Cistanche Polysaccharides Itejbu l-Assorbiment tal-Echinacoside in Vivo U Jaffettwaw Il-Mikrobijota tal-Imsaren

Kuntatt: emily.li@wecistanche.com

Zhifei Fu, et al

Astratt

Il-polisakkaridi uphenylethanoid glycosidesminnCistanche deserticolaintwerew li għandhom diversi benefiċċji għas-saħħa, madankollu, l-effett interattiv bejn dawn iż-żewġ tipi ta 'komposti in vivo mhuwiex magħruf fid-dettall. L-għan ta 'dan l-istudju kien li jinvestiga l-azzjonijiet sinerġistiċi ta' cistanche polysaccharides ma phenylethanoid glycoside u l-effetti tal-polisakkaridi fuq il-mikrobijota tal-musrana. Il-firien Sprague-Dawley ġew mitmugħa b’tipi differenti ta’ polisakkaridi cistanche għal 20 jum, fl-aħħar jum, il-firien kollha ngħataw il-echinacosidef'100 mg/kg. Ir-riżultati tqabblu prinċipalment fuq id-differenza fil-parametri farmakokinetiċi, il-kompożizzjoni tal-mikrobijota tal-musrana, u l-kontenut ta 'aċidi grassi ta' katina qasira. Ir-riżultati indikaw li l-polisakkaridi cistanche kollha, inklużi polisakkaridi mhux raffinati, molekulari għoljapolisakkaridi tal-piż, u polisakkaridi ta 'piż molekulari baxx, jistgħu jirregolaw id-diversità tal-mikrobijota tal-musrana, iżidu l-batterji ta' benefiċċju u partikolarment itejbu t-tkabbir ta 'Prevotella spp. kif ukoll ittejjeb il-produzzjoni ta 'aċidi grassi ta' katina qasira u l-assorbiment ta 'echinacoside. Billi tesplora l-azzjonijiet sinerġistiċi tal-polisakkaridi b'molekuli żgħar, dawn is-sejbiet jissuġġerixxu li polisakkaridi ta 'cistanche, partikolarment polisakkaridi ta' piż molekulari baxx, jistgħu jintużaw bħala manipulatur tal-mikrobijota tal-musrana għall-promozzjoni tas-saħħa.

Kliem ewlieni:CistanchedeserticolapolisakkaridEchinacosideMikrobijota tal-musrana

Ikklikkja hawn biex tikseb aktar informazzjoni dwar prodotti cistanche

1. Introduzzjoni

F'dawn l-aħħar snin, deher ċar li l-polisakkaridi jimmodulaw il-kompożizzjoni tal-mikrobijota tal-musrana u li l-bidliet jistgħu jimmedjaw assorbimenti nutrizzjonali multipli [1], li jipproduċu funzjoni fiżjoloġika [2,3]. Il-polisakkaridi mill-mediċina tradizzjonali Ċiniża (TCM) intwerew li huma kandidati ideali għar-regolamentazzjoni tal-mikrobijota tal-musrana u wrew effetti prebijotiċi. Fid-diġestiva, il-polisakkaridi u xi kompost molekulari żgħir kuntatt inevitabbilment, juru xi effetti fuq attivitajiet bijoloġiċi [4]. Bħala tip wieħed ta 'l-ingredjent attiv ewlieni fil-Panax ginseng, li ilu użat ħafna għal eluf ta' snin, il-polisakkaridi wrew tajjebtitjibġolintestinalimetaboliżmuuassorbimenttaginsenosidesin vivo [5]. Codonopsis pilosula polysaccharides wrew l-effett ta 'promozzjoni ta' l-assorbiment ta 'saponins fil-ġrieden kolite indotta mis-sodju ta' dextran sulfate [6]. Ganoderma lucidum polysaccharides, speċjalment il-frazzjoni ta 'piż molekulari għoli, ġew żvelati li għandhomprebijotikufunzjonijietf'mudelli ta 'ġrieden ta' disbiosis tal-imsaren indotti minn dieta b'ħafna xaħam [7]. Longan polysaccharides irregolaw il-mikrobijota intestinali u l-metaboliti tal-imsaren (iżdied il-kontenut ta 'pyruvate u butanoate) biex jipproduċu attivitajiet immunomodulatorji [8].

Cistanche deserticola, bħala Mediċina Tradizzjonali Ċiniża, intużat ħafna bħala suppliment tad-dieta fiċ-Ċina. Studji farmakoloġiċi wrew li esebitnewroprotettiv, immunomodulatorji, ormonaliibbilanċjar, kontra-għeja, kontra-infjammatorji, epatoprotezzjoni,kontra-ossidattiv, kontra-batterjali, kontra-virali, ukontra-tumureffetti [9]. Analiżi kimika wriet li phenylethanoid glycosides u polysaccharides kienu l-kostitwenti attivi ewlenin. Echinacoside, il-phenylethanoid glycoside prinċipali f'C. deserticola, wera azzjonijiet farmakoloġiċi wiesgħa, madankollu, druggability tiegħu huwa limitat minħabba l-bijodisponibilità fqira, metaboliżmu mgħaġġel u estensiv in vivo. Studji vverifikaw li echinacoside jista 'jiġi metabolizzat mill-mikrobijota tal-musrana in vitro [10,11]. Madankollu, l-evidenza in vivo ma ġietx investigata. Kif nafu, il-mikrobijota intestinali kellha rwol importanti fil-medjazzjoni tal-bijoattività metabolizzanti tal-mediċini erbali. Għalhekk, l-għan ewlieni ta 'dan ix-xogħol kien li jinvestiga l-influwenza ta'cistanche polysaccharidesfuq il-mikrobijota tal-imsaren u l-effetti fuq il-metaboliżmu ta 'echinacoside.

2. Materjali u metodi

2.1. Materjali u kimiċi

Cistanche deserticola YC Ma nkiseb minn Alashan, Inner Mongolia Mandela ramel industrija żvilupp Co., LTD, iċ-Ċina. Huma ġew awtentikati mill-professur Lijuan Zhang (Università ta 'Tianjin tal-Mediċina Tradizzjonali Ċiniża). Ġie depożitat kampjun ta’ vawċer fil-laboratorju tagħna. Is-sustanza standard bħal echinacoside, acteoside, u aċidu chlorogenic inkisbet mill-Istitut Nazzjonali għall-Kontroll tal-Prodotti Farmaċewtiċi u Bijoloġiċi (Beijing, iċ-Ċina). Il-purità ta 'kull standard kienet Akbar minn jew ugwali għal 98 fil-mija. Acetonitrile u metanol ta 'grad ta' kromatografija nxtraw minn Fisher Scientific (Pitts Burgh, PA). L-aċidu formiku nxtara minn Anaqua Chemical Supply Inc. (Wilmington, USA). Ir-reaġenti kimiċi l-oħra kienu ta 'grad analitiku u mixtrija minn Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. (Shanghai, iċ-Ċina).

Firien Sprague-Dawley maskili (200-220 g) ġew forniti minn Beijing HFK Bioscience CO., LTD (Beijing, iċ-Ċina, liċenzja Nru SCXK (Jing) 2014- 0004). L-annimali kollha ġew imrobbija u miżmuma taħt kundizzjonijiet SPF fil-faċilità tal-annimali. L-esperiment sar skont il-linji gwida stabbiliti mill-kura tal-annimali u juża kumitat ta 'TJUTCM u kkonforma mal-gwida għall-kura u l-użu ta' annimali tal-laboratorju ppubblikata mill-Istituti Nazzjonali tas-Saħħa tal-Istati Uniti (Pubblikazzjoni NIH numru 85-23, riveduta 1996). ). Wara perjodu ta 'akklimazzjoni ta' ġimgħa, il-firien ġew maqsuma b'mod każwali f'erba 'gruppi: grupp ta' kontroll, grupp ta 'polisakkarid totali, grupp ta' polysaccharide molekulari għoli, u grupp ta 'polisakkarid molekulari baxx. Kull grupp kien magħmul minn 6 firien, li kienu mrobbija fl-istess gaġġa.

2.2. Preparazzjoni ta' polisakkaridi Cistanche

3.0 kg ta 'Cistanche deserticola YC Ma tnaddaf u mnixxfa f'40 grad fil-forn tat-tnixxif tal-arja, imbagħad tgħaffeġ fi trab oħxon. It-trab oħxon niexef ġie estratt b'85 fil-mija etanol milwiema (v/v) f'60 grad darbtejn, u 2 h għal kull darba. Il-proporzjon solidu-likwidu kienu 1:12 u 1:10, rispettivament. Ir-residwi tal-ħxejjex ġew estratti bl-ilma f'100 grad darbtejn oħra, il-ħin tal-estratt u l-proporzjonijiet solidu-likwidu kienu l-istess b'85 fil-mija etanol. Is-soluzzjoni tal-ilma ġiet magħquda u kkonċentrata taħt pressjoni mnaqqsa u mbagħad ippreċipitat fi 80 fil-mija etanol, wieqfa taħt 4 gradi għal 24 siegħa. Il-preċipitat ġie iżolat permezz ta 'ċentrifugazzjoni f'8000 rpm għal 10 min fi 4 gradi u mbagħad lajofilizzat biex tikseb il-polisakkaridi totali (ZT). ZT ġie mbagħad maħlul f'ilma dejonizzat u filtrat fuq membrana ta 'ultrafiltrazzjoni tal-fibra vojta minn ġewwa ta' 100 kDa, inġabru l-infiltrati ritenttivi polisakkaridi molekulari għolja (HM). Il-filtrat permeated ġie filtrat b'membrana ta 'ultrafiltrazzjoni ta' 6 kDa. Inkisbu l-polisakkaridi molekulari tan-nofs tal-filtrat ritenttiv (MM) u l-polisakkaridi molekulari baxxi tal-filtrat permeated (LM).

2.3. Karatterizzazzjoni primarja ta 'polisakkaridi cistanche

Il-kontenut tal-polisakkarid kien iddeterminat bil-metodu tal-fenol tal-aċidu sulfuriku bl-użu tal-glukożju bħala standard [12]. Il-kontenut totali tal-proteini ġie ddeterminat bil-metodu BCA [13]. L-analiżi tal-kompożizzjoni tal-monosaccharide twettqet b'HPLC (sistema UltiMate 3000) mgħammra b'kolonna SinoPak C18 (5 μm, 150 mm × 4.6 mm) u detector array diode (VWD-3000). Is-separazzjoni kromatografika tad-derivattivi ta' qabel il-kolonna PMP (1-phenyl-3- methyl-5-pyrazolone) twettqet bl-użu ta' 100 mM phosphate buffer u acetonitrile fi proporzjon ta' 82:18 (v/v). , fil-mija ) bħala fażi mobbli b'rata ta 'fluss ta' 1.0 mL/min. Ġie injettat 10 μL ta 'kull kampjun u ġie użat ħin ta' analiżi ta '30 min b'detezzjoni f'245 nm. L-akkwist u l-ipproċessar tad-dejta saru bl-użu ta 'Chromeleon Software 7.1 (Dionex, Sunnyvale, CA, USA).

Il-piż molekulari (Mw) kien determinat minn kromatografija ta' esklużjoni tad-daqs ta' prestazzjoni għolja (HPSEC, UltiMate 30{{10}}0 sistema), mgħammra b'TSK gel G3000 PWXL (7.8 × 300.0 mm, Tosoh, Ġappun) u kolonna TSK gel GMPWXL (7.8 × 300.0 mm, Tosoh, Ġappun) u ditekter tal-indiċi refrattiv RefractoMax521 (RID). Il-kampjuni ġew elużi b'0.1 moL/L Na2SO4 b'rata ta 'fluss ta' 0.5 mL/min. It-temperatura tal-kolonna inżammet f'35 grad. Dextran bħala l-istandards u l-kurva standard ġie plottjat skond il-ħin ta 'eluzzjoni mpinġi kontra l-logaritmu tal-piż molekulari.

2.4. Studju farmakokinetiku

Inġabru kampjuni tad-demm mill-kanthus ta' ġewwa fi {{0}} h, 0.083 h, 0.167 h, 0.25 h, 0.5 h, 0.75 h, 1.0 h, 2.0 h, 3.{{20}} h, 4.0 h, 6.0 h, 8.0 h, 10 h, 12 h u 24 h wara l-għoti ta 'echinacoside (100 mg/kg). Kampjuni tal-plażma nkisbu biċ-ċentrifugazzjoni għal 10 min f'7500 pm. Għal 100 μL tal-kampjun tal-plażma, ġew miżjuda 10 μL ta 'soluzzjoni IS (aċidu kloroġeniku), u 500 μL ta' metanol. It-taħlita kienet imbagħad vortexed għal 3 min u ċentrifugazzjoni f'14,000 rpm għal 10 min. Is-supernatant inġabar u mnixxef fin-nitroġenu f'temperatura tal-kamra. Sussegwentement, ir-residwu ġie maħlul f'100 μL 50 fil-mija metanol akweju, ċentrifugazzjoni f'14,000 rpm għal 10 min mill-ġdid. Fl-aħħarnett, 3 μL tas-supernatant ġew injettati fis-sistema LC-MS/MS għall-analiżi. Il-kampjuni ġew analizzati bl-użu tal-metodu skond rapport qabel. Il-fażi mobbli kienet tikkonsisti f'CH3CN (solvent A) u H2O (li fihom 0.1 fil-mija HCOOH; solvent B) bl-użu tal-gradjent li ġej: 0-1 min, 10 fil-mija A; 1–8 min, 10–90 fil-mija A; 8–9 min, 90–10 fil-mija A; 9-11 min: 10 fil-mija A. Il-kampjun kien separat fuq il-kolonna ACQUITY HSS T3 (1.8 μm, 100 mm × 2.1 mm id). Ir-rata tal-fluss kienet 0.3 mL/min u t-temperatura tal-kolonna kienet issettjata għal 35 grad. Fl-analiżi MS, intuża l-mod ta 'jonizzazzjoni negattiva, bil-parametri ottimizzati li ġejjin: vultaġġ kapillari, 2.5 kV; temperatura tad-desolvazzjoni, 450 grad. In-nitroġenu ntuża bħala desolvation u gass tal-koni, b'rata ta 'fluss ta' 900 L/h u 150 L/h, rispettivament. Il-kwantifikazzjoni kienet għalhekk imwettqa bl-użu ta 'MRM tat-tranżizzjonijiet ta' m/z 785.29 → 623.26 għal echinacoside, m/z 353.06 → 191.07 għal aċidu chlorogenic (IS), m/z 623.24 → 161.09 għal acteoside. Il-vultaġġ tal-koni għal echinacoside, IS u acteoside kienu 100 V, 32 V, u 74 V; enerġija tal-ħabta, 32 V, 14 V, u 30 V.

2.5. Studju ta' aċidi grassi ta' katina qasira (SCFAs).

Firien Sprague-Dawley maskili ngħataw oralment ZT, HM, u LM għal 3 ġimgħat. Id-determinazzjoni ta 'SCFAs (aċidu aċetiku, aċidu propjoniku, aċidu isobutyric, aċidu butiriku, aċidu isovaleriku, aċidu valeriku u aċidu hexanoic) bil-kromatografija tal-gass (GC) saret kif deskritt qabel bi ftit modifiki [14]. Fil-qosor, 0.5 g kampjun tal-ħmieġ kien imxerred f'2.5 mL ta' ilma Milli-Q, imxerred għal 10 min, u 7.5 mL 1 fil-mija soluzzjoni ta' HCl/etanol li kien fiha standards interni (aċidu butiriku 24.0 ug /mL u 2- ethyl hexanoic acid 1.32 ug/mL bħala standards interni) ġew miżjuda. It-taħlitiet ġew omoġenizzati għal 5 min u ċentrifugati f'14,000 rpm għal 10 min f'4 gradi. Ħames mikrolitri ta 'supernatant ġew injettati f'modalità maqsuma fi proporzjon ta' 30: 1. Il-gass trasportatur kien N2 (99.999 fil-mija) f'1 mL / min. Il-gass tal-make-up (N2) kien f'25 mL/min. Ir-rata tal-fluss ta 'H2 u arja kienu 30 mL/min u 300 mL/min, rispettivament. Kampjuni tal-ħmieġ inġabru fl-20 jum ta 'dan l-istudju u immedjatament maħżuna f'-80 grad.

2.6. Ġbir tal-ippurgar, estrazzjoni tad-DNA, u sekwenzar tal-ġeni 16S rRNA

Madwar 200 mg ta 'kampjun tal-ħmieġ frisk inġabru f'tubu Eppendorf sterili ta' 1.5 mL minn kull far u nħażnu f'-80 grad għal preparazzjoni tad-DNA aktar tard. Id-DNA ġie estratt mill-ippurgar bl-użu tal-QIAamp DNA Stool Mini Kit (QIAGEN). L-ammont ta 'DNA ġie determinat bl-użu ta' spettrofotometru NanoDrop (Thermo Electron Corporation); l-integrità u d-daqs ġew iċċekkjati b'elettroforesi tal-ġell tal-agarose 1.0 fil-mija. Skont il-konċentrazzjoni, id-DNA ġie dilwit għal 1 ng/μL bl-użu ta 'ilma sterili.

16S rRNA ġie amplifikat bl-użu ta' primer speċifiku (V4: 515F-806R) bil-barcode. Ir-reazzjonijiet PCR kollha twettqu b'Phusion® High Fidelity PCR Master Mix (New England Biolabs). Ħallat volum ugwali ta '1× loading buffer (li jinsab SYB aħdar) ma' prodotti PCR u ħaddem l-elettroforesi fuq ġel agarose 2 fil-mija għall-iskoperta. L-istrixxi ewlenin brillanti bejn 400 u 450 bp ġew magħżula għal aktar esperimenti. Il-prodotti tal-PCR tħalltu fil-proporzjonijiet tad-densità tal-UE. Imbagħad, taħlita ta 'prodotti PCR ġew ippurifikati b'Qiagen Gel Extraction Kit (Qiagen, il-Ġermanja).

Il-libreriji tas-sekwenzjar inbnew bl-użu ta 'TruSeq® DNA PCR Free Sample Preparation Kit (Illumina, USA) wara r-rakkomandazzjonijiet tal-manifattur u ġew miżjuda kodiċijiet tal-indiċi. Il-kwalità tal-librerija ġiet ivvalutata fuq is-sistema Qubit® 2.0 Fluorometer (Thermo Scientific) u Agilent Bioanalyzer 2100. Il-librerija kienet sekwenzata fuq pjattaforma Illumina HiSeq 2500 u ġew iġġenerati 250 bp paired-end reads.

2.7. Analiżi tal-bijoinformatika

Il-barcode u l-qtugħ tas-sekwenza tal-primer, l-assemblaġġ tas-sekwenza, u l-filtrazzjoni tad-dejta skont il-QIIME (V 1.7.0). Sekwenzi b'xebh akbar minn jew ugwali għal 97 fil-mija ġew assenjati lill-istess OTUs. L-OTUs huma annotati bħala tikketti SILVA. L-indiċijiet alfa-diversità li jevalwaw ir-rikkezza tal-komunità mikrobjali tal-imsaren (il-metriċi ACE u Chao1) u d-diversità tal-komunità (il-metriċi ta 'Shannon u Simpson) ġew ikkalkulati bl-użu ta' Qiime (Verżjoni 1.9.1). Intużat analiżi tad-diversità beta biex tinvestiga l-varjazzjonijiet strutturali tal-komunitajiet tal-mikrobi bl-użu tad-distanza UniFrac. Id-differenzi fost il-gruppi kollha ġew ittestjati bit-test Tukey u t-test Wilcox. L-analiżi tal-koordinati prinċipali (PCoA) ġiet applikata biex tispjega d-differenzi fil-kompożizzjoni fost l-erba 'gruppi li jużaw pakketti R. Il-metodu tad-daqs tal-effett tal-analiżi diskriminanti lineari (LEfSe) huwa ddisinjat speċifikament għall-iskoperta tal-bijomarkaturi u d-dejta tas-sekwenzjar tal-ispjegazzjoni. U l-analiżi diskriminanti lineari (LDA) intużat biex jiġi kkalkulat id-daqs tal-effett ta 'kull mikrobi tal-musrana b'mod differenzjali u l-karatteristiċi assoċjati ma' kull grupp ta 'firien. L-analiżi tal-korrelazzjoni ġiet implimentata bl-użu tal-pakketti R gcorrplot (Verżjoni 1.1.463).

Id-dejta tal-SCFAs ġiet analizzata bl-użu tal-ANOVA tal-SPSS 22.0.

3. Riżultati u diskussjoni

3.1. Preparazzjoni u analiżi kimika ta 'polisakkaridi cistanche

Cistanches Herba jintuża kemm bħala ikel kif ukoll bħala mediċina fiċ-Ċina. Polysaccharides iżolati minnha ġibdu attenzjoni kbira minħabba l-attivitajiet sinifikanti tagħhom. F'dan l-istudju, l-erba 'partijiet ta' polisakkaridi cistanche (ZT, HM, MM, u LM) inkisbu bil-metodu ta 'estrazzjoni ta' ilma, preċipitazzjoni ta 'alkoħol u ultrafiltrazzjoni. Il-kompożizzjonijiet kimiċi ta 'erba' partijiet ta 'polisakkaridi huma murija fit-Tabella 1.

Kontenut totali taz-zokkor tal-kampjuni bl-użu ta' kurva standard ta' glukożju. Ir-riżultat wera li r-rendimenti ta 'HM u LM kienu ogħla minn MM. Polysaccharides wrew diversi proprjetajiet farmakoloġiċi, speċjalment attività immuni. Studji wrew li l-kontenut u t-tip ta 'monosaccharide, il-piż molekulari, it-tip ta' grupp sostituent għandhom rwol importanti fl-attivitajiet tal-polisakkaridi [15]. Il-partijiet differenti tal-kompożizzjoni tal-monosaccharide tal-polisakkaridi cistanche kienu simili, u mannożju (Man), aċidu galacturonic (GalUA), glukożju (Glc), galattożju (Gal), u arabinożju (Ara) kienu l-monosakkaridi ewlenin.

Madankollu, il-kontenut kien differenti fost l-erba 'partijiet. Glukożju u arabinożju kienu l-komponenti ewlenin ta 'ZT u HM, filwaqt li l-glukożju kien l-unità prinċipali taz-zokkor ta' LM, barra minn hekk, ftit rhamnose u aċidu glukuroniku (GlcUA) ġew skoperti wkoll f'dawn il-frazzjonijiet.

Il-piżijiet molekulari relattivi tal-kampjuni ġew investigati permezz ta 'kromatografija ta' esklużjoni tad-daqs ta 'prestazzjoni għolja (HPSEC). Skont il-kurva standard tad-dextrans u l-ħin taż-żamma fil-kolonni, il-piżijiet molekulari tal-quċċata prinċipali f'ZT ġew osservati f'1.68 × 106 Da u 1.70 × 104 Da, f'HM ġew determinati li huma 1.54 × 106, 2.06 × 105, u 4.81 × 104, f'MM u LM ġew determinati li huma 1.09 × 104 u 2.05 × 104, rispettivament. Ir-rendimenti minnhom ġew elenkati fit-Tabella 1 u r-rendiment ta 'MM kien baxx u mhux biżżejjed għall-esperiment fuq l-annimali. Studji preċedenti indikaw l-effetti li jiddependu mill-istruttura tal-polisakkaridi cistanche fuq bijoattivitajiet diversi [16]. Għad hemm bżonn ta 'esperimenti ulterjuri, speċjalment purifikazzjoni, analiżi strutturali Fifine għandha tiġi applikata għall-istudju tal-istruttura-attività

3.2. Studju farmakokinetiku

Il-farmakokinetika tal-echinacoside ġiet investigata permezz ta 'kromatografija likwida ta' prestazzjoni ultra-għolja spettrometrija tal-massa triple quadrupole (UPLC u Xevo TQ-S) wara amministrazzjoni orali ta 'echinacoside. Il-profili medja tal-konċentrazzjoni fil-plażma-ħin ta 'echinacoside kienu murija fil-Fig. 1. Skont is-software tad-droga u l-istatistika (DAS, verżjoni 2. 0), il-farmakokinetika ta' echinacoside fifit mudell ta 'kompartiment wieħed, u l-ieħor parametri fil-gruppi ZT, HM, u LM ġew miġbura fil-qosor fit-Tabella 2, inkluż il-ħin biex tintlaħaq il-konċentrazzjoni massima (Tmax), il-konċentrazzjoni massima (Cmax), l-erja taħt il-kurva tal-konċentrazzjoni-ħin (AUC), u l-ħin medju ta’ residenza (MTR). ). Studju farmakokinetiku wera li s-Cmax medja ta' echinacoside fil-gruppi ZT, HM, u LM instabu li kienu 646.4 ng/mL, 732.0 ng/ml, u 898.4 ng/mL li kienu 1.6, 1.8 u 2.2 darbiet meta mqabbla mal-grupp ta 'kontroll (406.8 ng/ml), rispettivament. Permezz tat-trattament minn qabel b'polysaccharides, l-AUC(0-24 h) ta' echinacoside żdiedu rispettivament b'6.6 fil-mija, 36.7 fil-mija, u 63.6 fil-mija fil-gruppi ZT, HM, u LM, meta mqabbla mal-grupp ta' kontroll, li wera li l-polisakkaridi wrew l-attività li tippromwovi l-assorbiment ta 'molekula żgħira. Dawn ir-riżultati kienu pjuttost simili għal dak li l-chitooligosaccharides tejbu l-bijodisponibilità ta 'phenylethanoid glycosides fl-estratt Fructus Forsythia [17] u l-polisakkaridi ta' Polygonum multiflorum tejbu l-proprjetajiet bijofarmaċewtiċi ta '2, 3, 5, 4'-tetrahydroxy-stilbene - 2-} O- -D-glucoside fil-firien normali Sprague-Dawley [18]. Il-mikrobijota tal-musrana fiha varjetà ta 'enzimi relatati mal-metabolizzazzjoni tad-droga u l-mekkaniżmi tal-mikrobijoma forom il-farmakokinetika u l-farmakodinamika tad-droga għadhom mhux magħrufa [19]. Il-polisakkaridi jistgħu jrawmu l-mikrobijota tal-musrana billi jżidu s-sistema immuni, jassorbu n-nutrijenti, u jnaqqsu t-tkabbir ta 'patoġeni [20,21]. Għalkemm il-letteratura rrappurtat li cistanche polysaccharides jistgħu jżidu l-metaboliti echinacoside (bħal acteoside) in vitro, ma sibniex li l-polisakkaridi koeżistenti bbenefikaw għal echinacoside konvertiti f'acteoside in vivo [10,11].

3.3. Kontenut ta' SCFAs fil-ħmieġ tal-firien

Il-mikrobijota tal-imsaren iffermentat polisakkaridi, li jipproduċu diversi polimeri u metaboliti bijoattivi, bħal SCFAs [3]. Bħala l-metaboliti ewlenin tal-polisakkaridi, SCFAs ġew analizzati fil-ħmieġ. L-SCFAs, inkluż l-aċidu aċetiku, l-aċidu propjoniku u l-butirrat ġew irrappurtati li għandhom effetti ta 'benefiċċju fuq il-metaboliżmu tal-glukożju, tal-kolesterol u tal-lipidi. L-aċetat huwa l-SCFAs prinċipali fil-kolon u huwa sottostrat importanti għas-sintesi tal-kolesterol, il-propionate huwa sottostrat għall-glukoneġenesi fil-fwied u l-butirat huwa s-sottostrat tal-enerġija preferut tal-kolonoċiti u għandu anti-infjammatorju fl-imsaren [22,23].

Ir-riżultati tagħna wrew li l-aċetat kien l-SCFAs ewlenin iffurmati fil-ħmieġ għall-gruppi kollha, segwit minn butyrate u propionate, filwaqt li l-konċentrazzjoni ta 'valerate u SCFAs ramifikati (aċidu isobutyric u aċidu isovaleric) kienu aktar baxxi. L-aċetat intwera li jżid l-attività tal-enzimi fit-tessut tal-fwied, li jirriżulta f'kontroll aħjar taz-zokkor fid-demm [24]. Fit-20jum (Fig. 2), il-grupp LM kellu livell sinifikament ogħla ta 'aċetat (pb 0.05), il-proporzjon ta' propionate kellu tendenza li jonqos, u l-proporzjon ta 'butirrat kellu tendenza li jiżdied għalkemm il-bidla kienet insinifikanti fil-ħmieġ meta mqabbla mal-grupp ta 'kontroll.

Madankollu, il-grupp HM kellu proporzjon sinifikanti aktar baxx ta 'butirrat mill-grupp ta' kontroll (pb 0.05). Il-kontenuti ta 'SCFAs totali bejn LM u HM kienu tendenza opposta meta mqabbla mal-grupp ta' kontroll u l-grupp LM biss kellu differenza sinifikanti.

Ħafna fatturi jaffettwaw il-livell ta 'SCFAs fil-ħmieġ, inklużi l-kompożizzjoni u l-ammont ta' mikrobijota tal-musrana, is-sors tad-dieta, u l-ħin li jieħu biex l-ikel jgħaddi mill-apparat diġestiv [22]. Studji li jakkumulaw juru li l-istruttura tal-polisakkaridi, inkluża l-kompożizzjoni tar-residwi tal-monosakkaridi, il-grad ta 'polimerizzazzjoni, it-tnejn jistgħu jaffettwaw il-proprjetajiet tal-fermentazzjoni u l-produzzjoni ta' SCFAs [25]. Mir-riżultati tagħna, nistgħu nikkonkludu li polisakkaridi cistanche jimmodulaw il-produzzjoni ta 'SCFAs u polisakkaridi ta' struttura differenti għandhom effetti differenti.

3.4. Cistanche polysaccharides ikkawżaw bidliet ewlenin fil-kompożizzjoni u d-diversità tal-mikrobijota tal-musrana

Il-kompożizzjoni batterjali tal-kampjuni tal-ħmieġ (n=4) ġiet eżaminata bl-użu ta 'teknika ta' sekwenzar ta' rendiment għoli Illumina. Il-librerija kienet sekwenzata fuq pjattaforma Illumina HiSeq2500 u ġew prodotti 250 bp paired-end reads. Ġew ipproċessati għal identifikazzjoni tassonomika u analiżi tad-diversità. Il-kurvi ta 'rarefazzjoni (Fig. 3a) wrew li, għal kull kampjun, ir-rikkezza tal-ispeċi batterjali livellata hekk kif żdied il-fond tal-kampjun, li jindika li l-isforz ta' sekwenzar kien biżżejjed u li nqabad id-diversità totali fil-kampjun. Il-kurva ta 'Shannon (Fig. 3b) wriet li n-numru ta' speċi batterjali uniċi żdied hekk kif in-numru ta 'sekwenzi identifikati żdied. Is-saturazzjoni tal-kurvi ta 'Shannon tfisser li d-dejta tas-sekwenzjar kienet biżżejjed biex tkopri l-ispeċi kollha tal-batterji.

L-analiżi tad-diversità alfa tintuża biex titkejjel id-diversità fi ħdan kampjun. L-indiċijiet tad-diversità Chao1, ACE, Shannon u Simpson ġew ikkalkulati bit-test ta 'Tukey biex jiddeskrivu d-diversità alfa. L-analiżi tad-diversità bbażata fuq l-indiċi ACE u Chao 1 wriet ir-rikkezza tal-komunità tal-mikrobijota intestinali fil-livell OTU. L-indiċijiet ACE u Chao 1 kienu aktar baxxi b'mod sinifikanti fil-kampjuni tal-ħmieġ tal-grupp LM meta mqabbla mal-grupp ta 'kontroll (pb 0.05) (Fig. 4a, b), li jimplika li r-rikkezza tal-ispeċi tal-mikrobijota tal-musrana naqset bl-għalf LM. L-analiżi tad-diversità bbażata fuq l-indiċi ta 'Shannon u Simpson żvelat id-diversità tal-komunità tal-mikrobijota intestinali. Ma kien hemm l-ebda bidla ovvja fl-indiċi tad-diversità ta 'Shannon u Simpson meta ttrattati b'polisakkaridi cistanche meta mqabbla mal-grupp ta' kontroll.

Cistanche polysaccharides ikkawżaw bidliet kbar fit-taxa. Barra minn hekk, f'erba 'gruppi N98 fil-mija tal-OTUs kienu relatati mal-phyla Bacteroidetes, Firmicutes, u Proteobacteria. L-aktar phylum predominanti kien Bacteroidetes li kkontribwixxa 55.09 fil-mija, 57.89 fil-mija, 52.72 fil-mija, u 69.{{2{0}}4 fil-mija tal-mikrobijota ippurgar fil-kontroll, ZT, HM, u Gruppi LM rispettivament, segwiti minn Firmicutes, li jikkontribwixxu 41.39 fil-mija, 38.03 fil-mija, 42.15 fil-mija, u 28.15 fil-mija rispettivament (Fig. 5a, b). Meta mqabbel mal-grupp ta 'kontroll, il-grupp ZT intwera li jirriżulta f'effetti dgħajfa fuq l-abbundanza relattiva tal-phyla maġġuri, ħlief l-abbundanza baxxa ta' Actinobacteria żdiedet b'mod sinifikanti (MetaStat, pb 0.05). Fil-grupp HM, Proteobacteria żdiedet b'mod sinifikanti (pb 0.01). Dan indika li HM Cistanche polysaccharide jista 'jippromwovi l-arrikkiment ta' Proteobacteria biex jaffettwa l-metaboliżmu ta 'sustanzi fil-firien. Fil-grupp LM, l-abbundanza tal-Bacteroidetes, li l-kontributuri ewlenin tagħhom kienu Prevotellaceae u Prevotellaceae_UCG-001 żdiedet b'mod sinifikanti (pb 0.05) u l-abbundanza ta 'Firmicutes, inklużi Peptococcaceae, naqset b'mod sinifikanti (pb 0.01) . Il-membri tal-Prevotella u l-Bacteroides kienu deskritti qabel bħala degradaturi tal-fibra tad-dieta [26], li jipproduċu prodotti finali metaboliċi bħal succinate u aċetat [27]. Sejbiet bħal dawn ikkonfermaw studji preċedenti li juru li xi Prevotella spp. jistgħu jiddegradaw polisakkaridi tal-pjanti kumplessi. Rapporti preċedenti wrew ukoll li ż-żewġ diviżjonijiet batterjali dominanti, il-proporzjon miżjud tal-phyla Firmicutes/Bacteroidetes huma assoċjati mal-obeżità [28]. L-abbundanza aktar baxxa ta 'l-ewwel u l-abbundanza ogħla ta' dawn ta 'l-aħħar fil-grupp LM issuġġerew li LM jista' jgħin biex jitfa 'liri.

Minn 72 familja misjuba, it-taxa top10 ġew iżolati u analizzati (Fig. 5c, d). Il-Lachnospiraceae u r-Ruminococcaceae huma tnejn mill-aktar familji abbundanti misjuba fl-ambjent tal-imsaren tal-mammiferi u ġew assoċjati mal-manutenzjoni tas-saħħa tal-imsaren [29]. Fl-istudju preżenti, il-familji Bacteroidales_S24-7_grupp (39.11 ± 6.04 fil-mija , 36.88 ± 4.44 fil-mija , 28.37 ± 4.01 fil-mija , 35.81 ± 7.91 fil-mija ), Prevotellaceae (10.684.5 ± 0.6 mija , ± 4.01 %) fil-mija, 19.65 ± 8.97 fil-mija, 21.05 ± 8.39 fil-mija), Lachnospiraceae (18.21 ± 5.20 fil-mija, 15.09 ± 3.29 fil-mija, 12.13 ± 7.14 fil-mija, 13.13 ± 7.14 fil-mija, 13.12 ± 8.12 fil-mija, ± 4.12 ± 4.0 fil-mija, 13.12 ± 8.12 fil-mija, ± 4.12 ± 4.12 fil-mija, 13.12 ± 7.14 fil-mija, 13.12. ± 4.70 fil-mija, 8.19 ± 1.72 fil-mija) kienu jiddominaw f'kull grupp. Ġiet irrappurtata familja S24-7 li kien fiha abbundanti ta' enzimi li jiddegradaw il-karboidrati [30]. Prevotellaceae ippreżenta żieda u Lachnospiraceae ippreżentaw tendenza ta 'tnaqqis fil-grupp tal-polisakkaridi meta mqabbel mal-grupp ta' kontroll [31]. Ġie preżunt li ma kien hemm l-ebda enzimi attivi ta' polisakkaridi cistanche korrispondenti fil-grupp Bacteroidales_S{24-7_ u Lachnospiraceae jew moduli ta' batterji li jorbtu l-karboidrati fil-polisakkaridi. Ġeneri Prevotella ġew irrappurtati f'assoċjazzjoni ma 'loċi ta' utilizzazzjoni tal-polisakkaridi u enzimi attivi għall-karboidrati [32]. Sabiex tinstab ir-relazzjoni bejn il-batterji u l-SCFAs, ġiet applikata l-analiżi ta 'korrelazzjoni ta' Spearman. Xi ġeneri bħal Bacteroides, Prevotella u Lactobacillus fil-mikrobijota tal-musrana għandhom rwol importanti fl-idrolizzazzjoni tal-polisakkaridi f'SCFAs [33]. Ir-riżultati tagħna wrew ukoll li l-Bacteroidaceae ikkorrelataw b'mod pożittiv u l-mikrobijota ddominata pproduċew aktar butirat [34], filwaqt li l-Prevotellaceae ikkorrelataw b'mod pożittiv u l-mikrobijota dominata pproduċiet aktar aċetat. Il-mikrobijota ddominata minn Lactobacillaceae u Ruminococcaceae ipproduċew aktar propionate (Fig. 6).

Intużat analiżi tad-diversità beta biex tinvestiga l-varjazzjonijiet strutturali tal-mikrobijota tal-musrana tul il-kampjuni bl-użu ta 'metriċi tad-distanza UniFrac. Id-differenzi fid-distanzi Unifrac ġew analizzati bit-test Tukey u Wilcox (Fig. 7). Bl-użu ta 'analiżi uniFrac mhux ippeżata, sibna li l-ġrieden tal-għalf LM jinġabru 'l bogħod minn gruppi oħra. Ġie identifikat mudell ta 'clustering apparenti għall-gruppi ta' kontroll, ZT, HM, u LM.

L-abbundanza ta 'dawn il-mikrobi kienet modulata b'mod differenzjali bi trattamenti ta' polisakkaridi. Biex tidentifika t-taxa batterika speċifika f'kull grupp, il-kompożizzjoni tal-mikrobijota mill-gruppi ta 'kontroll, ZT, HM, u LM tqabblu bil-metodu tad-daqs tal-effett tal-analiżi diskriminanti lineari (LEfSe). L-Analiżi Diskriminanti Lineari (LDA) tintuża biex tikkalkula d-daqs tal-effett ta 'kull karatteristika abbundanti b'mod differenzjali. Il-limitu tal-punteġġi LDA huwa ogħla mil-lista 4 kienu, li jindika abbundanza komunitarja relattiva ogħla fil-grupp korrispondenti milli fi gruppi oħra. Bl-użu ta' dan il-metodu, sibna li 19-il OTUs kienu differenti b'mod sinifikanti fil-gruppi kollha, jiġifieri, 6 OTUs fil-grupp ta' kontroll kienu ogħla, 1 OTU biss fil-grupp ZT kienet ogħla, 10 OTUs fil-grupp HM kienu ogħla. u 2 OTUS fil-grupp LM kienu ogħla minn gruppi oħra (Fig. 8). L-abbundanza ta' g_Prevotellaceae_ UCG_001 f'LM żdiedet b'mod sinifikanti (8.47 ± 1.9 fil-mija f'LM, 0.40 ± {{21) }}.09 fil-mija fil-grupp Kontroll, pb 0.01). Ir-riżultat kien konsistenti mar-rapport li Porphyra haitanensis u Ulva prolifera polysaccharides jistgħu ovvjament jippromwovu l-proliferazzjoni ta' Prevotellaceae UGC-001 (pb 0.05) u Rikenellaceae RC9 (pb 0.01) [35].

4. Konklużjonijiet

Huwa ċar li hemm relazzjoni bejn il-kostitwenti kimiċi tat-TCM, il-mikrobijota tal-musrana, u ċerti metaboliti li jirriżultaw mill-mikrobi tal-musrana. Is-sejbiet attwali tagħna pprovdew metodu għall-istudju tas-sinerġiji tal-metaboliżmu tal-echinacoside ma 'tipi differenti ta' polisakkaridi bbażati fuq mikrobijota tal-musrana. Il-mikrobijota tal-musrana tista 'timmetabolizza t-TCM u t-TCM tista' taffettwa t-tkabbir tal-mikrobijota tal-musrana. Min-naħa waħda, wara l-amministrazzjoni orali tal-polisakkaridi fl-imsaren, varjetà ta 'mikrobijota tal-musrana tikkodifika enzimi metaboliċi, li għandhom rwol importanti fid-dekompożizzjoni tal-polisakkaridi, u biex jipproduċu metaboliti bijoattivi. Min-naħa l-oħra, il-kontribuzzjonijiet tal-polisakkaridi għandhom xi impatt fuq il-bilanċ tal-mikroambjent tal-musrana fil-proċess. Permezz ta 'tqabbil ta' bi jew mingħajr polisakkaridi, sibna li polisakkaridi għalkemm indiġeriti direttament mill-ospitant, potenzjalment aġixxew bħala prebijotiċi, li wasslu għal bidliet favorevoli fil-mikrobijota tal-musrana billi jippromwovu t-tkabbir ta 'probijotiċi. Il-polisakkaridi Cistanche irregolaw id-diversità tal-mikrobijota tal-musrana, iżidu l-batterji ta 'benefiċċju u speċjalment il-polisakkaridi molekulari baxxi tejbu t-tkabbir ta' Prevotella spp. Barra minn hekk, il-mikrobijota mtejba tal-musrana mbagħad tejbet l-assorbiment ta 'echinacoside fil-Cistanche deserticola. Iżda r-raġuni mhix ċara għal kollox, tista 'tkun riżultat tad-difetti kkombinati tal-mikrobijota tal-musrana, SCFAs, u l-immunità, u aktar riċerka hija meħtieġa għal mudell ta' mard. Huwa diffiċli li tipprova l-effetti tal-prebijotiċi f'mudelli ta 'annimali b'saħħithom li l-komunità tal-mikrobijota tagħhom hija stabbli u reżiljenti. Cistanche deserticola polysaccharides jistgħu jiġu żviluppati bħala prodotti probijotiċi biex jirregolaw il-mikrobijota tal-musrana u jistgħu jiġu applikati għall-metaboliżmu sinerġistiku ta 'molekuli żgħar fil-futur. Din id-dejta tgħinna nfasslu interventi biex jipprevjenu gruppi vulnerabbli ta’ nies biex itejbu s-saħħa tagħhom.

Dikjarazzjoni ta' interess konkorrenti

L-awturi jiddikjaraw li m'hemm l-ebda kunflitt ta' interess rigward il-pubblikazzjoni ta' dan id-dokument.

Rikonoxximenti

L-awturi jirrikonoxxu bi gratitud lill-Fondazzjoni Nazzjonali tax-Xjenza Naturali taċ-Ċina (Għotja Nru 81830112 u 81904058)

Referenzi
[1] I. Khangwal, P. Shukla, Prebijotiċi potenzjali u l-mekkaniżmi ta 'trażmissjoni tagħhom: approċċi reċenti, J. Food Drug Anal. 27 (3) (2019) 649–656.
[2] XF Xu, PP Xu, CW Ma, J. Tang, XW Zhang, mikrobijota tal-musrana, saħħa ospitanti, u polisakkaridi, Biotechnol. Adv. 31 (2) (2013) 318–337.
[3] NT Porter, EC Martens, Ir-rwoli kritiċi tal-polisakkaridi fl-ekoloġija u l-fiżjoloġija tal-mikrobi tal-musrana, Annu. Dun Microbiol. 71 (2017) 349–369.
[4] QW Guo, QQ Ma, ZH Xue, XD Gao, HX Chen, Studji dwar il-karatteristiċi tal-irbit ta 'tliet polisakkaridi b'piż molekulari differenti u flavonoids mill-ħarir tal-qamħirrum (Maydis stigma), Carbohyd. Polim. 198 (2018) 581–588.
[5] SS Zhou, J. Xu, H. Zhu, J. Wu, JD Xu, R. Yan, XY Li, HH Liu, SM Duan, Z. Wang, HB Chen, H. Shen, SL Li, mikrobijota tal-musrana -mekkaniżmi involuti fit-titjib tal-espożizzjoni sistemika tal-ġinsenosidi minn polisakkaridi koeżistenti fid-decoction tal-ġinseng, Sci. Rep 6 (2016), 22474.
[6] YP Jing, AP Li, ZR Liu, PR Yang, JS Wei, XJ Chen, T. Zhao, YR Bai, LJ Zha, CJ Zhang, Assorbiment ta 'Codonopsis pilosula saponins minn polisakkaridi koeżistenti ttaffi d-disbiożi mikrobjali tal-musrana b'dextran sulfate sodium -kolite indotta fil-ġrieden mudell, Biomed. Riż. Int. 2018 (2018), 1781036(18-il paġna).
[7] CJ Chang, CS Lin, CC Lu, J. Martel, YF Ko, DM Ojcius, SF Tseng, TR Wu, YYM
Chen, JD Young, HC Lai, Ganoderma Lucidum inaqqas l-obeżità fil-ġrieden billi jimmodula l-kompożizzjoni tal-mikrobijota tal-musrana, Nat. Komun. 6 (2015) 7489.
[8] JC Zhang, GM Yang, YZ Wen, SX Liu, CF Li, RL Yang, W. Li, Il-mikrobijota intestinali huma involuti fl-attivitajiet immunomodulatorji ta 'longan polysaccharide, Mol. Nutr. Ikel Res. 61 (11) (2017), 1700466.
[9] T. Wang, XY Zhang, WY Xie, Cistanche deserticola YC Ma, "Desert Ginseng": reviżjoni, Am. J. Chin. Med. 40 (6) (2012) 1123–1141.
[10] Y. Li, GS Zhou, SH Xing, PF Tu, XB Li, Identifikazzjoni ta 'metaboliti echinacoside prodotti minn batterji intestinali umani bl-użu ta' likwidu ultraperformance
kromatografija–kwadrupole spettrometrija tal-massa tal-ħin tat-titjira, J. Agr. Chem tal-Ikel. 63 (30) (2015) 6764–6771.
[11] Y. Li, Y. Peng, MY Wang, PF Tu, XB Li, Metaboliżmu gastrointestinali uman ta 'estratt ta' l-ilma Cistanches Herba in vitro: eluċidazzjoni tal-profil metaboliku bbażat fuq identifikazzjoni komprensiva ta 'metaboliti f'meraq gastriku, meraq intestinali, intestinali uman. batterji, u mikrosomi intestinali, J. Agric. Chem tal-Ikel. 65 (34)
(2017) 7447–7456.
[12] M. Dubois, K. Gilles, JK Hamilton, PA Rebers, F. Smith, Metodu kolorimetriku għad-determinazzjoni taz-zokkor u s-sustanzi relatati, Anal. Chem. 168 (4265) (1956) 167.
[13] NH Cho, SY Seong, KH Chun, YH Kim, IC Kwon, BY Ahn, SY Jeong, Immunizzazzjoni mukoża ġdida b'konjugati ta 'polisakkaridi-proteini maqbuda f'mikrosferi alġinati, J. Kontroll. Rilaxx 53 (1–3) (1998) 215–224.
[14] XY Zhao, ZZ Jiang, F. Yang, Y. Wang, XM Gao, YF Wang, X. Chai, GX Pan, Y. Zhu, Sejbien sensittiv u simplifikat ta 'influwenza antibijotika fuq il-bidliet dinamiċi u versatili ta' qosra fekali -aċidi grassi tal-katina, PLoS One 11 (12) (2016), e167032.
[15] SJ Li, QP Xiong, XP Lai, X. Li, MJ Wan, JN Zhang, YJ Yan, M. Cao, L. Lu, JM Guan, DY Zhang, Y. Lin, Modifika molekulari tal-polisakkaridi u l-bijoattivitajiet li jirriżultaw , Compr. Dun Ikel. Sci. F. 15 (2) (2016) 237–250.
[16] ZF Fu, X. Fan, XY Wang, XM Gao, Cistanches Herba: ħarsa ġenerali lejn il-proprjetà tal-kimika, il-farmakoloġija u l-farmakokinetika tagħha, J. Ethnopharmacol. 219 (2018) 233–247.
[17] W. Zhou, XB Tan, JJ Shan, T. Liu, BC Cai, LQ Di, Effett ta’ chitooligosaccharides fuq
l-assorbimenti intestinali ta 'phenylethanoid glycosides fl-estratt Fructus Forsythia, Phytomedicine 21 (12) (2014) 1549–1558.
[18] LL Sun, M. Wang, HJ Zhang, GJ You, YN Liu, XL Ren, YR Deng, L-influwenza tal-polisakkaridi minn Ophiopogon japonicus fuq 2,3,5,4′-tetrahydroxy -stilbene-2- Z. Fu et al. / International Journal of Biological Macromolecules 149 (2020) 732–740 739 O{- -d-glucoside dwar il-proprjetajiet bijofarmaċewtiċi in vitro u farmakokinetiċi in vivo, Int. J. Biol. Makromol. 119 (2018) 677–682.
[19] KN Lam, M. Alexander, PJ Turnbaugh, Precision medicine goes microscopic: engineering the microbiome to improve drug outcomes, Cell Host Microbe 26 (1) (2019) 22–34.
[20] I. Khangwal, P. Shukla, Prospecting prebiotics, metodi innovattivi ta 'valutazzjoni, u l-applikazzjonijiet tas-saħħa tagħhom: reviżjoni, 3 Biotech. 9 (5) (2019) 187.
[21] GR Gibson, R. Hutkins, ME Sanders, SL Prescott, RA Reimer, SJ Salminen, K. Scott, C. Stanton, KS Swanson, PD Cani, K. Verbeke, G. Reid, L-assoċjazzjoni xjentifika internazzjonali għall-probijotiċi u prebijotiċi (ISAPP) dikjarazzjoni ta 'kunsens dwar id-definizzjoni u l-ambitu tal-prebijotiċi, Nat. Dun Gastro. Hepat. 14 (8) (2017) 491–502.
[22] JMW Wong, R. de Souza, CWC Kendall, A. Emam, DJA Jenkins, Colonic health: fermentation and short-chain fatty acids, J. Clin. Gastroenterol. 40 (3) (2006) 235–243.
[23] SI Cook, JH Sellin, Artiklu ta 'reviżjoni: aċidi grassi ta' katina qasira fis-saħħa u l-mard, Aliment. Pharm. Ther. 12 (6) (1998) 499–507.
[24] H. Yamashita, K. Fujisawa, E. Ito, S. Idei, N. Kawaguchi, M. Kimoto, M. Hinamori, H. Tsuji, Titjib tal-obeżità u t-tolleranza tal-glukożju bl-aċetat fid-dijabete tat-tip 2 Otsuka Long- Firien Evans Tokushima Fatty (OLETF), Biosci. Bijoteknoloġija. Biochem. 71 (5) (2007) 1236–1243.
[25] AL Ho, O. Kosik, A. Lovegrove, D. Charalampopoulos, RA Rastall, Fermentabilità in vitro ta 'xylooligosaccharides u frazzjonijiet ta' Xylo-polysaccharide b'piżijiet molekulari differenti minn batterji fekali umani, Carbohyd. Polim. 179 (2018) 50–58.
[26] TT Chen, WM Long, CH Zhang, S. Liu, LP Zhao, BR Hamaker, Il-kapaċità li tuża l-fibra tvarja fil-mikrobijota tal-musrana ddominata minn Prevotella versus Bacteroides, Sci. Rep 7 (1) (2017) 2594.
[27] M. Sakamoto, M. Ohkuma, Bacteroides sartorii huwa sinonimu eterotipiku preċedenti ta 'Bacteroides chinchilla u għandhom prijorità, Int. J. Syst. Evol. Mikr. 62 (6) (2012) 1241–1244.
[28] PJ Turnbaugh, RE Ley, MA Mahowald, V. Magrini, ER Mardis, JI Gordon, Microbiome tal-musrana assoċjat mal-obeżità b'kapaċità miżjuda għall-ħsad tal-enerġija, Nature 444 (7122) (2006) 1027–1131.
[29] LF Gomez-Arango, HL Barrett, HD McIntyre, LK Callaway, M. Morrison, NM Dekker, Konnessjonijiet bejn il-mikrobijoma tal-imsaren u l-ormoni metaboliċi fil-bidu tat-tqala f'nisa b'piż żejjed u obeżi, Dijabete 65 (8) (2016) 2214 –2223.
[30] KL Ormerod, DL Wood, N. Lachner, SL Gellatly, JN Daly, JD Parsons, CG Dal Molin, RW Palfreyman, LK Nielsen, MA Cooper, M. Morrison, PM Hansbro, P. Hugenholtz, Genomic characterization of the Familja Bacteroidales mhux kultivata S24-7 li tgħix fl-imsaren ta 'annimali omeotermiċi, Microbiome. 4 (1) (2016) 36.
[31] JD Zhang, LJ Song, YJ Wang, C. Liu, L. Zhang, SW Zhu, SJ Liu, LP Duan, Effett benefiku ta 'Lachnospiraceae li jipproduċi butyrate fuq sensittività eċċessiva vixxerali kkaġunata mill-istress fil-firien, J. Gastro. Hepatol. 34 (8) (2019) 1368–1376.
[32] T. Accetto, G. Avguštin, The diversi and extensive plant polysaccharide degradative apparatus of the rumen and hindgut prevotella species: a factor in their ubiquity? Syst. Appl. Microbiol. 42 (2) (2019) 107–116.
[33] KE Bach Knudsen, MS Hedemann, HN Lærke, Ir-rwol tal-karboidrati fis-saħħa intestinali tal-ħnieżer, Anim. Għalf. Sci. Tech. 173 (1–2) (2012) 41–53.
[34] SA Parker, A . Geirnaert, L. Berchtold, A. Greppi, L. Krych, RE Steinert, T. de Wouters, C. Lacroix, Nifhmu l-potenzjal prebijotiku ta 'fibri tad-dieta differenti bl-użu ta' mudell ta 'fermentazzjoni adulta kontinwa in vitro (PolyFermS), Sci. Rep 8 (1) (2018) 4318.
[35] ZS Zhang, XM Wang, SW Han, CD Liu, F. Liu, Effett ta 'żewġ polisakkaridi tal-alka tal-baħar fuq mikrobijota intestinali fil-ġrieden evalwati permezz ta' sekwenzar Illumina PE250, Int. J. Biol. Makromol. 112 (2018) 796–802.