Mediċina Ċiniża Cistanche Kompożizzjoni Kimika U Analiżi ta 'Komponenti Fil-Korp Ⅲ

Kapitolu 3 Analiżi kwantitattiva ta' komponenti b'ħafna komponenti ta' Cistanche deserticola ibbażata fuq RPLC-HILIC-MS/MS

Il-kompożizzjoni kimika tal-mediċina tradizzjonali Ċiniża hija kumplessa u fiha varjetà ta' komposti bħal metaboliti primarji u sekondarji [55-561. Il-kisba ta 'analiżi komprensiva u affidabbli tal-komponenti kimiċi tal-mediċina tradizzjonali Ċiniża (inklużi komponenti idrofiliċi u idrofobiċi) għadha problema teknika kbira. Barra minn hekk, il-kontenut ta 'kull komponent fil-mediċina tradizzjonali Ċiniża jvarja ħafna, u l-metodi ta' spettrometrija tal-massa likwida konvenzjonali huma diffiċli biex jikkwantifikaw b'mod preċiż kemm il-komponenti maġġuri kif ukoll dawk ta 'traċċa fl-istess ħin. 1571 Is-separazzjoni tradizzjonali ta 'kolonna waħda mhix biżżejjed, u l-analiżi ta' komposti ta 'traċċa fil-mediċina tradizzjonali Ċiniża se tkun limitata minn kostanti. Minħabba l-interferenza ta 'komposti, il-fenomenu ta' sovrapożizzjoni tal-quċċata huwa serju. Għalkemm intużaw varjetà ta' tekniki avvanzati ta' kromatografija biex itejbu s-separazzjoni ta' matriċi kumplessi, bħal kolonni tal-kromatografija tal-qalba-qoxra u tal-partiċelli submicron, kolonni tal-kromatografija tal-interazzjoni idrofilika, eċċ., Għadha diffiċli li tinkiseb separazzjoni komprensiva ta' komposti differenti bl-użu ta' kolonna waħda [58 -59. Il-kromatografija b'ħafna kolonni li tgħaqqad mill-inqas żewġ mekkaniżmi kromatografiċi ortogonali, bħal LC bidimensjonali, LC li jinbidlu l-kolonni, u LC tandem b'żewġ kolonni, ġiet ikkunsidrata bħala għodda fattibbli li tista 'tespandi b'mod sinifikanti l-kopertura tal-metaboliti. M'hemm l-ebda dubju li kemm LC bidimensjonali kif ukoll LC li jibdlu l-kolonna jistgħu jżidu b'mod sinifikanti l-ogħla kapaċità 160). Madankollu, iż-żewġ metodi huma dipendenti fuq il-valv, l-istrumentazzjoni hija kumplessa, u tieħu ħafna ħin, u t-tubi ta 'konnessjoni u r-regolaturi huma faċli biex jiġu installati. Ir-residwi jeżistu, u dawn iż-żewġ metodi huma suxxettibbli li jintroduċu serje ta’ fatturi ta’ inċertezza li jwasslu għal irriproduċibbiltà kwantitattiva1571. Għalkemm il-kromatografija-tandem ta 'interazzjoni idrofilika b'fażi inversa (RPLC-HILIC) ma tistax iżid b'mod sinifikanti l-ogħla kapaċità, it-tagħmir tal-istrument huwa sempliċi, m'hemm l-ebda residwi fil-konnessjoni ta' tubi u regolaturi, u xorta tista 'tirrealizza l-bidla minn idrofili għal idrofobiċi. Żamma komprensiva ta' numru kbir ta' komposti polari ġeneralment [61-66. Barra minn hekk, il-modalità ta 'monitoraġġ ta' reazzjoni multipla (MRM) unika għall-ispettrometru tal-massa quadrupole triple (QgQ) tista 'tintuża bħala dimensjoni oħra ta' separazzjoni biex tkompli titjieb il-kapaċità ta 'separazzjoni ta' RPLC-HILIC. Fil-qosor, RPLC-HILIC-MRM jintegra l-vantaġġi inerenti ta 'RPLC, HILIC u MRM u huwa mistenni li jsir metodu analitiku affidabbli.

KEMM JIEĦU BIEX TAĦDEM ĊISTANCHE?

Il-kontenut ta 'kull komponent tal-mediċina tradizzjonali Ċiniża jvarja ħafna. Meta mqabbel mal-komponenti ewlenin, in-nies jagħtu aktar attenzjoni għall-iżvilupp ta 'metodi aktar sensittivi biex jitlesta l-iskoperta ta' dawn il-komposti ta 'traċċa jew saħansitra ultra-traċċa. Il-mod MRM huwa spiss rakkomandat minħabba s-sensittività eċċellenti tiegħu u l-firxa dinamika lineari tajba167. Madankollu, u minħabba s-saturazzjoni tal-multiplikazzjoni tal-elettroni terminali tal-kamra Q3 tal-ispettrometru tal-massa QqQ, il-firxa lineari ġeneralment tiċkien, u l-limitu ta 'fuq ta' kwantifikazzjoni (ULOQ) ma jistax ikopri bis-sħiħ il-kontenut ta 'xi komposti ewlenin mingħajr monitoraġġ affidabbli dawn il-komponenti tat-traċċa. Għalhekk, is-soppressjoni tal-produzzjoni tal-joni tal-prodott tista 'tespandi ULOO. Bl-użu ta' parametri komposti mdgħajfa bħal pari ta' joni,depotenzjal(DP) uenerġija tal-ħabta(CE) jista' jnaqqas in-numru ta' joni tal-prodott fil-mira u b'hekk iwessa' l-ULOQ[68-69]

Il-mediċina tradizzjonali ĊiniżaCistanches Herbahuwa iz-zokk imnixxef imlaħħam bil-weraq bil-qoxra tal-Impjant taċ-ċistanċi. Hija waħda mill-mediċini tradizzjonali Ċiniżi użati b'mod komuni u hija magħrufa bħala l-"ġinseng tad-deżert". Phenylethanoid glycosides dejjem kienu suġġett ta 'riċerka jaħraq f'Cistanche deserticola, iżda f'dawn l-aħħar snin, l-effetti farmakoloġiċi ta' komponenti idrofiliċi oħra bħal mannitol ġew ukoll rikonoxxuti sew! 70-721. Madankollu, fl-analiżi kwantitattiva CH tagħna ta 'rutina, il-kontenut ta' komponenti ewlenin bħalechinaceaside,verbascoside, u mannitol ġieli kienu għoljin wisq biex jaqbżu l-firxa tal-kejl tad-ditekter tal-UV jew tad-ditekter tat-tifrix tad-dawl evaporattiv (ELSD). Għalhekk, mill-perspettiva ta 'evalwazzjoni ġenerali tal-kwalità, huwa importanti li jiġi stabbilit metodu analitiku li jista' jimmonitorja simultanjament komponenti idrofiliċi u idrofobiċi u jikkwantifika b'mod preċiż kemm il-komponenti maġġuri kif ukoll dawk ta 'traċċa.

L-esperiment f'dan il-kapitolu stabbilixxa metodu affidabbli adattat għall-analiżi ta 'matriċi kumplessi - RPLC-HILIC-MS/MS spettrometrija tal-massa likwida (kromatografija ta' interazzjoni inversa ta 'fażi idrofila akkoppjata serjali-spettrometrija tal-massa tandem), li kisbet l-iskoperta ta' 23 polaritajiet f'Cistanche deserticola . Separazzjoni, analiżi u determinazzjoni tal-kontenut simultanji ta' firxa wiesgħa ta' komposti (li jkopru komponenti idrofiliċi u idrofobiċi); filwaqt li tuża l-mod SMRM biex tiżgura r-riproduċibbiltà ta 'dan il-metodu, billi tuża valuri CE xierqa u pari ta' joni differenti biex tespandi l-konu tal-arżnu L-ULOQ ta 'komponenti ewlenin bħall-inulina u l-verbascoside tippermetti kwantifikazzjoni simultanja ta' komponenti ewlenin u komponenti ta 'traċċa f'Cistanche deserticola, li tipprovdi a għodda fattibbli għat-titjib tal-kontroll tal-kwalità ta 'Cistanche deserticola u tgħin biex jinkiseb metaboliżmu immirat mifrux tal-pjanti. Ġenomika.

Taqsima 1 Materjali Sperimentali

1. Strument

L-ispettrometru tal-massa likwida HPLC-Qtap-MS huwa mgħammar bi Shimadzu HPLC (mgħammar b'2 ​​pompi LC-20ADxR, kampjunatur awtomatiku SIL-20ACxR, detector UV SPD-M20A, CTO-20AC termostat, degassing onlajn DGU-20A3R Jikkonsisti f'magna, CBM-20Kontrollur, Shimadzu Corporation, il-Ġappun) u spettrometru tal-massa SCIEX5500 Qtrap (sors tal-jone ESI, SCIEX, Foster City, CA, USA) . L-akkwist tad-dejta u l-kalkolu tlestew bis-softwer tal-Analyst Software1.6.2. Sistema ta 'purifikazzjoni tal-ilma ultrapur Mili-Q (Milipore Company, USA), bilanċ analitiku elettroniku Mettler ME204 (Mettler Toledo Company, Iżvizzera), estrattur ultrasoniku (230V, Bransonmodel 5510, Danburry, CT, USA).

2. Materjali u reaġenti

Kolonna Waters Acquity UPLC HSS T3 (2.1 x 100 mm, 1.8 μm), kolonna Waters XBridge Amide (4.6mmx150mm, 3.5 μm).Polyetheretherketone(PEEK) pipeline (Agilent Company, l-Istati Uniti). Metanol ta’ grad ta’ kromatografija u ta’ spettrometrija tal-massa, aċetonitrile u aċidu formiku ta’ grad ta’ spettrometrija tal-massa nxtraw minn ThermoFisher (Pittsburgh, PA, USA), u l-ilma kien ilma ultrapur Milli-Q (Millipore, Bedford, MA, USA) magħmul fil-laboratorju . Niacin (aċidu nikotiniku, cLogP, 0.799), aċidu suċċiniku (cLogP, -0.526) inxtraw minn Sigma-Aldrich Company (St. Louis, MO, USA): uridine (cLogP, -2.219), adenojdi Adenosine (cLogP, -2.158), inosina (cLogP, {{10}}.106) u guanosina (cLogP) , -3.326) inxtraw minn Beijing Xinjingke Biotechnology Co., Ltd. Salidroside (cLogP -0.296), 6-deoxycatalpol (cLogP, -3.071), phenylalanine (cLogP, -1.556), 8-epi-loganic acid (cLogP , -2.366), mannitol (cLogP, -2.046), sukrożju (cLogP ) , -3.087), gluroside (cLogP, -1.757), alaschanioside A (alaschanioside A, cLogP -0.971 ), echinacoside (echinacoside, cLogP, -1 .811), aċidu feruliku (cLogP, 1.421), acteoside (cLogP, -0.890), isoacteoside (cLogP, -0.057) u Pinoresinol- -D-glucopyranoside (cLogP, -0.384) kien ipprovdut mil-Laboratorju Ewlenin tad-Drogi Naturali u Bijomimetiċi tal-Università ta’ Peking, cistanoside F (cistanoside F, cLogP, -2.211) Mixtrija minn Chengdu Mansite Biotechnology Co., Ltd., cistanoside A (cistanoside A, cLogP, -1.365), 2'-acetylatteoside (cLogP, -0.040) u liquiritin apioside (cLogP , -0.267) inxtraw minn Shanghai Shidande Biotechnology Co., Ltd., u tubuloside A (tubulosideA, cLogP, 0.287) inxtraw minn Chengdu Weiqi Biotechnology Co., Ltd. Il-purità tas-sustanzi ta’ referenza kollha ġiet ittestjata minn HPLC-DAD-IT-TOF-MS, u l- il-purità kienet akbar minn 98%. Il-valuri kollha tas-sustanza ta 'kontroll cLogP ġew ikkalkulati bis-softwer ChemBioDraw Ultra14.0 (CambridgeSoftCambridge, MA, USA).