Bidliet fil-Membrana tal-Eritroċiti Umani Esposti għal Estratti Akwei U Etanoliċi minn Uncaria Tomentosa

Kuntatt:tina.xiang@wecistanche.com

Astratt: Uncaria tomentosa (Willd.)DC hija speċi ta 'climber injam li joriġinaw mill-Amerika t'Isfel u Ċentrali li ntużat fit-terapija ta' l-ażma, rewmatiżmu, pressjoni għolja, u purifikazzjoni tad-demm. L-istudju preċedenti tagħna wera li U.tomentosaestrattiforma tal-eritroċiti umani mibdula, li tista 'tkun dovuta għall-inkorporazzjoni tal-komposti li jinsabu fl-estratti fil-membrana tal-eritroċiti. L-għan tal-istudju preżenti kien li jiddetermina kif il-komposti li jinsabu fl-estratti ta 'UI.tomentosa jinkorporaw fil-membrana tal-eritroċiti umani. L-istudju vvaluta l-effett ta 'estratti milwiema u etanoliċi minn weraq u qoxra ta' U. tomentose fuq ir-reżistenza osmotika tal-eritroċiti tal-bniedem, il-viskożità tal-intern tal-eritroċiti, u l-fluwidità tal-membrana tal-plażma tal-eritroċiti. Umaneritroċitiġew inkubati bl-estratti studjati fil-konċentrazzjonijiet ta '100,250, u 500ug/mL għal 2,5, u 24 siegħa. L-estratti kollha ttestjati kkawżaw tnaqqis fil-fluwidità tal-membrana tal-eritroċiti u żieda fis-sensittività osmotika tal-eritroċiti. L-estratti etanoliċi mill-qoxra u l-weraq żiedu l-viskożità tal-eritroċiti. L-akbar bidliet fil-parametri studjati ġew osservati fiċ-ċelloli inkubati b'estratt etanoliku tal-qoxra. Aħna nqisu li l-komposti mill-estratt ta 'U. tomentosa prinċipalment jibnu fis-saff monosaff ta' barra, idrofiliku tal-membrana eritroċita, u b'hekk jipproteġu l-eritroċiti kontra l-effetti ħżiena ta 'stress ossidattiv.

Kliem ewlieni: eritroċiti; fluwidità tal-membrana; reżistenza osmotika; Uncaria tomentosa; estratti

Ikklikkja biex titgħallem aktar informazzjoni

1. Introduzzjoni

Uncaria tomentosaestrattihuma komunement użati biex jappoġġjaw it-trattament ta diversi mard minħabba tagħhomantiossidant[1-4] u attivitajiet immunostimulanti [5,6]. Intwera wkoll estratti minn U.tomentosa li juru attivitajiet kontra l-kanċer [7-9], antimutaġeniċi [10,11]u antierpetiċi [11].

Stħarriġ etnomediċinali u studji oħra wrew bosta applikazzjonijiet ta 'dan l-impjant fil-mediċina tradizzjonali ta' kulturi differenti, eż., it-trattament ta 'infjammazzjoni, artrite, ażżma, kanċer, ulċeri gastriċi, mard fl-apparat urinarju, u emorraġiji [12,13]. Proprjetajiet differenti bħal dawn huma dovuti għall-kompożizzjoni kimika kumplessa ta 'U. tomentosa li hija prinċipalment assoċjata ma' kontenut għoli ta 'diversi metaboliti sekondarji bijoloġikament attivi, l-aktar fenoliċi u alkalojdi [14].

Bosta karti indikaw ukoll l-azzjoni ta 'benefiċċju (mingħajr ebda effetti sekondarji) ta' estratti ta 'UI.tomentosa (użati f'dożaġġi terapewtiċi) fiċ-ċelloli tad-demm kemm fi studji in vivo[15,16] kif ukoll in vitro [17-19]. Sheng et al. [20] ma osserva l-ebda tibdil fil-preżentazzjoni tad-demm wara l-għoti ta' konċentrazzjonijiet għoljin ta' estratt ta' U. tomentosa C-MED-100TM lil voluntiera b'saħħithom. Ma osservaw l-ebda tibdil statistikament sinifikanti, inkluż il-livell tal-emoglobina, il-valur tal-ematokrit, u l-volum medju taċ-ċelluli ħomor tad-demm (RBC), li pjuttost eskludew eliminazzjoni prematura possibbli ta 'RBCs esposti għal estratti ta' U. tomentosa.

Bl-istess mod, provi kliniċi mmexxija minn Piscoya et al. [21] fuq pazjenti b'osteoartrite ta 'l-irkoppa, fir-rigward ta' l-evalwazzjoni ta 'l-effikaċja ta' Uncaria gujanensis fit-terapija ta 'din il-marda, ma wrew l-ebda tibdil fl-ematokrit, il-livell ta' l-emoglobina, kif ukoll il-valur tar-rata ta 'sedimentazzjoni ta' l-eritroċiti (ESR), meta mqabbel ma 'grupp ta’ pazjenti li qed jirċievu plaċebo. Madankollu, aktar studji fuq koorti umani akbar huma meħtieġa biex tiġi eskluża l-possibbiltà li jiġu eliminatieritroċitimiċ-ċirkolazzjoni tal-bnedmin esposti għall-ispeċi Uncaria. Studji preċedenti tagħna wrew li estratti etanoliċi u milwiema mill-weraq u l-qoxra ta 'U. tomentosa anke f'konċentrazzjoni għolja ħafna ta' 500 ug/mL ma kinux tossiċi għall-eritroċiti. Osservajna wkoll li l-estratti studjati ttaffi l-ossidazzjoni tal-emoglobina u l-perossidazzjoni tal-lipidi kif ukoll naqsu l-formazzjoni ta’ ROS u l-emolisi indotta minn tossikanti 24-diklorofenol (2,4-DCP)[17]. Barra minn hekk, sibna effett protettiv ta 'estratti ta' U. tomentosa fuq l-attività ta 'catalase fl-eritroċiti umani inkubati b'2,4-DCP u catechol [22].

Il-konċentrazzjoni fiżjoloġika tal-polifenoli tal-pjanti hija diffiċli biex tiġi vvalutata. Fil-letteratura, normalment, tingħata l-informazzjoni dwar dożi rakkomandati ta’ preparazzjonijiet jew il-konċentrazzjonijiet ta’ komposti ttestjati (għall-bnedmin 210-500 mg/jum jew għall-annimali 350-500 mg/kg massa tal-ġisem) [23,24 ].

Xi wħud mill-komposti huma assorbiti mingħajr ma jbiddlu l-forma tagħhom, filwaqt li oħrajn, speċjalment fil-forma ta 'glukosidi, waqt l-assorbiment huma mċaħħda mir-residwi kollha taz-zokkor jew parti minnhom. Il-flora intestinali tipparteċipa wkoll fit-trasformazzjoni tal-polifenoli tal-pjanti.

Il-biċċa l-kbira tad-doża assorbita titneħħa mill-ġisem permezz tal-awrina u l-ħmieġ. Huwa stmat li mhux aktar minn 10-20 fil-mija tad-doża inġerita ta' quercetin u isoflavones (genistein u daidzein) tiġi skoperta fil-plażma wara 1-3 sigħat ta' amministrazzjoni. Anthocyanins huma kkunsidrati li huma assorbiti b'mod inqas effiċjenti - l-assorbiment tagħhom huwa stmat għal 1-2 fil-mija tad-doża inizjali [25]

L-istress ossidattiv iseħħ meta l-livell ta 'ROS f'ċellula jegħleb liċ-ċellulaantiossidantsistema tad-difiża. Iċ-ċelluli ħomor tad-demm huma partikolarment suxxettibbli għal stress ossidattiv minħabba l-kontenut għoli ta 'aċidi grassi polyunsaturated preżenti fil-membrana tagħhom u l-awto-ossidazzjoni tal-emoglobina. Il-membrana eritroċita umana hija magħmula minn aċidi grassi saturati, aċidi grassi monoinsaturati, aċidi grassi polyunsaturated, u aċidi grassi polyunsaturated N-3 ta' katina twila [26]. L-aġenti ossidanti jibdlu l-ebusija tal-membrana, ibiddlu l-potenzjal tad-dipol tal-membrana u jikkawżaw il-formazzjoni ta 'kumplessi ta' spectrin-emoglobina [27]. Biex ilaħħqu mal-istress ossidattiv, l-eritroċiti huma mgħammra b'ċitoskeletru speċjalizzat li jipprovdi l-istabbiltà mekkanika u l-flessibilità meħtieġa biex jifilħu għall-forzi li jseħħu matul iċ-ċirkolazzjoni. Il-membrana ta' l-eritroċiti hija magħmula minn saff ta' lipidi, proteini transmembrana, u xibka filamentuża ta' proteini (bħal spectrin, F-actin, proteina 4.1, u dominju ta' proteini li jorbtu l-actin, adducin, tropomyosin, u tropomodulin) li jiffurmaw skeletru tal-membrana tul il-wiċċ ċitoplasmika kollu tal-membrana tagħhom [28]. ROS huma wkoll kapaċi li jinduċu eryptosis permezz ta 'bidliet fit-traslokazzjoni tal-fosfatidilserina tal-membrana (PS) [29]. L-istress ossidattiv jista 'jwassal ukoll għall-eżawriment tal-komponenti riduttivi ċellulari u jikkawża bidliet strutturali u funzjonali fil-membrana taċ-ċelluli ħomor tad-demm: degradazzjoni ta' fosfatidilserina u aċidu sijaliku, li huma l-komponenti ewlenin li jistabbilixxu l-ħlas negattiv fuq in-naħa ta 'barra tal-membrana [30].

Ġie ppruvat li l-polifenoli iżolati minn U.tomentosa juru proprjetajiet antiossidattivi qawwija ħafna. Diversi rapporti wrew li estratti milwiema u metanoliċi miksuba minn partijiet differenti ta 'U. tomentosa ipproteġu ċelluli mill-produzzjoni ta' radikali ħielsa u perossidazzjoni tal-lipidi in vitro, kif ukoll inibixxew il-ħsara tad-DNA indotta minn radikali ħielsa u l-mewt taċ-ċelluli [2,3,31]. Fl-istudju preċedenti tagħna, urejna wkoll li l-estratti ta 'UI.tomentosa taħt kundizzjonijiet fiżjoloġiċi pproteġu l-eritroċiti kontra l-formazzjoni ta' ROS u l-emolisi. Barra minn hekk, urejna li estratti etanoliċi minn .tomentosa wrew l-aktar effetti protettivi b'saħħithom [17].

Biex issir taf jekk il-komposti ttestjati jistgħux jippenetraw il-membrana (u f'liema fond jinsabu), ġiet evalwata l-fluwidità tal-membrana eritroċita. Ħafna fatturi fiżiċi u kimiċi jaffettwaw il-fluwidità tal-membrana[32,33]. L-aġenti kimiċi jinkludu ksenobijotiċi li jikkawżaw ossidazzjoni tal-lipidi u proteini u l-komposti li jinterkalizzaw

fil-membrana [34,35]. L-inkorporazzjoni ta 'komposti barranin fl-istruttura tal-membrana tista' tfixkel l-arranġament tal-elementi tagħha, li normalment tirriżulta f'bidla fil-fluwidità tal-membrana. Bidliet fil-fluwidità tal-membrana jistgħu jwasslu għal disfunzjoni tal-eritroċiti kif ukoll għal alterazzjonijiet fil-proprjetajiet reoloġiċi tal-eritroċiti [36]. Min-naħa l-oħra, is-sustanzi bi proprjetajiet antiossidanti li għandhom il-kapaċità li jippenetraw il-membrana jistgħu juru rwol protettiv lejn iċ-ċellula [37]. Għalhekk, biex jiġi ċċarat jekk il-komposti li jinsabu fl-estratti ta 'U.tomentosa jistgħux jibnu fil-fuljett tal-membrana ta' ġewwa jew/u ta 'barra, ivvalutajna alterazzjonijiet fil-fluwidità tal-membrana fil-livelli differenti tagħha kif ukoll evalwajna r-reżistenza osmotika u l-viskożità interna tal-eritroċiti. Aħna għażilna konċentrazzjonijiet relattivament għoljin (iżda mhux tossiċi kif muri fi studji preċedenti) tal-estratti ttestjati biex josservaw bidliet potenzjali fil-parametri studjati kif ukoll biex jiddeterminaw il-post tal-komponenti tal-estratt fil-membrana tal-eritroċiti.

2. Riżultati

2.1.Fluwidità tal-membrana

2.1.1. Ordni Parametru S

Wara 2 sigħat u 24 siegħa ta' inkubazzjoni tal-eritroċiti b'estratti milwiema u etanoliċi mill-qoxra u l-weraq, statistikament, ġew innutati bidliet sinifikanti fil-parametru tal-ordni S Il-Figura 1 turi l-valuri medji u tad-devjazzjoni standard għal erba' (2 sigħat inkubazzjoni) u ħamsa ( 24 h inkubazzjoni) esperimenti indipendenti. Wara 2 sigħat ta 'inkubazzjoni, l-estratti kollha studjati f'500ug/mL ikkawżaw żieda fil-parametru tal-ordni S fl-RBCs tal-bniedem. /mL tal-estratti kollha eżaminati.

2.1.2. Ħin ta' Korrelazzjoni TB u Ħin TC

Wara 2 sigħat ta 'inkubazzjoni, statistikament, ġew osservati bidliet sinifikanti għall-ħin ta' korrelazzjoni TB u ħin tc għall-eritroċiti ttrattati biss b'estratt etanoliku f'500ug/mL. Wara 24 siegħa ta 'inkubazzjoni, ma ġew osservati l-ebda bidliet statistikament sinifikanti fil-ħin u l-ħin Tc f'RBCs ittrattati bi kwalunkwe estratt ittestjat (Tabella 1).

2.2. Viskożità Interna taċ-Ċelloli Ħomor tad-Demm

Wara 2 sigħat u 24 siegħa ta 'inkubazzjoni ta' RBCs bl-ilma u estratti etanoliċi mill-qoxra u l-weraq fil-konċentrazzjonijiet ivarjaw minn 100 sa 500 ug / mL, ma ġew osservati l-ebda bidliet statistikament sinifikanti fil-viskożità relattiva tal-intern tal-eritroċiti (Figura 2) . Il-graffs juru l-valuri medji u ta 'devjazzjoni standard għal erba' (2 h) u ħames (24 h) esperimenti indipendenti.

Għandu jiġi nnutat li wara sagħtejn, u partikolarment wara 24 siegħa ta 'inkubazzjoni tal-eritroċiti b'estratti etanoliċi mill-qoxra, setgħet tiġi osservata tendenza lejn viskożità akbar tal-internum tal-eritroċiti (ir-riżultati ma kinux statistikament sinifikanti) (Figura 2) .

2.3. Fraġilità Osmotika

L-inkubazzjoni ta 'l-eritroċiti b'estratti milwiema u etanoliċi mill-qoxra u l-weraq f'konċentrazzjoni ta' 100 ug / L saret għal 2 h, 5 h, u 24 h. Id-dijagramma tar-reżistenza osmotika (Figura 3) tippreżenta r-riżultati medji għal 5 esperimenti indipendenti għal kull ħin ta 'inkubazzjoni. Għall-leġibbiltà taċ-ċart, ma ġewx ippjanati devjazzjonijiet standard. Il-plots IC5o (Figura 4) juru l-medja kkalkulata u l-valuri ta 'devjazzjoni standard għal 5 esperimenti indipendenti għal kull ħin ta' inkubazzjoni.

Wara 2 sigħat ta 'inkubazzjoni ta' l-eritroċiti bl-estratti ttestjati, ma ġew osservati l-ebda bidliet fis-sensittività osmotika ta 'dawn iċ-ċelloli, u għalhekk bidliet fil-valuri tal-parametri ICs0 (Figuri 3 u 4). Ġie nnutat ukoll li l-estratti ttestjati wara 5 sigħat ta 'inkubazzjoni żiedu s-sensittività osmotika tal-eritroċiti umani. Ħlief għall-estratt tal-weraq milwiema, l-estratti l-oħra ssensibilizzaw RBCs għal ħsara minn stress osmotiku. L-eritroċiti inkubati bl-estratti studjati għaddew minn emolisi f'konċentrazzjonijiet ogħla ta 'NaCl meta mqabbla mal-RBCs ta' kontroll (Figura 3). Żieda fil-valuri tal-parametri IC50 kienet ukoll statistikament sinifikanti għall-eritroċiti inkubati għal 5 sigħat b'estratti ta 'qoxra milwiema u etanolika u estratt tal-weraq etanoliku (Figura 4). Wara 24 siegħa ta’ inkubazzjoni, ġiet innutata sensittività akbar għall-istress osmotiku fl-eritroċiti ttrattati bl-estratti ttestjati kollha meta mqabbla mal-

kontroll RBCs (Figura 3). Bl-istess mod, ġiet innutata żieda statistikament sinifikanti fil-valuri ICs fl-eritroċiti inkubati bl-estratti studjati kollha minn U.tomentosa (Figura 4).

3. Diskussjoni

Studju preċedenti wera li estratti ta 'U.tomentosa biddlu l-morfoloġija ta' eritroċiti umani [19]. Instabet il-formazzjoni ta 'xistoċiti, li indikat l-inkorporazzjoni ta' komponenti ta 'estratti fil-monosaff ta' barra tal-membrana eritroċiti[38,39]. Studju ieħor wera li l-komposti li jinsabu fl-estratti ta 'U. tomentosa inibixxu t-tnixxija tal-emoglobina (emolisi) probabbilment billi jissiġillaw il-membrana taċ-ċellula [17]. Waħda mill-proprjetajiet tal-membrana bijoloġika, li tirriżulta mill-istruttura tagħha u l-interazzjoni bejn il-komponenti tagħha, hija l-fluwidità tal-membrana. Il-fluwidità tal-membrana hija inversament proporzjonali għall-viskożità tagħha.

Bl-użu ta 'spettroskopija ta' reżonanza paramanjetika (EPR), il-fluwidità tal-membrana eritroċita inkubata b'etanol u estratti milwiema mill-qoxra u l-weraq ġiet iddeterminata f'żewġ livelli tal-5 u 16-il atomu tal-karbonju tar-residwu tal-aċidu xaħmi.

Ibbażat fuq l-ispettri EPR miksuba għall-{0}}doxy-stearic acid spin tag (5-DSA), ġie kkalkulat il-parametru tal-ordni S, li ta informazzjoni dwar il-bidliet fil-fluwidità fil-livell ta '5 atomi tal-karbonju tar-residwu tal-aċidu xaħmi. Għall-parametru tal-ordni S, ġiet osservata żieda statistikament sinifikanti fil-valur tagħha wara l-inkubazzjoni tal-eritroċiti b'etanol u estratti tal-ilma mill-qoxra u l-weraq ta 'U. tomentosa, li wera.

tnaqqis fil-fluwidità tal-membrana fil-livell ta '5 atomi tal-karbonju ta' residwu ta 'aċidu xaħmi. Żieda statistikament sinifikanti fil-parametru S ġiet osservata wara 2-h inkubazzjoni ta 'eritroċiti b'estratti etanoliċi mill-qoxra kif ukoll ilma u estratt etanoliku mill-weraq f'250 ug/mL u 500 ug/mL, filwaqt li estratt ta' l-ilma minn il-qoxra biss f'500 ug/mL ikkawżat bidliet fil-parametru li jiddiskuti (Figura 1A). It-titwil tal-ħin ta 'inkubazzjoni sa 24 siegħa kkawża żieda statistikament sinifikanti fil-parametru S fl-eritroċiti inkubati bl-estratti studjati kollha li jibdew mill-konċentrazzjoni tagħhom ta' 250ug/mL (Figura 1B). It-tnaqqis fil-fluwidità tal-membrana fil-livell ta '5 atomi tal-karbonju ta' residwu ta 'aċidu xaħmi seta' kien marbut mal-effett tal-polifenoli fuq l-istruttura tal-membrana tal-plażma kif deskritt minn Duchnowicz et al.[40]. Ir-riċerka minn Koren et al.[37]implika effett ta 'benefiċċju tal-polifenoli fuq il-kapaċità antiossidant totali tad-demm, speċjalment tal-eritroċiti. Huma postulaw li l-eritroċiti li jiċċirkolaw u possibilment ċelloli tad-demm oħra jistgħu jkunu kontinwament miksija b'polifenoli minn nutrijenti supplimentati, li jaġixxu bħala depożiti antiossidanti, u b'hekk jistgħu jġibu ruħhom bħala protetturi kontra l-konsegwenzi dannużi tal-istress ossidattiv. Komposti polifenoliċi determinati f'U. tomentosa huma kklassifikati bħala metaboliti sekondarji li għandhom effett pożittiv fuq il-ġisem tal-bniedem. Huma juru attività antiossidanti, joni tal-metall kelat (ħadid, ram), u jappoġġjaw attivitajiet ta 'enzimi antiossidanti. L-effett protettiv tal-polifenoli fuq il-ġisem tal-bniedem huwa primarjament assoċjat mal-protezzjoni taċ-ċelluli kontra l-istress ossidattiv, li jista 'jkun assoċjat mal-prevenzjoni tal-iżvilupp ta' diversi mard, inkluż l-aterosklerożi jew il-kanċer [41,42]. Riċerka mwettqa minn Heitzman et al. [43] kif ukoll l-istudju tagħna[17] wera l-preżenza ta 'polifenoli fl-estratti ta' U.tomentosa. L-awturi, billi analizzaw diversi estratti, iddeterminaw l-ogħla kontenut ta 'polifenoli fl-estratt tal-etanol mill-qoxra u l-inqas fl-estratt milwiema mill-weraq. Komposti fenoliċi preżenti f'Ul. tomentosa huma l-aktar rappreżentati minn tannini, derivattivi tal-flavonol, katekini, tannini (inklużi catechins u epicatechins), u procyanidins. Il-polifenoli minħabba l-istruttura tagħhom għandhom solubilità fl-ilma differenti, iżda kollha jinħallu sew f'solventi organiċi. Għalhekk, estratti ta 'l-etanol minn pjanti normalment ikollhom kompożizzjoni aktar diversa u konċentrazzjoni ogħla ta' polifenoli minn estratti milwiema.

Fil-każ ta' 16-doxyl stearic acid spin tag (16-DSA), ġew determinati żewġ ħinijiet ta' korrelazzjoni T u tc. Wara inkubazzjoni ta 'eritroċiti għal 2 sigħat b'estratt ta' etanol mill-qoxra f'konċentrazzjoni ta '500 ug/mL, ġiet osservata żieda fil-ħin ta' korrelazzjoni tp u ħin Tc. Madankollu, l-ebda tibdil statistikament sinifikanti f'dawn il-parametri ma kien innutat wara 24 siegħa ta 'inkubazzjoni. Estratti oħra ttestjati ma kkawżawx bidliet statistikament sinifikanti fil-ħin ta 'korrelazzjoni tat-TB kemm wara 2 sigħat kif ukoll 24 siegħa ta' inkubazzjoni. Intwera xejra 'l fuq għal dan il-parametru f'eritroċiti inkubati (partikolarment għal 24 siegħa) bl-estratti kollha studjati f'500ug/mL (Tabella 1). Żieda fil-ħinijiet ta 'korrelazzjoni tB u tc tindika ebusija tal-film fil-livell ta' 16-il atomu tal-karbonju tar-residwu tal-aċidu xaħmi. Madankollu, l-ebda tibdil wara 24 siegħa ta 'inkubazzjoni jissuġġerixxi li dan huwa effett temporanju ikkawżat mill-komponenti tal-estratt, li inizjalment huma inkorporati fil-membrana, iżda wara żmien itwal ta' inkubazzjoni, jitneħħew barra ċ-ċellula. Tali effetti ta 'polifenoli ġew deskritti fl-istudju ta' Tarahovsky et al. [44]. Dawn l-awturi ssuġġerew li l-flavonoids ippenetraw is-sit idrofobiku tas-saff tal-lipidi, partikolarment fil-kompartimenti magħrufa bħala ċattri tal-lipidi, jew fil-bwiet tal-proteini idrofobiċi. Flavonoids wara kumplessi ma 'metalli, għad għandhom il-potenzjal antiossidattiv, filwaqt li l-lipofiliċità tagħhom tista' tiżdied, għalhekk tiffaċilita l-protezzjoni tal-lipidi tal-membrana kontra l-ossidazzjoni.

Nissuġġerixxu li l-polifenoli mill-estratt tal-qoxra ta 'U. tomentosa mhux biss ippenetraw livelli aktar profondi tal-membrana tal-eritroċiti iżda ġew ukoll trasferiti ġewwa ċ-ċellula, li kienet ikkonfermata miż-żieda fil-viskożità interna RBC. Wieħed mill-parametri ewlenin li jaffettwaw id-deformabbiltà tal-eritroċiti huwa l-viskożità interna tagħhom [45]. F'dan l-istudju, il-bidliet fil-viskożità ta 'l-eritroċiti ġew evalwati minn markaturi ta' spin. Ma kien hemm l-ebda tibdil statistikament sinifikanti fil-viskożità relattiva ta 'eritroċiti ttrattati b'estratti ta' l-ilma minn U.tomentosa kemm wara 2-h kif ukoll 24-h inkubazzjoni, filwaqt li estratti etanoliċi indoxxew bidliet fil-parametru ta 'diskussjoni (Figura2). Dan jista 'jindika li l-polifenoli li jinsabu f'ħafna

konċentrazzjonijiet ogħla fl-estratti etanoliċi ppenetraw b'mod intensiv il-membrana RBC u kkawżaw bidliet fil-viskożità tal-intern tal-eritroċit. Eritroċiti inkubati b'estratti ta 'l-ilma jistgħu faċilment jikkumpensaw għal bidliet fil-viskożità tagħhom, li kienu pprovokati minn konċentrazzjonijiet aktar baxxi ta' sustanzi polifenoliċi (Figura 6).

Għandu jiġi enfasizzat, madankollu, li l-post tal-polifenoli fis-saffi aktar profondi tal-membrana taċ-ċellula, u konsegwentement, il-penetrazzjoni tagħhom fiċ-ċellula b'disturb simultanju fil-viskożità RBC tista 'sseħħ biss f'konċentrazzjoni għolja ħafna ta' dawn is-sustanzi li ma jinstabux. fil-ġisem tal-bniedem anke wara trattament terapewtiku b'estratti ta 'U. tomentosa. F'konċentrazzjonijiet baxxi, il-polifenoli jinsabu prinċipalment fil-monosaff ta 'barra, kif muri minn bidliet fil-valur tal-parametru S. Alterazzjonijiet fil-viskożità tal-intern tal-eritroċiti jistgħu jkunu assoċjati ma' bidla fil-forma tal-eritroċiti. Dan kien indikat minn bidliet fil-parametru tal-kanal tat-tixrid 'il quddiem (FSC) miksub minn analiżi ċitometrika tal-fluss u ritratti miksuba minn eżami mikroskopiku b'kuntrast ta' fażi [19]. Il-formazzjoni ta 'xistoċiti tista' tirriżulta mit-tqegħid ta 'polifenoli preżenti fl-estratti ta' U.tomentosa kemm fir-reġjun idrofiliku kif ukoll fir-reġjun idrofobiku tal-monosaff tal-membrana taċ-ċellula ta 'barra, kif issuġġerit minn bidliet fil-parametru tal-ordni S u l-ħinijiet ta' korrelazzjoni tB u Tc. Bidliet fil-forma taċ-ċelluli ħomor tad-demm jistgħu jkunu assoċjati ma 'telf ta' ilma u ż-żieda tal-viskożità ġewwa ċ-ċelloli. Barra minn hekk, jistgħu jkunu dovuti għal tnaqqis fir-reżistenza osmotika tal-eritroċiti. It-tqegħid ta 'eritroċiti mibdula f'soluzzjoni isotonika ta' NaCl jista 'jwassal għal liżi taċ-ċelluli aktar mgħaġġla (meta mqabbla ma' ċelluli ta 'kontroll) minħabba l-effett miżjud tal-ilma u possibbiltà limitata ta' deformazzjoni tal-membrana tal-eritroċiti, u għalhekk bidliet fil-forma taċ-ċellula.

Ir-riżultati wrew li skond il-ħin ta 'inkubazzjoni, l-estratti minn U, tomentosa jista' jkollhom impatt differenti fuq il-fluwidità tal-membrana tal-plażma u r-reżistenza osmotika ta 'eritroċiti.

Ir-reżistenza osmotika ta 'eritroċiti hija parametru li jindika s-sensittività ta' RBCs għall-azzjoni ta 'ambjent ipotoniku. Bl-espożizzjoni tal-eritroċiti għall-ambjent iżotoniku, jista 'jiġi osservat moviment osmotiku żgħir tal-ilma fil-membrana taċ-ċellula, li ma jbiddilx il-volum u l-forma taċ-ċellula. Fil-każ ta 'ambjent ipotoniku, l-ilma jidħol fiċ-ċellula, li jikkawża li l-volum tagħha jiżdied, kif ukoll ibiddel il-forma minn diska b'żewġ konkavi għal forma ta' sfera. Iċ-ċelloli jistgħu jżidu l-volum tagħhom biss sa ċertu punt. Żieda ulterjuri fil-volum tirriżulta fi tfixkil tal-integrità tal-membrana taċ-ċelluli u rilaxx tal-kontenut taċ-ċelluli minn Ivsis osmotiku, Wara 2- siegħa ta 'inkubazzjoni ta' eritroċiti b'estratti minn U.tomentosa, l-ebda tibdil fis-sensittività osmotika ta 'RBCs (Figuri 3 u 4), kif ukoll bidliet fil-parametru IC50, ġew osservati. Madankollu, wara 24-h inkubazzjoni, ġiet osservata sensittività osmotika akbar ta 'eritroċiti u għalhekk ġiet innutata żieda fil-valur ICso kontra l-kontroll (Figuri 3 u 4). Ġew osservati effetti aktar b'saħħithom wara inkubazzjoni ta 'eritroċiti b'estratti ta' etanol meta mqabbla ma 'estratti milwiema. Dan probabbilment huwa dovut għall-fatt li l-estratti tal-etanol għandhom aktar komposti tal-polifenoli u tannini [17]. Bidliet simili (żieda fil-valur IC50) wara ħin itwal ta 'inkubazzjoni (90 min f'37 grad) ta' eritroċiti b'catechins ġew osservati minn Naparlo et al. [46]. Dawn l-awturi ssuġġerew li probabbilment waqt inkubazzjoni fit-tul, il-catechins huma meħuda mill-eritroċiti, li jistgħu jwasslu għal żieda fl-osmolarità ta 'ġewwa taċ-ċellula, u għalhekk emolisi aktar faċli f'soluzzjonijiet ipotoniċi minħabba differenza akbar fl-osmolarità bejn ġewwa u barra taċ-ċelluli. It-tieni spjegazzjoni għal bidliet bħal dawn kienet suġġeriment li l-catechins jiġġeneraw ROS waqt inkubazzjoni fit-tul, eż, perossidu tal-idroġenu, li jista 'jagħmel ħsara lill-membrana tal-eritroċiti u jżid il-fraġilità tagħha, inkluża fraġilità osmotika.

Il-lokazzjoni tal-komposti fil-livell ta '5 karbonju tal-katina tal-aċidu xaħmi tal-eritroċiti rriżultat f'sensittività osmotika miżjuda ta' dawn iċ-ċelloli (ċaqliq tal-kurvi tar-reżistenza osmotika lejn valuri ogħla ta 'konċentrazzjoni ta' NaCl, żieda fil-valuri IC50). Madankollu, f'esperimenti preċedenti mwettqa minn Bors et al. [17] taħt kundizzjonijiet iżotoniċi (0.9 fil-mija NaCl), l-estratti ta 'U.tomentosa inibixxu l-emolisi indotta minn tossiċi, bħal 2,4-DCP u catechol. Dawn ir-riċerkaturi wrew ukoll ir-rwol protettiv ta 'estratti ta' U. tomentosa kontra l-azzjoni ossidattiva ta '2,4-DCP fl-eritroċiti umani manifestati fit-tnaqqis tal-livelli ta' methemoglobin u ROS. Għalhekk, l-effett finali ta 'l-estratti fil-ġisem huwa probabbilment pożittiv. Fis-sistema in vivo, estratti minn U. tomentosa (f'konċentrazzjonijiet baxxi) jinkorporaw fil-membrana (mingħajr ma jfixklu l-istruttura tagħha) u juru proprjetajiet protettivi antiossidanti [12,47]. Ir-riżultati tal-istudji fuq il-firien kif ukoll fuq voluntiera b'saħħithom li ngħataw U.tomentosa ma wrew l-ebda tibdil fil-membrana taċ-ċelluli ħomor tad-demm jew bidliet oħra fl-eritroċiti, li eskludew il-possibbiltà ta 'tneħħija prematura ta' dawn iċ-ċelluli miċ-ċirkolazzjoni. 20,48].

Aħna nsostnu li l-irbit tal-polifenoli mal-wiċċ tal-eritroċiti jista 'jkun responsabbli għall-proprjetajiet protettivi tagħhom (osservati fi studji preċedenti). Il-polifenoli, li huma l-aktar spiss rappreżentati f'estratti minn U.tomentosa, jistgħu jinteraġixxu direttament ma 'membrani bijoloġiċi, u jaġixxu wkoll bħala kenniesa ta' radikali ħielsa u inibituri tal-perossidazzjoni tal-lipidi, u jżidu r-reżistenza taċ-ċelluli għall-ħsara ossidattiva. Dan kien ikkonfermat mill-aħħar riċerka li saret fuq membrani bijoattivi. Kim et al.[49] miżjud estratt U. tomentosa fil-proċess ta 'formulazzjoni tal-membrana alġinat nanostrutturat biex ittejjeb l-attivitajiet bijoloġiċi tagħha. L-awturi wrew li l-membrana li fiha komponenti minn U. tomentosa kellha attività antiossidant eċċellenti, li turi kważi 100 fil-mija tal-kapaċità ta 'tnaqqis ta' radikali ħielsa fi 15-il minuta.

Il-limitazzjoni ta 'dan l-istudju hija nuqqas ta' evalwazzjoni tal-effett tal-estratti ttestjati fuq il-kompożizzjoni tal-aċidu xaħmi fil-membrana tal-eritroċiti. Il-membrana eritroċita umana hija magħmula minn aċidi grassi saturati (palmitiku, stearic), aċidi grassi monoinsaturati (palmitoleic, vaccenic, cis-oleic, trans-oleic), polyunsaturated fatty acids (cis-linoleic, transinoleic, linolenic, eicosanoid, eicosatrienoic, eicosatrienoic) , u aċidi grassi polyunsaturated N-3 ta' katina twila (eicosapentaenoic, docosahexaenoic).

Madankollu, f'dan l-istudju, l-estratti ġew applikati għal eritroċiti miksuba minn donaturi b'saħħithom. Għalhekk, wieħed jista' jassumi li l-kompożizzjoni tal-lipidi tal-membrana tal-eritroċiti hija tipika għal ċelloli normali [26]. Peress li l-eritroċiti maturi umani m'għandhomx nukleu, ma jissintetizzawx komponenti ċellulari, inklużi l-aċidi grassi. Għal din ir-raġuni, il-kompożizzjoni tal-lipidi m'għandhiex tinbidel għall-kuntrarju ta' studji in vivo: f'karċinoma taċ-ċelluli squamous tal-ġilda [26] jew waqt is-supplimentazzjoni [50,51]. Il-proċess flip-flop, l-ossidazzjoni tal-lipidi, il-bidla tal-interazzjonijiet fl-oqsma tal-lipidi, u d-distribuzzjoni tagħhom huma possibbli, iżda peress li l-bijosintesi tal-lipidi fl-eritroċiti ma sseħħx, il-kompożizzjoni kwalitattiva u kwantitattiva tal-lipidi tal-membrana tal-eritroċiti taħt l-influwenza ta 'estratti ttestjati miżjuda in vitro huwa improbabbli ħafna li jseħħ.

Fil-qosor, l-estratti ta 'U. tomentosa huma prinċipalment inkorporati temporanjament fil-membrana, u eżattament fil-monosaff ta' barra tagħha. Madankollu, f'konċentrazzjonijiet għoljin ħafna, jistgħu jippenetraw aktar fil-fond fil-membrana u fl-aħħar mill-aħħar ibiddlu l-viskożità tal-eritroċiti. Ibbażat fuq ir-riżultati miksuba kif ukoll id-dejta tal-letteratura, aħna nikkunsidraw li konċentrazzjonijiet fiżjoloġiċi baxxi tal-komposti li jinsabu fl-estratti minn U.tomentosa se jkunu fil-monosaff ta 'barra tal-membrana taċ-ċellula u se jipproteġu l-eritroċiti kontra stress ossidattiv u ħsara.

4. Materjali u Metodi

4.1. Kimiċi

5-Aċidu doxylstearic (5-DSA),16-aċidu doxylstearic (16-DSA),4-idrossi-2,2,6,{{ 8}}tetramethyl piperidine-1-oxyl(TEMPOL)inxtraw minn Sigma-Aldrich, Saint Louis, MI, USA. Kimiċi oħra nkisbu minn Roth, Karlsruhe, il-Ġermanja, u Avantor Performance Materials Poland, Gliwice, Polonja.

4.2.Materjal Bijoloġiku

4.2.1.Impjant

Il-materja prima (qoxra u weraq) ta' U. fomentosa oriġinat mill-Instituto Peruano de Investigaciones Fitoterapia Andina f'Lima, il-Peru, ġiet ġentilment fornuta minn Wilcaccora

Lomianki Centre, il-Polonja. Il-karatteristiċi ġenerali ta 'dan il-materjal kienu deskritti qabel minn Pilarski et al. [3].

Il-materjali tal-vawċer ġew depożitati fil-Laboratorju tal-Fitokimika, Istitut tal-Kimika Bijoorganika, Akkademja tax-Xjenzi Pollakka, Poznan, il-Polonja.

Preparazzjoni tal-kampjuni: gramma waħda tal-materja prima (qoxra u weraq) ta 'U.tomentosa ġiet estratta b'volum ta' 10 mL ta 'ilma jew 96 fil-mija etanol f'37 grad għal 8 sigħat. Imbagħad, l-estratti ġew ċentrifugati f'4000 rpm għal 15-il minuta. Is-supernatanti ġew evaporati b'Speed-Vac għal massa niexfa, u mbagħad imnixxfa b'P2O5. F'dawn il-kundizzjonijiet, madwar 111 mg ta 'preparazzjoni għal kull gramma ta' qoxra u madwar 158 mg ta 'preparazzjoni għal kull gramma ta' weraq fil-każ ta 'estrazzjoni milwiema kienu koperti. Waqt l-estrazzjoni b'96 fil-mija etanol, inkisbu 123 mg ta 'preparazzjoni għal kull gramma ta' qoxra u 158 mg ta 'preparazzjoni għal kull gramma ta' weraq. Erba 'estratti nkisbu, jiġifieri, estratt etanoliku mill-qoxra (Bet), estratt milwiema mill-qoxra (Borra), estratt etanoliku mill-weraq (Ħalli), estratt milwiema mill-weraq (Lag). Preparazzjonijiet trab ġew maħżuna fi friġġ f'kontenituri magħluqa sewwa, li minnhom ġew ippreparati soluzzjonijiet tal-istokk għal kull esperiment [19].

Il-kompożizzjoni kwalitattiva u kwantitattiva ta 'alkalojdi oxindole li jinsabu fl-estratti ta' U. tomentosa ġiet determinata permezz ta 'analiżi tal-marki tas-swaba' HPLC. Il-karatteristiċi ġenerali tal-alkalojdi kwantitattivi ta 'dan il-materjal ġew deskritti qabel minna fil-pubblikazzjoni ta' Bors et al. [18].

Uncarine F, speciophylline, mitraphylline, pteropodine/isomitraphylline, u isopteropo-dine ġew skoperti f'estratti ta 'U.tomentosa. Mitraphylline u pteropodine/isomitraphylline huma alkalojdi, li huma dominanti fl-estratti tal-weraq, filwaqt li pteropodine/isomitraphylline huma dominanti fl-estratti tal-qoxra. Estratti etanoliċi kienu kkaratterizzati minn kontenut ta 'alkalojdi ogħla minn estratti milwiema (Figura 5).

Il-karatteristiċi ġenerali tad-determinazzjoni kwantitattiva tal-polifenoli fl-estratti ta 'U. tomentosa ġew deskritti qabel minna [17]. L-analiżi HPLC/DAD wriet li estratti etanoliċi u akwei tal-qoxra kien fihom prinċipalment Procyanidin B2 u C1 kif ukoll (-)-epicatechin. Id-derivattivi tal-aċidu kaffejku ġew determinati biss f'estratti milwiema mill-weraq, filwaqt li l-aċidu kloroġeniku, il-flavonoli u l-proanthocyanidins polimeriċi kienu jinsabu fl-estratti kollha studjati. L-ogħla konċentrazzjonijiet totali ta 'fenoli ħielsa ġew determinati fl-estratti etanoliċi mill-qoxra. Il-kontenut għoli ta 'komposti fenoliċi ġie skopert ukoll fl-estratt etanoliku mill-weraq, filwaqt li nstabet konċentrazzjoni fenolika aktar baxxa f'estratt milwiema mill-qoxra u estratti etanoliċi mill-weraq (Figura 6).

Fl-aħħarnett, l-estratti kollha ġew maħlula f'dimethyl sulfoxide (DMSO). Is-soluzzjoni miksuba ġiet miżjuda f'volum żgħir ta '1 μL sa 1 mL ta' sospensjoni ta 'eritroċiti (il-konċentrazzjoni ta' DMSO ma influwenzatx il-membrana taċ-ċellula). L-eritroċiti supplimentati biss b'DMSO intużaw bħala kontrolli.

4.2.2.Iżolament ta 'Eritroċiti

Kisja lewkoċita-buffy inkisbet minn demm miġbur fil-Bank tad-Demm f’Lodz, il-Polonja. Il-lewcocyte-buffy coat ġiet ċentrifugata (3000 rpm għal 10 min fi 4 gradi) u maħsula darbtejn b'salina buffered bil-fosfat (pH 7.4).

Eritroċiti iżolati sospiżi fil-PBS ġew inkubati għal 2, 5, u 24 siegħa b'erba 'tipi ta' estratti (estratti etanoliċi u akwei mill-qoxra u estratti etanoliċi u milwiema mill-weraq) f'konċentrazzjonijiet ta '100 ug/mL, 250 ug/mL u 500 ug / mL Studji preċedenti wrew li l-estratti studjati f'dawn il-konċentrazzjonijiet ma kkawżawx ħsara lill-eritroċiti, filwaqt li wrew effett protettiv fuq RBCs [17,19,22].

4.3. Fluwidità tal-membrana

Il-fluwidità tal-membrana tal-eritroċiti ġiet iddeterminata permezz ta' spettroskopija ta' reżonanza paramanjetika tal-elettroni (EPR)(Brucker 300 Spectrometer, il-Ġermanja) bl-użu ta' 5-doxylstearic acid (5-DSA) u 16-doxylstearic acid ( 16-DSA)spin tikketti. Mill-ispettri EPR miksuba għat-tikketta spin 5-DSA, ġie kkalkulat il-parametru tal-ordni S. Il-ħinijiet ta' korrelazzjoni TB u TC ġew ikkalkulati mill-ispettri tal-EPR miksuba għat-tikketta spin 16-DSA. Il-parametru tal-ordni Sas kif ukoll il-ħinijiet ta 'korrelazzjoni TB u tc juru l-korrelazzjoni inversa mal-fluwidità tal-membrana. Il-parametru tal-ordni S u l-ħinijiet ta 'korrelazzjoni tB u tc ġew ikkalkulati kif deskritt fl-istudju ta' Koter et al. [52].

4.4.Viskożità Interna taċ-Ċelloli Ħomor tad-Demm

It-tikketta spin TEMPOL intużat biex tiddetermina l-viskożità interna tal-eritroċiti [53]. Soluzzjoni TEMPOL (20 mM) maħlula f'buffered saline (PBS) ġiet miżjuda mas-sospensjoni ta 'eritroċiti b'50 fil-mija ematokrit. Wara 30-min inkubazzjoni, l-eritroċiti ġew maħsula tliet darbiet b'80 mM K3Fe(CN6 soluzzjoni biex jitnaqqas is-sinjal mill-ispin-label li jinsab fl-ispazju interċellulari. Ibbażat fuq l-ispettru miksub għal TEMPOL fl-ilma u fl-eritroċiti , il-ħin ta 'korrelazzjoni rotazzjonali ġie determinat skond il-formula:

-(2)"-1

(1)

fejn: k—kostanti għat-tikketta tal-ispin tan-nitrossidu, k=6.5×10-9s mT-l, ho—l-għoli tal-linja ċentrali, h_1—għoli tal-għoli- linja tal-qasam, Wo—wisa 'tal-linja ċentrali.

Il-viskożità relattiva ġiet iddeterminata mill-formula:

TR

_C

(2)"1 B

fejn: TR-ħin ta 'korrelazzjoni rotazzjonali tal-markatur fl-eritroċiti, TB-ħin ta' korrelazzjoni rotazzjonali tal-markatur fil-PBS, c-viskożità interna ta 'eritroċiti, 1B-viskożità PBS (valur 1 kien preżunt).

4.5. Fraġilità Osmotika

Wara l-inkubazzjoni tal-eritroċiti b'estratti minn U. tomentosa, iċ-ċelloli ġew ċentrifugati fi 3000rpm għal 10min f'4 gradi. Iċ-ċelloli mbagħad ġew maħsula b'soluzzjoni ta '0.9 fil-mija NaCl. Dan il-pass ġie ripetut darbtejn. Wara li tneħħi s-supernatant, RBCs ġew sospiżi f'soluzzjoni ta 'NaCl fil-medda ta' konċentrazzjoni minn 0.2 sa 0.9 fil-mija (15-il punt ġew magħżula). Iċ-ċelloli ġew inkubati għal 30 min f'37 grad u mbagħad ċentrifugati f'3000 rpm għal 10 min f'4 gradi C. Id-densità ottika tas-supernatant ġiet imkejla f'540 nm (Adobe) bl-użu ta 'qarrej ta' assorbiment tal-mikroplate (BioTek Elx808, BIOTEK).

L-emolisi f'kull tubu ġiet espressa bħala persentaġġ, filwaqt li l-emolisi f'ilma distillat bħala 100 fil-mija (A100 fil-mija):

×100 (3)

Perċentwal tal-emolisi (perċentwali o)= Aole

A100

4.6. Analiżi Statistika

Ir-riżultati ġew ippreżentati bħala medja ± SD miksuba minn 4 sa 6 esperimenti individwali (4-6 donaturi tad-demm), filwaqt li għal kull individwu (donatur), il-punt sperimentali kien valur medju ta' 2-3 repliki. Paraguni multipli bejn il-gruppi differenzi medji ġew analizzati b'analiżi one-way ta 'varjanza (ANOVA) segwit minn test Tukey post hoc. Id-differenzi tqiesu statistikament sinifikanti għal p<0.05. all="" statistical="" analyses="" were="" performed="" using="" statistica="" software(statsoft,="" inc,="" tulsa,="" va,="">

Referenzi

1. de Azevedo, QK; Roxo, M.; Borges, MC; Peixoto, H.; Crevelin, EJ; Bertoni, BW; Contini, SH; Lopes, AA; Franza, SC; Pereira, AM; et al. Attività Antiossidanti ta 'Estratt ta' Weraq Aqueous minn Uncaria tomentosa u l-Alkalojdi Maġġuri tagħha Mitra phylline u Isomitraphylline f'Caenorhabditis elegans. Molekuli 2019, 24, 3299. [CrossRef]

2. Navarro, M.; Arnaez, E.; Moreira, I.; Hurtado, A.; Monge, D.; Monagas, M. Kompożizzjoni Polifenolika u Attività Antiossidanti ta 'Prodotti tal-Qoxra Kummerċjali Uncaria tomentosa. Antiossidanti 2019, 8, 339. [CrossRef]

3. Pilarski, R.; Zieli ´nski, H.; Ciesiołka, D.; Gulewicz, K. Attività antiossidanti ta 'estratti etanoliċi u milwiema ta' Uncaria tomentosa (Willd.) DC. J. Ethnopharmacol. 2006, 104, 18–23. [CrossRef]

4. Santo, GD; Grotta, A.; Boligon, AA; Da Costa, B.; Rambo, CL; Fantini, EA; Sauer, E.; Lazzarotto, LMV; Bertoncello, KT; Junior, OT; et al. Effett protettiv ta 'l-estratt ta' Uncaria tomentosa kontra stress ossidattiv u ġenotossiċità indotta minn glyphosate Roundup bl-użu ta 'zebrafish (Danio rerio) bħala mudell. Environ. Sci. Tniġġes. Riż. Int. 2018, 25, 11703–11715. [CrossRef]

5. Allen-Hall, L.; Arnason, JT; Cano, P.; Lafrenie, RM Uncaria tomentosa jaġixxi bħala inibitur qawwi ta 'TNF-alfa permezz ta' NF-kappaB. J. Ethnopharmacol. 2010, 127, 685–693. [CrossRef]

6. Elgawish, RA; Abdelrazek, HMA; Ismail, SAA; Loutfy, NM; Soliman, MTA Attività epatoprotettiva ta 'estratt ta' Uncaria tomentosa kontra espożizzjoni sub-kronika għal fipronil fil-firien maskili. Environ. Sci. Tniġġes. Riż. Int. 2019, 26, 199–207. [CrossRef]

7. Ciani, F.; Tafuri, S.; Troiano, A.; Cimmino, A.; Fioretto, BS; Guarino, AM; Pulizija, A.; Vivo, M.; Evidenti, A.; Carotenuto, D.; et al. Effetti anti-proliferattivi u pro-apoptotiċi tal-estratt milwiema ta 'Uncaria tomentosa fiċ-ċelloli tal-karċinoma squamous. J. Ethnopharmacol. 2018, 211, 285–294. [CrossRef]

8. Zari, A.; Alfarteesh, H.; Buckner, C.; Lafreniere, RM Trattament b'Uncaria tomentosa Tippromwovi l-Apoptożi fiċ-Ċelloli B16-BL6 tal-Melanoma tal-Ġurdien u Inibixxi t-Tkabbir ta' Tumuri B{16-BL6. Molekuli 2021, 26, 1066. [CrossRef] [PubMed]

9. Ko´smider, A.; Czepielewska, E.; Kura's, M.; Gulewicz, K.; Pietrzak, W.; Nowak, R.; Nowicka, G. Uncaria tomentosa Weraq Decoction Modula Differenti Produzzjoni ta 'ROS fil-Kanċer u Ċelloli Normali u Effetti Ċitotossiċità ta' Cisplatin. Molekuli 2017, 22, 620. [CrossRef] [PubMed]

10. Almeida, IV; Soares, LC; Lucio, FT; Cantagalli, LB; Użu mill-ġdid, AF; Vicentini, VEP Effetti kimoterapewtiċi tal-mediċina erbali Uncaria tomentosa (Willd.) DC. Genet. Mol. Riż. 2017, 16. [CrossRef] [PubMed]

11. Caon, T.; Kaiser, S.; Feltrin, C.; de Carvalho, A.; Sincero, TCM; Ortega, GG; Simões, CMO Attivitajiet antimutaġeniċi u antierpetiċi ta' preparazzjonijiet differenti minn Uncaria tomentosa (irkuprar tal-qtates). Chem tal-Ikel. Tossikol. 2014, 66, 30–35. [CrossRef] [PubMed]

12. Batiha, GE-S.; Magdy Beshbishy, ​​A.; Wasef, L.; Elewa, YHA; Abd El-Hack, ME; Taha, AE; Al-Sagheer, AA; Devkota, HP; Tufarelli, V. Uncaria tomentosa (Willd. ex Schult.) DC.: Reviżjoni dwar Kostitwenti Kimiċi u Attivitajiet Bijoloġiċi. Appl. Sci. 2020, 10, 2668. [CrossRef]

13. Santos Araújo, MdC; Farias, IL; Gutierres, J.; Dalmora, SL; Flores, N.; Farias, J.; de Cruz, I.; Chiesa, J.; Morsch, VM; Chitolina Schetinger, MR Uncaria tomentosa-Trattament Adjuvant għall-Kanċer tas-Sider: Prova Klinika. Evid. Komplement Ibbażat. Alternat. Med. 2012, 2012, 676984. [CrossRef]

14. Navarro Hoyos, M.; Sánchez-Patán, F.; Murillo Masis, R.; Martín-Álvarez, PJ; Zamora Ramirez, W.; Monagas, MJ; Bartolomé, B. Assessjar Fenoliku ta 'Uncaria tomentosa L. (Cat's Claw): Weraq, Zokk, Qoxra u Estratti tal-Injam. Molekuli 2015, 20, 22703–22717. [CrossRef]

15. Farias, I.; do Carmo Araújo, M.; Zimmermann, ES; Dalmora, SL; Benedetti, AL; Alvarez-Silva, M.; Asbahr, ACC; Bertol, G.; Farias, J.; Schetinger, MRC Uncaria tomentosa jistimula l-proliferazzjoni ta 'ċelluli proġenitriċi majelojdi. J. Ethnopharmacol. 2011, 137, 856–863. [CrossRef] [PubMed]

16. Yunis-Aguinaga, J.; Claudiano, GS; Marcusso, PF; Manrique, WG; de Moraes, JRE; de Moraes, FR; Fernandes, JBK Uncaria tomentosa iżid it-tkabbir u l-attività immuni f'Oreochromis niloticus ikkontestat bi Streptococcus agalactiae. Ħut. Shellfish Immunol. 2015, 47, 630–638. [CrossRef] [PubMed]

17. Bors, M.; Bukowska, B.; Pilarski, R.; Gulewicz, K.; Oszmia ´nski, J.; Michałowicz, J.; Koter-Michalak, M. Attività protettiva ta 'l-estratti ta' Uncaria tomentosa fuq eritroċiti umani fi stress ossidattiv indott minn 2,4-dichlorophenol (2,4-DCP) u catechol. Chem tal-Ikel. Tossikol. 2011, 49, 2202–2211. [CrossRef]

18. Bors, M.; Michałowicz, J.; Pilarski, R.; Sici ´nska, P.; Gulewicz, K.; Bukowska, B. Studji ta 'proprjetajiet bijoloġiċi ta' estratti ta 'Uncaria tomentosa fuq ċelluli mononukleari tad-demm uman. J. Ethnopharmacol. 2012, 142, 669–678. [CrossRef]

19. Bors, M.; Sici ´nska, P.; Michałowicz, J.; Wieteska, P.; Gulewicz, K.; Bukowska, B. Evalwazzjoni ta 'l-effett ta' estratti ta 'Uncaria tomentosa fuq id-daqs u l-għamla ta' eritroċiti umani (in vitro). Environ. Tossikol. Pharmacol. 2012, 33, 127–134. [CrossRef] [PubMed]