Botryllus Schlosseri Bħala Mudell Uniku ta' Chordate Kolonjali Għall-Istudju U l-Modulazzjoni Ta' Attività Immuni Innata

Astratt:

Il-fehim tal-mekkaniżmi li jsostnu n-nuqqas ta 'reattività immunoloġika huwa essenzjali għaż-żamma tat-tessut f'ambjenti sinġeniċi u alloġeniċi, bħat-trapjant u t-tolleranza tat-tqala. Filwaqt li l-biċċa l-kbira tar-rifjuti tat-trapjant iseħħu minħabba r-rispons immuni adattiv, ir-rispons proinfjammatorju tal-immunità intrinsika huwa meħtieġ għall-attivazzjoni tal-immunità adattiva. Botryllus schlosseri, tunikat kolonjali, li huwa l-eqreb grupp ta 'invertebrati għall-vertebrati, huwa nieqes minn immunità adattiva bbażata fuq iċ-ċelluli T u B. Għandu karatteristiċi uniċi li jagħmluha sistema mudell ta' valur għall-istudju tal-mekkaniżmi ta' immunità intrinsika: (i) fenomenu naturali ta' trapjant alloġeniku li jirriżulta jew f'fużjoni jew rifjut; (ii) riġenerazzjoni ta' annimali sħaħ u assorbiment mill-ġdid mhux infjammatorju kull ġimgħa; (iii) assorbiment mill-ġdid alloġeniku li huwa komparabbli mar-rifjut kroniku tal-bniedem.

Studji reċenti f'B. schlosseri wasslu għar-rikonoxximent ta 'qafas molekulari u ċellulari sottostanti t-telf ta' immunità intrinsika ta 'tolleranza għal tessuti alloġeniċi. Barra minn hekk, B. schlosseri ġie żviluppat bħala mudell għall-istudju tat-trapjant taċ-ċelluli staminali ematopojetiċi (HSC), u jipprovdi aktar għarfien dwar ix-xebh bejn in-niċeċ HSC tal-bnedmin u B. schlosseri. F'din ir-reviżjoni, niddiskutu għaliex l-istudju tal-mogħdijiet molekulari u ċellulari li jidderieġu t-tolleranza immuni intrinsika b'suċċess f'B. schlosseri jistgħu jipprovdu għarfien ġdid u modulazzjonijiet potenzjali ta 'dawn il-proċessi immuni fil-bnedmin.

L-immunità hija relatata mill-qrib ma' mekkaniżmi ta' nuqqas ta' rispons. Il-mekkaniżmu ta 'nuqqas ta' rispons huwa mezz importanti biex tinżamm l-istabbiltà tal-ambjent intern u estern tal-ġisem tal-bniedem, u huwa wkoll fattur importanti biex tiġi żgurata l-liġi tal-ħajja normali tal-ġisem. Mingħajr l-eżistenza ta 'mekkaniżmi ta' nuqqas ta 'rispons, il-funzjoni tal-immunità titnaqqas ħafna.

Pereżempju, l-istratum corneum u l-membrana mukus fuq il-wiċċ tal-ġisem huma estremament importanti għad-difiża ta 'mikro-organiżmi patoġeniċi esterni, li huma parti mill-immunità innata tal-ġisem tal-bniedem. Mingħajr mekkaniżmu bħal dan, tkun kemm tkun b'saħħitha s-sistema immuni tal-bniedem, ikun diffiċli li tinkiseb reżistenza effettiva għall-mard. Għandna wkoll nagħtu attenzjoni għat-titjib tal-immunità fil-ħajja ta 'kuljum. Fir-riċerka tagħna, sibna li Cistanche jista 'jtejjeb l-immunità. Cistanche fih varjetà ta 'komponenti bijoloġikament attivi, bħal polisakkaridi, żewġ faqqiegħ, Huang Li, eċċ Dawn l-ingredjenti jistgħu jistimulaw diversi ċelloli tas-sistema immuni u jżidu l-attività immuni tagħhom.

Ikklikkja meta tieħu cistanche

Kliem ewlieni:

tolleranza immuni; alloko-rikonoxximent; trapjant ta' ċelluli staminali; Botryllus schlosseri; tunikati; immunità innata; rifjut immuni; modulazzjoni immuni.

1. Introduzzjoni

L-istudju tal-mekkaniżmi immunoloġiċi li jippermettu lill-annimali jirriġeneraw u jagħrfu t-tessuti alloġeniċi huwa karatteristika importanti fil-qasam tat-trapjant. Fil-vertebrati, iċ-ċelluli T huma ċ-ċelluli effettivi prinċipali tas-sistema immuni adattiva għal mhux awto-rikonoxximent. Interessanti, iċ-ċelloli intrinsiċi huma attivati ​​minn sinjali infjammatorji rilaxxati minn ċelloli bil-ħsara jew stressati li jirriżultaw minn trapjant alloġeniku; din l-immunità intrinsika hija meħtieġa għall-attivazzjoni taċ-ċelluli T u r-rispons ta 'rifjut konkomitanti [1,2].

Pereżempju, wara t-trapjant tal-HSC, l-iperattivazzjoni taċ-ċelluli naturali killer (NK) tirriżulta fi produzzjoni medjata minn ċelluli NK ta’ sinjali proinfjammatorji li jinduċu u jsostnu r-rispons tal-marda tal-graft-versus-host (GVHD) medjat minn ċelluli T [3,4] ]. L-immunità innata għandha wkoll rwol importanti fit-tolleranza tat-tessuti tal-embrijuni waqt it-tqala. F'dan il-każ, ir-risponsi intrinsiċi huma assoċjati ħafna ma 'disturbi tat-tqala bħal telf ta' tqala rikorrenti, twelid qabel iż-żmien, u preeclampsia [5-11].

Biex nistudjaw il-mekkaniżmi ċellulari u molekulari li jiggwidaw is-sistemi immuni intrinsiċi għat-tolleranza jew ir-rifjut, aħna nirrevedu l-idea li nistudjaw mudell emerġenti ta 'kordat kolonjali, Botryllus schlosseri. B. schlosseri ġie studjat għal għexieren ta' snin u għandu fenomeni naturali interessanti ħafna li huma bbażati fuq risponsi immuni intrinsiċi, minn trapjant naturali jew rifjut għal tneħħija taċ-ċelluli tal-programm sinkronizzat u riġenerazzjoni tal-ġisem kollu. Dan l-organiżmu huwa tunikat; hija parti mill-eqreb grupp oħt għall-vertebrati, u hija nieqsa minn immunità adattiva bbażata fuq il-limfoċiti [12–14]. Dan jippermetti l-istudju tal-mekkaniżmi ċellulari u molekulari li jidderieġu r-rifjut tat-tolleranza u r-riġenerazzjoni f'sistema li m'għandhiex immunità medjata miċ-ċelluli T u B.

F'dawn l-aħħar għaxar snin, ġew miżjuda għodod u avvanzi ġodda mal-mudell ta 'B. schlosseri, mill-proġett tal-ġenoma [15] u settijiet ta' ġeni ta 'fenomeni immunoloġiċi differenti għall-iżolament ta' ċelloli immuni u trapjant HSC [16,17]. Il-ġenoma ta 'B. schlosseri (~ 600 Mbp) kien sekwenzat u annotat bis-sħiħ fl-2013 [15], u sab li ħafna ġeni li jikkodifikaw il-proteini jaqsmu omoloġija sinifikanti ma' mill-inqas 75 fil-mija tal-ġeni umani [15]. F'din ir-reviżjoni, aħna nispjegaw il-fenomeni naturali differenti bbażati fuq l-immunità intrinsika f'B. schlosseri u kif jirrelataw mal-proċessi tal-mammiferi. Barra minn hekk, aħna nirrevedu l-għodod u s-settijiet tal-ġeni disponibbli biex nistudjaw il-livelli ċellulari u molekulari ta 'dawk il-fenomeni immunoloġiċi in vivo u in vitro bl-użu ta' dan l-organiżmu mudell uniku.

Botryllus schlosseri

B. schlosseri huwa tunikat kolonjali marittimu invażiv mill-phylum Chordata, li issa jista 'jinstab mad-dinja kollha [18,19]. It-tunikati ngħataw l-isem għall-istruttura ġelatina tat-“tunika” li tkopri ġisimhom u ġiet proposta minn Charles Darwin bħala ħjiel fundamentali fl-evoluzzjoni tal-vertebrati [20]; tabilħaqq, studji tal-filoġenetika molekulari sabu li huma l-eqreb qraba invertebrati ħajjin tal-vertebrati [21,22].

B. schlosseri jista' jirriproduċi jew sesswalment jew b'mod asesswali [23,24]. Wara l-fertilizzazzjoni, serje ta 'stadji klassiċi ta' żvilupp embrijoniku fuq 6 ijiem tirriżulta f'larva tad-dpole konċepita fil-mogħdija sesswali [23]. Dan l-istadju tal-larva huwa ħjiel ewlieni li jirrifletti r-relazzjoni mill-qrib mal-vertebrati, peress li fih karatteristiċi bħal denb, notokorda, tubu newrali u muskolatura strijata (Figura 1A) [15,22,23,25]. Il-larva tal-għawm toqgħod fuq sottostrat fi żmien ftit sigħat wara t-tfaqqis u timmetamorfożi f’sessili mimli bi pjan tal-ġisem li jixbah lil invertebrati (Figura 1B), li jibda proċess blastoġeniku ċikliku li jirriżulta fil-formazzjoni ta’ kolonja ta’ zooids ġenetikament identiċi u blanzuni [23,26].

Iċ-ċiklu ta 'jibża' jieħu 7 ijiem u jibda bi blanzuni sekondarji li jinbidlu fi blanzuni primarji li, fl-aħħar taċ-ċiklu, jissostitwixxu l-ġenerazzjoni preċedenti ta' zooids, li ċ-ċelluli tagħhom imutu permezz ta 'mewt taċ-ċelluli programmata u jitneħħew permezz ta' tneħħija programmata taċ-ċelluli (Figura 1C). 17,23,27–29]. Dan il-proċess ta 'budding ċikliku huwa medjat minn ċelloli staminali, li jsostnu l-organiżmu tul il-ħajja tiegħu u huma responsabbli għall-organoġenesi fiċ-ċiklu ta' riproduzzjoni asesswali u gametoġenesi fil-mogħdija tar-riproduzzjoni sesswali [17,30-35].

B. schlosseri għandu livelli differenti ta' risponsi immuni li jseħħu b'mod naturali. Meta żewġ kolonji ġenetikament kompatibbli li jaqsmu mill-inqas allele wieħed fil-ġene tal-fattur tal-istokompatibilità Botryllus (BHF) tagħhom imissu, huma jingħaqdu, jaqsmu ċ-ċirkolazzjoni, u jiffurmaw kimera (Figura 1D, fuq) [36-38].

Madankollu, kolonji inkompatibbli, li ma jaqsmu l-ebda alleli fil-ġene BHF, jgħaddu minn rispons ta 'rifjut, u joħolqu punti ta' rifjut bejn il-kolonji b'tessut nekrotiku (Figura 1D, qiegħ) [31,33,34,36-38]. Interessanti, f'annimali mdewba fuq livell semi-kompatibbli, f'xi każijiet, sieħeb kimeriku wieħed jiġi eliminat minn proċess infjammatorju ta 'riassorbiment alloġeniku li huwa komparabbli ma' rifjut kroniku uman (Figura 1E) [16,39].

Fenomenu affaxxinanti ieħor li jseħħ meta żewġ kolonji kompatibbli jingħaqdu ċ-ċirkolazzjoni hija l-kompetizzjoni taċ-ċelloli staminali, fejn iċ-ċelloli staminali minn kolonja waħda jinfiltraw l-organi riproduttivi tal-kolonja l-oħra, jaqbżu l-gametoġenesi u jagħtu lok għall-wild tal-ġenotip tagħha; għalhekk, iċ-ċelloli staminali jirrappreżentaw unitajiet bijoloġiċi ta 'selezzjoni naturali. Il-kompetizzjoni taċ-ċelloli staminali hija eżempju ta 'qasam ġdid li evolviet mill-istudju tal-kimeri ta' B. schlosseri. Il-kompetizzjoni taċ-ċelluli f'B. schlosseri intweriet f'esperiment li uża markaturi ġenetiċi biex jittraċċaw il-ġenotip ta' tessuti somatiċi u ġerminali fi ħdan kimera b'żewġ kolonji, li żvela l-espressjoni ta' ġenotip wieħed biss fit-tessuti ġerminali taż-żewġ kolonji, kif ukoll wieħed. għal ftit ġenotipi fiċ-ċelloli somatiċi [31,33,34]. Studji ta' segwitu wrew aktar li dan it-teħid ta' klonu huwa medjat minn ċelloli staminali [31].

Biex jittraduċu l-istudju tal-kompetizzjoni taċ-ċelluli staminali għall-ġrieden, ġrieden tetra-chimera ġew żviluppati billi injettaw tliet ċelluli staminali embrijoniċi kkuluriti distinti f'blastoċiti, kull wieħed immarkat b'reporter fluworexxenti differenti [40]. Hekk kif l-embrijuni żviluppaw, ħafna tubuli seminiferous ħdejn xulxin taw diversi sinjali fluworexxenti; madankollu, tnejn sa tliet kuluri differenti biss f'kull testikolu baqgħu wara l-maturazzjoni [41]. L-interpretazzjoni tissuġġerixxi li, filwaqt li l-kloni kollha daħlu fil-ħniek ġenitali bilateralment, wieħed biss minnhom baqa 'fil-ġrieden adulti [42]. Fis-sistema li tifforma d-demm, il-proċessi tat-tixjiħ u l-mard ġew attribwiti għall-kompetizzjoni taċ-ċelloli staminali.

Waqt it-tixjiħ, hemm żieda fil-proporzjon ta 'ċelloli staminali li jipproduċu popolazzjonijiet tad-demm majelojdi vs limfoid, li jistgħu jiġu attribwiti għall-kompetizzjoni taċ-ċelloli staminali, kif osservat fi ġrieden u bnedmin qodma versus żgħar [43-47]. L-espansjoni klonali u l-kompetizzjoni taċ-ċelloli staminali intwerew b'mod ċar fil-progressjoni pass ta' kloni prelewkemiċi aberranti lejn lewkimji [48-53], kif ukoll fl-espansjoni klonali taċ-ċelloli tal-muskoli lixxi fl-aterosklerożi fil-ġrieden u l-bnedmin [54,55]. Dawn huma eżempji ta’ kif studji f’B. schlosseri wasslu għal skoperti fl-iżvilupp tal-mammiferi, ix-xjuħija, il-kanċer u l-aterosklerożi [42].

2. Fenomeni ta' Trapjant Naturali (Mekkaniżmi ta' Fużjoni/Ċaħda)

Meta żewġ kolonji ta 'B. schlosseri jmissu ma' l-ampullae (il-punt finali tal-vini tad-demm tagħhom), huma jesperjenzaw proċess ta 'rikonoxximent lilhom infushom/mhux infushom [36,38,56]. Il-kolonji jirrikonoxxu lil xulxin bħala lilhom infushom u jingħaqdu l-vaskulaturi tagħhom biex jiffurmaw parabiont naturali (Figura 1D fuq) jekk jaqsmu mill-inqas allele wieħed tal-ġene tal-istokompatibilità polimorfika, fattur tal-istokompatibilità Botryllus (BHF) [38]. Malli tiġi stabbilita sistema ta 'vaskulatura komuni, iċ-ċelloli immuni u ċ-ċelloli staminali jistgħu jiċċirkolaw liberament minn sieħeb wieħed tal-kimera għall-ieħor, li jixbħu parabionts f'sistemi sperimentali tal-mammiferi (Figura 2A-C).

Fuq il-livell somatiku, il-kimeriżmu jista 'jkun stabbli għal perjodu twil, meta ż-żewġ ġenotipi jkunu preżenti u viżibbli. Peress li ċ-ċelloli staminali huma wkoll ħielsa li jiċċaqilqu fi ħdan il-kimera, kompetizzjoni ġerarkika taċ-ċelloli staminali sseħħ fil-kolonja kimerika fejn iċ-ċelloli "rebbieħa" se jkunu dominanti li jintirtu, u jagħtu lok għal gonadi ta' oriġini ġerminali waħda filwaqt li jżommu kimeri somatiċi [33,34]. ]. Ir-razez ġerminali rebbieħ u telliefa li jintirtu jirriflettu fenotipi taċ-ċelloli staminali determinati ġenetikament [31,32,35]. Interessanti, f'xi każijiet ta 'kolonji mdewba, wieħed mill-imsieħba se jiġi assorbit mill-ġdid. Dan normalment jiġri matul iċ-ċiklu blastoġeniku, filwaqt li jkun hemm tneħħija programmata taċ-ċelluli taż-żooids qodma; madankollu, proċess infjammatorju jipprevjeni wkoll il-proċess ta 'żvilupp taż-żooids il-ġodda mill-blanzuni [16,39]. Dan il-proċess jissejjaħ assorbiment mill-ġdid alloġeniku (Figura 1E).

Kolonji ġenetikament mhux kompatibbli jgħaddu minn rispons ta 'rifjut immuni fejn ċelluli infjammatorji u ċitotossiċi huma involuti, u joħolqu żoni nekrotiċi bejn l-ampullae li jmissu (Figura 1D qiegħ) [17,36,38]. Il-bażi għar-rispons taċ-ċaħda taċ-ċitotossiċità hija rappreżentata minn ċelluli ċitotossiċi tal-morula (MCs), li jidhru li jaħdmu skont l-"awto-ipoteżi nieqsa", li jixbħu ċelluli umani naturali killer (NK). Mingħajr ir-rikonoxximent inibitorju ta 'BHF kompatibbli, l-MCs joqtlu ċ-ċelloli fil-mira, li jirriżultaw f'leżjoni nekrotika fil-punti ta' rifjut (Figura 1D qiegħ) [17]. Dan l-allorecognition huwa attribwit bħala l-kontroparti invertebrata tal-immunità tat-trapjant [16].

3. Assorbiment mill-ġdid u Riġenerazzjoni Zooid bħala Mudell għat-Tneħħija taċ-Ċelloli Pprogrammata

Kolonja ta' B. schlosseri tevolvi minn larva waħda bħal tadpole li żviluppat permezz ta' embrioġenesi tal-kordat klassiku minn bajda fertilizzata. Blastoġenesi tibda meta l-larva metamorfożi f'nixxiegħa filtranti li ġġorr bud, li tiżviluppa fi żooid adult individwali. Zooids jikbru blanzuni li jiżviluppaw u jissostitwixxuhom kull ġimgħa li jiffurmaw kolonji (Figura 1A-C). Kull kolonja hija magħmula minn adulti li jiffiltraw (żooids) blanzuni primarji, u blanzuni sekondarji. Iċ-ċiklu blastogenetic huwa definit minn bidliet tul dawn it-tliet ġenerazzjonijiet li jseħħu kull ġimgħa f'20 grad [24].

Zooids jgħixu għal ġimgħa 1 u jiġu assorbiti mill-ġdid meta l-ġenerazzjoni l-ġdida tissostitwihomDan "l-avveniment ta 'teħid ta' kontroll huwa medjat mill-koordinazzjoni ta 'proċessi molekulari u ċellulari differenti, li fihom iċ-ċelluli tad-demm li jiċċirkolaw huma involuti. Qabel ma sseħħ it-teħid, mewt taċ-ċelluli programmata mxerrda tiġi attivata. , minn ta' quddiem għal wara taż-żooid (57], permezz ta' mogħdija apoptotika dipendenti fuq il-mitokondrija. Dan ġie evidenzjat minn żieda fil-kondensazzjoni tal-kromatina (27l, l-attivazzjoni ta' caspases (caspase-3 u9)) (58l , l-espressjoni żejda tal-molekuli apoptotiċi tal-mammiferi (jiġifieri, Bax, Fas, u FasL), u t-tnaqqis tal-antiapoptotic Bcl-2 (59). Phosphatidylserine u lipidi ossidizzati huma espressi fuq il-wiċċ tal-membrana tal-plażma taċ-ċelloli affettwati bħala fagoċiti sinjali ta 'rikonoxximent (27).Fil-passi li jmiss tat-teħid, ċelluli fagoċitiċi li jiċċirkolaw (pożittivi għall-antikorpi CD36) jinfiltraw tessuti senescent, jaħarbu ċelluli apoptotiċi, u mbagħad imutu wkoll b'apoptożi (Figura 1C)[27,60].

Ir-riassorbiment taż-żooid jiġġenera ammont sostanzjali ta’ materjal bijoloġiku, li jiġi riċiklat billi jiġu żviluppati blanzuni biex jinżamm l-iżvilupp blastoġeniku (611. Ir-riassorbiment taż-żooids u r-riassorbiment alloġeniku (dettaljat fil-parti E) li jseħħ f’B. schlosseri chimeras jaqsmu xebh fl-immunità. rispons, peress li t-tnejn jinvolvu l-crosstalk kostanti fost l-apoptożi, l-għarfien għal rasu/nonself, u l-fagoċitosi [62] Billi dan il-crosstalk iseħħ taħt kundizzjonijiet naturali, B. schlosseri jirrappreżenta mudell siewi biex jiġi studjat, f’livelli differenti (ġeni, metaboliti, molekuli ta’ sinjalazzjoni , u funzjonijiet ċellulari), il-mekkaniżmi li jiggwidaw it-tneħħija programmata taċ-ċelluli, li tippermetti r-riġenerazzjoni ta 'żooids ġodda.

4. Botryllus schlosseri bħala Mudell biex Tistudja l-Immunità Innata

B. schlosseri għandha sistema immuni effiċjenti li mhux biss tiġġieled u tipprevjeni l-infezzjonijiet, iżda wkoll orkestra l-istokompatibilità, l-inkompatibilità, ir-rifjut u l-proċessi ta 'assorbiment mill-ġdid taż-żooid. Interessanti, meta l-ġenoma tiegħu ġie annotat u mqabbel ma 'ġenomi invertebrati u vertebrati, instab li bosta ġeni assoċjati mas-sistema immunitarja u l-ematopoiesi, inklużi ZBTB1, MEFV, DSG3, NQ01, NQO2, u BHLHE40, li huma involuti fl-iżvilupp tal-lewkoċiti, kif ukoll sett addizzjonali ta' ġeni li jistgħu jiġu attribwiti għal prekursuri ta' nisel ematopojetiċi umani, jistgħu jiġu skoperti f'B. schlosseri iżda mhux fi speċi invertebrati oħra jew speċi ta' tunikati solitarji [15].

Ir-risponsi immuni f'B. schlosseri huma medjati minn turnover taċ-ċelluli omeostatiċi u l-liċenzjar ta 'ċelluli ċitotossiċi intrinsika, li jikkollaboraw ma' fagoċiti attivati. Dawn iċ-ċelloli effeturi immuni huma ċelluli tad-demm li jiċċirkolaw li bħalissa juru attività taċ-ċelluli fagoċitiċi u ċitotossiċi. Fost iċ-ċelloli fagoċitiċi, B. schlosseri għandu nisel majelojde li jaqsam sett kbir ta' ġeni ma' nisel majelojdi tal-mammiferi [17]; għandu wkoll amoebocytes u fagoċiti kbar li huma morfoloġikament aktar relatati ma 'emoċiti ta' artropodi u ekinodermi [63]. Dawn il-fagoċiti jegħlbu mikro-organiżmi u awto-ċelluli bil-ħsara, fihom fagosomi b'enzimi idrolitiċi, lipidi u lipofuscins [64], u jistgħu jiġu suddiviżi f'popolazzjonijiet statiċi (fis-sistema ċirkolatorja epitelja) u mobbli (jiċċirkolaw mill-kolonja) [65].

MCs ta' B. schlosseri ġew ikkaratterizzati bħala ċelluli ċitotossiċi; huma l-aktar tip ta 'ċelluli ċirkolatorji abbundanti u għandhom granuli ċitoplasmiċi kbar li fihom forma inattiva ta' phenoloxidase (PO) [64]. L-analiżi tal-espressjoni tal-ġeni wriet li jesprimu repertorju tal-ġeni speċifiku għat-tunikati u sett ta 'ġeni (15 fil-mija) li jaqsmu omoloġija ma' limfoċiti vertebrati [17,63].

Fil-livell molekulari, BsTLR1 huwa espress kemm fil-fagoċiti kif ukoll f'MCs ta 'B. schlosseri bħala membru tal-familja tar-riċetturi TLR, li hija involuta b'mod attiv fir-rikonoxximent ta' l-awto/mhux innifsu [66]. Iċ-ċelloli li jiċċirkolaw id-demm jesprimu wkoll ġene ta 'proteina transmembrana tat-tip II li hija relatata mar-riċetturi CD94 u NKR-p1 ta' ċelloli NK umani u limfoċiti T. Din il-proteina hija rregolata 'l fuq matul il-proċess ta' allorekognizzjoni [67]. Rhamnose-binding lectin (BsRBL) ġiet identifikata bħala molekula effettur li tattiva l-fagoċiti, u b'hekk tinduċi r-rilaxx ta 'molekuli simili għal ċitokini li huma rikonoxxuti mill-antikorpi anti-IL1 u anti-TNF [68]. Barra minn hekk, il-fagoċiti attivati ​​jagħmlu sinjal permezz ta' GTPases żgħar bħal Ras, MAPKs, u netwerks NF-κB biex jiskattaw ir-rispons ta 'rikonoxximent ta' ċelloli barranin [69].

Ix-xogħol f'B. schlosseri ggwidana biex niptesisaw li l-mekkaniżmi immuni intrinsiċi matul il-manutenzjoni tat-tessuti, l-allorecognition u r-riġenerazzjoni huma kkonservati u importanti ħafna għall-bidu tar-rispons immuni adattiv fil-mammiferi. Għalhekk, dan il-mudell jippermetti l-istudju tal-proċessi ċellulari u molekulari orkestranti madwar dawn ir-risponsi immuni, li jiffoka fuq risponsi immuni intrinsika. Din l-informazzjoni mbagħad tista 'tiġi tradotta għall-immunità tal-bniedem, b'impatt partikolari fuq it-titjib ta' strateġiji terapewtiċi għal ċelloli staminali, tessuti, u trapjant ta 'organi.

Barra minn hekk, id-difiżi immuni tat-tunikati għamluhom sors potenzjali ta 'diversi riżorsi naturali tad-droga b'potenzjal kbir għal applikazzjonijiet farmakoloġiċi. Pereżempju, l-attività hemagglutinating tal-lectins fl-emolymph ascidian għandha rwol immuni importanti [70]; lectins tal-baħar ġew investigati bħala aġenti antimikrobiċi u antivirali potenzjali, kif ukoll komposti b'effetti immunomodulatorji u ċitotossiċi fuq iċ-ċelloli tat-tumur [71]. Ġew identifikati ħames traskrizzjonijiet omologi ta' rhamnose-binging lectins (RBLs) biex itejbu l-fagoċitosi f'B. schlosseri [70]. Barra minn hekk, komponenti tal-mogħdija alternattiva tal-kompliment (ortologi C3 u Bf) [72,73] u komponenti tal-mogħdija tal-lectin (lectin li torbot il-mannoż, ficolin, u serine protease 1 assoċjata mal-mannożju) huma traskritti minn MCs u assoċjati ma’ rikonoxximent mhux proprju. , opsonizzazzjoni, u tneħħija ta 'mikrobi u ċelluli apoptotiċi [74].

L-enzima PO imsemmija qabel, li hija degranulata u rilaxxata minn B. schlosseri MCs, hija molekula bijoattiva b'attività ċitotossika kontra infezzjonijiet mikrobjali (jiġifieri, ċelluli tal-ħmira u spori batterjali), kif ukoll ċelluli mhux proprji (jiġifieri demm inkompatibbli) [70] ,75]. L-MCs huma wkoll is-sors ewlieni tal-molekuli proinfjammatorji solubbli li jixbħu ċitokini IL-1- u TNF- , li huma ssuġġeriti li jiġu rilaxxati fil-preżenza ta 'ċelluli u mikrobi inkompatibbli [70]. Huma meħtieġa aktar studji biex jiġi esplorat il-potenzjal tad-droga ta 'dawn il-molekuli B. schlosseri u l-applikazzjonijiet farmakoloġiċi possibbli tagħhom.

Diversi komposti oħra b'potenzjali antifungali, antidijabetiċi, antiossidanti u antitumorali ġew identifikati fit-tunikati. Informazzjoni aktar fil-fond dwar dan is-suġġett ġiet riveduta f'[76,77].

5. Botryllus bħala Mudell għat-Trapjant tal-HSC

L-attributi ta 'B. schlosseri wrew ħafna xebh ma' vertebrati u mammiferi, kemm jekk fiċ-ċirkolazzjoni tad-demm tagħhom, bijoloġija taċ-ċelluli staminali, jew karatteristiċi immuni [31,33,56]. Bl-istess mod, għall-vertebrati, iċ-ċelloli staminali ta 'B. schlosseri jgħixu f'niċeċ uniċi, fejn l-istatus tagħhom huwa preżunt li huwa regolat fuq spettru fejn tarf wieħed jirrappreżenta quiescence u l-ieħor jirrappreżenta differenzjazzjoni/espansjoni. Fl-2005, Laird et al. wera trapjant ibbażat fuq ċelloli staminali [31]; fl-2008, Voskoboynik et al. identifikat b'suċċess in-niċċa endostyle u ċ-ċelloli staminali somatiċi iżolati ta 'B. schlosseri minnha (Figura 2D) [35]. Dan l-avvanz wassal għal aktar studji ffukati fuq il-karatterizzazzjoni tan-niċċa u ċ-ċelloli staminali.

L-HSCs, li huma fil-quċċata tal-ġerarkija fejn jidħlu demm/ċelluli immuni, iżommu d-demm tal-organiżmu u s-sistemi immuni matul il-ħajja tiegħu. Ġew studjati bir-reqqa f'diversi organiżmi, l-aktar importanti minnhom huma l-bnedmin u l-ġrieden [78-81]. Fl-2018, Rosental et al. [17] ippappjaw b'suċċess transcriptomi sħaħ ta 'ċelluli u tessuti fis-sistema ematopojetika ta' B. schlosseri, bħal HSCs u n-niċċa tagħhom (endostyle), ċelluli proġenitriċi, u ċelluli effettur immuni. Huma għażlu 23 popolazzjoni separata, immappjaw it-traskriptomi tagħhom, u identifikaw raggruppament ta 'ċelluli li fihom 235 ġeni kienu regolati b'mod differenzjat, li juru omoloġija sinifikanti ta' attività tal-ġeni għal HSCs umani u mammiferi. Permezz ta 'testijiet ta' trapjant, urew dawk li arrikkitw id-divrenzjar tal-HSC għal ċelluli tad-demm Botryllus oħra, kif ukoll dawk li huma dar għan-niċċa tal-endostyle (Figura 2D).

Għall-karatterizzazzjoni tal-endostil bħala niċċa HSC, qabblu d-dejta tat-traskriptome minn 10 endostyles għal 34 kolonja sħaħ, u sabu 327 ġene li kienu elevati b'mod sinifikanti u kondiviżi mal-ġeni regolati 'l fuq fil-mudullun ematopojetiku tal-ġrieden u tal-bniedem. Dan jissuġġerixxi oriġini komuni għan-niċċa tal-endostyle f'B. schlosseri, kif ukoll il-mudullun ematopojetiku vertebrat, lil hinn mill-HSCs tal-omoloġija u ċ-ċelloli immuni derivati ​​minn nisel majelojdi [17,63].

Dan ix-xogħol reċenti, meħud flimkien ma 'riċerka preċedenti, jagħmel B. schlosseri mudell komplet għat-trapjant HSC, meta wieħed iqis il-kapaċità tagħhom li jiżolaw l-HSCs, l-interazzjoni tagħhom maċ-ċelloli effetor immuni, u l-lokalizzazzjoni tagħhom fin-niċċa HSC (Figura 2D). Dan jinkludi l-abbiltà li janalizza l-livell ta 'kimeriżmu indott mit-trapjant permezz ta' ċitometrija tal-fluss (Figura 2E).

6. Riassorbiment Alloġeniku bħala Mudell għal Ċaħda Kronika

F'ħafna każijiet, wara l-fużjoni bejn żewġ kolonji ta 'B. schlosseri, wieħed mill-imsieħba semi-kompatibbli se jerġa' jiġi assorbit fi żmien diversi ġimgħat permezz ta 'proċess infjammatorju li jipprevjeni r-riġenerazzjoni taż-żooids il-ġodda (Figura 1E) [39]. Il-mekkaniżmi ta 'sewqan ta' dan il-proċess ġew spjegati minn Corey et al., Li identifikaw MC ċitotossiċi bħala tip ta 'ċellula effetur immuni ewlieni fil-proċess ta' riassorbiment alloġeniku [16]. Il-preżenza ta 'MC irriżulta f'bidliet fl-espressjoni tal-ġeni fis-sieħeb "li jitlef" li jikkawżaw programmi ta' mewt taċ-ċelluli u difetti fil-proċess ta 'żvilupp. Meta l-MCs alloġeniċi ġew trapjantati b'mod adottiv għal kolonji, huma kkawżaw rispons infjammatorju li jipprevjeni l-iżvilupp ta 'zooids tal-ġenerazzjoni li jmiss (meta mqabbel ma' injezzjonijiet finti jew donaturi mhux MC), li juru li l-MCs huma l-muturi ta 'dan il-proċess. L-iżolament u s-sekwenzjar tal-RNA tal-blanzuni u ż-żooids minn partijiet risorbenti versus mhux risorbenti tal-kimeri pprovdew lista ta 'ġeni espressi b'mod differenzjat, li jiżvelaw upregulation fl-espressjoni ta' ġeni regolatorji ta 'difiża tal-ospitanti u markaturi pro-infjammatorji.

Ġeni relatati mas-sistema komplementari, bħal MASP1, MASP2, u C3, ġew identifikati li għandhom bidliet fl-espressjoni matul ir-riassorbiment alloġeniku, flimkien ma 'proteini assoċjati ma' TNF (TRAF3 u TRAF4), komponenti ta 'koagulazzjoni (KLKB1, KLK3, F2, F8), mewt taċ-ċelluli (CASP2/7/9), u proteinases liżosomali (CTSV, CTSF). Din id-dejta tikkonferma li l-proċess ta' riassorbiment alloġeniku jinkludi avvenimenti differenti ta' crosstalk li jistgħu jiġu studjati aktar f'B. schlosseri.

Il-membru tal-familja interleukin IL-17 irriżulta li kien ġene ewlieni regolat 'il fuq (żieda ta' 60-darbiet). IL-17 hija mnixxija minn ċelloli immuni intrinsiċi u hija involuta fit-tneħħija ta' fungi u batterji extraċellulari [82]. IL-17 jaġixxi bħala ċitokin regolatorju ewlieni, u r-regolazzjoni 'l fuq tagħha tirriżulta f'ħsara fit-tessuti minħabba infjammazzjoni eċċessiva, infjammazzjoni kronika [83], awtoimmunità [84], u GVHD kronika f'vertebrati ogħla [85]. B'paragun, f'B. schlosseri, l-użu ta' proteina rikombinanti B. schlosseri IL-17 wassal għal ċitotossiċità ċellulari regolata b'mod sinifikanti b'mod dipendenti fuq id-doża [16]. Dan ir-riżultat, meħud flimkien mas-settijiet tal-ġeni li juru l-upregulation tar-risponsi infjammatorji klassiċi, juri l-paralleli għar-rifjut kroniku tal-bniedem.

7. Prospett ta' Mudell Alloġeniku Ġenerali

Bħalissa, it-trapjant alloġeniku tal-HSC jintuża biex jikkura diversi mard fil-bnedmin; madankollu, dan il-proċess kliniku huwa kumpless ħafna u jeħtieġ trattament profilattiku biex jipprevjeni r-rifjut immuni [86]. Uħud mill-għażliet l-aktar prominenti għall-profilassi jinkludu inibituri tal-kalċineurin, rapamycin, mycophenolate mofetil bi (jew mingħajr) globulina anti-thymocyte, jew, fil-każ ta 'GVHD akut, l-użu ta' kortikosterojdi sistemiċi bħal methylprednisolone [87].

Minkejja l-avvanzi reċenti u l-użu ta 'profilassi, GVHD akut huwa djanjostikat fi kważi nofs il-proċeduri alloġeniċi ta' trapjant HSC, u huwa assoċjat ma 'pronjosi ħażina [88]. Ir-rifjut kroniku huwa biss aggravat mir-reżistenza għat-trattament tal-kortikosterojdi; l-inkapaċità li tikkontrolla r-rifjut kroniku twassal lil xi pazjenti li jeħtieġu trapjant mill-ġdid li jżid ir-riskji kliniċi [88]. F'vertebrati ogħla, iċ-ċelluli T għandhom rwol ewlieni fir-rifjut kroniku, GVHD, u disturbi tat-tqala [89,90]. L-eluċidazzjoni tal-mekkaniżmi relatati mal-immunità wara l-attivazzjoni ta 'dawn iċ-ċelluli effector f'ambjent alloġeniku se tagħtina għarfien aħjar ta' kif nevitaw l-attivazzjoni ċitolitika tagħhom u jimmodulaw b'mod pożittiv il-proċess ta 'rifjut kroniku. Iċ-ċelloli NK u ċ-ċelloli T fil-bnedmin jaqsmu l-karatteristika li jidentifikaw l-awto/nonself alloġeniku u huma attivati ​​jew bl-identifikazzjoni ta 'nonself jew in-nuqqas ta' awto.

F'B. schlosseri rifjut alloġeniku jseħħ b'mod simili għall-vertebrati, minkejja s-sistema bbażata fuq l-immunità aktar intrinsika tagħha. Kif diskuss qabel, BHF f'B. schlosseri jaqsam xi attributi ma 'MHC uman [91], peress li r-rikonoxximent tiegħu bħala "awto" iwassal għal mekkaniżmu inibitorju ewlieni ta' ċitotossiċità fl-allorekognition. L-effetti inibitorji ta' BHF fuq iċ-ċitotossiċità [17], flimkien ma' evidenza ta' osservazzjoni ta' fużjoni ta' kolonji li jaqsmu mill-inqas alleli BHF wieħed, li jissuġġerixxu li l-mekkaniżmu ta' tossiċità ċellulari matul l-allorecognition f'dan it-tunikat ġej mill-'self nieqes' u jista' jitqabbel mar-rikonoxximent. minn ċelluli NK f'vertebrati avvanzati [63]. Meħuda flimkien, dawn is-sejbiet juru xebh fir-risponsi immuni intrinsiċi bejn B. schlosseri u l-bnedmin fuq il-livelli ċellulari u molekulari. Filwaqt li l-forza li tmexxi f'kull organiżmu hija differenti, punti ta 'interazzjoni bħal mogħdijiet immuni u molekuli ta' rikonoxximent ewlenin jistgħu jiġu studjati f'mudell ta 'aċċess faċli u mbagħad tradotti f'mudelli kumplessi tal-mammiferi.

8. Konklużjonijiet

L-avvanzi fir-riċerka u l-għodod xjentifiċi fil-mudell B. schlosseri ippromwovew B. schlosseri bħala mudell interessanti biex jiġu studjati r-risponsi tas-sistema immuni intrinsika, b'mod aktar speċifiku fit-trapjanti. Waħda mill-għodod ta' riċerka l-aktar prominenti, il-proġett tal-ġenoma Botryllus [15], ippermetta analiżi fuq il-livelli ġenetiċi u molekulari, u b'hekk identifika l-BHF [38] fuq il-locus tal-istokompatibilità tal-fużjoni [92]. Barra minn hekk, il-proġett tal-ġenoma kkonferma l-post tat-tunikati bħala l-eqreb grupp invertebrati għall-vertebrati, fejn ħafna ġeni immuni huma kondiviżi mal-mammiferi u s-sistema ematopojetika tagħhom [15].

Barra minn hekk, kif imsemmi hawn fuq, B. schlosseri għandu fenomeni li jseħħu b'mod naturali li jixbħu ħafna proċessi immunoloġiċi bażiċi, bħal (I) rifjut bħala rifjut akut fit-trapjant, (II) fużjoni bħala parabionts naturali li jaqsmu ċelloli staminali, (III) ċelloli staminali kompetizzjoni u chimerism, (IV) ċiklu ta 'kull ġimgħa naturali ta' assorbiment mill-ġdid taż-żoojdi u żvilupp ta 'blanzuni ġodda, li jaħdmu permezz ta' tneħħija taċ-ċelluli programmati klassiċi u mekkaniżmi ta 'riġenerazzjoni komparabbli mal-vertebrati, u (V) assorbiment mill-ġdid alloġeniku bħala proċess ta' rifjut kroniku.

Barra minn hekk, kien hemm diversi settijiet ta’ espressjoni tal-ġeni miksuba matul ir-riċerka tal-proċessi deskritti hawn fuq, li ppermettew it-tfittxija ta’ ġeni kandidati u mogħdijiet li jaffettwaw dawk il-proċessi assoċjati mal-immunità, pereżempju, settijiet ta’ ġeni ta’ riassorbiment alloġeniku [16], fużjoni u ġeni assoċjati mal-istokompatibilità [38], 23 popolazzjoni ċellulari differenti u endostyle [17], u proċessi ta' riġenerazzjoni u żvilupp taż-żoojdi [23].

Meħuda flimkien, l-għodod u l-avvanzi f'B. schlosseri, flimkien mal-kapaċità ta 'profili immuni ċellulari in vivo u ex vivo, b'manipulazzjonijiet ċellulari u molekulari (minn morpholinos għal proteini rikombinanti), jirrappreżentaw il-pedament għal skoperti futuri dwar mekkaniżmi ta' attivazzjoni immuni f' mudell sempliċi, li huwa rilevanti għar-riċerka immuni umana.

Kontribuzzjonijiet tal-Awtur:

Kunċettwalizzazzjoni, BR; kitba—preparazzjoni tal-abbozz oriġinali, OG, EAM-T., TL, ST, u BR; kitba—reviżjoni u editjar, OG, EAM-T., TL, ST, TR, AV, BR u OG-Y.; superviżjoni, BR; amministrazzjoni tal-proġett, OG-Y.; akkwist tal-finanzjament, AV, u BR L-awturi kollha qraw u qablu mal-verżjoni ppubblikata tal-manuskritt.

Finanzjament:

Ix-xogħol ta 'BR huwa appoġġjat mill-Fondazzjoni tax-Xjenza ta' l-Iżrael (ISF), numru ta 'għotja 1416/19, u Għotja ta' Riċerka HFSP, RGY0085/2019. BR irċieva finanzjament mill-Kunsill Ewropew tar-Riċerka (ERC) taħt il-programm ta 'riċerka u innovazzjoni Orizzont 2020 tal-Unjoni Ewropea taħt ftehim ta' għotja Nru 948476. AV hija appoġġjata mill-NIH R21AG062948 u l-programm Chan Zuckerberg Investigator.

Dikjarazzjoni tal-Bord ta' Reviżjoni Istituzzjonali:

Ma japplikax.

Dikjarazzjoni ta' Kunsens Informat:

Ma japplikax.

Kunflitti ta' Interess:

L-awturi ma jiddikjaraw l-ebda kunflitt ta' interess.

Referenzi

1. Oberbarnscheidt, MH; Lakkis, FG Allocognition innat. Immunol. Rev 2014, 258, 145–149. [CrossRef]

2. Zecher, D.; Li, Q.; Williams, AL; Walters, JT; Baddoura, FK; Chalasani, G.; Rothstein, DM; Shlomchik, WD; Demetris, AJ; Lakkis, FG L-immunità innata waħedha mhix biżżejjed għal rifjut kroniku iżda tippredisponi allografts imfejqa għal patoloġija medjata miċ-ċelluli T. Transpl. Immunol. 2012, 26, 113–118. [CrossRef] [PubMed]

3. Ghadially, H.; Ohana, M.; Elboim, M.; Gazit, R.; Gur, C.; Nagler, A.; Mandelboim, ir-riċettur taċ-ċelluli O. NK NKp46 jirregola l-marda tat-tilqim kontra l-ospitanti. Cell Rep 2014, 7, 1809–1814. [CrossRef]

4. Simonetta, F.; Alvarez, M.; Negrin, Ċelloli Killer Naturali RS fit-Trapjant kontra l-Ospitanti wara Trapjant taċ-Ċelloli Ematopojetiċi Alloġeniċi. Quddiem. Immunol. 2017, 8, 465. [CrossRef]

5. Geldenhuys, J.; Rossouw, TM; Lombard, HA; Ehlers, MM; Kock, MM Tfixkil fir-Regolament ta 'Risposti Immuni fis-Subtip Plaċentali ta' Preeclampsia. Quddiem. Immunol. 2018, 9, 1659. [CrossRef]

6. Gomez-Lopez, N.; Stlouis, D.; Lehr, MA; Sanchez-Rodriguez, EN; Arenas-Hernandez, M. Ċelloli immuni fit-terminu u qabel iż-żmien. Ċellula. Mol. Immunol. 2014, 11, 571–581. [CrossRef]

7. Kwak-Kim, J.; Bao, S.; Lee, SK; Kim, JW; Gilman-Sachs, A. Modi immunoloġiċi ta 'telf ta' tqala: Infjammazzjoni, Effetturi immuni, u Stress. Em. J. Reprod. Immunol. 2014, 72, 129–140. [CrossRef] [PubMed]

8. Moffett, A.; Chazara, O.; Colucci, F. Alloricognition materna tal-fetu. Fertili. Sterili. 2017, 107, 1269–1272. [CrossRef]

9. Rosental, B.; Brusilovsky, M.; Hadad, U.; Oz, D.; Appel, MY; Afergan, F.; Yossef, R.; Rosenberg, LA; Aharoni, A.; Cerwenka, A.; et al. Antiġenu Nukleari taċ-Ċelloli Proliferanti Huwa Ligand Inibitorju Ġdid għar-Riċettur Naturali taċ-Ċitotossiċità NKp44. J. Immunol. 2011, 187, 5693–5702. [CrossRef] [PubMed]

10. Shemesh, A.; Kugel, A.; Steiner, N.; Yezersky, M.; Tirosh, D.; Edri, A.; Teltsh, O.; Rosental, B.; Sheiner, E.; Rubin, E.; et al. Profili varjanti ta 'splice NKp44 u NKp30 f'tessuti decidua u tumur: Lat komparattiv. Oncotarget 2016, 7, 70912–70923. [CrossRef] [PubMed]

11. Shemesh, A.; Tirosh, D.; Sheiner, E.; Tirosh, NB; Brusilovsky, M.; Segev, R.; Rosental, B.; Porgador, A. Telf ta 'Tqala ta' l-Ewwel Trimestru u l-Espressjoni ta 'Isoformi NKp30 Spliced ​​Alternattivament fid-Demm Maternali u fit-Tessut tal-Plaċenta. Quddiem. Immunol. 2015, 6, 189. [CrossRef]

12. Azumi, K.; De Santis, R.; De Tomaso, A.; Rigoutsos, I.; Yoshizaki, F.; Pinto, MR; Marino, R.; Shida, K.; Ikeda, M.; Ikeda, M.; et al. Analiżi ġenomika tal-immunità f'Urochordate u l-emerġenza tas-sistema immuni vertebrata: "stennija għal Godot." Immunogenetics 2003, 55, 570-581. [CrossRef]

13. Flajnik, MF Veduta ta' demm kiesaħ tal-immunità adattiva. Nat. Dun Immunol. 2018, 18, 438–453. [CrossRef]

14. Hirano, M.; Das, S.; Guo, P.; Cooper, MD Kapitolu 4—L-Evoluzzjoni tal-Immunità Adattiva fil-Vertebrati. Fl-Avvanzi fl-Immunoloġija; Frederick, W., Ed.; Academic Press: Cambridge, MA, USA, 2011; Volum 109, p. 125–157. [CrossRef]

15. Voskoboynik, A.; Neff, NF; Sahoo, D.; Newman, AM; Pushkarev, D.; Koh, W.; Passarelli, B.; Fann, HC; Mantalas, GL; Palmeri, KJ; et al. Is-sekwenza tal-ġenoma tal-kordat kolonjali, Botryllus schlosseri. eLife 2013, 2, e00569. [CrossRef]

16. Corey, DM; Rosenthal, B.; Kowarsky, M.; Sinha, R.; Ishizuka, KJ; Palmeri, KJ; Quake, SR; Voskoboynik, A.; Weissman, IL Programmi tal-mewt taċ-ċelluli tal-iżvilupp liċenzjaw ċelluli ċitotossiċi biex jeliminaw l-imsieħba istokompatibbli. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2016, 113, 6520–6525. [CrossRef]

17. Rosental, B.; Kowarsky, M.; Seita, J.; Corey, DM; Ishizuka, KJ; Palmeri, KJ; Chen, S.-Y.; Sinha, R.; Okamoto, J.; Mantalas, G.; et al. Is-sistema ematopojetika kumplessa bħal mammiferi tinstab f'kordat kolonjali. Natura 2018, 564, 425. [CrossRef]

18. Ben-Shlomo, R.; Reem, E.; Douek, J.; Rinkevich, B. Il-ġenetika tal-popolazzjoni tal-ascidian invażiv Botryllus schlosseri mill-kosti tal-Amerika t'Isfel. Mar Ekol. Prog. Ser. 2010, 412, 85. [CrossRef]

19. Stoner, DS; Ben-Shlomo, R.; Rinkevich, B.; Weissman, IL Varjabilità ġenetika ta 'invażjonijiet ta' Botryllus schlosseri lejn il-kosti tal-lvant u tal-punent tal-Istati Uniti. Mar Ekol. Prog. Ser. 2002, 243, 93. [CrossRef]

20. Darwin, C.; Kebler, L. Dwar l-Oriġini tal-Ispeċi li jużaw l-Għażla Naturali, jew, Il-Preservazzjoni tat-Tlielaq Preferiti fil-Ġlieda għall-Ħajja; J. Murray: Londra, ir-Renju Unit, 1859; Volum 1, p. 502.

21. Delsuc, F.; Brinkmann, H.; Chourrout, D.; Philippe, H. It-tunikati u mhux iċ-ċefalokordati huma l-eqreb qraba ħajjin tal-vertebrati. Natura 2006, 439, 965. [CrossRef] [PubMed]

22. Manni, L.; Lane, NJ; Joly, JS; Gasparini, F.; Tiozzo, S.; Caicci, F.; Zaniolo, G.; Burighel, P. Placodes newroġeniċi u mhux newroġeniċi f'ascidians. J. Exp. Żooloġija. Parti B Mol. Dev. Evol. 2004, 302, 483. [CrossRef]

23. Kowarsky, M.; Anselmi, C.; Hotta, K.; Burighel, P.; Zaniolo, G.; Caicci, F.; Rosental, B.; Neff, NF; Ishizuka, KJ; Palmeri, KJ; et al. Żvilupp sesswali u asesswali: Żewġ programmi distinti li jipproduċu l-istess tunikat. Cell Rep. 2021, 34, 108681. [CrossRef]

24. Manni, L.; Gasparini, F.; Hotta, K.; Ishizuka, KJ; Ricci, L.; Tiozzo, S.; Voskoboynik, A.; Dauga, D. Ontoloġija għall-Iżvilupp Asesswali u l-Anatomija tal-Chordate Kolonjali Botryllus schlosseri. PLoS ONE 2014, 9, e96434. [CrossRef]

25. Manni, L.; Burighel, P. Mogħdijiet komuni u diverġenti fi proċessi ta 'żvilupp alternattiv ta' ascidians. BioEssays 2006, 28, 902–912. [CrossRef]

26. Milkman, R. Studji ġenetiċi u ta' żvilupp fuq Botryllus schlosseri. Biol. Bull. 1967, 132, 229–243. [CrossRef] [PubMed]

27. Cima, F.; Basso, G.; Ballarin, L. Apoptosis u rikonoxximent medjat mill-fosfatidilserina matul il-fażi tat-teħid taċ-ċiklu tal-ħajja kolonjali fl-ascidian Botryllus schlosseri. Ċellula Tissue Res. 2003, 312, 369–376. [CrossRef] [PubMed]

28. Lauzon, RJ; Ishizuka, KJ; Weissman, IL Fenomenu tal-mewt ċikliku, regolat b'mod żvilupp f'urokordat kolonjali. Dev. Dyn. 1992, 194, 71–83. [CrossRef] [PubMed]

29. Lauzon, RJ; Patton, CW; Weissman, IL Studju morfoloġiku u immunoistokimiku tal-mewt taċ-ċelluli programmata f'Botryllus schlosseri (Tunicata, Ascidiacea). Ċellula Tissue Res. 1993, 272, 115–127. [CrossRef]

30. Laird, DJ; De Tomaso, AW; Cooper, MD; Weissman, IL 50 miljun sena ta 'evoluzzjoni tal-kordati: Tfittex l-oriġini tal-immunità adattiva. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2000, 97, 6924–6926. [CrossRef] [PubMed]

31. Laird, DJ; De Tomaso, AW; Iċ-Ċelloli Staminali ta' Weissman, IL huma Unitajiet ta' Għażla Naturali f'Ascidian Kolonjali. Ċellula 2005, 123, 1351–1360. [CrossRef]

32. Rinkevich, Y.; Voskoboynik, A.; Rosner, A.; Rabinowitz, C.; Paz, G.; Oren, M.; Douek, J.; Alfassi, G.; Moiseeva, E.; Ishizuka, KJ; et al. Ċikliżmu ripetut u fit-tul ta 'Ċelloli Stem Putative bejn Niċeċ f'Kordat Bażali. Dev. Cell 2013, 24, 76–88. [CrossRef]

33. Stoner, DS; Rinkevich, B.; Weissman, IL Kompetizzjonijiet ta' nisel ta' raħs u ċelluli somatiċi li jintirtu fi protokordate kolonjali kimeriku.... Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1999, 96, 9148–9153. [CrossRef] [PubMed]

34. Stoner, DS; Weissman, IL Parassitiżmu somatiku u taċ-ċelluli ġerminali f'assidjan kolonjali: Rwol possibbli għal sistema ta 'allorecognition polimorfika ħafna. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1996, 93, 15254–15259. [CrossRef] [PubMed]

35. Voskoboynik, A.; Soen, Y.; Rinkevich, Y.; Rosner, A.; Ueno, H.; Reshef, R.; Ishizuka, KJ; Palmeri, KJ; Moiseeva, E.; Rinkevich, B.; et al. Identifikazzjoni tal-Endostyle bħala Niċċa taċ-Ċelloli Staminali f'Kordat Kolonjali. Cell Stem Cell 2008, 3, 456–464. [CrossRef] [PubMed]

36. Sabbadin, A. Le basi genetiche della capacita di fusione fra colonie in Botryllus schlosseri (Ascidiacea). Rend Accad Naz Lincei Ser VIII 1962, 32, 1031–1035.

37. Scofield, V. Allorecognition u infezzjoni mikrobjali: Rwoli fl-evoluzzjoni tas-sess u l-immunità. Fl-Oriġini u l-Evoluzzjoni tas-Sess; Halvorson, H., Monroy, A., Eds.; Alan R. Liss: New York, NY, USA, 1985; Volum 7, p. 213.

38. Voskoboynik, A.; Newman, AM; Corey, DM; Sahoo, D.; Pushkarev, D.; Neff, NF; Passarelli, B.; Koh, W.; Ishizuka, KJ; Palmeri, KJ; et al. Identifikazzjoni ta' Ġene tal-Histokompatibilità Kordat Kolonjali. Xjenza 2013, 341, 384. [CrossRef]

39. Rinkevich, B.; Tartakover, S.; Gershon, H. Kontribuzzjoni ta 'ċelluli morula għal risponsi alloġeniċi fl-urochordate kolonjali Botryllus schlosseri. Mar Biol. 1998, 131, 227–236. [CrossRef]

40. Ueno, H.; Weissman, IL Analiżi Klonali tal-Iżvilupp tal-Ġurdien Tiżvela Oriġini Poliklonali għall-Gżejjer tad-Demm tal-Isfar Sac. Dev. Ċellula 2006, 11, 519. [CrossRef]

41. Ueno, H.; Turnbull, BB; Weissman, IL Żvilupp oligoklonali f'żewġ stadji ta 'ċelluli ġerminali maskili. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2009, 106, 175–180. [CrossRef]

42. Weissman, IL Iċ-ċelloli staminali huma unitajiet ta 'għażla naturali għall-formazzjoni tat-tessuti, l-iżvilupp tal-linja ġerminali, u l-iżvilupp tal-kanċer. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2015, 112, 8922–8928. [CrossRef]

43. Beerman, I.; Bhattacharya, D.; Zandi, S.; Sigvardsson, M.; Weissman, IL; Bryder, D.; Rossi, DJ Ċelloli staminali ematopojetiċi distinti funzjonalment jimmodulaw il-potenzjal tan-nisel ematopojetiku matul ix-xjuħija permezz ta 'mekkaniżmu ta' espansjoni klonali. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2010, 107, 5465–5470. [CrossRef]

44. Pang, WW; Prezz, EA; Sahoo, D.; Beerman, I.; Maloney, WJ; Rossi, DJ; Schrier, SL; Weissman, IL Iċ-ċelloli staminali ematopojetiċi tal-mudullun tal-bniedem huma miżjuda fil-frekwenza u preġudikati majelojde bl-età. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2011, 108, 20012–20017. [CrossRef]

45. Rossi, DJ; Bryder, D.; Seita, J.; Nussenzweig, A.; Hoeijmakers, J.; Weissman, IL Defiċjenzi fit-tiswija tal-ħsara fid-DNA jillimitaw il-funzjoni taċ-ċelloli staminali ematopojetiċi bl-età. Nat. Cell Biol. 2007, 447, 725–729. [CrossRef]

46. ​​Rossi, DJ; Bryder, D.; Zahn, JM; Ahlenius, H.; Sonu, R.; Wagers, AJ; Weissman, IL Alterazzjonijiet intrinsiċi taċ-ċelluli huma l-bażi tat-tixjiħ taċ-ċelluli staminali ematopojetiċi. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2005, 102, 9194–9199. [CrossRef]

47. Rossi, DJ; Jamieson, CH; Weissman, IL-Ċelloli Staminali u l-Pathways to Aging and Cancer. Ċellula 2008, 132, 681–696. [CrossRef]

48. Corces, M.; Hong, W.-J.; Weissman, IL; Medeiros, QK; Majeti, R. Mutazzjonijiet preleukemic fil-lewkimja majelojde akuta umana jaffettwaw ir-regolaturi epiġenetiċi u jippersistu fir-remissjoni. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2014, 111, 2548–2553. [CrossRef] [PubMed]

49. Jaiswal, S.; Jamieson, CH; Pang, WW; Park, CY; Chao, MP; Majeti, R.; Traver, D.; Van Rooijen, N.; Weissman, IL CD47 Huwa Upregulated fuq Ċelloli Stem Ematopojetiċi li jiċċirkolaw u Ċelloli tal-Lewkimja biex tiġi evitata l-fagoċitożi. Ċellula 2009, 138, 271–285. [CrossRef] [PubMed]

50. Jamieson, CH; Ailles, LE; Dylla, SJ; Muijtjens, M.; Jones, C.; Zehnder, JL; Gotlib, J.; Li, K.; Manz, MG; Keating, A.; et al. Proġenituri tal-granuloċiti-makrofagi bħala ċelluli staminali lewkemiċi kandidati f'CML ta' blast-crisis. N. Engl. J. Med. 2004, 351, 657–667. [CrossRef] [PubMed]

51. Jan, M.; Snyder, TM; Corces-Zimmerman, MR; Vyas, P.; Weissman, IL; Quake, SR; Majeti, R. L-Evoluzzjoni Klonali taċ-Ċelloli Stem Ematopojetiċi Prelewkemiċi tippreċedi Lewkimja Majelojde Akuta tal-Bniedem. Sci. Transl. Med. 2012, 4, 149ra118. [CrossRef]

52. Miyamoto, T.; Weissman, IL; Akashi, K. Ċelloli staminali mhux lewkemiċi li jesprimu AML1/ETO f'lewkimja majeloġenika akuta b'8; 21 traslokazzjonijiet kromosomali. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2000, 97, 7521–7526. [CrossRef]

53. Sykes, SM; Kokkalaris, KD; Milsom, MD; Levine, RL; Majeti, R. Evoluzzjoni klonali ta 'ċelloli staminali ematopojetiċi prelewkemiċi f'lewkimja majelojde akuta. Exp. Hematol. 2015, 43, 989–992. [CrossRef] [PubMed]

54. Kojima, Y.; Volkmer, J.-P.; McKenna, K.; Civelek, M.; Lusis, AJ; Miller, CL; Direnzo, D.; Nanda, V.; Ye, J.; Connolly, AJ; et al. CD47-antikorpi li jimblokkaw jirrestawraw il-fagoċitożi u jipprevjenu l-aterosklerożi. Natura 2016, 536, 86. [CrossRef]

55. Wang, B.; Zhang, F.; Wang, S.; Yang, R.; Chen, C.; Zhao, W. Immaġini HClO endoġenu fl-aterosklerożi bl-użu ta 'sonda ġdida ta' fluworexxenza b'rispons mgħaġġel. Chem. Komun. 2020, 56, 2598. [CrossRef] [PubMed]

56. Scofield, VL; Schlumpberger, JM; Punent, LA; Weissman, IL Protochordate allorekognition hija kkontrollata minn sistema ta 'ġene simili MHC. Natura 1982, 295, 499. [CrossRef] [PubMed]

57. Burighel, P.; Schiavinato, A. Rigressjoni deġenerattiva tas-sistema diġestiva fl-ascidian kolonjali Botryllus schlosseri (Pallas). Ċellula Tissue Res. 1984, 235, 309–318. [CrossRef] [PubMed]

58. Ballarin, L.; Burighel, P.; Cima, F. A Tale of Death and Life: Natural Apoptosis in the Colonial Ascidian Botryllus schlosseri (Urochordata, Ascidiacea). Curr. Pharm. Des. 2008, 14, 138. [CrossRef] [PubMed]

59. Ballarin, L.; Schiavon, F.; Manni, L. Apoptosi naturali matul iċ-Ċiklu Blastoġenetiku tal-Botryllus schlosseri Ascidian Kolonjali: Analiżi Morfoloġika. Zoöl. Sci. 2010, 27, 96. [CrossRef]

60. Voskoboynik, A.; Rinkevich, B.; Weiss, A.; Moiseeva, E.; Reznick, AZ Involviment tal-makrofaġi għal deġenerazzjoni b'suċċess ta 'organi apoptotiċi fl-urochordate kolonjali Botryllus schlosseri. J. Exp. Biol. 2004, 207, 2409. [CrossRef]

61. Lauzon, RJ; Ishizuka, KJ; Weissman, IL Ġenerazzjoni ċiklika u Deġenerazzjoni ta 'Organi f'Urokordat Kolonjali Jinvolvi Crosstalk bejn Qadim u Ġdid: Mudell għall-Iżvilupp u r-Riġenerazzjoni. Dev. Biol. 2002, 249, 333–348. [CrossRef]

62. Rinkevich, B.; Weissman, IL Botryllus schlosseri (Tunicata) irradjazzjoni sħiħa tal-kolonja: Ir-riassorbiment taż-żooid senescent u r-riassorbiment immunoloġiku jinvolvu avvenimenti ta' rikonoxximent simili? J. Exp. Zoöl. 1990, 253, 189. [CrossRef]

63. Rosental, B.; Raveh, T.; Voskoboynik, A.; Weissman, IL Perspettiva evoluzzjonarja dwar is-sistema ematopojetika permezz ta 'kordat kolonjali: Immunità alloġenika u ematopoiesi. Curr. Opinja. Immunol. 2020, 62, 91. [CrossRef]

64. Franchi, N.; Ballarin, L. Immunità fi Protochordates: Il-Perspettiva tat-Tunicate. Quddiem. Immunol. 2017, 8, 674. [CrossRef] [PubMed]

65. Lauzon, RJ; Kannella, C.; Kerr, L.; Tiozzo, S. Dinamika tal-fagoċiti f'urokordata riġenerattiva ħafna: għarfien dwar l-iżvilupp u d-difiża tal-ospiti. Dev. Biol. 2013, 374, 357–373. [CrossRef] [PubMed]

66. Peronato, A.; Franchi, N.; Loriano, B. BsTLR1: Membru ġdid tal-familja TLR ta 'proteini ta' rikonoxximent mill-ascidian kolonjali Botryllus schlosseri. Ħut Molluski. Immunol. 2020, 106, 967. [CrossRef] [PubMed]

67. Khalturin, K.; Becker, M.; Rinkevich, B.; Bosch, TC Urochordates u l-oriġini taċ-ċelluli naturali killer: Identifikazzjoni ta' riċettur relatat CD94/NKR-P1- fiċ-ċelloli tad-demm ta' Botryllus. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2003, 100, 622–627. [CrossRef] [PubMed]

68. Franchi, N.; Schiavon, F.; Carletto, M.; Gasparini, F.; Bertoloni, G.; Tosatto, SC; Ballarin, L. Rwoli immuni ta 'lectin li torbot rhamnose fl-ascidian kolonjali Botryllus schlosseri. Immunobiology 2011, 216, 725–736. [CrossRef]

69. Franchi, N.; Schiavon, F.; Betti, M.; Canesi, L.; Ballarin, L. Insight dwar mogħdijiet ta 'transduction tas-sinjali involuti fil-fagoċitosi fl-ascidian kolonjali Botryllus schlosseri. J. Invertebr. Pathol. 2013, 112, 260–266. [CrossRef]

70. Ballarin, L. Immunobiology of compound ascidians, b'referenza partikolari għal Botryllus schlosseri: State of art. Invertebr. Sopravivenza. J. 2008, 5, 54.

71. Cheung, RCF; Wong, JH; Pan, W.; Chan, YS; Yin, CM; Dan, XL; Ng, TB Lettini marittimi u l-applikazzjonijiet mediċinali tagħhom. Appl. Microbiol. Bijoteknoloġija. 2015, 99, 3755. [CrossRef] [PubMed]

72. Franchi, N.; Ballarin, L. Karatterizzazzjoni preliminari ta 'komplement f'tunikat kolonjali: C3, Bf, u inibizzjoni ta' attività opsonika C3 minn compstatin. Dev. Komp. Immunol. 2014, 46, 430. [CrossRef]

73. Peronato, A.; Drago, L.; Rothbacher, U.; Macor, P.; Ballarin, L.; Franchi, N. Sistema ta 'Komplement u fagoċitosi fi protochordate kolonjali. Dev. Komp. Immunol. 2020, 103, 103530. [CrossRef]

74. Nicola, F.; Ċelloli Soriano, B. Morula bħala emoċiti ewlenin tal-mogħdija tal-lectin ta 'attivazzjoni tal-kompliment fit-tuniċi kolonjali Botryllus schlosseri. Ħut Molluski. Immunol. 2017, 63, 157. [CrossRef]

75. Ballarin, L.; Menin, A.; Franchi, N.; Bertoloni, G.; Ċelluli Cima, F. Morula u rikonoxximent mhux awto fil-kompost ascidian Botryllus schlosseri. Invertebr. Sopravivenza. J. 2005, 2, 1.

76. Palanisamy, SK; Rajendran, NM; Marino, A. Diversità tal-Prodotti Naturali ta 'Ascidians tal-Baħar (Tunicates; Ascidiacea) u Drogi b'suċċess fl-Iżvilupp Kliniku. Nat. Prod. Bioprosp. 2017, 7, 1–111. [CrossRef]

77. Ramesh, C.; Tulasi, BR; Raju, M.; Thakur, N.; Dufosse, L. Prodotti tal-Baħar Naturali mit-Tunicati u l-Mikrobi Assoċjati tagħhom. Drogi ta’ Marzu 2021, 19, 308. [CrossRef]

78. Copelan, EA Trapjant ta 'Ċelloli Staminali Ematopojetiċi. N. Engl. J. Med. 2006, 354, 1813. [CrossRef] [PubMed]

79. Doulatov, S.; Notta, F.; Laurenti, E.; Dick, JE Ematopoiesis: Perspettiva tal-Bniedem. Cell Stem Cell 2012, 10, 120. [CrossRef] [PubMed]

80. Osawa, M.; Hanada, K.-I.; Hamada, H.; Nakauchi, H. Rikostituzzjoni Limfoematopojetika fit-Tul minn CD Uniku 34- Ċellula Stem Ematopojetika Baxxa/Negattiva. Xjenza 1996, 273, 242–245. [CrossRef] [PubMed]

81. Spangrude, GJ; Heimfeld, S.; Weissman, IL Purifikazzjoni u karatterizzazzjoni ta 'ċelluli staminali ematopojetiċi tal-ġrieden. Xjenza 1988, 241, 58–62. [CrossRef]

82. Weaver, CT; Hatton, RD; Mangan, PR; Harrington, LE IL-17 Ċitokini tal-Familja u l-Espansjoni tad-Diversità tal-Linji taċ-Ċelloli T tal-Effector. Annu. Dun Immunol. 2007, 25, 821. [CrossRef] [PubMed]

83. Miossec, P.; Kolls, JK Timmira ċelloli IL-17 u TH17 f'infjammazzjoni kronika. Nat. Dun Drug Discov. 2012, 11, 763. [CrossRef] [PubMed]

84. Zhu, S.; Qian, Y. IL-17/IL-17 sistema tar-riċetturi fil-mard awtoimmuni: Mekkaniżmi u potenzjal terapewtiku. Clin. Sci. 2012, 122, 487–511. [CrossRef]

85. van der Waart, AB; van der Velden, WJ; Blijlevens, NM; Dolstra, H. Immira l-Pathway IL17 għall-Prevenzjoni tal-Mard tal-Grat-Versus-Host. Biol. Mudullun Transpl. 2014, 20, 752. [CrossRef]

86. Carnevale-Schianca, F.; Leisenring, W.; Martin, PJ; Furlong, T.; Schoch, G.; Anasetti, C.; Appelbaum, FR; Carpenter, PA; Deeg, HJ; Kiem, H.-P.; et al. Valutazzjoni Lonġitudinali tal-Morbidità u l-Mard Akut tal-Grat-versus-Host wara Trapjant Alloġeniku ta' Ċelloli Ematopojetiċi: Analiżi Retrospettiva ta' Studju ta' Fażi III Multiċentriku. Biol. Mudullun Transpl. 2009, 15, 749. [CrossRef]

87. Holt, CD Ħarsa ġenerali tat-Terapija Immunosoppressiva fit-Trapjant ta' Organi Solidi. Anesthesiol. Clin. 2017, 35, 365. [CrossRef]

88. Ustun, C.; Jillella, A.; Shah, R.; Sterling, K.; DeRemer, D.; Savage, N.; Awan, F.; Gossage, JR; Dillard, T.; Martin, PJ It-tieni allo-SCT minn donatur differenti jista 'jtejjeb il-GVHD tal-musrana severa reżistenti għall-isterojdi. Mudullun Transpl. 2010, 45, 1658. [CrossRef] [PubMed]

89. Lindahl, KF; Wilson, DB Histokompatibilità limfoċiti T ċitotossiċi attivati ​​bl-antiġen. II. Stimi tal-frekwenza u l-ispeċifiċità tal-prekursuri. J. Exp. Med. 1977, 145, 508. [CrossRef] [PubMed]

90. Macdonald, WA; Chen, Z.; Gras, S.; Archbold, J.; Tynan, FE; Clements, CS; Bharadwaj, M.; Kjer-Nielsen, L.; Saunders, PM; Wilce, MC; et al. Allorekognizzjoni taċ-Ċellola T permezz ta' Mimicry Molekulari. Immunità 2009, 31, 897. [CrossRef]

91. Taketa, DA; De Tomaso, AW Botryllus schlosseri allorekognition: Tackling the enigma. Dev. Komp. Immunol. 2015, 48, 254. [CrossRef]

92. De Tomaso, AW; Nyholm, SV; Palmeri, KJ; Ishizuka, KJ; Ludington, WB; Mitchel, K.; Weissman, IL Iżolament u karatterizzazzjoni ta' locus tal-istokompatibilità tal-protokordate. Natura 2005, 438, 454. [CrossRef] [PubMed]

Oron Goldstein 1,†, Edna Ayerim Mandujano-Tinoco 1,2,†, Tom Levy 3, Shani Talice 1, Tal Raveh 3, Orly Gershoni-Yahalom 1, Ayelet Voskoboynik 3 u Benyamin Rosental 1,*.

1 Ċentru ta 'Riċerka dwar il-Mediċina Riġenerattiva u ċ-Ċelloli Staminali, Id-Dipartiment tal-Mikrobijoloġija, Immunoloġija u Ġenetika ta' Shraga Segal, Fakultà tax-Xjenzi tas-Saħħa, Università Ben Gurion tan-Negev, Beer Sheva 8410501, Iżrael; Orongold@post.bgu.ac.il (OG); eamanti24@gmail.com (EAM-T.); shanital@post.bgu.ac.il (ST); orlyge@post.bgu.ac.il (OG-Y.)

2 Laboratorju tat-Tessut Konnettiv, Centro Nacional de Investigación y Atención de Quemados, Instituto Nacional de Rehabilitación "Luis Guillermo Ibarra Ibarra", Calzada Mexico-Xochimilco Nru 289, Col. Arenal de Guadalupe, Tlalpan, Belt tal-Messiku 14389, Messiku

3 Istitut għall-Bijoloġija taċ-Ċelloli Staminali u l-Mediċina Riġenerattiva, l-Iskola tal-Mediċina tal-Università ta 'Stanford, Hopkins Marine Station, Stanford University, Chan Zuckerberg Biohub, Pacific Grove, CA 93950, USA; levyt@stanford.edu (TL); tal6933@stanford.edu (TR); ayeletv@stanford.edu (AV)

* Korrispondenza: rosentab@post.bgu.ac.il

† OG u EAM-T. ikkontribwixxa bl-istess mod għal dan ix-xogħol.

For more information:1950477648nn@gmail.com