L-għażla ta 'ingredjent botaniku għall-kura tal-ġilda għandha tinvolvi aktar milli tinstab storja attraenti tal-pjanti. Għal marka tal-kura tal-ġilda, manifattur kuntrattwali, jew distributur tal-ingredjenti, il-mistoqsijiet l-aktar utli huma:

Liema komposti huma preżenti fl-estratt?

Kemm jista' l-manifattur jikkontrolla l-konċentrazzjonijiet tagħhom b'mod konsistenti?

Liema esperimenti jappoġġjaw l-applikazzjoni proposta?

L-evidenza tapplika għall-ingredjent attwali li qed jinxtara?

Liema ttestjar addizzjonali huwa meħtieġ qabel ma jitnieda prodott lest?

Id-dokument tekniku eżaminat f'dan l-artikolu jiffoka fuqverbascoside derivat minn Cistancheu l-applikazzjonijiet proposti tagħha fil-produzzjoni tal-lipidi tal-ġilda, l-idratazzjoni u r-riċerka relatata mal-barrieri.

Jiddeskrivi kemm proċess ta 'purifikazzjoni kif ukoll esperimenti tal-laboratorju li jqabblu verbascoside purifikat ma' diversi estratti ta 'Cistanche u ingredjenti oħra.

 

 

16% estratt tal-verbascoside cistanche

Il-lezzjoni kummerċjali ċentrali hija sempliċi: estratt ġenerali ta 'Cistanche u kompost purifikat ħafna derivat minn Cistanche m'għandhomx jiġu ttrattati bħala ingredjenti interkambjabbli.

Nota ta' evidenza:Is-sejbiet tar-riċerka hawn taħt huma rrappurtati fit-test tal-privattiva Ċiniża pprovdut għat-traduzzjoni. Il-materjal fornut ma jinkludix iċ-ċifri oriġinali, settijiet ta' dejta numeriċi kompluti, dettalji tal-pubblikazzjoni tal-privattivi, jew studji kliniċi umani. Għalhekk għandu jinqara bħala żvelar tekniku, mhux bħala konferma indipendenti tal-effikaċja tal-prodott lest jew approvazzjoni regolatorja.

 

1. X'inhu Verbascoside?

Verbascoside huwa magħruf ukoll bħalaacteoside. Dawn huma ismijiet għall-istess sustanza kimika, aktar milli żewġ ingredjenti attivi differenti. Ir-reġistru tas-sustanzi tal-FDA jelenka ż-żewġ ismijiet taħt l-istess identità tas-sustanza. (precision.fda.gov)

 

 

Fl-iżvelar fornut, verbascoside huwa deskritt bħala phenylethanoid glycoside miksub minn zkuk imnixxfin imlaħħam ta 'speċi Cistanche. Is-sorsi botaniċi prinċipali msemmija huma:

Cistanche deserticola

Cistanche tubulosa

Cistanche sinensis

Salsa Cistanche

Id-dokument jinvestiga verbascoside bħala attiv botaniku potenzjali għal formulazzjonijiet topiċi, b'attenzjoni partikolari għall-metaboliżmu tal-lipidi, il-produzzjoni tal-aċidu hyaluronic, il-proteini tight-junction, u l-migrazzjoni taċ-ċelluli.

Għaliex l-Isem Jgħodd Meta Tixtri l-Ingredjenti

Meta tqabbel il-kwotazzjonijiet tal-fornituri, itlob konferma ta':

L-ispeċi botaniċi u l-parti tal-pjanti.

Jekk il-materjal huwa estratt sħiħ, estratt standardizzat, jew kompost purifikat.

Il-kontenut tal-verbascoside imkejjel.

Il-metodu analitiku u l-istandard ta' referenza użati.

Jekk il-perċentwal iddikjarat jirrappreżentax assaġġ bil-massa jew perċentwal taż-żona kromatografika.

Kwotazzjoni għal "estratt ta' Cistanche" waħdu ma tipprovdix biżżejjed informazzjoni biex tiddetermina jekk tikkorrispondix għall-materjal evalwat f'esperiment partikolari.

2. Għaliex l-Iżvelar Iffoka fuq l-Ostakolu tal-Ġilda?

Id-dokument jippreżenta kunċett ta 'riċerka b'ħafna punti aktar milli sempliċi talba ta' moisturizing tal-wiċċ.

Is-sekwenza proposta tagħha hija:

Tiġdid taċ-ċelluli epidermali → konnessjonijiet aktar b'saħħithom minn ċellula għal ċellula → appoġġ tal-lipidi → produzzjoni ta' aċidu hyaluronic → attività relatata mat-tiswija

Biex jinvestigaw dan il-kunċett, ir-riċerkaturi użaw ċelloli HaCaT. HaCaT hija linja taċ-ċelluli tal-keratinoċiti umani immortalizzata stabbilita bħala mudell tal-laboratorju għall-istudju tal-bijoloġija epidermali u l-keratinizzazzjoni. Mhuwiex tip ta 'ċellula naturalment imsejjaħ "HaCaT" fil-ġilda ta' persuna. (pmc.ncbi.nlm.nih.gov)

Għax-xerrejja tal-ingredjenti, din id-distinzjoni hija importanti:riżultati fiċ-ċelloli kkultivati ​​huma punt tat-tluq tar-riċerka, mhux sostitut għall-ittestjar ta 'prodott lest fuq il-ġilda tal-bniedem.

L-Endpoints Prinċipali Rapportati

Qasam ta' riċerka	Kejl deskritt fid-dokument fornut	Interpretazzjoni prattika
Rispons taċ-ċelluli	CCK-8 assaġġ	A endpoint tal-iskrinjar; metodi addizzjonali jsaħħu talba ta' proliferazzjoni
Attività relatata mal-lipidi	Attività ta' aċidu xaħmi sintażi; Espressjoni ACC , FASN, u N-SMase	Jappoġġja aktar investigazzjoni tal-metaboliżmu tal-lipidi, iżda ma jikkwantifikax direttament il-profil sħiħ tal-lipidi tal-barriera tal-ġilda
Aċidu hyaluronic	Kontenut HA; Espressjoni HAS2, HAS3, u CD44	Jappoġġja aktar investigazzjoni ta' mogħdijiet relatati mal-HA
Konnessjonijiet minn ċellula għal ċellula	Livelli ta' Claudin-1 u occludin	Jkejjel proteini tight-junction magħżula aktar milli funzjoni ta 'barriera kompluta
Attività relatata mat-tiswija	Assaġġ tal-grif taċ-ċelluli	Endpoint ta' għeluq ta' vojt in vitro, mhux prova klinika tal-fejqan tal-feriti
Żamma ta 'umdità	Żamma tal-massa tal-formulazzjoni fuq pjanċi tal-ħġieġ	Test tal-laboratorju fil-livell tal-formulazzjoni, mhux studju dwar l-idratazzjoni fuq il-ġilda

Dawn l-interpretazzjonijiet isegwu mill-metodi sperimentali deskritti fit-test fornut.

 

3. X'Jagħmel Din ir-Riċerka Utli għan-Negozji tal-Kura tal-Ġilda?

L-iżvelar iqabbel diversi materjali aktar milli jassumi li kull ingredjent derivat minn Cistanche jipproduċi l-istess rispons.

Il-materjali ttestjati jinkludu:

A Cistanche polysaccharide estratt.

Diversi estratti li fihom phenylethanoid-glycoside.

Estratt totali ta 'phenylethanoid glycoside.

Echinacoside.

Verbascoside purifikat.

Skont id-dokument fornut, verbascoside purifikat wera attività f'bosta mill-endpoints imkejla. Xi estratti mħallta wrew attività f'ċerti testijiet iżda mhux oħrajn.

The Purchasing Takeaway

Ixtri l-ispeċifikazzjoni li taqbel mal-objettiv tal-iżvilupp tiegħek - mhux biss l-isem tal-impjant.

Per eżempju:

Jekk il-proġett tiegħek huwa bbażat fuq l-esperimenti purifikat-verbascoside, itlob data għall-materjal purifikat.

Jekk il-formulazzjoni tiegħek tuża estratt sħiħ standardizzat, itlob ittestjar fuq dak l-estratt.

Jekk fornitur jikkwota riċerka dwar proċess ieħor ta 'estrazzjoni, staqsi jekk il-kompożizzjoni ttestjata hijiex komparabbli mal-materjal li qed jiġi offrut.

Evidenza għal grad wieħed ta' ingredjent m'għandhiex tiġi trasferita awtomatikament għal ieħor.

4. Kif Huwa Ppreparat Verbascoside fl-Iżvelar?

Il-proċess deskritt għandu erba' stadji ewlenin:

Preparazzjoni botanika:Ittratta minn qabel u polverizza zkuk imnixxfin ta' Cistanche.

Estrazzjoni:Uża 50%-80% etanol milwiema.

Arrikkiment:Separa l-frazzjonijiet billi tuża AB-8 reżina ta' adsorbiment makroporuża.

Purifikazzjoni:Uża kromatografija tal-ġel tas-silika, segwita minn konċentrazzjoni u tnixxif bil-friża.

Il-purità finali ddikjarata hijamill-inqas 98%, għalkemm it-test fornut ma jinkludix il-validazzjoni analitika jew id-dejta tal-lott meħtieġa biex tikkonferma b'mod indipendenti dik l-ispeċifikazzjoni.

Mistoqsija Kritika tal-Manifattura: Solventi Residwu

Il-pass tal-kromatografija żvelat jużakloroform u metanol.

Għal proġett ta 'provenjenza kummerċjali, staqsi lill-manifattur għal-lista attwali tas-solventi tal-produzzjoni, kontrolli tat-tneħħija tas-solvent, u riżultati tas-solvent residwu speċifiċi għall-lott. ICH Q3C jipprovdi qafas farmaċewtiku għall-evalwazzjoni tar-riskji residwi-solvent; m'għandux ikun rappreżentat bħala standard universali ta 'aċċettazzjoni kożmetika. (ema.europa.eu)

Tassumux li "idderivat mill-pjanti" tfisser "magħmul biss bl-ilma u l-etanol."

 

5. X'Juri fil-fatt it-test taż-żamma tal-umdità?

Id-dokument ipprovdut jiddeskrivi paragun ta’:

Serum li fih2% verbascoside.

Serum li fih2% echinacoside.

Serum ta' kontroll pożittiv li fih5% gliċerina.

Il-kampjuni tpoġġew fuq25 grad u 50% umdità relattiva, u l-massa tagħhom kienet imkejla maż-żmien.

L-iżvelar jirrapporta li l-kampjun li fih verbascoside żamm aktar massa taħt dawn il-kundizzjonijiet.

Din hija osservazzjoni potenzjalment utli ta' screening tal-formulazzjoni. Madankollu, il-metodu deskritt ma jistabbilixxix:

Idratazzjoni superjuri fuq il-ġilda tal-bniedem.

Tnaqqis ta 'telf ta' ilma transepidermali.

Superjorità klinika fuq il-gliċerina.

Prestazzjoni aħjar f'kull formulazzjoni.

Li d-differenza osservata rriżultat biss mill-attivi msemmija, mingħajr paragun tal-vetturi mqabbla kompletament żvelat.

Għal marka li tippjana talba komparattiva, ittestja l-formulazzjonijiet lesti billi tuża studju mfassal b'mod xieraq.

 

6. Lista ta 'Kontroll Prattika għall-Akkwist ta' Ingredjenti ta 'Cistanche

Uża l-mistoqsijiet li ġejjin meta tevalwa fornitur ta 'estratt ta' Cistanche jew manifattur verbascoside purifikat.

Kwistjoni tax-xiri	Dokumentazzjoni li trid titlob
X'inhu s-sors botaniku?	Identifikazzjoni tal-ispeċi, dikjarazzjoni tal-parti tal-pjanti, u informazzjoni dwar it-traċċabilità
X'qed jiġi fornut eżattament?	Kompożizzjoni sħiħa, inklużi trasportaturi, għajnuniet għall-ipproċessar, u eċċipjenti fejn applikabbli
Kemm verbascoside huwa preżenti?	Ċertifikat ta' analiżi u metodu ta' analiżi speċifiku għal lott
Kif tiġi kkonfermata l-identità?	Identifikazzjoni kromatografika u informazzjoni standard ta' referenza
Liema solventi jintużaw?	Dikjarazzjoni attwali tas-solvent tal-manifattura u riżultati tat-test tas-solvent residwu
Kemm hija konsistenti l-produzzjoni?	Riżultati rappreżentattivi minn lottijiet multipli
Il-materjal huwa adattat għall-użu maħsub?	Dokumentazzjoni għall-użu maħsub u dossier tas-sikurezza xieraq
Se taħdem fil-formula magħżula?	Solubilità, kompatibilità, stabbiltà, u dejta dwar l-iżvilupp tal-ippakkjar
X'jappoġġja t-talbiet proposti?	Rapporti ta' studju għall-istess grad ta' ingredjent u, preferibbilment, il-formulazzjoni lesta

 

Tużax "Naturali" bħala Konklużjoni tas-Sigurtà

It-test tal-privattiva fornut jagħmel dikjarazzjoni ta' sikurezza favorevoli bbażata fuq l-oriġini botanika tal-ingredjent. Dik id-dikjarazzjoni teħtieġ kwalifika għall-pubblikazzjoni kummerċjali.

L-FDA tispjega li s-sors ta 'ingredjent ma jiddeterminax is-sigurtà tiegħu: materjali derivati ​​mill-pjanti jista' jkun fihom ukoll sustanzi tossiċi jew allerġeniċi. Is-sikurezza għandha tiġi evalwata għall-kundizzjonijiet maħsuba għall-użu. (fda.gov)

Għal din ir-raġuni, itlob is-sostenzjoni tas-sigurtà aktar milli tiddependi fuq "naturali", "ħxejjex," jew "purità għolja" bħala assigurazzjonijiet waħedhom.

 

7. Kif Għandha Brand Tiddiskuti r-Riċerka?

Żomm tliet saffi separati:

Dak li jsostni l-iżvelar.

Dak li l-esperimenti rrappurtati mkejla.

X'intwera li jagħmel il-prodott lest.

Pereżempju, "investigat f'ċelloli HaCaT għal attività relatata mal-lipidi" huwa materjalment differenti minn "ppruvat klinikament biex isewwi l-barriera tal-ġilda."

Bl-istess mod, referenzi għat-trattament tal-ekżema, il-ġestjoni tad-dermatite atopika, jew il-fejqan tal-feriti m'għandhomx jiġu kkupjati direttament fi stqarrijiet ta 'prodotti kożmetiċi ordinarji. Fl-Istati Uniti, pretensjonijiet li jittrattaw mard jew jaffettwaw l-istruttura jew il-funzjoni tal-ġisem jistgħu jikkawżaw prodott li jiġi rregolat bħala mediċina. (fda.gov)

Artiklu ta' riċerka jew referenza għal privattiva mhijiex, waħedha, permess biex issir talba ta' kummerċjalizzazzjoni terapewtika.

8. Mogħdija ta 'żvilupp Rakkomandata

Għal negozju li jqis verbascoside derivat minn Cistanche, sekwenza ta' żvilupp utli hija:

Iddefinixxi l-kategorija tal-prodott intenzjonat u s-suq fil-mira.

Agħżel il-grad tal-ingredjent u l-ispeċifikazzjoni analitika.

Irrevedi l-kompożizzjoni, il-kontaminanti, is-solventi residwi, u d-dokumentazzjoni tas-sigurtà.

Żviluppa prototip u tivvaluta l-kompatibilità tal-ingredjenti.

Evalwa l-formulazzjoni u l-istabbiltà tal-ippakkjar.

Iwettaq valutazzjonijiet mikrobijoloġiċi u tas-sikurezza xierqa.

Ittestja l-prodott lest kontra l-pretensjonijiet ta 'prestazzjoni maħsuba.

Irrevedi l-websajt finali, it-tikketta, u l-lingwa tar-reklamar qabel it-tnedija.

Il-firxa tal-konċentrazzjoni fl-iżvelar-0.01%–5.0%-għandha tiġi ttrattata bħala firxa żvelata, mhux bħala rakkomandazzjoni ta 'formulazzjoni validata universalment.

 

Bottom Line għal Xerrejja ta 'Ingredjenti

Ir-riċerka fornuta tagħmel il-verbascoside derivat minn Cistanche kandidat għal aktar żvilupp tal-kura tal-ġilda, partikolarment għal proġetti li jesploraw l-idratazzjoni u l-endpoints tal-laboratorju relatati mal-barrieri.

 

Lista tal-kontenut ta' Cistanche acteoside

 

Ikklikkja biex iżżur kontenut differenti tal-lista tal-estratt ta 'acteoside cistanche

 

 

 

L-aktar lezzjoni utli tagħha mhix sempliċement li "Cistanche hija tajba għall-ġilda." Huwa dakmetodu ta 'estrazzjoni, kontenut ta' kompost attiv, identità ta 'ingredjent, u kwalità ta' evidenza kollha jinfluwenzaw jekk ingredjent botaniku huwiex adattat għal proġett kummerċjali speċifiku.

Meta tavviċina manifattur Cistanche, ibda b'talba preċiża:

"Jekk jogħġbok ipprovdi l-identità botanika, speċifikazzjoni verbascoside, metodu analitiku, ċertifikati rappreżentattivi ta 'analiżi, riżultati residwu-solvent, dokumentazzjoni tas-sigurtà, u gwida ta' formulazzjoni għall-grad ta 'ingredjent propost għall-proġett tagħna."

Dik it-talba toħloq bażi ferm aktar b'saħħitha għall-iżvilupp tal-prodott minn inkjesta ġenerika għal trab tal-estratt tal-ħxejjex.

 

(54) Titolu ta' l-Invenzjoni

Metodu għall-Preparazzjoni tal-Verbascoside u Metodu tal-Applikazzjoni tiegħu għall-Promozzjoni tal-Produzzjoni tal-Lipidi tal-Ġilda

(57) Astratt

L-invenzjoni tirrigwarda metodu għall-preparazzjoni tal-verbascoside u metodu ta 'applikazzjoni tiegħu għall-promozzjoni tal-produzzjoni tal-lipidi tal-ġilda, li jappartjenu għall-qasam tekniku tal-kura tal-ġilda u prodotti topiċi.

Il-metodu jinkludi l-passi li ġejjin:

Għażla taz-zkuk imnixxfin imlaħħam tal-pjanti OrobanchaceaeCistanche deserticola, Cistanche tubulosa, Cistanche sinensis, jewSalsa Cistanche; il-polverizzazzjoni taż-zkuk wara t-trattament minn qabel; estratthom taħt rifluss b'soluzzjoni akwea ta' etanol ta' 50%–80% darbtejn sa erba' darbiet għal siegħa sa tliet sigħat kull darba; il-kombinazzjoni tal-estratti; u tikkonċentrahom taħt pressjoni mnaqqsa sakemm ma tibqa 'ebda riħa ta' etanol, u b'hekk tinkiseb soluzzjoni konċentrata.

Tgħaddi s-soluzzjoni kkonċentrata minn AB-8 kolonna tar-reżina ta' adsorbiment makroporuża; elużjoni sekwenzjali b'ilma dejonizzat u soluzzjoni ta' etanol milwiema ta' 30%–50% biex tneħħi l-impuritajiet; imbagħad elużjoni tal-kostitwenti fil-mira b'soluzzjoni ta' etanol milwiema ta' 60%–90%; jiġbor l-eluat u jikkonċentrah taħt pressjoni mnaqqsa; jippurifikah permezz ta' kromatografija fuq kolonna tal-ġel tas-silika bl-użu ta' kloroform-metanol fi proporzjon tal-volum li jvarja minn 5:1 sa 2:1 bħala l-eluwent; il-ġbir tal-frazzjonijiet fil-mira; u tikkonċentrahom taħt pressjoni mnaqqsa, segwita minn freeze-drying, biex tikseb verbascoside purifikat.

L-effetti ta 'benefiċċju ddikjarati għall-invenzjoni huma li verbascoside jipproteġi l-ġilda u juri attività mtejba tal-kura tal-ġilda meta inkorporat fil-prodotti.

 

Talbiet

Talba 1

Metodu għall-preparazzjoni tal-verbascoside, ikkaratterizzat li jinkludi l-passi li ġejjin:

Għażla taz-zkuk imnixxfin imlaħħam tal-pjanti OrobanchaceaeCistanche deserticola, Cistanche tubulosa, Cistanche sinensis, jewSalsa Cistanche; pulverizzarhom wara trattament minn qabel; estratthom taħt rifluss b'soluzzjoni akwea ta' etanol ta' 50%–80% darbtejn sa erba' darbiet għal siegħa sa tliet sigħat kull darba; il-kombinazzjoni tal-estratti; u tikkonċentrahom taħt pressjoni mnaqqsa sakemm ma tibqa 'ebda riħa ta' etanol, u b'hekk tinkiseb soluzzjoni konċentrata.

Tgħaddi s-soluzzjoni kkonċentrata minn AB-8 kolonna tar-reżina ta' adsorbiment makroporuża; elużjoni sekwenzjali b'ilma dejonizzat u soluzzjoni ta' etanol milwiema ta' 30%–50% biex tneħħi l-impuritajiet; imbagħad elużjoni tal-kostitwenti fil-mira b'soluzzjoni ta' etanol milwiema ta' 60%–90%; jiġbor l-eluat u jikkonċentrah taħt pressjoni mnaqqsa; jippurifikah permezz ta' kromatografija fuq kolonna tal-ġel tas-silika bl-użu ta' kloroform-metanol fi proporzjon tal-volum li jvarja minn 5:1 sa 2:1 bħala l-eluwent; il-ġbir tal-frazzjonijiet fil-mira; tikkonċentrahom taħt pressjoni mnaqqsa; u tnixxifhom bil-friża biex jiksbu verbascoside purifikat b'purità ta 'mill-inqas 98%.

 

Talba 2

Il-metodu għall-preparazzjoni tal-verbascoside skont it-talba 1, fejn il-proporzjon tal-materjal għal-solvent waqt l-estrazzjoni tar-rifluss ivarja minn 1:10 sa 1:20, u t-temperatura tal-estrazzjoni tvarja minn 60 grad sa 80 grad.

 

Talba 3

Il-metodu għall-preparazzjoni tal-verbascoside skont it-talba 1, fejn il-proporzjon tad-dijametru għall-għoli tal-kolonna tar-reżina tal-adsorbiment makroporuża AB-8 tvarja minn 1:8 sa 1:15, u r-rata tal-fluss tal-eluzzjoni tvarja minn 1 sa 3 BV/h.

 

Talba 4

Il-metodu għall-preparazzjoni tal-verbascoside skont it-talba 1, fejn il-kundizzjonijiet tat-tnixxif bil-friża jinkludu temperatura li tvarja minn -40 grad sa -50 grad, pressjoni tal-vakwu li tvarja minn 10 sa 30 Pa, u ħin tat-tnixxif li jvarja minn 12 sa 24 siegħa.

 

Talba 5

Metodu ta' applikazzjoni ta' verbascoside biex jippromwovi l-produzzjoni tal-lipidi tal-ġilda, bl-użu ta' verbascoside ippreparat skont kwalunkwe waħda mit-Talbiet 1–4, ikkaratterizzat li l-metodu ta' applikazzjoni jinkludi:

Żieda ta' verbascoside ma' bażi ta' prodott topiku fi frazzjoni ta' massa predeterminata u tħawwad b'mod uniformi biex jiġi prodott prodott lest; l-applikazzjoni tal-prodott lest fuq il-wiċċ tal-ġilda darba jew darbtejn kuljum; li jippermetti lill-verbascoside jippenetra u jaġixxi fuq iċ-ċelloli HaCaT epidermali biex jirregola l-espressjoni tal-ġeni u l-proteini ta 'ACC , FASN, u N-SMase u jżid l-attività ta' aċidu xaħmi sintażi; u użu kontinwu għal ġimgħa sa erba 'ġimgħat biex ittejjeb is-sintesi tal-lipidi tal-ġilda.

Verbascoside jippromwovi l-proliferazzjoni taċ-ċelluli HaCaT, il-fejqan tal-feriti, l-espressjoni ta 'proteini tight-junction, u l-produzzjoni tal-lipidi u l-aċidu hyaluronic, u b'hekk tipprovdi funzjonijiet ta' tiswija ta 'barriera multi-mira.

Jintuża matul il-katina tal-manutenzjoni tal-barriera tal-ġilda li tinkludi tiġdid taċ-ċelluli epidermali, konnessjonijiet interċellulari msaħħa, riforniment tal-matriċi tal-lipidi, u s-sintesi tal-aċidu hyaluronic bħala fattur moisturizing naturali.

 

Talba 6

Il-metodu ta' applikazzjoni skond it-talba 5, fejn il-frazzjoni tal-massa ta' verbascoside fil-prodott topiku tvarja minn 0.01% sa 5.0%.

 

Talba 7

Il-metodu ta 'applikazzjoni skont it-talba 5, fejn 0.1–0.5 g tal-prodott lest jintuża għal kull applikazzjoni, segwit minn massaġġi ġentili għal minuta sa tliet minuti biex jippromwovu l-assorbiment.

 

Talba 8

Il-metodu ta 'applikazzjoni skont it-talba 5, fejn il-prodott topiku huwa dressing mediku, prodott ta' tiswija ta 'wara l-proċedura, prodott ta' trattament aġġuntiv għal dermatite atopika, prodott għall-kura tal-ġilda speċifikament maħsub għal ġilda sensittiva, jew prodott intensiv ta 'moisturizing u tiswija tal-ġilda.

 

Talba 9

Il-metodu ta' applikazzjoni skond it-talba 5, fejn eċċipjenti jistgħu jiġu inkorporati addizzjonalment waqt l-applikazzjoni ta' verbascoside.

 

Talba 10

Il-metodu ta 'applikazzjoni skond it-Talba 9, fejn l-eċċipjent jintgħażel minn humectant, emulsifikant, preservattiv, fwieħa, jew aġent serħan il-moħħ, u l-forma tad-dożaġġ tal-kompożizzjoni li fiha l-eċċipjent hija magħżula minn lotion, krema, ġel, serum, jew soluzzjoni ta' maskra tal-folja.

 

Metodu għall-Preparazzjoni tal-Verbascoside u Metodu tal-Applikazzjoni tiegħu għall-Promozzjoni tal-Produzzjoni tal-Lipidi tal-Ġilda

 

Qasam Tekniku

[0001]L-invenzjoni tappartjeni għall-qasam tekniku tal-kura tal-ġilda u prodotti topiċi. B'mod partikolari, tirrigwarda metodu għall-preparazzjoni ta' verbascoside u metodu ta' applikazzjoni tiegħu għall-promozzjoni tal-produzzjoni tal-lipidi tal-ġilda.

B'mod aktar speċifiku, tikkonċerna metodu ta 'preparazzjoni għal verbascoside maħsub biex jeżerċita effetti tul is-sekwenza sħiħa tat-tiswija tal-barriera tal-ġilda tat-tiġdid taċ-ċelluli epidermali → junctions stretti interċellulari mtejba → riforniment tal-matriċi tal-lipidi → sintesi ta' aċidu hyaluronic → fejqan tal-feriti, għall-użu fil-protezzjoni tal-ġilda.

 

Sfond Art

[0002]Tiġdid taċ-ċelluli epidermali, junctions stretti interċellulari msaħħa, riforniment tal-matriċi tal-lipidi, sinteżi ta 'aċidu hyaluronic, u fejqan tal-feriti kull wieħed għandu rwol indispensabbli fiż-żamma tal-omeostasi tal-barriera tal-ġilda.

It-tiġdid taċ-ċelluli epidermali huwa l-pedament tal-kostruzzjoni tal-barriera. Billi tħaffef il-proliferazzjoni u d-divrenzjar tal-keratinoċiti bażali, tiżgura li għadd suffiċjenti ta 'ċelluli jimxu 'l fuq b'mod ordnat, u jfornu materjal ċellulari adegwat għall-formazzjoni tal-barriera.

Strutturi ta 'junctional interċellulari, inklużi junctions stretti u desmosomi, jankraw flimkien ċelloli ffurmati ġodda biex joħolqu barriera fiżika densa u kontinwa li tirreżisti b'mod effettiv id-dħul ta' irritanti esterni.

Il-matriċi tal-lipidi li timla l-ispazji bejn iċ-ċelluli tifforma struttura lamellari organizzata u hija l-mezz prinċipali ta' ssiġillar tal-mogħdijiet li minnhom jintilef l-ilma.

L-aċidu hyaluronic sintetizzat fl-epidermide u d-dermis jifforma netwerk qawwi li jżomm l-ilma, jipprovdi umdità lill-istratum corneum, u jżomm l-omeostasi ċellulari. Jista 'wkoll jipprovdi ambjent niedja adattat għal dawn il-proċessi fiżjoloġiċi u jittrasmetti sinjali ċellulari.

Il-fejqan tal-feriti jiddependi ħafna fuq dawn l-erba 'proċessi. L-ewwel, l-aċidu hyaluronic jipprovdi matriċi proviżorja u funzjonijiet ta 'sinjalazzjoni. It-tiġdid taċ-ċelluli epidermali huwa mbagħad meħtieġ biex tkopri l-ferita. Ċelloli ffurmati ġodda għandhom jerġgħu jistabbilixxu junctions stretti u jimlew il-matriċi tal-lipidi biex itemmu r-restawr tal-funzjoni tal-barriera.

Dawn il-ħames proċessi jinbdew b'mod sekwenzjali waqt il-fejqan tal-feriti. L-azzjonijiet interkonnessi u kkoordinati tagħhom - mit-tiġdid taċ-ċelluli u t-tisħiħ strutturali għall-mili tal-matriċi u l-ħażna tal-ilma - kollettivament iwasslu għal barriera tal-ġilda kompletament stabilizzata.

Huma jipprovdu mhux biss is-saħħa fiżika meħtieġa biex jirreżistu l-irritanti esterni iżda wkoll il-kapaċità ta 'żamma ta' umdità meħtieġa biex jipprevjenu telf ta 'ilma intern, li jippermettu lill-ġilda żżomm saħħa fit-tul fi stat ta' ekwilibriju dinamiku.

Għaldaqstant, rikostruzzjoni multidimensjonali u sistematika hija aktar fundamentali milli sempliċement it-titjib tal-umdità tal-wiċċ. Jista 'jtejjeb ir-reżistenza tal-ġilda u ż-żamma tal-umdità fis-sors tagħhom, u jappoġġja kundizzjoni b'saħħitha aktar fit-tul u stabbli.

[0003]Il-produzzjoni tal-ġilda stess ta 'lipidi u aċidu hyaluronic hija fundamentali biex tinżamm is-saħħa tal-ġilda, tirreżisti l-irritazzjoni ambjentali, u tippreserva kundizzjoni żagħżugħa.

Permezz taż-żamma tal-umdità u d-difiża kontra mikro-organiżmi u sustanzi li jniġġsu, dawn is-sustanzi jgħinu biex jiżguraw il-funzjoni fiżjoloġika normali tal-ġilda.

Meta mqabbel ma 'supplimentazzjoni esterna biss, il-promozzjoni tal-produzzjoni tal-ġilda stess ta' lipidi u aċidu hyaluronic hija deskritta bħala strateġija aktar fundamentali u durabbli li ssaħħaħ direttament il-"kapaċità ta 'awto-tiswija" u "reżistenza" tagħha.

Għal mard tal-ġilda bħal dermatite atopika u ekżema, it-tisħiħ tal-produzzjoni tal-lipidi u l-aċidu hyaluronic huwa deskritt bħala li għandu sinifikat ċentrali preventiv u terapewtiku.

Is-sors jispjega li dawn il-kundizzjonijiet ħafna drabi jinvolvu difetti ġenetiċi li jdgħajfu l-istruttura "briks u mehries" tal-ġilda, li jippermettu li l-allerġeni u l-irritanti jippenetraw aktar faċilment u jwasslu għal ċiklu immuni-infjammatorju persistenti.

Għalhekk, l-identifikazzjoni ta 'ingredjenti attivi li jattivaw enzimi ewlenin tas-sinteżi tal-lipidi, bħal FASN u ACC, jew jinduċu direttament il-produzzjoni ta' aċidu hyaluronic jista 'jżomm u jsewwi b'mod proattiv il-produzzjoni tal-lipidi ċellulari u l-aċidu hyaluronic.

Skont l-iżvelar, din l-istrateġija tista 'ttaffi n-nixfa, ħakk, u episodji infjammatorji filwaqt li tnaqqas il-kawżi esterni fis-sors tagħhom, tnaqqas il-frekwenza u s-severità tar-rikorrenza, u tgħin biex tiċċaqlaq il-ġestjoni tal-mard minn trattament passiv għal prevenzjoni attiva.

 

[0004]Verbascoside huwa phenylethanoid glycoside u wieħed mill-kostitwenti ewlenin tal-pjanti Orobanchaceae:

Cistanche deserticolaYC Ma;

Cistanche tubulosa(Schenk) Wight;

Cistanche sinensisBeck; u

Salsa Cistanche(CA Mey.) Beck.

 

Ir-riċerka wriet li verbascoside huwa antiossidant qawwi u jippossjedi attivitajiet farmakoloġiċi inklużi effetti anti-infjammatorji, newroprotettivi, epatoprotettivi u kontra t-tixjiħ.

Waqt l-iskrinjar għal aġenti protettivi tal-ġilda minn pjanti numerużi, l-inventuri sabu li verbascoside mhux biss jippromwovi l-proliferazzjoni taċ-ċelluli HaCaT u l-espressjoni ta 'proteini tight-junction iżda jirregola wkoll l-attività ta' synthase ta 'aċidu xaħmi, u b'hekk ittejjeb is-sintesi tal-lipidi tal-ġilda.

Jattiva wkoll mogħdijiet involuti fil-produzzjoni tal-aċidu hyaluronic u sussegwentement jippromwovi l-fejqan tal-feriti.

Dawn l-azzjonijiet jinkludu s-sekwenza sħiħa ta 'manutenzjoni u tiswija tal-barriera tal-ġilda tat-tiġdid taċ-ċelluli epidermali → konnessjonijiet interċellulari mtejba → riforniment tal-matriċi tal-lipidi → sintesi ta' aċidu hyaluronic → fejqan tal-feriti.

Verbascoside jista' għalhekk jintuża bħala aġent protettiv u moisturising tal-ġilda b'ħafna mira fil-kura tal-ġilda funzjonali u prodotti topiċi.

Eżempji jinkludu dressings mediċi u prodotti ta' tiswija ta' wara l-proċedura; prodotti aġġuntivi għal dermatite atopika jew ekżema; Prodotti għall-kura tal-ġilda maħsuba speċifikament għal ġilda sensittiva jew rosaċeja; u prodotti intensivi ta' moisturizing u tiswija għall-użu ta' kuljum.

 

Sommarju ta' l-Invenzjoni

[0005]L-invenzjoni tipprovdi metodu għall-preparazzjoni tal-verbascoside u metodu tal-applikazzjoni tiegħu għall-promozzjoni tal-produzzjoni tal-lipidi tal-ġilda.

Il-metodu ta 'preparazzjoni jikkonċerna verbascoside maħsub biex jappoġġa s-sekwenza sħiħa tat-tiswija tal-barriera tal-ġilda tat-tiġdid taċ-ċelluli epidermali → konnessjonijiet interċellulari mtejba → riforniment tal-matriċi tal-lipidi → sinteżi tal-aċidu hyaluronic → fejqan tal-feriti.

Jindirizza l-problema teknika li tipprovdi ingredjent attiv ewlieni ġdid b'effetti multi-mira għall-kura tal-ġilda jew prodotti topiċi.

Verbascoside huwa deskritt bħala li għandu l-vantaġġ li jaġixxi tul il-katina sħiħa tat-tiswija tal-barriera tal-ġilda, b'effetti superjuri għall-ingredjenti eżistenti tal-kura tal-ġilda b'mira waħda, bħal ingredjenti li jippromwovu biss sinteżi ta 'aċidu hyaluronic, jippromwovu biss proliferazzjoni taċ-ċelluli, jew jipprovdu moisturization waħdu.

[0006]Biex tikseb l-għanijiet ta 'hawn fuq, l-invenzjoni tadotta s-soluzzjoni teknika li ġejja.

[0007]Metodu għall-preparazzjoni tal-verbascoside jinkludi l-passi li ġejjin.

[0008]Agħżel iz-zkuk imnixxfin imlaħħam tal-pjanti OrobanchaceaeCistanche deserticola, Cistanche tubulosa, Cistanche sinensis, jewSalsa Cistanche.

Wara t-tibjid, it-tnixxif u l-polverizzazzjoni, estratt il-materjal taħt rifluss b'soluzzjoni akwea ta 'etanol ta' 50%-80% darbtejn sa erba 'darbiet għal siegħa sa tliet sigħat kull darba.

Għaqqad l-estratti u kkonċentrahom taħt pressjoni mnaqqsa sakemm ma tibqa' l-ebda riħa ta' etanol, u b'hekk tikseb soluzzjoni kkonċentrata.

[0009]Għaddi s-soluzzjoni kkonċentrata minn AB-8 kolonna tar-reżina ta' adsorbiment makroporuża.

Eluwixxi b'mod sekwenzjali b'ilma dejonizzat u soluzzjoni akwea ta' etanol ta' 30%-50% biex tneħħi l-impuritajiet, segwit minn soluzzjoni ta' etanol milwiema ta' 60%-90% biex tneħħi l-kostitwenti fil-mira.

Iġbor l-eluat u kkonċentrah taħt pressjoni mnaqqsa.

Ippurifika l-konċentrat bil-kromatografija tal-kolonna tal-ġel tas-silika billi tuża kloroform–metanol fi proporzjon tal-volum li jvarja minn 5:1 sa 2:1 bħala l-eluwent.

Iġbor il-frazzjonijiet fil-mira, ikkonċentrahom taħt pressjoni mnaqqsa, u nixxefhom bil-friża biex tikseb verbascoside purifikat b'purità ta 'mill-inqas 98%.

[0010]B'għażla, il-proporzjon materjal-solvent matul l-estrazzjoni ta 'rifluss tvarja minn 1:10 sa 1:20, espress f'g/mL, u t-temperatura ta' estrazzjoni tvarja minn 60 grad sa 80 grad.

Nota tat-traduttur: Is-sors jiddikjara wkoll li dan il-proporzjon ifisser "1 g ta 'materja prima huwa miżjud ma' 1 mL ta 'solvent." Dik id-dikjarazzjoni hija inkonsistenti mal-medda speċifikata 1:10–1:20, li tikkorrispondi għal 10–20 mL ta 'solvent għal kull gramma ta' materja prima.

[0011]B'għażla, il-proporzjon tad-dijametru għall-għoli tal-kolonna tar-reżina ta 'adsorbiment makroporuża AB-8 tvarja minn 1:8 sa 1:15, fejn il-proporzjon huwa d-dijametru tal-kolonna, d, għall-għoli tal-kolonna, h. Ir-rata tal-fluss tal-elużjoni tvarja minn 1 sa 3 BV/h.

[0012]B'għażla, il-kundizzjonijiet tat-tnixxif bil-friża jinkludu temperatura li tvarja minn -40 grad sa -50 grad, pressjoni tal-vakwu li tvarja minn 10 sa 30 Pa, u ħin tat-tnixxif li jvarja minn 12 sa 24 siegħa.

[0013]Metodu ta 'applikazzjoni ta' verbascoside biex jippromwovi l-produzzjoni tal-lipidi tal-ġilda huwa pprovdut kif ġej.

[0014]Żid verbascoside ma' bażi ta' prodott topiku fi frazzjoni ta' massa predeterminata u ħawwad b'mod uniformi biex tipproduċi prodott lest.

Applika l-prodott lest fuq il-wiċċ tal-ġilda darba jew darbtejn kuljum.

Permezz tal-penetrazzjoni, verbascoside jaġixxi fuq ċelluli HaCaT epidermali biex jippromwovi l-proliferazzjoni taċ-ċelluli u jsaħħaħ il-junctions stretti.

Fl-istess ħin, jirregola l-espressjoni tal-ġeni u l-proteini ta 'ACC, FASN, u N-SMase, iżid l-attività ta' aċidu xaħmi sintażi, jirregola HAS2, HAS3, u CD44, u jżid il-kontenut ta 'aċidu hyaluronic.

Kompli uża għal ġimgħatejn sa erba' ġimgħat biex tikseb titjib ġenerali tal-barriera tal-ġilda.

[0015]B'għażla, il-frazzjoni tal-massa ta' verbascoside fil-prodott topiku tvarja minn 0.01% sa 5.0%.

[0016]B'għażla, uża 0.1–0.5 g tal-prodott lest għal kull applikazzjoni u massaġġi bil-mod għal minuta sa tliet minuti wara l-applikazzjoni biex tippromwovi l-assorbiment.

[0017]B'għażla, il-prodott topiku huwa dressing mediku, prodott ta 'tiswija ta' wara l-proċedura, prodott ta 'trattament aġġuntiv għal dermatite atopika, prodott għall-kura tal-ġilda speċifikament maħsub għal ġilda sensittiva, jew prodott intensiv ta' moisturizing u tiswija tal-ġilda.

[0018]B'għażla, eċċipjenti jistgħu jiżdiedu wkoll waqt l-applikazzjoni ta' verbascoside.

[0019]Barra minn hekk, l-eċċipjent jintgħażel minn humectant, emulsifikant, preservattiv, fwieħa, jew aġent serħan il-moħħ.

Il-forma tad-dożaġġ tal-kompożizzjoni li fiha l-eċċipjent hija magħżula minn lotion, krema, ġel, serum, jew soluzzjoni ta 'maskra tal-folja.

 

Effetti Benefiċi ta' l-Invenzjoni

[0020]L-effetti ta 'benefiċċju ta' l-invenzjoni huma kif ġej.

[0021]L-invenzjoni turi li verbascoside għandu attivitajiet ewlenin fil-promozzjoni tal-produzzjoni tal-lipidi tal-ġilda u l-aċidu hyaluronic.

Jista 'wkoll jippromwovi l-proliferazzjoni taċ-ċelluli tal-ġilda, isaħħaħ il-junctions stretti interċellulari, u jaċċellera l-fejqan tal-feriti, li jifforma mekkaniżmu ta' ċirku magħluq ta '"promozzjoni tal-proliferazzjoni taċ-ċelluli → stabbilizzazzjoni ta' konnessjonijiet interċellulari → titjib tal-produzzjoni tal-lipidi u aċidu hyaluronic → aċċellerazzjoni tat-tiswija u l-fejqan."

Meta mqabbel ma 'l-arti preċedenti, l-invenzjoni hija deskritta bħala li għandha l-vantaġġi li ġejjin.

[0022]Verbascoside huwa ingredjent attiv naturali derivat mill-pjanti b'livell għoli ta 'sigurtà u attività farmakoloġika definita b'mod ċar, li jevita riskji potenzjali ta' irritazzjoni tal-ġilda assoċjati ma 'ingredjenti sintetizzati kimikament.

Kwalifika editorjali: Din hija l-istqarrija tas-sigurtà tas-sors, mhux konklużjoni stabbilita sempliċement minn oriġini botanika.

[0023]L-effiċjenza tal-preparazzjoni u r-rendiment ta 'verbascoside huma mtejba.

[0024]Verbascoside jaġixxi fuq firxa komprensiva ta 'miri, u fl-istess ħin jirregola diversi proċessi ewlenin, inklużi l-proliferazzjoni taċ-ċelluli, l-espressjoni ta' proteina tight-junction, sinteżi tal-lipidi, produzzjoni ta 'aċidu hyaluronic, u fejqan tal-feriti.

B'hekk ittejjeb il-funzjoni tal-barriera tal-ġilda b'mod integrat, b'effetti deskritti bħala superjuri għal dawk ta 'ingredjenti b'mira waħda.

[0025]L-applikazzjonijiet tagħha huma wesgħin, inklużi tiswija medika, trattament aġġuntiv ta 'mard tal-ġilda, kura tal-ġilda sensittiva, u moisturizing u tiswija ta' kuljum, li jissodisfaw il-ħtiġijiet tas-saħħa tal-ġilda ta 'popolazzjonijiet differenti.

 

Deskrizzjoni Qasira tat-Tpinġijiet

[0026]Biex tispjega s-soluzzjonijiet tekniċi ta 'l-inkarnazzjonijiet ta' l-invenzjoni jew l-arti preċedenti b'mod aktar ċar, it-tpinġijiet meħtieġa għad-deskrizzjoni ta 'l-inkarnazzjonijiet jew l-arti preċedenti huma introdotti fil-qosor hawn taħt.

It-tpinġijiet deskritti hawn taħt jirrappreżentaw biss ċerti inkarnazzjonijiet tal-invenzjoni. Persuna ta 'ħila ordinarja fl-arti tista' tikseb tpinġijiet oħra minnhom mingħajr sforz kreattiv.

[0027]Il-Figura 1 hija flowchart skematika tal-metodu ta 'preparazzjoni ta' l-invenzjoni.

[0028]Il-Figura 2 tippreżenta dejta dwar il-vijabbiltà taċ-ċelluli HaCaT.

[0029]Il-Figura 3 tippreżenta dejta dwar l-attività tal-aċidu xaħmi sintażi.

[0030]Il-Figura 4 tippreżenta dejta dwar il-kontenut tal-aċidu hyaluronic.

[0031]Il-Figura 5 tippreżenta dejta dwar il-vijabbiltà taċ-ċelluli HaCaT għall-invenzjoni.

[0032]Il-Figura 6 tippreżenta data ta 'attività ta' aċidu xaħmi sintażi għall-invenzjoni.

[0033]Il-Figura 7 tippreżenta l-espressjoni tal-ġeni assoċjati mas-sintesi tal-aċidu xaħmi.

[0034]Il-Figura 8 tippreżenta l-espressjoni tal-proteini assoċjati mas-sintesi tal-aċidu xaħmi.

[0035]Il-Figura 9 tippreżenta riżultati Western blot assoċjati mas-sintesi tal-aċidu xaħmi.

[0036]Il-Figura 10 tippreżenta dejta dwar il-kontenut tal-aċidu hyaluronic.

[0037]Il-Figura 11 tippreżenta l-espressjoni tal-ġeni assoċjati mas-sintesi tal-aċidu hyaluronic.

[0038]Il-Figura 12 tippreżenta l-espressjoni tal-proteini assoċjati mas-sintesi tal-aċidu hyaluronic.

[0039]Figura 13 tippreżenta riżultati Western blot assoċjati ma 'aċidu hyaluronic.

[0040]Il-Figura 14 tippreżenta livelli ta' espressjoni ta' claudin-1.

[0041]Figura 15 tippreżenta livelli ta 'espressjoni ta' occludin.

[0042]Il-Figura 16 tippreżenta r-rati tal-għeluq tal-feriti.

[0043]Il-Figura 17 tippreżenta immaġini mill-assaġġ tal-bidu taċ-ċelluli.

[0044]Il-Figura 18 tippreżenta evalwazzjoni tal-prestazzjoni ta' moisturizing ta' kampjuni differenti.

 

Deskrizzjoni Dettaljata tal-Inkorporazzjonijiet

[0045]L-inkarnazzjonijiet tal-applikazzjoni huma deskritti fid-dettall hawn taħt b'referenza għad-disinji li jakkumpanjawhom.

Eżempju 1: Preparazzjoni ta' Verbascoside Purifikat

[0046]Eżempju 1.

[0047]Kif muri fil-Figura 1, dan l-eżempju jipprovdi metodu għall-preparazzjoni tal-verbascoside, imqassar bħala Ver, li jinkludi l-passi li ġejjin.

[0048]Agħżel iz-zkuk imnixxfa tal-laħamCistanche deserticolajewCistanche tubulosa, it-tnejn li jappartjenu għall-familja Orobanchaceae.

Qatta l-materjal, bajdah f'ilma jagħli għal 10-25 minuta, u nixxef fil-forn f'40 grad -60 grad, u żżid il-kontenut ta 'verbascoside aktar minn erba' darbiet.

 

 

Nota:* vs grupp ta' kontroll vojt, P<0.05P < 0.05P<0.05.

 

Wara l-polverizzazzjoni, iġbed il-materjal taħt rifluss b'soluzzjoni akwea ta 'etanol ta' 50%-80% darbtejn sa erba 'darbiet għal siegħa sa tliet sigħat kull darba.

Għaqqad l-estratti u kkonċentrahom taħt pressjoni mnaqqsa sakemm ma tibqa' l-ebda riħa ta' etanol, u b'hekk tikseb soluzzjoni kkonċentrata.

 

[0049]Għaddi s-soluzzjoni kkonċentrata minn AB-8 kolonna tar-reżina ta' adsorbiment makroporuża.

Eluwixxi b'mod sekwenzjali b'ilma dejonizzat u soluzzjoni akwea ta' etanol ta' 30%-50% biex tneħħi l-impuritajiet, segwit minn soluzzjoni ta' etanol milwiema ta' 60%-90% biex tneħħi l-kostitwenti fil-mira.

Iġbor l-eluat u kkonċentrah taħt pressjoni mnaqqsa.

Ippurifikah bil-kromatografija tal-kolonna tal-ġel tas-silika billi tuża kloroform–metanol fi proporzjon tal-volum li jvarja minn 5:1 sa 2:1 bħala l-eluwent.

Iġbor il-frazzjonijiet fil-mira, ikkonċentrahom taħt pressjoni mnaqqsa, u nixxefhom bil-friża biex tikseb verbascoside purifikat b'purità ta 'mill-inqas 98%.

[0050]Speċifikament, il-proporzjon materjal-solvent waqt l-estrazzjoni tar-rifluss ivarja minn 1:10 sa 1:20, u t-temperatura ta 'estrazzjoni tvarja minn 60 grad sa 80 grad.

[0051]Il-proporzjon tad-dijametru għall-għoli tal-kolonna tar-reżina tal-adsorbiment makroporuża AB-8 tvarja minn 1:8 sa 1:15, u r-rata tal-fluss tal-eluzzjoni tvarja minn 1 sa 3 BV/h.

[0052]Il-kundizzjonijiet tat-tnixxif bil-friża jinkludu temperatura li tvarja minn -40 grad sa -50 grad, pressjoni tal-vakwu li tvarja minn 10 sa 30 Pa, u ħin tat-tnixxif li jvarja minn 12 sa 24 siegħa.

 

Tabella 2. Sommarju tal-bijoattività ta' kampjuni differenti

Indiċi	Kontroll vojt	Kontroll pożittiv	CTE	Ech	Ver
Vijabbiltà taċ-ċelluli (%)	100 ± 8.347	/	122.052 ± 8.051*	117.868 ± 7.941*	128.894 ± 9.528*
Attività FAS (U/mg prot)	2.712 ± 0.419	18.488 ± 4.56*	2.069 ± 0.27	9.799 ± 1.356*	10.4 ± 0.697*
Kontenut HA (ng/mL)	10.908 ± 0.968	19.925 ± 4.306*	21.644 ± 2.037*	13.517 ± 1.653*	18.486 ± 1.341*
Espressjoni ta' Claudin-1 (pg/mL)	414.58 ± 25.05	/	505.556 ± 20.518*	478.937 ± 12.419*	554.057 ± 22.106*
Espressjoni tal-okkludin (pg/mL)	3.287 ± 0.683	/	4.285 ± 0.575	4.666 ± 0.582*	7.258 ± 0.774*
Rata ta' fejqan tal-feriti f'24 siegħa (%)	30.581 ± 1.308	70.075 ± 1.781*	40.762 ± 9.68	37.102 ± 7.038	45.173 ± 5.508*
Rata ta' fejqan tal-feriti ta' 48 siegħa (%)	55.458 ± 6.674	87.545 ± 3.155*	76.47 ± 2.684*	67.883 ± 5.678*	76.704 ± 4.8*

Nota:* vs grupp ta' kontroll vojt, P<0.05P < 0.05P<0.05.

 

Eżempju 2: Preparazzjoni ta' Estratt ta' Cistanche Polysaccharide

[0053]Eżempju 2.

[0054]Oħroġ Cistanche darbtejn taħt rifluss imsaħħan bi kwantitajiet ta 'ilma ta' 20 darba u 15-il darba għal tliet sigħat u sagħtejn, rispettivament.

Iffiltra, għaqqad il-filtrati, u kkonċentra fi 80 grad –90 grad.

Żid 215 mL ta '95% etanol biex tikseb konċentrazzjoni finali ta' etanol ta '80%, u ħalli matul il-lejl f'4 gradi.

Iġbor il-preċipitat jew b'filtrazzjoni, billi żżomm il-kejk tal-filtru, jew b'ċentrifugazzjoni f'4,000 rpm għal 10 minuti.

Aħsel il-preċipitat tliet darbiet b'etanol assolut u nixxef f'50 grad biex tikseb estratt ta' polisakkarid Cistanche, imsejjaħ POL.

 

Eżempju 3: Preparazzjoni ta' Estratt ta' Phenylethanoid Glycoside

[0055]Eżempju 3.

[0056]Oħroġ Cistanche darbtejn taħt rifluss imsaħħan bi kwantitajiet ta 'ilma ta' 20 darba u 15-il darba għal tliet sigħat u sagħtejn, rispettivament.

Iffiltra, għaqqad il-filtrati, u kkonċentra fi 80 grad –90 grad.

Żid 215 mL ta '95% etanol biex tikseb konċentrazzjoni finali ta' etanol ta '80%, u ħalli matul il-lejl f'4 gradi.

Iġbor il-filtrat permezz ta' filtrazzjoni jew is-supernatant permezz ta' ċentrifugazzjoni f'4,000 rpm għal 10 minuti.

Ikkonċentra u nixxef biex tikseb Cistanche phenylethanoid glycoside estratt, imsejjaħ POLS.

L-ittestjar wera kontenut ta 'echinacoside ta' 21.8% u kontenut ta 'verbascoside ta' 1.2%.

 

Eżempju 4: Preparazzjoni tal-Estratt RE1

[0057]Eżempju 4.

[0058]XarrabCistanche deserticolaf'sitt darbiet il-kwantità tagħha ta '52% etanol f'temperatura tal-kamra għal 10 ijiem.

Iffiltra u żomm il-fdal tal-pjanti.

Wara t-tnixxif, estratt ir-residwu darba taħt rifluss b'sitt darbiet il-kwantità tiegħu ta' 95% etanol għal sagħtejn.

Iffiltra, għaqqad il-filtrati, ikkonċentra f'60 grad, u nixxef biex tikseb estratt ta 'Cistanche phenylethanoid glycosides u d-derivattivi tagħhom, nominati RE1.

L-estratt fih kostitwenti inklużi echinacoside, verbascoside, isoverbascoside, u 2′-acetylverbascoside.

 

Eżempju 5: Preparazzjoni tal-Estratt RE2

[0059]Eżempju 5.

[0060]EstrattCistanche tubulosadarbtejn b'75% etanol għal siegħa kull darba.

Iffiltra u żomm il-fdal.

Wara t-tnixxif, estratt ir-residwu darba taħt rifluss b'sitt darbiet il-kwantità tiegħu ta' 95% etanol għal sagħtejn.

Iffiltra, għaqqad il-filtrati, ikkonċentra f'60 grad, u nixxef biex tikseb estratt ta 'Cistanche phenylethanoid glycosides u d-derivattivi tagħhom, nominati RE2.

L-estratt fih kostitwenti inklużi echinacoside, verbascoside, isoverbascoside, u 2′-acetylverbascoside.

 

Eżempju 6: Preparazzjoni ta' Estratt ta' Glycoside Phenylethanoid Total

[0061]Eżempju 6.

[0062]Qatta Cistanche u estratt darbtejn b'soluzzjoni ta' etanol ta' 75% għal 1.5 siegħa kull darba.

Għaqqad l-estratti, ikkonċentra, u nixxef biex tikseb Cistanche phenylethanoid glycoside estratt, nominat CTE.

L-ittestjar wera kontenut ta 'echinacoside ta' 22.6% u kontenut ta 'verbascoside ta' 4.5%.

 

Eżempju 7: Metodu ta' Applikazzjoni

[0063]Eżempju 7.

[0064]Ibbażat fuq l-Eżempju 1, dan l-eżempju jipprovdi metodu ta 'applikazzjoni li permezz tiegħu verbascoside jeżerċita effetti tul is-sekwenza sħiħa tat-tiswija tal-barriera tal-ġilda tat-tiġdid taċ-ċelluli epidermali → konnessjonijiet interċellulari mtejba → riforniment tal-matriċi tal-lipidi → sintesi tal-aċidu hyaluronic → fejqan tal-feriti.

Il-metodu ta 'applikazzjoni speċifiku huwa kif ġej.

[0065]Żid verbascoside ma' bażi ta' prodott topiku fi frazzjoni ta' massa predeterminata u ħawwad b'mod uniformi biex tipproduċi prodott lest.

Applika l-prodott lest fuq il-wiċċ tal-ġilda darba jew darbtejn kuljum.

Permezz tal-penetrazzjoni, verbascoside jaġixxi fuq ċelluli HaCaT epidermali biex jippromwovi l-proliferazzjoni taċ-ċelluli u jsaħħaħ il-junctions stretti.

Fl-istess ħin, jirregola l-espressjoni tal-ġeni u l-proteini ta 'ACC, FASN, u N-SMase, iżid l-attività ta' aċidu xaħmi sintażi, jirregola HAS2, HAS3, u CD44, u jżid il-kontenut ta 'aċidu hyaluronic.

Kompli uża għal ġimgħatejn sa erba' ġimgħat biex tikseb titjib ġenerali tal-barriera tal-ġilda.

[0066]Speċifikament, il-frazzjoni tal-massa ta 'verbascoside fil-prodott topiku tvarja minn 0.01% sa 5.0%.

[0067]Uża 0.1–0.5 g tal-prodott lest għal kull applikazzjoni u massaġġi bil-mod għal minuta sa tliet minuti wara l-applikazzjoni biex tippromwovi l-assorbiment.

[0068]Il-prodott topiku huwa dressing mediku, prodott ta 'tiswija ta' wara l-proċedura, prodott ta 'trattament aġġuntiv għal dermatite atopika, prodott għall-kura tal-ġilda maħsub speċifikament għal ġilda sensittiva, jew prodott intensiv ta' moisturizing u tiswija tal-ġilda.

[0069]Jistgħu jiżdiedu wkoll sustanzi mhux attivi waqt l-applikazzjoni ta' verbascoside.

Barra minn hekk, l-eċċipjent jintgħażel minn humectant, emulsifikant, preservattiv, fwieħa, jew aġent serħan il-moħħ.

Il-forma tad-dożaġġ tal-kompożizzjoni li fiha l-eċċipjent hija magħżula minn lotion, krema, ġel, serum, jew soluzzjoni ta 'maskra tal-folja.

 

Eżempju 8: Materjali u Tagħmir Sperimentali

[0070]Eżempju 8.

[0071]Ibbażat fuq l-Eżempji 1 u 7, il-materjali sperimentali użati fl-invenzjoni huma kif ġej.

[0072]Iċ-ċelloli sperimentali kienu ċelluli HaCaT epidermali umani immortalizzati mixtrija minn Shanghai Yaji Biotechnology.

Iċ-ċelloli ġew ikkultivati ​​f'DMEM ta 'glukożju għoli supplimentat b'10% serum bovin tal-fetu u 1% penicillin-streptomycin f'37 grad f'atmosfera li fiha 5% dijossidu tal-karbonju f'umdità saturata.

[0073]Il-materjali sperimentali kienu:

Echinacoside, imqassar bħala Ech, mill-Istituti Nazzjonali għall-Kontroll tal-Ikel u d-Droga, iċ-Ċina.

Serum bovin tal-fetu, FBS, minn EXCELL.

DMEM ta 'glukożju għoli minn Gibco.

0.25% trypsin-EDTA minn Gibco.

Trab tal-melħ imbuffer bil-fosfat minn Beijing Zhongshan Golden Bridge Biotechnology.

CCK-8 Kit tal-Assaġġi tal-Proliferazzjoni taċ-Ċelloli/Ċitotossiċità minn TransGen Biotech.

Occludin tal-Bniedem, OCLN, Kit ELISA minn Wuhan CUSABIO.

Uman Claudin-1, CLDN1, Kit ELISA minn Wuhan CUSABIO.

Fatty Acid Synthase, FAS, Kit ta 'Assaġġi ta' Attività minn Solarbio.

Kit ELISA tal-Aċidu Hyaluronic Uman minn Wuhan CUSABIO.

Proteina tal-EGF tal-Bniedem rikombinanti, ħielsa minn trasportatur, minn Sistemi R&D.

DEPC minn Amresco.

M5 HiClear DL2000 DNA Marker minn Mei5 Biotechnology.

Reaġent TRIzol minn Ambion.

5X All-In-One RT MasterMix minn abm.

EvaGreen Express 2X qPCR MasterMix–ROX baxx minn abm.

Easy II Protein Quantitative Kit, BCA, minn TransGen Biotech.

RIPA lysis buffer minn Boster.

Inibitur tal-protease minn Boster.

Mogħoż Kontra l-Fenek IgG H&L, HRP, minn Abcam.

Mogħoż Anti-Mouse IgG H&L, HRP, minn Abcam.

Marker tal-proteina prestained minn Solarbio.

-Mercaptoethanol minn Amresco.

Membrana ta 'trasferiment PVDF, 0.45 μm, minn Millipore.

Glycine minn Sangon Biotech.

Gliċerol minn Sangon Biotech.

SuperSignal West Pico PLUS minn Thermo Fisher.

Beta-Actin Loading Control Antibody, Mouse Monoclonal, minn Sino Biological.

ACC1 Antikorp minn Affinity.

FASN Antikorp minn Affinity.

SMPD2 Antikorp minn Affinity.

Hyaluronan Synthase 2 Antibody, HAS2, minn Affinity.

HAS3 Antikorp minn Affinity.

CD44 Antikorp minn Affinity.

[0074]It-tagħmir sperimentali kien jinkludi:

SmartCell HF-90 inkubatur tal-kultura taċ-ċelluli tad-dijossidu tal-karbonju, Shanghai Lishen Scientific Equipment Co., Ltd. [上海力康仪器有限公司].

HF1200LC kabinett tas-sigurtà bijoloġika mill-istess manifattur.

DK-80 ċentrifuga b'veloċità baxxa fuq il-bank, Shanghai Feige Instrument Co., Ltd.

Ċentrifuga refriġerata b'veloċità għolja Heraeus Multifuge X1R, Thermo Fisher Scientific.

spettrofotometru tal-mikroplate xMark, Bio-Rad.

GL-88B vortex mixer, Haimen Qilin-Bell Instrument Manufacturing Co., Ltd.

Mudell 2500 ġel immaġini sistema, Shanghai Tianneng.

Strument MyCycler Thermal Cycler PCR, Bio-Rad.

7500 Strument Fast Real-Time PCR, ABI.

Chemiscope 3000 chemiluminescence immaġini sistema, Shanghai Qinxiang Scientific Instrument Co., Ltd.

Apparat tat-trasferiment tal-proteini tas-sistema Mini-PROTEAN Tetra, Bio-Rad.

DYCZ-24DN apparat tal-elettroforesi, Beijing Liuyi.

Nota tat-traduttur: Id-deskrizzjonijiet tal-manifattur u tal-istrumenti hawn fuq isegwu s-sors ipprovdut; id-dettalji tal-katalgu ma ġewx verifikati b'mod indipendenti.

 

 

 

Eżempju 9: Metodi Sperimentali

[0075]Eżempju 9.

[0076]Ibbażat fuq l-Eżempji 1-8, il-metodi sperimentali użati fl-invenzjoni kienu kif ġej.

CCK-8 Assaġġ għall-Proliferazzjoni taċ-Ċelloli

[0077]Ipprepara sospensjoni ta 'ċellula waħda ta' ċelluli HaCaT f'medju ta 'kultura kompluta f'densità ta' 5 × 1045 \\times 10 ^ 45 × 104 ċelluli/mL.

Żergħa ċ-ċelluli fi pjanċa ta' 96 bir f'100 μL kull bir.

Wara li tħalli ċ-ċelloli jehmżu għal 24 siegħa f'37 grad taħt 5% dijossidu tal-karbonju, armi l-medium tal-kultura u amministra s-sustanzi tat-test differenti. Inkludi grupp ta' kontroll vojt, b'n=5n=5n=5.

Wara 48 siegħa ta' trattament, armi l-medium u żid 100 μL ta' soluzzjoni ta' 10% CCK-8 ippreparata friska f'kull bir.

Kompli l-inkubazzjoni fl-inkubatur tal-kultura taċ-ċelluli għal siegħa, imbagħad kejjel id-densità ottika f'450 nm billi tuża microplate reader.

Assaġġ tal-Attività tal-Aċidu Xaħmi Synthase

[0078]Ipprepara sospensjoni ta 'ċellula waħda ta' ċelluli HaCaT f'medja ta 'kultura kompluta f'densità ta' 5 × 1045 \\times 10 ^ 45 × 104 ċelluli/mL u żerriegħa ċ-ċelluli fi fliexken tal-kultura.

Wara li tħalli ċ-ċelloli jehmżu għal 24 siegħa f'37 grad taħt 5% dijossidu tal-karbonju, armi l-medium tal-kultura u amministra s-sustanzi tat-test differenti.

Inkludi grupp ta' kontroll vojt u grupp ta' kontroll pożittiv ittrattat b'fattur ta' tkabbir epidermali uman rikombinanti, rhEGF, f'20 ng/mL, b'n=3n=3n=3.

Wara 48 siegħa ta' trattament, iġbor iċ-ċelloli u kejjel l-attività ta' aċidu xaħmi sintażi skont l-istruzzjonijiet tal-assay-kit.

Assaġġ tal-Kontenut tal-Aċidu Hyaluronic

[0079]Ipprepara sospensjoni ta 'ċellula waħda ta' ċelluli HaCaT f'medja ta 'kultura kompluta f'densità ta' 5 × 1045 \\times 10 ^ 45 × 104 ċelluli/mL u żerriegħa ċ-ċelluli fi fliexken tal-kultura.

Wara li tħalli ċ-ċelloli jehmżu għal 24 siegħa f'37 grad taħt 5% dijossidu tal-karbonju, armi l-medium tal-kultura u amministra s-sustanzi tat-test differenti.

Inkludi grupp ta' kontroll vojt u grupp ta' kontroll pożittiv ittrattat b'rhEGF f'20 ng/mL, b'n=3n=3n=3.

Wara 48 siegħa ta' trattament, iġbor is-supernatanti tal-kultura taċ-ċelluli u kejjel il-kontenut ta' aċidu hyaluronic skont l-istruzzjonijiet tal-assay-kit.

PCR kwantitattiv ta' traskrizzjoni inversa

[0080]Ipprepara sospensjoni ta 'ċellula waħda ta' ċelluli HaCaT f'medju ta 'kultura kompluta f'densità ta' 5 × 1045 \\times 10 ^ 45 × 104 ċelluli/mL u żerriegħa ċ-ċelluli fi pjanċi ta 'sitt well.

Wara li tħalli ċ-ċelloli jehmżu għal 24 siegħa f'37 grad taħt 5% dijossidu tal-karbonju, armi l-medium tal-kultura u amministra s-sustanzi tat-test differenti.

Inkludi grupp ta' kontroll vojt u grupp ta' kontroll pożittiv ittrattat b'rhEGF f'20 ng/mL, b'n=3n=3n=3.

Wara 48 siegħa ta' trattament, armi s-supernatant u żid 1 mL ta' TRIzol ma' kull bir biex tinqala' u lyse iċ-ċelloli, filwaqt li tiżgura li r-reaġent ikopri s-saff taċ-ċelluli.

Ripetutament ħawwad ir-reċipjent tal-kultura sakemm iċ-ċelloli jiġu rilaxxati, u ttrasferixxi l-materjal għal tubu mikroċentrifugu ta' 1.5 mL.

Oħroġ l-RNA totali u uża qRT-PCR biex tiddetermina l-espressjoni ta 'ACC, FASN, N-SMase, HAS2, HAS3, u CD44.

Western Blotting

[0081]Ipprepara sospensjoni ta 'ċellula waħda ta' ċelluli HaCaT f'medja ta 'kultura kompluta f'densità ta' 5 × 1045 \\times 10 ^ 45 × 104 ċelluli/mL u żerriegħa ċ-ċelluli fi fliexken tal-kultura.

Wara li tħalli ċ-ċelloli jehmżu għal 24 siegħa f'37 grad taħt 5% dijossidu tal-karbonju, armi l-medium tal-kultura u amministra s-sustanzi tat-test differenti.

Inkludi grupp ta' kontroll vojt u grupp ta' kontroll pożittiv ittrattat b'rhEGF f'20 ng/mL, b'n=3n=3n=3.

Wara 48 siegħa ta 'trattament, iġbor iċ-ċelloli.

Oħroġ il-proteina totali u uża Western blotting biex tiddetermina l-espressjoni ta 'ACC, FASN, N-SMase, HAS2, HAS3, u CD44.

Valutazzjoni ta 'Tight-Junction Proteina Espressjoni

[0082]Ipprepara sospensjoni ta 'ċellula waħda ta' ċelluli HaCaT f'medja ta 'kultura kompluta f'densità ta' 5 × 1045 \\times 10 ^ 45 × 104 ċelluli/mL u żerriegħa ċ-ċelluli fi fliexken tal-kultura.

Wara li tħalli ċ-ċelloli jehmżu għal 24 siegħa f'37 grad taħt 5% dijossidu tal-karbonju, armi l-medium tal-kultura u amministra s-sustanzi tat-test differenti.

Inkludi grupp ta' kontroll vojt, b'n=3n ​​= 3n=3.

Wara 48 siegħa ta' trattament, iġbor il-lisati taċ-ċelluli u kejjel occludin u claudin-1 billi tuża ELISA skont l-istruzzjonijiet tal-kit.

Assaġġ ta' Scratch taċ-Ċellula

[0083]Ipprepara sospensjoni ta 'ċellula waħda ta' ċelluli HaCaT f'medja ta 'kultura kompluta f'densità ta' 5 × 1055 \\times 10 ^ 55 × 105 ċelluli/mL.

Żerriegħa 500 μL għal kull bir fi pjanċa b'24 bir.

Wara t-twaħħil taċ-ċelluli, amministra t-trattamenti, taqsam iċ-ċelloli fi grupp ta 'kontroll vojt, grupp ta' kontroll pożittiv ittrattat b'serum bovin fetali, u gruppi ta 'sustanza tat-test.

Ittratta għal 48 siegħa.

Wara t-trattament, oħloq bil-mod scratch dritta billi tuża ponta tal-pipetta.

Ibdel il-medium b'medju mingħajr serum fil-gruppi kollha ħlief fil-grupp ta' kontroll pożittiv.

Irritratta ż-żoni scratched f'0, 24, u 48 siegħa.

Uża ImageJ biex tikkalkula ż-żona tal-bidu u tevalwa l-kapaċità tal-migrazzjoni taċ-ċelluli.

 

Eżempju 10: Evalwazzjoni taż-Żamma ta' Umdità

[0084]Eżempju 10.

[0085]Intuża metodu gravimetriku in vitro biex jevalwa l-prestazzjoni moisturizing tas-serum li fihom Ver, Ech, jew gliċerina.

Iżen kwantitajiet speċifikati ta' Kampjun 1 ittrattat minn qabel, li jkun fih 2% Ver; Kampjun 2, li fih 2% Ech; u l-kontroll pożittiv, li fih 5% gliċerina.

Aħżen il-kampjuni f'kamra b'temperatura kostanti u umdità kostanti f'25 grad u 50% umdità relattiva.

Iżen il-kampjuni f'punti ta' ħin differenti u plott il-kurvi taż-żamma tal-umdità.

[0086]Ir-rata taż-żamma tal-umdità hija kkalkulata kif:

Rata ta' żamma ta' umdità (%)=M2−M0M1−M0×100%\\text{Rata ta' żamma ta' umdità (\\%)}=\\frac{M_2-M_0}{M_1-M_0}\\times100\\%Rata ta' żamma ta' umdità (%)=M1​−M0​M2​−M0​​×100%

[0087]Fejn:

[0088]M0M_0M0​ hija l-massa tal-pjanċa vojta, fi grammi.

[0089]M1M_1M1​ hija l-massa tal-pjanċa tal-ħġieġ wara ż-żieda tal-kampjun, fi grammi.

[0090]M2M_2M2​ hija l-massa wara l-ħażna f'dessikatur għal diversi sigħat, fi grammi.

Nota tat-traduttur: Il-paragrafu [0085] jiddeskrivi l-ħażna f'kamra b'temperatura kkontrollata u umdità kkontrollata, filwaqt li [0090] jirreferi għal dessikatur. Iż-żewġ deskrizzjonijiet jinżammu mis-sors.

 

Riżultati Sperimentali

[0091]Ir-riżultati sperimentali ta 'dan l-eżempju huma kif ġej.

Effetti fuq il-Proliferazzjoni taċ-Ċelloli HaCaT

[0092]Kif muri fil-Figura 2, estratti differenti ta 'Cistanche kellhom effetti differenti fuq il-vijabbiltà taċ-ċelluli HaCaT.

Ver u POL żiedu b'mod sinifikanti l-vijabbiltà taċ-ċelluli, b'P<0.05P < 0.05P<0.05, and Ver produced the highest viability.

Effetti fuq l-Attività Synthase tal-Aċidu Xaħmi

[0093]Kif muri fil-Figura 3, il-lipidi interċellulari fl-istratum corneum huma l-komponent tal-qalba "mehrież" tal-istruttura "briks u mehries" tal-ġilda.

Iċ-ċeramidi, il-kolesterol u l-aċidi grassi ħielsa jiffurmaw struttura b'saffi lamellari densa fi proporzjonijiet speċifiċi.

Iż-żamma ta 'sintesi normali tal-lipidi tista' ssaħħaħ din l-istruttura, tevita telf ta 'ilma, tirreżisti ħsara esterna, iżżomm il-bilanċ tal-mikrobijoma tal-ġilda, u tippromwovi awto-tiswija.

B'hekk tista' tindirizza n-nixfa, is-sensittività, u l-kapaċità mnaqqsa tad-difiża tal-ġilda fis-sors tagħhom.

[0094]L-aċidu xaħmi synthase huwa deskritt bħala enzima li tillimita r-rata tal-qalba u magna tal-provvista ċentrali li tirregola s-sintesi tal-lipidi tal-ġilda.

Il-funzjoni prinċipali tagħha hija li tikkatalizza s-sintesi tal-aċidu palmitiku, C16: 0, minn acetyl-CoA u malonyl-CoA. L-aċidu palmitiku huwa deskritt bħala l-aċidu xaħmi saturat prinċipali endoġenu ta 'katina twila fil-ġilda.

L-aċidu palmitiku għandu żewġ funzjonijiet.

L-ewwel, bħala blokk strutturali fundamentali, huwa direttament użat fis-sintesi tal-lipidi tal-barriera stratum-corneum, inklużi ċeramidi u aċidi grassi ħielsa, li jipprovdu l-bażi materjali għall-formazzjoni ta 'saffi lamellari.

It-tieni, bħala prekursur importanti u molekula ta 'sinjalazzjoni, tista' tiġi pproċessata aktar minn elongases downstream, bħal ELOVL1, f'aċidi grassi ta 'katina twila ħafna. Dawn l-aċidi grassi distintivi huma meħtieġa għall-integrità tal-barriera.

Għaldaqstant, l-attività tal-aċidu xaħmi sintażi tiddetermina direttament il-provvista ta 'materja prima disponibbli għall-produzzjoni tal-ġilda stess ta' lipidi barriera.

Ir-regolazzjoni 'l fuq tal-funzjoni tagħha hija pass inizjali u kritiku fil-promozzjoni tas-sinteżi tal-lipidi epidermali u b'hekk it-tiswija u t-tisħiħ tal-barriera fiżika tal-ġilda, fl-aħħar mill-aħħar tappoġġja ż-żamma u d-difiża tal-umdità.

[0095]Id-dejta wriet li l-kontroll pożittiv rhEGF u Ver żiedu b'mod sinifikanti l-attività tas-sintażi tal-aċidu xaħmi, b'P<0.05P < 0.05P<0.05.

POL, POLS, RE1, u RE2 ma żiedux l-attività ta ' l-aċidu xaħmi synthase.

Although RE2 increased fatty acid synthase activity, the difference was not statistically significant, with P>0.05P > 0.05P>0.05.

Nota tat-traduttur: Is-sors l-ewwel jinkludi RE2 fost materjali li ma żiedux l-attività, imbagħad jirrapporta żieda mhux sinifikanti għal RE2. Din l-inkonsistenza tinżamm.

 

Effetti fuq il-Kontenut ta' Aċidu Hyaluronic

[0096]Kif muri fil-Figura 4, l-aċidu hyaluronic huwa polysaccharide li jseħħ b'mod naturali fil-ġilda b'kapaċità qawwija li torbot l-ilma, deskritt fis-sors bħala li huwa prinċipalment preżenti fid-dermis u stratum corneum.

Iż-żieda fil-kontenut ta 'aċidu hyaluronic tista' żżomm l-umdità f'livelli aktar profondi, iżżomm struttura dermali b'saħħitha, tipprovdi effetti antiossidanti u anti-infjammatorji, tippromwovi l-fejqan u t-tiswija tal-feriti, u ttejjeb il-funzjoni tal-istratum-corneum.

Dawn l-effetti huma deskritti bħala li jipproduċu idratazzjoni, milja, u reżiljenza minn ġewwa.

[0097]Id-dejta wriet li l-kontroll pożittiv rhEGF, Ver, u RE2 żiedu b'mod sinifikanti l-kontenut ta 'aċidu hyaluronic, b'P<0.05P < 0.05P<0.05.

POL, POLS, u RE1 ma żiedux il-kontenut ta 'aċidu hyaluronic.

 

Tqabbil ta 'Klassijiet ta' Estratt u Verbascoside Purifikat

[0098]Cistanche fih prinċipalment phenylethanoid glycosides u polysaccharides.

L-attivitajiet tal-estratt tal-polisakkarid, POL; estratti ta' phenylethanoid glycoside, POLS, RE1, u RE2; u verbascoside, Ver, għalhekk ġew imqabbla.

Ir-riżultati fil-Figuri 2-4 jindikaw li Cistanche phenylethanoid glycoside estratti ppreparati b'metodi differenti u l-kompost individwali esebiti attivitajiet differenti fil-promozzjoni tal-proliferazzjoni taċ-ċelluli HaCaT, żieda fl-attività ta ' l-aċidu xaħmi synthase, u żieda fil-kontenut ta ' l-aċidu hyaluronic.

Ver biss esebixxa attività fit-tliet oqsma kollha, kif imqassar fit-Tabella 1.

[0099]–[0101] Dawn in-numri tal-paragrafi u l-kontenut tat-Tabella 1 ma kinux preżenti fis-sors ipprovdut. L-ebda traduzzjoni jew rikostruzzjoni mhi possibbli għall-materjal nieqes.

Tabella 1. Sommarju tal-bijoattività ta' kampjuni differenti

Indiċi	Kontroll vojt	Kontroll pożittiv	POL	POLS	RE1	RE2	Ver
Vijabbiltà taċ-ċelluli (%)	100 ± 7.008	/	119.008 ± 7.379*	105.312 ± 6.494	85.851 ± 8.381	95.234 ± 10.065	128.894 ± 9.528*
Attività FAS (U/mg prot)	2.712 ± 0.419	18.488 ± 4.56*	3.786 ± 1.715	2.399 ± 0.717	2.145 ± 0.889	9.34 ± 10.756	10.63 ± 2.228*
Kontenut HA (ng/mL)	10.908 ± 0.968	19.925 ± 4.306*	6.881 ± 2.411	6.321 ± 1.021	6.53 ± 1.342	16 ± 2.531*	17.86 ± 3.27*

 

Tqabbil ulterjuri ta 'CTE, Echinacoside, u Verbascoside

[0102]Kif muri fil-Figura 5, il-glikożidi phenylethanoid prinċipali f'Cistanche jinkludu echinacoside u verbascoside.

L-effetti ta 'l-estratt totali ta' Cistanche phenylethanoid glycoside, CTE, li fih 22.6% echinacoside u 4.5% verbascoside; echinacoside, Ech; u verbascoside, Ver, fuq il-proliferazzjoni taċ-ċelluli HaCaT kienu għalhekk imqabbla aktar.

[0103]Id-dejta wriet li CTE, Ech, u Ver kollha promossi l-proliferazzjoni taċ-ċelluli HaCaT.

CTE u Ver ipproduċew l-aktar effetti b'saħħithom, li jissuġġerixxu effetti protettivi fuq iċ-ċelloli tal-ġilda.

Aktar Effetti fuq l-Attività tas-Syntase tal-Aċidu Xaħmi

[0104]Kif muri fil-Figura 6, l-effetti fuq l-attività ta 'l-aċidu xaħmi sintażi kienu kif ġej.

[0105]Id-dejta wriet li l-kontroll pożittiv rhEGF, Ech, u Ver żiedu b'mod sinifikanti l-attività tal-aċidu xaħmi sintażi, b'P<0.05P < 0.05P<0.05.

CTE ma żiedx l-attività tal-aċidu xaħmi sintażi.

 

Espressjoni ta' Ġeni u Proteini Assoċjati mas-Sinteżi tal-Aċidi Xaħam

[0106]Il-Figuri 7–9 juru l-effetti fuq l-espressjoni tal-ġeni u l-proteini assoċjati mas-sintesi tal-aċidu xaħmi.

[0107]ACC u FASN huma deskritti bħala l-enzima li tillimita r-rata u l-magna tal-qalba tal-anaboliżmu tal-lipidi.

Flimkien, huma jikkatalizzaw il-ġenerazzjoni ta 'aċidi grassi ta' katina twila, inkluż l-aċidu palmitiku, li jipprovdu materja prima essenzjali għas-sintesi ta 'lipidi ta' barriera ewlenin bħal ċeramidi.

N-SMase huwa inizjatur ewlieni tat-tqassim tal-lipidi u s-sinjalar tal-istress b'rwol doppju.

Huwa attivat waqt il-korriment u idrolizza l-isphingomielin biex jiġġenera ċeramidi ta 'sinjalazzjoni, jikkawża infjammazzjoni u apoptożi u jrażżan is-sintesi normali tal-lipidi.

Fiċ-ċelloli normali, madankollu, għandu rwol regolatorju fil-metaboliżmu tal-lipidi.

[0108]Kif muri fil-Figuri 7–9, ir-riżultati qPCR u Western blot indikaw li Ver, bħal rhEGF, irregola b'mod sinifikanti l-espressjoni tal-ġeni u l-proteini ta 'ACC, FASN, u N-SMase, b'P<0.05P < 0.05P<0.05, and the effects were comparable.

Ir-riżultati jindikaw li Ver jirregola l-ACC u l-FASN biex jirregola s-sinteżi tal-lipidi ċellulari għall-kostruzzjoni tal-membrana, il-ħażna tal-enerġija jew is-sekrezzjoni.

Fl-istess ħin, ir-regolazzjoni 'l fuq ta' N-SMase tista 'tattiva ċ-ċikliżmu metaboliku ta' sphingolipid.

Iċ-ċeramidi prodotti mhumiex biss sinjali ta 'stress. Taħt kundizzjonijiet fiżjoloġiċi normali, huma wkoll prekursuri importanti għas-sintesi ta 'sphingolipidi kumplessi oħra, bħal glycosphingolipidi, jew għal remodeling dinamiku tal-membrana.

Għalhekk, ir-regolazzjoni kkoordinata ta 'dawn it-tliet ġeni u proteini ttejjeb l-attività anabolika ċellulari ġenerali u l-kapaċità ta' mudellar mill-ġdid tal-membrana.

 

Aktar Effetti fuq il-Kontenut ta 'Aċidu Hyaluronic

[0109]Kif muri fil-Figura 10, id-dejta indikat li rhEGF, CTE, Ech, u Ver kollha żiedu b'mod sinifikanti l-kontenut ta 'aċidu hyaluronic, b'P<0.05P < 0.05P<0.05.

L-ordni tal-effett kien CTE, segwit minn Ver, segwit minn Ech.

 

Espressjoni ta 'Ġeni u Proteini Assoċjati mas-Sinteżi tal-Aċidu Hyaluronic

[0110]Kif muri fil-Figuri 11–13, HAS2, HAS3, u CD44 jiffurmaw ċirku ta 'rispons ta' "sinteżi-sensing-rispons" fil-metaboliżmu tal-aċidu hyaluronic fiċ-ċelloli HaCaT.

HAS2 u HAS3 huma l-enzimi ewlenin tas-sinteżi katalitika.

HAS2 prinċipalment jipproduċi aċidu hyaluronic ta 'piż molekulari għoli u huwa assoċjat maż-żamma tal-omeostażi tal-ġilda u l-effetti anti-infjammatorji.

HAS3 għandu t-tendenza li jipproduċi aċidu hyaluronic ta 'piż molekulari aktar baxx u jipparteċipa aktar direttament fi proċessi inklużi l-migrazzjoni u l-proliferazzjoni taċ-ċelluli.

CD44 huwa r-riċettur prinċipali tal-wiċċ taċ-ċelluli għall-aċidu hyaluronic.

Mhux biss jimmedja t-trażmissjoni tas-sinjali intraċellulari u extraċellulari li jinvolvi l-aċidu hyaluronic iżda wkoll jirregola b'mod dinamiku l-aċidu hyaluronic permezz ta 'endoċitożi u riċiklaġġ u, min-naħa tiegħu, jirregola l-espressjoni u l-attività HAS2 u HAS3.

[0111]Kif muri fil-Figuri 11–13, ir-riżultati qPCR u Western blot indikaw li Ver, bħal rhEGF, irregola b'mod sinifikanti l-espressjoni tal-ġeni u l-proteini ta 'HAS2, HAS3, u CD44, b'P<0.05P < 0.05P<0.05.

L-effetti regolatorji ta 'Ver fuq l-espressjoni tal-ġeni HAS2, HAS3, u CD44 kienu akbar minn dawk ta' rhEGF.

Ir-riżultati jindikaw li Ver jirregola HAS2, HAS3, u CD44 biex jikkontrolla l-proċess sħiħ ta '"sinteżi-assemblaġġ-trasmissjoni tas-sinjal" tal-aċidu hyaluronic, li jikkontribwixxi għall-idratazzjoni epidermali, it-tiswija u l-funzjoni tal-barriera.

Effetti fuq l-Espressjoni tal-Proteina Tight-Junction

[0112]Iż-żamma tal-produzzjoni tal-lipidi tal-ġilda u l-aċidu hyaluronic hija deskritta bħala li tipprovdi appoġġ sinerġistiku fundamentali għal u stabbilizzazzjoni ta 'proteini ta' junction stretta bejn iċ-ċelloli HaCaT.

Lipidi adegwati jippermettu lill-keratinoċiti jiffurmaw saffi tal-lipidi interċellulari kompluti u organizzati.

Dawn l-istrutturi huma deskritti mhux biss bħala l-qafas fiżiku tal-barriera iżda wkoll ambjent strutturali stabbli u idrofobiku għal assemblaġġ u ankrar ta 'proteini b'junction stretta.

Fl-istess ħin, l-istat ta 'idratazzjoni favorevoli miżmum mill-aċidu hyaluronic jgħin biex jiżgura metaboliżmu u sinjalazzjoni normali tal-keratinoċiti.

Permezz ta 'mogħdijiet li jinvolvu riċetturi bħal CD44, l-aċidu hyaluronic jirregola wkoll indirettament l-espressjoni u d-distribuzzjoni tal-proteini tight-junction.

Flimkien, il-lipidi u l-aċidu hyaluronic jipprovdu l-pedamenti fiżiċi u bijokimiċi meħtieġa għall-formazzjoni u l-manutenzjoni ta 'junction stretta mill-perspettivi rispettivi ta' stabbiltà strutturali u omeostasi mikroambjentali.

B'hekk isaħħu l-konnessjonijiet interċellulari fiżiċi u l-integrità ġenerali tal-barriera.

[0113]Ir-riżultati ta 'hawn fuq indikaw li Ver wera l-aktar attività b'saħħitha fil-promozzjoni tal-produzzjoni tal-lipidi tal-ġilda u l-aċidu hyaluronic.

Investigazzjoni ulterjuri tal-effetti tagħha fuq tight junctions interċellulari wriet li CTE, Ech, u Ver kollha promossi b'mod sinifikanti l-espressjoni tal-proteina tight-junction claudin-1, b'P<0.05P < 0.05P<0.05, as shown in Figure 14.

Kif muri fil-Figura 15, Ech u Ver biss ippromwovew b'mod sinifikanti l-espressjoni tal-occludin.

L-effett ta 'Ver kien ferm akbar minn dak ta' Ech, b'P<0.05P < 0.05P<0.05.

Dan kien konsistenti mal-aktar attività b'saħħitha attribwita lil Ver fil-promozzjoni tal-produzzjoni tal-lipidi tal-ġilda u l-aċidu hyaluronic.

 

Effetti fuq il-fejqan tal-feriti

[0114]Kif muri fil-Figuri 16–17, HAS3 tipparteċipa direttament fi proċessi inklużi l-migrazzjoni u l-proliferazzjoni taċ-ċelluli.

CD44 jittrasmetti informazzjoni mill-aċidu hyaluronic fiċ-ċelloli u fl-aħħar mill-aħħar jirregola l-migrazzjoni taċ-ċelluli, il-proliferazzjoni u l-idratazzjoni, u għandu rwol ċentrali fil-fejqan tal-feriti, l-umdità tal-ġilda u l-omeostasi tal-barriera.

L-esperimenti preċedenti wrew li verbascoside ippromwova b'mod sinifikanti l-espressjoni HAS3 u CD44.

Il-kapaċità tagħha li tippromwovi l-fejqan tal-feriti għalhekk ġiet investigata aktar.

[0115]Kif muri fil-Figuri 16–17, ir-riżultati indikaw li CTE, Ech, u Ver kollha promossi l-fejqan tal-feriti.

Madankollu, Ver biss wera effett ta 'promozzjoni sinifikanti f'24 siegħa.

Esibit l-aktar attività b'saħħitha li tippromwovi l-fejqan tal-feriti, konsistenti mal-promozzjoni sinifikanti tagħha tal-espressjoni tal-ġeni u l-proteini HAS3.

Kwalifika editorjali: Il-metodu sperimentali fornut għal dan ir-riżultat huwa assaġġ tal-grif taċ-ċelluli. "Fejqan tal-feriti" hija t-terminoloġija użata fis-sors u m'għandhiex tiġi interpretata hawnhekk bħala riżultat kliniku muri.

 

Prestazzjoni ta 'Żamma ta' Umdità tal-Formulazzjonijiet

[0116]Kif muri fil-Figura 18, il-kapaċità taż-żamma tal-umdità tal-kampjun ġiet evalwata mix-xejriet fil-kurvi taż-żamma tal-umdità biex tevalwa l-prestazzjoni tal-umdità għall-ġilda.

Id-dejta wriet li l-kurva taż-żamma tal-umdità tal-Kampjun 1 kienet ogħla minn dawk tal-Kampjun 2 u l-kontroll pożittiv.

Taħt kundizzjonijiet ta '25 grad u 50% umdità relattiva, il-Kampjun 1 kellu prestazzjoni ta' moisturizing aħjar minn Kampjun 2 u l-kontroll tal-gliċerina ta '5%, li jindika l-iktar prestazzjoni ta' moisturizing b'saħħitha.

Il-kampjun 1 kien fih Ver, u l-Kampjun 2 kien fih Ech.

Skont is-sors, dawn ir-riżultati jindikaw li, meta jkun inkorporat fil-prodotti, Ver għandu omoġeneità aħjar u attività moisturizing minn Ech, kif imqassar fit-Tabella 2.

[0117]Tabella 2. Sommarju tal-Attivitajiet ta' Kampjuni Differenti.

Il-kontenut tat-tabella ma kienx inkluż fis-sors ipprovdut.

[0118]Nota: [Is-simbolu tas-sinifikat ma ġiex riprodott fit-test fornut.] Meta mqabbel mal-grupp ta' kontroll vojt, P<0.05P < 0.05P<0.05.

 

Interpretazzjoni Ġenerali Ippreżentata fl-Iżvelar

[0119]Ir-riżultati ta 'qabel jindikaw li verbascoside jesibixxi attività ta' moisturizing eċċellenti billi jattiva b'mod preċiż mekkaniżmu ta 'tiswija tal-barriera tal-ġilda komplet u magħluq.

L-ewwel jaġixxi fuq is-saff bażali biex jaċċellera b'mod sinifikanti t-tiġdid taċ-ċelluli epidermali u d-divrenzjar ordnat, u jipprovdi biżżejjed blokki ta 'bini ċellulari għall-kostruzzjoni tal-barriera.

Imbagħad jippromwovi t-tisħiħ ta 'junctions stretti u strutturi desmosomali bejn keratinoċiti, isaħħaħ l-ankraġġ fiżiku bejn iċ-ċelloli u jżid id-densità tal-barriera u s-saħħa mekkanika.

Fl-istess ħin, jattiva b'mod effettiv l-enzimi ewlenin tal-metaboliżmu tal-lipidi u jimla l-matriċi tal-lipidi interċellulari, jimla l-ispazji tal-"mehrież" bejn il-"briks" biex jipprevjeni t-telf tal-ilma.

Fl-aħħarnett, billi tirregola l-espressjoni ta 'l-aċidu hyaluronic synthase, simultanjament iżid il-kontenut ta' aċidu hyaluronic fid-dermis u l-epidermide, jaqbad u jżomm ammonti sostanzjali ta 'ilma.

Dan jifforma linja funzjonali kompluta li tinkludi tiġdid fis-sors, tisħiħ strutturali, riforniment tal-matriċi, u ħażna tal-ilma.

B'hekk tista 'tikseb sekwenza ta' ċirku magħluq ta '"promozzjoni tal-proliferazzjoni taċ-ċelluli → tisħiħ tal-konnessjonijiet fiżiċi interċellulari → promozzjoni tal-produzzjoni tal-lipidi u aċidu hyaluronic → promozzjoni tal-fejqan tal-feriti."

Is-sors jikkonkludi li jipproduċi effetti ta 'applikazzjoni aħjar minn echinacoside minn Cistanche u l-gliċerina humectant użata komunement u jista' jintuża bħala aġent protettiv tal-ġilda fil-kura tal-ġilda funzjonali u prodotti topiċi.

[0120]Id-deskrizzjonijiet ta 'hawn fuq huma biss inkarnazzjonijiet speċifiċi ta' l-invenzjoni.

L-ambitu tal-protezzjoni tal-invenzjoni mhuwiex limitat għal dawn l-inkarnazzjonijiet.

Kwalunkwe tibdil jew sostituzzjoni li persuna tas-sengħa fl-arti tista' tikkonċepixxi faċilment fl-ambitu tekniku żvelat fl-invenzjoni għandha taqa' fl-ambitu tal-protezzjoni tal-invenzjoni.

Għaldaqstant, l-ambitu tal-protezzjoni tal-invenzjoni għandu jiġi determinat mill-pretensjonijiet.