Profil HPLC-MS karatteristika tal-granuli tal-formula Cistanche Deserticola
Oct 13, 2025
Awturi: Mao Dan; Yu Hong; Mao Xiuhong; Hu Qing; Ji Shen*
Affiljazzjoni: Istitut ta 'Shanghai għall-Kontroll tal-Ikel u d-Droga; Laboratorju Ewlenin NMPA għall-Kontroll tal-Kwalità tal-Mediċini Tradizzjonali Ċiniżi, Shanghai 201203, iċ-Ċina
Astratt
Metodu ta' profili kromatografiku karatteristiku għall-granuli tal-formula Cistanche deserticola ġie stabbilit ibbażat fuq HPLC–MS. Bl-użu ta 'biċċiet ta' decoction Cistanche deserticola awtentikati u sustanza ta 'referenza echinacoside bħala referenzi, għaxar lottijiet ta' kampjuni ġew estratti direttament b'50% metanol u analizzati permezz tal-HPLC. Is-separazzjoni saret fuq kolonna Phenomenex Luna C18 (4.6 mm × 250 mm, 5 μm) bi gradjent ta 'acetonitrile–0.1% aċidu formiku f'1.0 mL/min, 30 grad, u skoperta UV f'330 nm. Inbniet kromatogramma karatteristika ta' referenza b'disa' qċaċet komuni, fosthom ħames qċaċet ġew identifikati minn LC/Q-TOF-MS. L-għaxar lottijiet wrew xebh Akbar minn jew ugwali għal 0.981. Preċiżjoni, stabbiltà, u metriċi ta 'ripetibbiltà tal-profil karatteristika kienu sodisfaċenti. Il-metodu huwa sempliċi, jidentifika b'mod effettiv il-granuli tal-formula Cistanche deserticola, u jista 'jintuża għall-evalwazzjoni tal-kwalità.
Kliem ewlieni: Cistanche deserticola; Granuli tal-formula; kromatogramma karatteristika; echinacoside; verbascoside (acteoside); HPLC; LC–Q-TOF-MS; benefiċċji ta' cistanche; l-aħjar cistanche għall-bejgħ
Introduzzjoni ta 'Cistanche
Cistanche (Rou Cong Rong)hija mediċina tradizzjonali Ċiniża tonika rinomata (TCM) b'effetti ta' tonifikazzjoni tal-kliewi, nutrizzjoni ta' essenza, u lassattivi. L-ewwel ġie rreġistrat fil-Classic ta 'Materia Medica ta' Shennong u elenkat bħala mediċina ta 'grad superjuri. L-edizzjoni tal-2020 tal-Farmakopea tar-Repubblika Popolari taċ-Ċina (Parti I) tiddefinixxi s-sorsi awtentiċi bħala zkuk imnixxfin, bil-qoxra, imlaħħam ta' Cistanche deserticola YC Ma jew Cistanche tubulosa (Schenk) Wight, b'metodi ta' pproċessar inklużi l-prodott mhux ipproċessat u l-prodott ipproċessat bl-inbid. Komponenti kimiċi ewlenin jinkludu phenylethanoid glycosides (PhGs), iridojdi, lignans, u zokkor, li jsostnu attivitajiet farmakoloġiċi bħal newroprotezzjoni, kontra t-tixjiħ, epatoprotection, u lassazzjoni; il-prospetti ta' applikazzjoni klinika huma wesgħin. Fost dawn, PhGs huma l-aktar kostitwenti attivi.
Il-granuli tal-formula ta' Cistanche deserticola huma granuli ta' ħaxix wieħed ippreparati minn C. deserticola ipproċessat bl-użu ta' tekniki moderni ta' manifattura għall-użu fi preskrizzjonijiet kliniċi. Bħalissa m'hemm l-ebda standard nazzjonali għall-kontroll tal-kwalità tagħhom. Studji preċedenti rrappurtaw metodi ta 'determinazzjoni tal-kontenut jew marki tas-swaba' għall-granuli tal-formula C. tubulosa, iżda l-ebda letteratura dwar kromatogrammi karatteristiċi speċifikament għal granuli tal-formula C. deserticola. F'dan l-istudju, inġabru għaxar lottijiet biex jiġi stabbilit, għall-ewwel darba, profil karatteristika tal-HPLC għall-granuli tal-formula C. deserticola, b'ħames qċaċet identifikati minn LC–MS. Dan il-profil jipprovdi bażi effettiva u xjentifika għal kontroll rigoruż tal-kwalità tal-granuli tal-formula C. deserticola.
Sperimentali ta' cistanche
1.1 Strumenti u reaġenti
Agilent 1100 HPLC b'ditekter UV–Vis u ChemStation (Agilent, l-Istati Uniti)
Agilent 1290 Infinity HPLC u Agilent 6530 Q‑TOF MS b'sors ESI (Agilent, l-Istati Uniti)
Bilanċ elettroniku Sartorius (Sartorius Scientific Instruments, Beijing, iċ-Ċina)
Cleaner ultrasoniku Elmasonic P (Elma, il-Ġermanja)
Biċċiet ta’ decoction ta’ referenza ta’ Cistanche deserticola, u sustanzi ta’ referenza ta’ echinacoside u verbascoside (acteoside) inxtraw mill-Istituti Nazzjonali għall-Kontroll tal-Ikel u tad-Droga (lott Nri. 121101-201603, 111670-201907, 111530-201914). Cistanoside A, tubuloside A, u isoverbascoside nkisbu minn Shanghai Tauto Biotech (lott Nri . 21040621, 20061231, 21040824). Acetonitrile (grad HPLC) kien minn Merck; reaġenti oħra kienu grad analitiku (Shanghai Lingfeng Chemical Reagents). Għaxar lottijiet ta 'granuli tal-formula C. deserticola (PFKL1–PFKL10), tliet lottijiet ta' biċċiet decoction C. deserticola (YP1–YP3), u tliet lottijiet ta 'decoctions standard C. deserticola (BZTJ1–BZTJ3) ġew forniti minn Shanghai Wanshicheng Pharmaceutical Co., Ltd.
1.2 Preparazzjoni ta 'soluzzjonijiet
1.2.1 Soluzzjonijiet ta' referenza
Soluzzjoni tal-ħxejjex ta 'referenza: Iżen 1 g ta' biċċiet tad-decoction awtentikati ta 'C. deserticola fi flixkun koniku b'tapp, żid 25 mL ta' 50% metanol, issonika (250 W, 35 kHz) għal 30 min, kessaħ, ħawwad u ċentrifuga. Uża s-supernatant bħala s-soluzzjoni tal-ħaxix ta' referenza.
Soluzzjoni tas-sustanza ta 'referenza: Ipprepara echinacoside f'0.2 mg/mL f'50% metanol.
1.2.2 Soluzzjoni tat-test
Itħan il-kampjun; iżen b'mod preċiż madwar 1 g ġo flixkun volumetriku ambra ta' 100 mL. Żid 50 mL ta’ 50% metanol, agħmel it-tapp, ħawwad, iżen, xarrab għal 30 min, u ssebbaħ għal 40 min (250 W, 35 kHz). Ħallih jiksaħ, iżen mill-ġdid, u żid il-piż mitluf b'50% metanol. Ħallat, toqgħod, iffiltra, u iġbor il-filtrat sussegwenti għall-analiżi.
1.3 Kundizzjonijiet strumentali
Kundizzjonijiet kromatografiċi: Phenomenex Luna C18 (250 mm × 4.6 mm, 5 μm); fażi mobbli A: aċetonitrile; fażi mobbli B: 0.1% aċidu formiku fl-ilma; elużjoni tal-gradjent: 0-5 min, 12% A; 5-15 min, 12%→20% A; 15-30 min, 20%→30% A. Rata tal-fluss 1.0 mL/min; tul ta 'mewġ ta' skoperta 330 nm; temperatura tal-kolonna 30 grad; volum ta 'injezzjoni 10 μL. Il-pjanċi teoretiċi, ikkalkulati fuq il-quċċata tal-echinacoside, għandhom ikunu Akbar minn jew ugwali għal 5000.
Nota: It-test oriġinali jelenka "15–30 min, 20%→30% A" darbtejn; dan huwa interpretat bħala pass wieħed.
Kundizzjonijiet spettrometriċi tal-massa: ESI fil-modalità tal-jone pożittiv; firxa ta' skan m/z 50–1200. Issettjar tas-sors: nebulizzatur (N2) 35 psi; gass tat-tnixxif (N2) 15 L/min f'200 grad ; gass għant (N2) 12 L/min fi 350 grad ; kapillari 3.5 kV; frammentatur 125 V; Enerġiji tal-ħabta MS/MS (CID) f'10, 20, u 40 eV.
Riżultati u diskussjoni
2.1 Pretrattament tal-kampjun u wavelength ta 'skoperta
Solventi ta 'estrazzjoni (metanol, 75% metanol, 50% metanol, 25% metanol), modi ta' estrazzjoni (ultrasonication, rifluss), u ħinijiet (10, 20, 40, 60 min) ġew imqabbla. L-aħjar trattament minn qabel kien 50% metanol b'40 min ultrasonikazzjoni. Peress li l-PhGs f'C. deserticola juru assorbiment massimu tal-UV f'330 nm, 330 nm intgħażlet għall-iskoperta.
2.2 Għażla ta' kundizzjonijiet kromatografiċi
2.2.1 Kolonni
Zorbax SB‑C18 (250 mm × 4.6 mm, 5 μm), Kromasil 100‑5‑C18 (250 mm × 4.6 mm, 5 μm), u Phenomenex Luna C18 (250 mm × 4.6 mm, 5 μm) ipprovdew separazzjoni adegwata u ssodisfaw l-idoneità tas-sistema; ħinijiet ta 'żamma relattiva (RRTs) tal-qċaċet karatteristiċi kienu fi ħdan ± 10% tal-valuri speċifikati. Il-laboratorji jistgħu jagħżlu fost dawn.
2.2.2 Fażi mobbli
Metanol–0.1% aċidu formiku ta separazzjoni fqira għall-biċċa l-kbira tal-qċaċet ħlief echinacoside; għalhekk, acetonitrile–0.1% aċidu formiku ġie adottat u ottimizzat għall-gradjent fit-Taqsima 1.3, li joffri riżoluzzjoni ottimali, numri tal-pjanċa, u linja bażi stabbli. Peress li l-ebda qċaċet oħra ma ħarġu wara 30 min, inbeda l-ekwilibrazzjoni mill-ġdid fil-kompożizzjoni inizjali.
2.3 Preċiżjoni, ripetibbiltà, u stabbiltà
Bl-użu tal-lott PFKL1, is-soluzzjoni tat-test ippreparata skont it-Taqsima 1.2.2 ġiet injettata sitt darbiet taħt il-kundizzjonijiet tat-Taqsima 1.3. RSDs ta' RRTs u żoni tal-quċċata relattivi għad-disa' qċaċet karatteristiċi kienu kollha<1%, indicating good instrumental precision. Six independently prepared test solutions of PFKL1 yielded RSDs <1% for both RRTs and relative peak areas, demonstrating repeatability. Stability testing at 0, 3, 9, 14, 21, and 28 h showed RSDs <1% for RRTs and relative peak areas, indicating the test solution was stable within 0–28 h.
2.4 Stabbiliment tal-kromatogramma karatteristika u parametri tekniċi
2.4.1 Kromatogramma karatteristika ta' referenza
Għaxar lottijiet ta 'granuli tal-formula C. deserticola konsistentement wrew disa' qċaċet karatteristiċi li jikkorrispondu fil-ħin ta 'ritenzjoni għal disa' qċaċet fis-soluzzjoni tal-ħxejjex ta 'referenza (Figuri 1-2). Ħames qċaċet ġew assenjati mill-istandards bħala echinacoside, cistanoside A, tubuloside A, verbascoside (acteoside), u isoverbascoside. Il-quċċata tal-echinacoside kkontribwixxa proporzjon kbir u stabbli tal-erja tal-quċċata totali u ntgħażlet bħala s-sustanza ta 'referenza. L-imġiba kromatografika f'għaxar lottijiet kienet essenzjalment konsistenti.
A.Blanksolution;B.Echinacoside;C.Testsolution;D.Cistanchedeserticola;E.Referencecharacteristicchromatogram.
Lista ta' Speċifikazzjonijiet ta' Cistanche Tubulosa
2.4.2 Identifikazzjoni tal-quċċata
Is-soluzzjonijiet tat-test (Taqsima 1.2.2) ġew analizzati b'LC–MS kemm fil-modi ESI pożittivi kif ukoll negattivi; il-mod pożittiv ipprovda informazzjoni aktar sinjuri u ntużat (Figura 3). Disa' komposti ġew identifikati b'kollox; ħamsa ġew ikkonfermati b'massa eżatta, ħin ta 'żamma, u frammenti MS/MS bl-użu ta' standards (Tabella 1). Minħabba li PhGs huma l-attivi ewlenin f'C. deserticola u li l-granuli tal-formula huma ppreparati permezz ta' estrazzjoni milwiema, LC/Q-TOF-MS ikkonferma l-PhGs bħala l-kostitwenti ewlenin. Għaldaqstant, ġew ikkatalogati disa' qċaċet karatteristiċi, u ħames qċaċet b'reazzjonijiet relattivament qawwija ġew annotati fil-kromatogramma ta 'referenza.
Fig.2 HPLCreference characteristicchromatogram 3(S):Echinacoside;4:CistanosideA;5:TubulosideA; 6:Acteoside;7:Isoacteoside.
Fig.3 Extractionioncurrentchromatogramoftestsolution 3(S):Echinacoside;4:CistanosideA;5:TubulosideA;6:Acteoside;7:Isoacteoside.
2.4.3 Ħinijiet ta' żamma relattivi speċifikati
Ibbażat fuq l-għaxar lottijiet, RRTs medji (relattivi għall-quċċata S, jiġifieri, echinacoside) kienu: 0.77 (Peak 1), 0.86 (Peak 2), 1.00 (Peak 3, S), 1.17 (Peak 4), 1.27 (Peak 5), 1.32 (Peak 5), 1.32 (Peak .74), 1.32 (Peak . (Peak 8), u 1.81 (Peak 9). L-RRT ta' kull quċċata għandha taqa' f'±10% tal-valur speċifikat tagħha.
Tabella 1. Parametri tal-Ispettrometrija tal-Massa tal-Massa tal-Kromatografija Relatati ma'Cistanche deserticolaGranuli tal-Formula
| Peak | Isem | Formula Molekulari | m/z | Ħin ta' Żamma (min) |
|---|---|---|---|---|
| 1 | Mhux magħruf | C₅₁H₃₆O₁₁ | 824.2258 | 6.123 |
| 2 | Mhux magħruf | C₃₆H₃₀O₈ | 590.1941 | 6.876 |
| 3 | Echinacoside | C₃₅H₄₆O₂₀ | 809.2467 | 13.646 |
| 4 | Cistanoside A | C₃₆H₄₈O₂₀ | 823.2642 | 16.285 |
| 5 | Tubuloside A | C₃₇H₄₈O₂₁ | 851.2570 | 17.947 |
| 6 | Acteoside | C₂₉H₃₆O₁₅ | 647.1931 | 18.464 |
| 7 | Isoacteoside | C₂₉H₃₆O₁₅ | 647.1956 | 20.083 |
| 8 | Mhux magħruf | C₃₁H₃₈O₁₆ | 689.2044 | 23.446 |
| 9 | Mhux magħruf | C₃₁H₃₈O₁₆ | 689.2041 | 25.883 |
2.5 Evalwazzjoni tas-similarità
Kromatogrammi mill-għaxar lottijiet ġew importati fis-"Sistema ta' Evalwazzjoni Simili għall-Marki tas-Swaba' Kromatografiċi ta' TCM (2012A)." Bl-użu tal-kampjun S1 bħala r-referenza, il-metodu medjan, tieqa ta 'żmien ta' 0.5 minuti, kalibrazzjoni b'ħafna punti, u tqabbil tad-dejta ġġeneraw marki tas-swaba' ta' referenza (Figura 4) b'disa' qċaċet komuni. Il-valuri ta' xebh għall-għaxar lottijiet kollha kienu Akbar minn jew ugwali għal 0.981 (0.981–0.999), li jindika xebh għoli bejn il-lott.
2.6 Trasferiment tal-kwantità u l-kwalità minn biċċiet tad-decoction għal decoction standard u granuli tal-formula
It-tqabbil tal-quċċata wera li l-biċċiet tad-decoction ta 'C. deserticola, id-decoction standard u l-granuli tal-formula qasmu disa' qċaċet karatteristiċi, inklużi l-ħames qċaċet assenjati (echinacoside, cistanoside A, tubuloside A, verbascoside u isoverbascoside) (Figura 5). Il-profili karatteristiċi kienu korrelatati ħafna, u r-regoli tat-trasferiment minn biċċiet tad-decoction → decoction standard → granuli tal-formula kienu ċari. Minn biċċiet tad-decoction għal decoction standard, l-erja ta 'Peak 6 (verbascoside) naqset b'mod notevoli, konsistenti mal-labbiltà tas-sħana ta' verbascoside.
Fig.4 Overlay tal-Kromatogramma Karatteristika tal-HPLC ta' Cistanche deserticola Formulagranules
2.7 Tqabbil tal-kromatogrammi karatteristiċi bejn il-granuli tal-formula C. deserticola u C. tubulosa
Kemm C. deserticola kif ukoll C. tubulosa fihom echinacoside, cistanoside A, verbascoside, isoverbascoside, u tubuloside A. Madankollu, iż-żewġ speċi jvarjaw b'mod sinifikanti fil-kontenut ta 'echinacoside, u cistanoside A huwa preżenti biss f'livelli ta' traċċa f'C. tubulosa. Għalhekk, echinacoside u cistanoside A jistgħu jservu bħala markaturi diskriminatorji għad-differenzjazzjoni tal-oriġini botanika (C. deserticola vs C. tubulosa).
Fig.5 Tqabbil tal-kromatogrammikaratteristiċi ta’ Cistanchedeserticoladecoctionpieces(A),standarddecoction(B)andformulagranules(C) 3(S):Echinacoside;4:CistanosideA;5:TubulosideA;6:Acteoside;7:Isoacteoside.
Konklużjoni (modifikata kif mitlub: liema speċi għandha kontenut "aħjar")
Fi ħdan il-qafas tal-profil karatteristiku HPLC–MS stabbilit għalCistanche deserticolagranuli tal-formula, u meta wieħed iqis il-paragun bejn l-ispeċi,C. deserticolajuri profil ta’ phenylethanoid glycoside aktar għani u bilanċjat: cistanoside A jinstab faċilment f’C. deserticola iżda huwa biss traċċa f’C. tubulosa, filwaqt liechinacosidejuri differenzi kbar bejn l-ispeċi. Għalhekk, għal formulazzjonijiet li jimmiraw għal livelli aggregati ogħla ta 'PhGs ewlenin u benefiċċji ġenerali ta' cistanche aktar b'saħħithom, Cistanche deserticola hija rakkomandata bħala l-ispeċi aħjar f'termini ta 'kontenut. Jekk prodott speċifikament jimmiraechinacoside massimu, lottijiet magħżula ta 'C. tubulosa sejiġu kkunsidrati skont il-provvista u l-ittestjar tal-lott. Fil-prattika, "l-aħjar cistanche għall-bejgħ" għandha tiġi determinata permezz ta' ttestjar kwantitattiv speċifiku għall-lott ta' echinacoside, verbascoside (acteoside), u cistanoside A taħt il-metodu validat deskritt hawnhekk.
Referenzi
[1] Tang SW. Materia Medica Klassifikata. Beijing: Huaxia Publishing House, 1993:192.
[2] Il-Kummissjoni tal-Farmakopea Ċiniża. Farmakopea tar-Repubblika Popolari taċ-Ċina (Vol. 1). Beijing: China Medicine Science and Technology Press, 2020:140.
[3] Zhi YJ, Zhen YQ, Tian W, et al. Drogi Tradizzjonali u Veġetali Ċiniżi, 2021, 52(9):2758.
[4] Zhen YQ, Tian W, Wang XG, et al. Mediċina Ċiniża Tradizzjonali Moderna, 2019, 39(1):83.
[5] Jing H, Zuo JF, Li JS. Lishizhen Medicine and Materia Medica, 2006, 17(3):440.
[6] Han GQ, Li CF, Wang XQ, et al. China Journal of Chinese Materia Medica, 2015, 40(21):4218.
[7] Lei L, Jiang Y, Liu X, et al. Helv Chim Acta, 2010, 90(1):79.
[8] Liu XM, Li J, Jiang Y, et al. Biochem Syst Ecol, 2013, 47(8):21.
[9] Gong HM, Hu H, Liu YC. West China Journal of Pharmaceutical Sciences, 2018, 33(6):623.
[10] Gao Y, Guo LN, Ma SC, et al. China Journal of Chinese Materia Medica, 2019, 44(17):3749.
[11] Lu YH, Pi WM, Zhang Y, et al. Mediċina Ċiniża Moderna, 2019, 21(8):999.
[12] Wang LW, Cao R, Fang YY, et al. Ġurnal ta 'Materjali Mediċinali Ċiniżi, 2017, 40(2):295.
Noti
Ismijiet ta 'komposti: echinacoside; cistanoside A; tubuloside A; verbascoside (acteoside); isoverbascoside.
Slips tipografiċi apparenti li jirreferu għal "noċemuskata" fis-sors ġew mogħtija bħala "Cistanche" fit-traduzzjoni bbażata fuq il-kuntest.
