Is-sawni huma ta' benefiċċju jew ta' ħsara għall-mard tal-kliewi poliċistiku awtosomali dominanti? Eżami Bil-Mudell Mouse Ⅰ

Sfond Astratt:Proteini ta 'xokk tas-sħana (Hsps), li l-espressjoni tagħhom hija indotta minntrattament termali, funzjoni fil-protezzjoni tal-kliewiminnli jrażżan l-apoptożiuiż-żamma tal-vijabbiltà tubulari tal-kliewi. Barra minn hekk, reċentement, ġie indikat li l-espressjoni ta 'Hsps tista' tkun mira terapewtika għal mard tal-kliewi poliċistiku awtosomali dominanti (ADPKD). Aħna investigajna l-effett tat-terapija tas-sawna niexfafuq ġrieden mudell ADPKD.

Agħfas HAWN BIEX IKseb ESTRAT TA' CISTANCHE ORGANIKU NATURALI B'25% ECHINACOSIDE U 9% ACTEOSIDE GĦALL-FUNZJONI TAL-KLIEI

Metodi u Riżultati:Il-ġrieden (ġrieden maskili DBA/2FG-pay) ġew kategorizzati fi tliet gruppi: kontrolli, TS: ġrieden paga suġġetti għal sawna fit-tul b'ilma amministrat li fih 4% sukrożju, SW: ġrieden paga mogħtija ilma li fih 4% sukrożju. Il-grupp TS kien soġġett għal sessjonijiet tas-sawna darbtejn fil-ġimgħa għal erba 'ġimgħat. Il-grupp TS laħaq u nżamm f'temperaturi tar-rektum ta' madwar 39.0 grad sakemm tneħħew bir-reqqa mill-apparat tar-raġġi infra-aħmar bogħod. Wara 4 ġimgħat ta 'trattament tas-sawna, il-livelli tal-krejatinina u tad-demm-urea-nitroġenu (BUN) ġew determinati b'metodu enżimatiku. Il-proteina ta 'xokk tas-sħana (HSP) jew it-tkabbir taċ-ċelluli u l-proteini relatati mad-daqs ġew analizzati permezz ta' western blotting. Il-grupp TS wera livelli marġinalment ogħla ta 'kreatinina u BUN milli għamlu l-gruppi ta' kontroll u SW, madankollu, id-differenzi ma kinux sinifikanti. Madankollu, it-tkabbir taċ-ċisti fil-grupp TS naqas b'mod sinifikanti meta mqabbel ma 'dak tal-grupp ta' kontroll. L-espressjoni ta' HSP90 naqset kemmxejn fil-gruppi TS u SW relattiva għall-grupp ta' kontroll (p <0.01 jew p < 0.001, vs. kontroll), kif kienet l-espressjoni ta' Erk , li hija marbuta mal-iżvilupp u l-proliferazzjoni taċ-ċisti (p <0.05, TS vs kontroll). L-espressjoni ta 'Hsp27 u l-livell ta' fosforilazzjoni fil-grupp SW kienu komparabbli ma 'dak tal-grupp ta' kontroll. Madankollu, il-grupp TS kellu livelli miżjuda ta 'Hsp27 u fosforilazzjoni (NS). L-espressjoni ta' pro-caspase-3 fil-grupp TS kienet marġinalment aktar baxxa minn dik fil-grupp ta' kontroll. Madankollu, l-attività ta' caspase-3 fil-gruppi kollha ma wriet l-ebda differenzi.

Konklużjoni:Is-sejbiet ta 'dan l-istudju indikaw li 4 ġimgħat ta' trattament tas-sawna jistgħu jikkawżaw deidrazzjoni temporanja u disfunzjoni renali relatata u jwasslu għar-riskju li jistimulaw it-tkabbir taċ-ċisti permezz ta 'żieda fl-espressjoni ta' Hsp27. Barra minn hekk, aħna kkonkludejna li l-prevenzjoni tad-deidrazzjoni u t-tkabbir taċ-ċisti jistgħu jiġu mrażżna billi jittieħed ammont xieraq ta 'ilma direttament wara t-trattament tas-sawna.

I Introduzzjoni

Mard tal-kliewi poliċistiku awtosomali dominanti(ADPKD) huwa disturb ġenetiku kkaratterizzat mit-tkabbir ta 'bosta ċisti fiż-żewġ kliewi. L-ADPKD hija kkawżata prinċipalment minn mutazzjonijiet fil-ġeni tal-marda poliċistika tal-kliewi 1 (PKD1) u PKD2, li jikkodifikaw il-polycystin 1 (PC1) u PC2, rispettivament. Matul l-għexieren ta’ snin tal-marda, il-pazjenti jiżviluppaw ċisti tal-kliewi kbar mimlija fluwidu li jfixklu l-funzjoni tal-kliewi. Bħalissa, in-numru ta' pazjenti b'ADPKD fil-Ġappun huwa stmat li hu ta' 31,000, li jammonta għal madwar 3-5% tal-pazjenti kollha tad-dijalisi). Madwar 50% tal-pazjenti b'ADPKD jiżviluppaw mard renali fl-aħħar stadju sa l-età ta' 602). Tolvaptan, antagonist tar-riċettur tal-vasopressin 2 (V2), ġie approvat bħala l-ewwel aġent terapewtiku għall-ADPKD, u l-użu kliniku tiegħu beda f'Mejju 2014 fil-Ġappun). Għalkemm hija mediċina effettiva li tnaqqas ir-rata tat-tkabbir taċ-ċisti, bħalissa m'hemm l-ebda kura għall-ADPKD, u mhux possibbli li titwaqqaf il-formazzjoni taċ-ċisti fil-kliewi.

It-terapija termali, inkluża l-balneoterapija (BT) u t-terapija spa (ST), intużat ta 'spiss globalment bħala fiżjoterapija jew terapija alternattiva. F'ambjenti kliniċi, l-għan ewlieni tat-terapija termali huwa li jinkisbu riżultati ta 'trattament effikaċi mingħajr ma ssir ħsara lit-tessuti normali. Reviżjoni sistematika riċenti wriet li BT u ST jipprovdu serħan mill-uġigħ sinifikanti u kwalità tal-ħajja mtejba f'mard kroniku tas-sistema muskuloskeletali jew tat-tessut konnettiv). L-istimulazzjoni termali tinduċi proteini ta 'xokk tas-sħana (Hsps) li huma essenzjali għas-sopravivenza taċ-ċelluli permezz tal-funzjoni tagħhom bħala chaperones tal-proteini. Ir-rwol tal-Hsps fis-saħħa u l-mard tal-kliewi huwa varjabbli. L-induzzjoni tal-Hsps tista’ tkun jew ta’ benefiċċju jew ta’ detriment għall-kliewi, skont l-Hsps speċifiċi, it-tip ta’ ċellula u l-kuntest). Fit-tessut tal-kliewi, Hsps huma parti importanti tas-sistema ta 'difiża intraċellulari, li hija attivata minn tipi differenti ta' stress ċellulari. Id-diversi Hsps ġewwa ċ-ċellula jistabbilizzaw l-istrutturi taċ-ċelluli u jtejbu r-reżistenza taċ-ċelluli għall-apoptożi u n-nekrożi6), 7). F'dawn l-aħħar snin, ġie rrappurtat li l-Hsps għandhom rwol detrimentali fl-ADPKD, u għalhekk huma miri terapewtiċi8), 9). Għalhekk, immirajna li ninvestigaw l-effett tas-sawni fuq annimali mudell ADPKD, meta t-tagħbija tas-sħana li tgħolli t-temperatura tar-rektum b'madwar 2 gradi u żżommha għal madwar 30 min tiġi ripetuta. II Materjali u Metodi 1. Ġurdien mudell ta' marda poliċistika tal-kliewi awtosomali dominanti (ADPKD) Il-proċeduri kollha tal-annimali twettqu skont il-linji gwida għall-kura u l-użu tal-annimali tal-laboratorju approvati mill-Università tax-Xjenza tas-Saħħa ta' Kumamoto (Nru 18-07) . Ġrieden maskili DBA/2FG-pcy (pcy)10), 11) (8 ġimgħat, n=12) (Kyudo, Kumamoto, Ġappun) b’piżijiet inizjali tal-ġisem ta’ 20.9±0.7 g intużaw bħala ġrieden mudell ADPKD f’dan esperiment. Ġrieden DBA maskili (8 ġimgħat, n=3) intużaw bħala referenza għall-mudell tal-ġurdien ADPKD. Figura 1 turi d-dehra u l-kliewi imneħħija bħala eżempji tipiċi ta 'ġrieden pcy (Fig. 1A, B). L-annimali kollha tpoġġew taħt umdità u temperatura kkontrollati b'ċiklu ta' dawl/dlam ta' 12:12-siegħa u ngħataw aċċess b'xejn għal chow standard tal-ġurdien u ilma tal-vit.

Disa 'ġrieden pcy (qodma 8 ġimgħat) ġew maqsuma b'mod każwali fit-tliet gruppi li ġejjin- grupp ta' kontroll: ġrieden pcy bħala kontroll (n=3), grupp TS: ġrieden pcy esposti għal stimulazzjoni termali sistemika ripetuta (n {{3} }); u grupp SW: ġrieden pcy li ngħataw ilma li kien fih 4% sukrożju (n=3). Ġrieden fil-grupp TS ġew ipprovduti ilma li kien fih 4% sukrożju matul il-lejl, wara stimulazzjoni termali sistemika biex tiġi evitata d-deidrazzjoni. Fi studju preċedenti, konna sibna li t-telf fil-piż tal-ġisem kien bejn wieħed u ieħor 3-4% wara stimulazzjoni termali sistemika12). Meta 4% ilma sukrożju ingħata lill-ġrieden pcy, l-ammont ta 'ilma kkunsmat żdied b'mod sinifikanti minn 5.6 ± 0.6 mL għal 7.4 ± 0.7 mL (p <0.001 , Fig. 1C). Il-konsum ta 'ilma ta' sukrożju matul il-lejl ta '4% kien tabilħaqq konsum għoli ta' fluwidu ekwivalenti għal 14 ± 7% tal-piż tal-ġisem. Il-grupp SW kkunsmat ilma matul il-lejl bl-istess frekwenza bħall-grupp TS.

Fig. 1 A: ġurdien DBA (Lt) u ġurdien 2FG-pcy (Rt). B: Kilwa ta 'DBA (Lt) jew 2FG-pcy (Rt), Skala bar=1 ċm. C: Ammont ta 'teħid ta' l-ilma jew l-ilma sukrożju ta '4% matul il-lejl wara sawna għal ġrieden pcy ta' 8 ġimgħat. Id-dejta tintwera bħala medja ± SD. n=3. ＊＊＊ p <0.001 (Analiżi statistika użat test T paired).

2. Stimulazzjoni termali sistemika (sawna)

L-intensità tas-sħana tas-sawna ġiet stabbilita b'referenza għal studju preċedenti13). Madankollu, it-temperatura tar-rektum ta 'wħud mill-ġrieden pcy qabżet it-42 grad minħabba l-volum żgħir tal-ġisem tagħhom meta mqabbel ma' dawk ta 'ġrieden DBA normali u ġrieden 129X1/SvJ. Għalhekk, it-temperatura tar-rektum ġiet ippruvata tgħolli bi grad, iżda minħabba l-limitazzjoni tal-kontroll tas-sistema tas-sawna niexfa tar-raġġi infra-aħmar imbiegħda (provduta mill-Università ta 'Kagoshima), it-temperatura tar-rektum ġiet issettjata biex titla' għal madwar 39 grad. Ma kien hemm l-ebda rapporti dwar il-frekwenza tas-sau nas għall-ADPKD misjuba; għalhekk, il-frekwenza minima effettiva tas-sawna (darbtejn/ġimgħa) stabbilita fi studju dwar ir-relazzjoni bejn l-għawm tas-sawna u l-mard kardjovaskulari u kawżi oħra ta 'mortalità minn Laukkanen et al.14) ġiet adottata. Speċifikament, il-ġrieden irċevew trattament tas-sawna fi 43 grad għal għaxar minuti u mbagħad f'37 grad għal 35 min biex jgħollu t-temperatura tar-rektum minn 37.1 ± 0.1 grad għal 39.3 ± 0.3 grad bl-użu tal- sistema ta 'sawna niexfa tar-raġġi infra-aħmar bogħod. It-temperaturi tar-rektum tal-ġrieden inżammu madwar 39.0 grad, sakemm inħarġu mill-apparat tas-sawna. Il-grupp TS kien espost għas-sawna għal erba 'ġimgħat, darbtejn fil-ġimgħa.

3. Proċedura analitika

Id-dejta fiżjoloġika nkisbet mill-ġrieden kollha fi tmiem il-perjodu ta’ studju ta’ erba’ ġimgħat. Inġabru kampjuni ta 'l-awrina ta' erbgħa u għoxrin siegħa f'gaġeġ metaboliċi, u ġie determinat il-konsum ta 'fluwidu. Inġabru kampjuni tad-demm mill-vina cava inferjuri, u l-livelli ta’ kreatinina fil-plażma u nitroġenu ta’ l-urea fid-demm (BUN) ġew imkejla bl-użu ta’ Hitachi 7180 Biochemistry Automatic Analyzer (Hitachi High-Technologies Corporation, Tokyo, Ġappun), b’Aqua-auto Kainos CRE -II kit tat-test jew kit tat-test UN-II (Kainos, Tokyo, Ġappun) bl-użu tal-metodu enżimatiku.

4. Studji istoloġiċi

Il-kliewi ġew iffissati b'4% soluzzjoni buffer tal-fosfat tal-paraformaldehyde u inkorporati fil-paraffin. Kampjuni tal-kliewi tqassmu f'intervalli ta' 2-µm u mtebbgħin b'ematossilina u eosina (H&E), u ċ-ċisti tat-tubuli ġew ikkwantifikati fuq 2 sezzjonijiet/ġurdien (kilwa tal-lemin) bl-użu ta' ImageJ (Istituti Nazzjonali tas-Saħħa, Bethesda, Maryland, L-ISTATI UNITI). Żoni bi tiċrit tat-tessuti u bżieżaq li ġew identifikati b'ingrandiment ogħla (× 40) ġew esklużi mill-analiżi, kif irrappurtat qabel15).

5. Punent blotting

Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) u blotting saru bl-użu ta 'proċeduri standard. Alikwoti li fihom 15 µg proteina ġew soġġetti għal SDS-PAGE. Intużaw antikorpi mqajma kontra l-proteini li ġejjin: Hsp27 (1:1,000, sc-9012, Santa Cruz Biotechnology), phospho-Hsp27 (1:1,000, #2401S, Cell Signaling Technology), total-Akt (1:1,000, #9272, Cell Signaling Technology), phospho-Akt (1:1,000, #9275, Cell Signaling Technology), Erk1 /2 (1:1,000, #9102, Teknoloġija tas-Sinjali taċ-Ċelluli), phospho-Erk1/2 (1:1,000, #9101, Teknoloġija tas-Sinjali taċ-Ċelluli), mTOR (1:1 ,000, #2972, Cell Signaling Technology), phospho-mTOR (1:1,000, #2971, Cell Signaling Technology), caspase 3 (1:500, ab4051, Abcam, Cambridge, UK), kaspase maqsuma-3 (1:1,000, #9661, Cell Signaling Technology), u -actin (1:1,000, sc{-130656, Bijoteknoloġija ta’ Santa Cruz). Il-blots ġew skoperti bl-użu tas-sistema ta 'detezzjoni ta' western blotting ECL Prime (GE Healthcare, UK) skont l-istruzzjonijiet tal-manifattur. Id-dejta wriet kwantifikazzjoni relattiva kontra -actin, li ntużat bħala kontroll intern.

6. Analiżi statistika

Għal analiżi statistika, id-dejta bejn il-gruppi TS u SW tqabblu bl-użu tat-test Mann-Whitney U. Il-gruppi tqabblu bl-użu ta' analiżi tal-varjanza f'direzzjoni waħda (ANOVA) segwita mit-test ta' Tukey biex jiġu identifikati d-differenzi. Id-differenzi kienu kkunsidrati statistikament sinifikanti f'p < 0.05. Id-dejta hija espressa bħala medja ± devjazzjoni standard (SD) jew medja ± żball standard tal-medja (SEM). GraphPad Prism 6 (GraphPad Software, San Diego, CA, USA) intuża għall-analiżi statistika.

Servizz ta 'Appoġġ Ta' Wecistanche-L-akbar esportatur ta' cistanche fiċ-Ċina:

Email:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Shop Għal Aktar Speċifikazzjonijiet Dettalji:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop