċ-Ċelloli u l-Proliferazzjoni

Iċ-ċelloli DU145 ġew ikkultivatiDMEM supplimentat b'10% FBS u 1% penicillin/streptomycinf'inkubatur tas-CO₂. Għall-Assaġġ MTT, ċelluli DU145 tal-fażi logaritmika ġew miżrugħa fi pjanċi ta’ 96 bir u ttrattati biSoluzzjonijiet ta' polisakkaridi Cistanchef'konċentrazzjonijiet ta'10, 20, 40, u 80 mg/mL. Il-grupp ta 'kontroll irċieva biss medju DMEM.

Wara 24 siegħa ta' kura,20 µL ta' 5 mg/mL MTTġie miżjud ma 'kull bir u inkubat għal 4 sigħat. Is-supernatant tneħħa, u150 µL ta' DMSOġie miżjud. Wara li tħawwad għal 10 minuti, l-assorbiment tkejjel fi490 nmbilli tuża microplate reader. Il-IC₅₀ġie kkalkulat, u20, 40, u 80 mg/mLġew magħżula bħaladożi baxxi, medji u għoljingħal esperimenti sussegwenti. Il-rata ta' inibizzjoni tal-proliferazzjoni taċ-ċelluliġie kkalkulat bħala:
Rata ta' inibizzjoni (%)=(OD_control - OD_treated) / OD_control × 100

1.3 Assaġġ tal-Apoptożi

Ċelloli DU145 log-phase ġew ittrattati b'konċentrazzjonijiet differenti ta 'Cistanche polysaccharidesskond raggruppamenti. Wara l-iffissar u t-tbajja ',Anness V-FITCuPIintużaw biex jittikkettaw ċelluli apoptotiċi.Ċitometrija tal-flusstwettqet biex jinstabu sinjali ta 'fluworexxenza, u l-perċentwal ta' ċelloli apoptotiċi ġie rreġistrat.

 

1.4 Sejbien ta 'Livelli ta' ROS u GSH Intraċellulari

Il-livelli ta' ROS tkejlu bl-użu ta' aSonda tal-fluworexxenza ROSu ċitometrija tal-fluss. Il-livelli ta' GSH ġew ikkwantifikati bl-użuELISA. Ġiet ippreparata kurva standard bl-użu ta 'konċentrazzjonijiet magħrufa ta' standards GSH, u l-assorbiment tkejjel biex jiġu kkalkulati konċentrazzjonijiet ta 'GSH fil-kampjuni.

 

1.5 RT-PCR għall-espressjoni tal-mRNA ta' GCLC, GCLM, TXNRD1

RNA totali ġie estratt bl-użuTrizol, u cDNA ġie sintetizzat. Il-PCR twettqet bl-użu ta’ primers speċifiċi:

GCLC:

Il-quddiem: 5'-GTCGGTGTCAAAATACGGAGTTCCA-3'

Reverse: 5'-CGTGACGAGGACTGCGTGCATGGAT-3'

GCLM:

Il-quddiem: 5'-CCGATGACGCCATAAACGTCCGTAGC-3'

Reverse: 5'-GGCTAAGCGTACGTAGTACGCAACGTA-3'

TXNRD1:

Il-quddiem: 5'-TGACAGTCCTACCGTACGTAGAATGCC-3'

Reverse: 5'-ATAATCGTAGGGATGCGCTAGCAATGG-3'

-actin (kontroll intern):

Il-quddiem: 5'-TTAGGCGCGATGCAGTCAGATAAGC-3'

Reverse: 5'-ATCGACGTACGTACGGACGCGATAG-3'

Kundizzjonijiet ta 'amplifikazzjoni: 95 grad għal 60 s, segwiti minn 30 ċiklu ta' 95 grad għal 30 s, 60 grad għal 30 s, u 72 grad għal 60 s. Il-prodotti tal-PCR ġew analizzati minnelettroforeżi tal-ġel, u l-espressjoni tal-ġeni relattiva ġiet normalizzata għal-aktina.

 

1.6 Western Blotting għall-Espressjoni tal-Proteina

Proteina totali ġiet estratta bl-użubuffer RIPA, u l-konċentrazzjoni tal-proteina kienet determinata minnAssaġġ BCA. Proteini kienu separati minnSDS-PAĠNA, trasferit għalMembrani PVDF, imblukkata, u inkubata matul il-lejl f'4 grad b'antikorpi primarji kontraGCLC, GCLM, TXNRD1, u-aktina. Wara l-inkubazzjoni maAntikorpi sekondarji konjugati ma' HRP, meded ġew viżwalizzati bl-użukimiluminixxenzau kkwantifikati minnSoftwer ImageJ.

 

1.7 Analiżi Statistika

Id-dejta kollha ġiet analizzata bl-użuSPSS 25.0. One-way ANOVA uTestijiet LSD-tintużaw biex jiddeterminaw is-sinifikat statistiku.