Astratt

Għan:Il-formula li tirregola l-ipogliċemiċi tal-lipidi (HLF) ibbażata fuq Cistanche wriet effikaċja sinifikanti fit-titjib tad-disturbi tal-metaboliżmu tal-glukożju u tal-lipidi. Madankollu, il-mekkaniżmi speċifiċi ta' azzjoni tagħha għadhom mhux ċari. Dan l-istudju kellu l-għan li jesplora l-miri u l-mekkaniżmi potenzjali tal-HLF fit-titjib tad-disturbi metaboliċi tal-glukolipidi permezz ta 'farmakoloġija tan-netwerk, docking molekulari, simulazzjonijiet ta' dinamika molekulari (MD), u validazzjoni sperimentali.

Metodi:
Miri assoċjati ma' disturbi metaboliċi tal-glukolipidi ġew irkuprati mid-database GeneCards. Il-miri ta' azzjoni tal-komponenti attivi ewlenin tal-HLF inkisbu mid-databases CTD u SwissTargetPrediction. Id-database STRING u s-softwer Cytoscape intużaw biex jinbnew netwerks ta' interazzjoni proteina-proteina (PPI). Wara li ġew identifikati miri ewlenin potenzjali, saru analiżi ta' arrikkiment tal-Ontoloġija tal-Ġene (GO) u l-Enċiklopedija ta' Kjoto tal-Ġeni u l-Ġenomi (KEGG) permezz tad-database Metascape, u nbena netwerk "compost-target-pathway". Docking molekulari sar bl-użu ta 'AutoDock u PyMOL biex tivverifika l-interazzjonijiet bejn il-komponenti ewlenin u l-miri ewlenin. Imbagħad saru simulazzjonijiet MD fuq l-aħjar kumplessi proteina-ligand identifikati mill-docking. Ġie stabbilit mudell tal-ġurdien ta' disturb metaboliku tal-glukolipidin vivovalidazzjoni tas-sejbiet tal-farmakoloġija tan-netwerk.

Riżultati:
L-analiżi topoloġika tan-netwerk PPI identifikat 10 miri ewlenin: TNF, CTNNB1, AKT1, NF-κB1, ESR1, FN1, TP53, IL-1 , IL-6, u EGFR. L-arrikkiment GO wera li dawn il-miri kienu involuti prinċipalment fit-trasduzzjoni tas-sinjali u r-regolamentazzjoni tat-traskrizzjoni. L-analiżi tal-mogħdija KEGG wriet assoċjazzjoni sinifikanti mal-mogħdijiet tal-lipidi u l-aterosklerożi. Docking molekulari kkonferma affinitajiet ta' rbit favorevoli bejn il-komponenti ewlenin ta' HLF (eż., lovastatin, coptisine, salvianolic acid B) u miri bħal AKT1, FN1, u IL-6. Simulazzjonijiet MD urew aktar interazzjonijiet stabbli, speċjalment bejn AKT1 u komposti bħal lovastatin, coptisine, u salvianolic acid B. Esperimenti fuq l-annimali indikaw li HLF jista 'jeżerċita effetti terapewtiċi billi jirregola l-espressjoni ta' AKT1, TP53, FN1, u EGFR, jrażżan fatturi infjammatorji bħal IL-1}, u {4}IL-1}}, u {1{4}CTN}}, u {1{4} jirregolaw ESR. Dawn il-bidliet wasslu għal titjib fil-livelli tal-glukożju fid-demm u tal-lipidi fil-ġrieden mudell.

Konklużjoni:
L-HLF jista' jirregola l-metaboliżmu tal-glukożju u tal-lipidi u jtejjeb il-leżjonijiet aterosklerotiċi billi jimmira mogħdijiet relatati mal-lipidi u l-aterosklerożi. Joffri strateġija terapewtika komprensiva għall-prevenzjoni u t-trattament ta 'disturbi metaboliċi u kumplikazzjonijiet relatati.

Kliem ewlieni:
Formula bbażata fuq Cistanche; Disturb metaboliku tal-glukolipid; Farmakoloġija tan-netwerk; Docking molekulari; Simulazzjoni tad-dinamika molekulari;Mogħdija tal-lipidi u aterosklerożi

 

 

 

cistanche estratt acteoside ingredjent għat-trattament ta 'disturbi metaboliċi Glucolipid

Tgħallem aktar dwar il-benefiċċji ta' cistanche, jekk jogħġbok ikkuntattjana

Ikkuntattja issa

 

 

 

1. Introduzzjoni

Disturbi metaboliċi tal-glukolipid saru tħassib prominenti tas-saħħa pubblika madwar id-dinja. Fl-2021, il-prevalenza globali tad-dijabete laħqet madwar 529 miljun, bi projezzjonijiet li jindikaw aktar minn 1.31 biljun każ sal-2050. Fiċ-Ċina, studji reċenti juru prevalenza tad-dijabete ta '12.4% fl-2018, minn 10.9% fl-2013. diżabilità.

Stħarriġ epidemjoloġiku minn 20 sptar terzjarju fiċ-Ċina juri li 67.1% tal-pazjenti bid-dijabete tat-tip 2 (T2DM) għandhom dislipidemija. L-istudju CCMR-3B irrapporta li 72% tal-pazjenti T2DM kellhom ukoll dislipidemija u/jew pressjoni għolja, u rduppjaw ir-riskju tagħhom ta' kumplikazzjonijiet makrovaskulari u mikrovaskulari meta mqabbla ma' pazjenti bid-dijabete biss.

Minħabba l-patoġenesi kumplessa ta 'disturbi metaboliċi glukolipid u r-rata baxxa ta' kisba ta 'kontroll metaboliku komprensiv, trattamenti effettivi huma limitati. Il-formula li tirregola l-ipogliċemiċi-lipidi (HLF) ibbażata fuq Cistanche, żviluppata taħt it-teorija tal-"phlegm turbidity", għandha l-għan li tnaddaf is-sħana, tneħħi t-turbidità u tirrestawra l-bilanċ. Magħmul minn tmien ħwawar inklużiCistanche, Momordica charantia, Aloe vera, Scutellaria baicalensis, Schisandra chinensis, Zingiber officinale, Salvia miltiorrhiza, uAtractylodes macrocephala, HLF jimmira mekkaniżmi ewlenin ta 'disturbi metaboliċi.

L-analiżi tal-marki tas-swaba' bl-użu tal-HPLC identifikat komposti ewlenin:mangiferin, coptisine, jatrorrhizine, salvianolic acid B, aloin, berberine, palmatine,ulovastatin. Studji preċedenti kkonfermaw l-effikaċja tal-HLF fit-tnaqqis tal-livelli tal-glukożju u tal-lipidi, it-tnaqqis tar-riskju kardjovaskulari, u t-titjib tar-reżistenza għall-insulina. Prova klinika multiċentrika, randomised, open-label li tinvolvi 450 pazjent b'T2DM u dislipidemija relatati mal-obeżità sabet li l-HLF naqqas b'mod effettiv il-glukożju fid-demm, irregola l-lipidi, naqas il-piż tal-ġisem, u tejbet is-sensittività għall-insulina.

Aktar riċerka ssuġġeriet li l-HLF jista’ jimmodula l-mikrobijota tal-musrana (eż.Faecalibacterium, Blautia) u jinfluwenzaw mogħdijiet metaboliċi bħad-degradazzjoni tal-aċidu xaħmi u l-glikolisi/glukoneġenesi. Minkejja l-effikaċja klinika ppruvata tagħha, il-mekkaniżmi preċiżi għadhom mhux ċari, u jillimitaw applikazzjoni usa '.

Il-farmakoloġija tan-netwerk toffri approċċ fil-livell tas-sistemi biex jiġu spjegati l-mekkaniżmi tal-mard u l-azzjonijiet tad-droga billi tintegra l-bijoinformatika u l-iskrinjar b’rendiment għoli. Dan l-istudju jutilizza farmakoloġija tan-netwerk, docking molekulari, dinamika molekulari, u esperimenti fuq l-annimali biex jikxef il-mekkaniżmi multi-mira ta 'HLF fit-trattament ta' disturbi metaboliċi tal-glukolipidi.

2. Materjali u Metodi

2.1 Strumenti

D3024R Ċentrifuga mkessħa b'veloċità għolja (SCILOGEX)

Apparat tal-elettroforeżi Y300C u tank tal-elettroforeżi JY300C (Junyi Oriental, Beijing)

Sistema tal-immaġini ChampGel 5000 (Saizhi Innovation, Beijing)

SMA-1000 spettrofotometru (Meilin Hengtong, Beijing)

Sistema qRT-PCR StepOne Plus (ABI)

Unità tal-elettroforeżi universali PowerPac (Bio-Rad)

PB-10 miter tal-pH (Sartorius)

Analizzatur tal-kimiluminixxenza Tanon 5200 (Tanon, Shanghai)

2.2 Mediċini Veġetali

Formula HLF inkluża:

Cistanche (Cistanches Herba)

Momordica charantia

Scutellaria baicalensis

Aloe vera

Schisandra chinensis

Zingiber officinale

Salvia miltiorrhiza

Atractylodes macrocephala
Il-ħxejjex aromatiċi kollha kienu estratti tal-formula granulati (Tianjiang Pharmaceutical, Jiangyin).

Kontroll tad-droga:Metformin hydrochloridepilloli (0.5 g kull pillola, Bristol-Myers Squibb, Shanghai).

2.3 Reaġenti u Antikorpi

Reaġent TRIzol (Invitrogen)

HiFiScript cDNA Synthesis Kit (CW2569)

Taħlita UltraSYBR (ROX Għoli, CW2602)

Kit tal-Analiżi tal-Proteina BCA

Antikorpi primarji mmirati lejn p-AKT, p-NF-κB p65, AKT, NF-κB p65, FN1, p53, IL-1 , IL-6, EGFR, TNF- , -catenin, ESR1, -actin

Antikorpi sekondarji (IgG tal-mogħoż kontra l-fenek/ġrieden konjugat mal-HRP)

2.4 Mudelli tal-Annimali

Ġrieden maskili C57BL/6J (7 ġimgħat) ġew mixtrija u miżmuma taħt kundizzjonijiet SPF standard. Il-proċeduri kollha tal-annimali ġew approvati mill-Kumitat tal-Etika tal-Isptar Guang'anmen (l-approvazzjoni nru. IACUC-GAMH-2019-002).

2.5 Tbassir tal-Mira

Il-komposti attivi minn HLF ġew mistoqsija fiCTDuSwissTargetPrediction(probabbiltà > 0.1). Miri relatati mal-mard għal T2DM u dislipidemija ġew irkuprati minnGeneCards(punteġġ ta' rilevanza > 1). Id-dijagrammi Venn identifikaw miri li jikkoinċidu għal aktar analiżi tal-PPI.

2.6 Kostruzzjoni tan-Netwerk tal-PPI

Miri li jikkoinċidu ġew inputSTRING(https://www.string-db.org), b'kunfidenza medja (punteġġ Akbar minn jew ugwali għal 0.4). In-netwerk ġie viżwalizzat u analizzat fiCytoscape, u miri ewlenin identifikati skond iċ-ċentralità tal-grad.

2.7 Arrikkiment GO u KEGG

Miri ewlenin ġew sottomessi lilMetascapegħall-analiżi tal-mogħdija GO (BP, MF, CC) u KEGG (P <0.01). Il-viżwalizzazzjoni saret bl-użu ta' plots tal-bużżieqa.

2.8 Netwerk tal-Kompost-Target-Pathway

Cytoscape intuża biex jinbena netwerk li jgħaqqad ħxejjex aromatiċi, komposti, miri, u mogħdijiet, li juri interazzjonijiet multi-mira, multi-mogħdijiet.

2.9 Docking Molekulari

Strutturi 2D ta 'komposti nkisbu minnPubChem, konvertit għal PDB bl-użuIftaħ Babel. L-istrutturi tal-proteini ġew imniżżla minnRCSB PDB, ippreparat fiAutoDockTools, u docked bl-użuSailVina. Affinità ta' rbit Inqas minn jew ugwali għal -4.25 kcal/mol tqieset sinifikanti. Ir-riżultati tad-docking ġew viżwalizzati biPyMOL.

2.10 Simulazzjoni tad-Dinamika Molekulari

Simulazzjonijiet MD saru bl-użuAmber18għal kumplessi ta 'fuq magħżula. Proteina: ambra14SB; ligand: gaff; ilma: mudell OPC. RMSD u RMSF ġew ikkalkulati minn simulazzjonijiet 20 ns NPT.

2.11 Raggruppament u Intervent tal-Annimali

Il-ġrieden ġew randomised f'4 gruppi: Normali (N), Mudell (M), Metformin (MET) u HLF. Ħlief grupp N, il-ġrieden kollha ġew mitmugħa dieta b'ħafna xaħam (HFD) għal 6 ġimgħat. L-HLF ġie amministrat f'14 g/kg (ekwivalenti ta' ħwawar mhux raffinat), MET f'250 mg/kg. Wara 8 ġimgħat ta 'intervent, id-demm u t-tessuti tal-fwied inġabru għall-analiżi.

2.12 qRT-PCR

L-RNA totali ġie estratt bl-użu ta 'TRIzol. cDNA ġie sintetizzat bl-użu ta' HiFiScript. qPCR sar bl-użu ta' UltraSYBR u StepOne Plus. L-espressjoni relattiva ġiet ikkalkulata permezz ta '2^−ΔΔCt.

2.13 Western Blot

Proteini ġew estratti mit-tessut tal-fwied, ikkwantifikati, separati minn SDS-PAGE, u trasferiti għal membrani PVDF. Wara l-imblukkar u l-inkubazzjoni b'antikorpi primarji u sekondarji, is-sinjali ġew viżwalizzati minn ECL u kkwantifikati bl-użu ta' ImageJ. -actin intuża għan-normalizzazzjoni.

2.14 Analiżi Statistika

Id-dejta ġiet analizzata bl-użuSPSS 23.0uGraphPad Prism 10.1.2. Intużaw ANOVA f'direzzjoni waħda u t-testijiet, b'P < 0.05 meqjusa statistikament sinifikanti.