Effetti Antiossidanti Ta Phenylethanoids Minn Cistanche Deserticola

Kuntatt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

Quanbo Xiong/ Shigetoshi Kadota, "Tadato Tani,6 u Tsuneo Namba"

L-estratt tal-aċetun-H2O (9:1) miz-zokk ta 'Cistanche deserticola wera attività qawwija ta' tneħħija tar-radikali ħielsa. Disa 'komposti feniletanojdi ewlenin ġew iżolati minn dan l-estratt. Huma ġew identifikati mill-NMR bħala acteoside, isoacteoside, l^acetylacteoside, tubuloside B, echinacoside, tubuloside A, syringalide A 3z-a-rhamno-pyranoside, cistanoside A u cistanoside F. Dawn il-komposti kollha wrew attivitajiet ta 'tneħħija tar-radikali ħielsa aktar b'saħħithom minn a. -tocopherol fuq 1,1 -diphenyI-2-picrylhydrazy 1 (DPPH) radikali u xanthine/xanthine oxidase (XOD) iġġenerat superoxide anion radical (Oj). Fost id-disa 'komposti, isoacteoside u tubuloside B, li l-parti ta' caffeoyl tagħhom hija f'pożizzjoni d' tal-glukosju, wrew effett inibitorju fuq XOD. Aħna studjajna aktar l-effetti ta 'dawn il-phenylethanoids fuq il-perossidazzjoni tal-lipidi fil-mikrosomi tal-fwied tal-firien indotti minn metodi enżimatiċi u mhux enżimatiċi. Kif mistenni, kull wieħed minnhom wera inibizzjoni sinifikanti kemm fuq aċidu askorbiku/Fe2 plus u ADP/NADPH/Fe3 flimkien ma 'perossidazzjoni tal-lipidi indotta fil-mikrosomi tal-fwied tal-firien, li kienu aktar qawwija minn a-tocopherol jew aċidu caffeic. L-effett antiossidant instab li ġie msaħħaħ b'żieda fin-numru ta 'gruppi idroksil fenoliċi fil-molekula.

Kliem ewlieni: Cistanche deserticola; feniletanojdi;antiossidant; DPPH (1 ,1 -difenil-2-picrylhydrazyl) radikali; radikali anjoni superossidu; perossidazzjoni tal-lipidi

zokk ta' Cistanche deserticola

Iz-zokk ta' Cistanche spp. (Cistanche Herba, familja Orobanchaceae) huwa toniku fil-mediċina tradizzjonali Ċiniża użata għal defiċjenza tal-kliewi kkaratterizzata minn impotenza, sensazzjoni ta 'kesħa fil-flettijiet u l-irkopptejn, sterilità femminili, u stitikezza minħabba nixfa tal-musrana fis-senile.Numru ta' kostitwenti inklużi phenyl-ethmoids (xi kultant imsejħa phenylpropanoids),2) ir idoids3* u polysaccharides4) ġew iżolati minn dawn il-pjanti. Sato et al5} irrapportaw li xi phenylethanoids minn din id-droga mhux raffinata wrew effett protettiv kontra tnaqqis kemm ta 'mġieba sesswali kif ukoll ta' tagħlim fil-ġrieden mdendlin mgħobbija bi stress. Phenylethanoids huma l-kostitwenti ewlenin ta 'dawn il-pjanti u huma kkunsidrati li jikkontribwixxu għall-azzjonijiet varji ta' din il-mediċina.6)

Phenylethanoids huma mqassma ħafna fir-renju tal-pjanti u xi wħud instabu li għandhom l-attività ta 'anti-anoxia,7) anti-neoplasm,8) inibizzjoni tal-enzimi,9* anti-infjammazzjoni,10) antinefrite,1 n anti-mikroorganiżmu, u immunomodulation.12) Ġew irrapportati wkoll studji dwar l-attività antiossidativa ta' xi phenylethanoids minn Pedicularis,13 -15) iżda ma nstab l-ebda rapport li jittratta l-attività antiossidativa tal-phenylethanoids mill-ispeċi Cistanche.

Huwa rikonoxxut sew li r-radikali ħielsa huma involuti b'mod kritiku f'diversi patoġenesi bħal kanċer, disturb kardjovaskulari, artrite, infjammazzjoni, kif ukoll fil-proċessi deġenerattivi assoċjati mat-tixjiħ.16™18) Fl-iskrinjar tagħna għal aġenti kontra t-tixjiħ minn riżorsi naturali , sibna li kull wieħed mill-CHC13 (C), EtOAc (E), aċetun (A), aċetun-H2O (9:1) (AH), u l-ilma (H) estratt taż-zokk ta 'Cistanche deserticola wera DPPH qawwi attività scavenging radikali (Fig. 1), fosthom, l-aktar b'saħħitha kienet esebita mill-estratt ta 'l-aċetun—H?.(9:1) (AH). L-estratt tal-aċetun-H2O (9:1) kien fih proporzjon għoli ta 'phenylethanoids, li probabbilment kienu kostitwenti attivi tal-effetti ta' scavenging radikali ħielsa. Iżolajna l-phenylethanoids maġġuri minn dan l-estratt u studjajna l-effetti antiossidattivi permezz tat-tneħħija tagħhom fuq radikali DPPH u xanthine/XOD iġġenerat radikali anjoni superossidu, u l-inibizzjoni tagħhom ta 'aċidu askorbiku/Fe2 plus u ADP/NADPH/Fe3 flimkien ma' perossidazzjoni tal-lipidi indotta fil-fwied tal-firien. mikrosomi.

Cistanche deserticola

MATERJALI U METODI

Reaġenti Polyamide C-200 (75一150/zm) u ġel tas-silika (Wakogel C-200, 75—150^m) trab għall-kromatografija tal-kolonna, DPPH (1,1 -diphenyl{{ 8}}picrylhydrazyl), xanthine, XOD (xanthine oxidase), NBT (nitroblue tetrazolium), ADP, g-NADPH, caffeic acid u a-tocopherol inxtraw minn Wako Pure Chemicals, Osaka, il-Ġappun. Malonaldehyde bis(dimethylacetal) kien minn Tokyo Kasei, Tokyo, Ġappun. BSA (albumina tas-serum bovin) u allopurinol kienu minn sigma,St. Louis, USA Kimiċi oħra kienu ta' grad analitiku.

Strumenti L-assorbiment tal-UV tkejjel fuq aSpettrofotometru tar-reġistrazzjoni Shimadzu UV-2200, spettri NMR inġarru fuq sistema JEOL GX-400 jew JEOL JNM-LA 400WB FT NMR.

Materjali tal-Pjanti Droga mhux raffinata kummerċjali (prodotta f'Nei Monggol, mixtrija f'Bozhou Crude Drug Market, provinċja ta' Anhui, iċ-Ċina, 1995; il-voucher speci men, TMPW Nru 15479 depożitat fil-Mużew ta 'Materia Medica, Ċentru ta' Riċerka Analitika għall-Ethnomedicine, Riċerka Istitut għal Wakan-Yaku, Toyama Medical and Pharmaceutical University) ġie identifikat bħala zkuk ta 'Cistanche deserticola YC Ma billi tqabbel il-karattri morfoloġiċi u anatomiċi tagħha ma' kampjun awtentiku pprovdut mill-Professur Dawen Shi, Dipartiment tal-Farmakognożja, Shanghai Medical University, iċ-Ċina.

Estrazzjoni u Iżolament Il-mediċina mhux raffinata trab (5.87 kg) ġiet estratta b'mod konsekuttiv b'CHC13 (12, 9 1x2) u EtOAc (9 1 x 3) f'temperatura tal-kamra u refluxed bl-aċetun (9 1 x 3), aċetun-玦0 (9:1,91x3) u H2O (7.5 1x4) biex jagħtu l-estratti ta' CHC13 (C) (28.7g), EtOAc (E) ( 13.4g), aċetun (A) (95g), aċetun- H2O (9:1) (AH) (175 g) u H2O (H) (2.51kg), rispettivament. Porzjon ta' lOOg ta' l-estratt ta' aċetun-H2O (9:1) ġie soġġett għal kolonna ta' poliamide C-200 (4{{50}}0 g) u eluwit b'H2O ({{41 }}) u mbagħad MeOH (5 1). L-eluwent MeOH (20 g) kien iċċarġjat f'kolonna tal-ġel tas-silika (600 g) u eluwit b'CHCl3-MeOH-H2O (8: 3: 0.3) (5 1) biex jagħti 10 frazzjonijiet. Kull frazzjoni ġiet soġġetta għal kolonna Sephadex LH-20 u elużi b'diversi proporzjonijiet ta 'MeOH-H2O (0一50 fil-mija); disa' feniletanojdi ewlenin 1 (607 mg), 2 (286 mg), 3 (43 mg), 4 (187 mg), 5 (1.1 g), 6 (100 mg), 7 (208 mg), 8 (168 mg) , 9 (75 mg) inkisbu.

Annimali Male Std: Intużaw firien Wistar (8 ġimgħat, 230一 250 g). L-annimali nxtraw miċ-Ċentru tal-Annimali tal-Laboratorju ta 'Shizuoka u ġew mitmugħa b'pellet chow tal-laboratorju (Clea Japan) u ngħataw ilma ad libitum.

Preparazzjoni ta 'Sospensjoni mikrosomali tal-Fwied tal-Firien Il-frazzjoni mikrosomali tal-fwied tal-firien ġiet ippreparata bil-metodu ta' Kiso et al.l9) iżda mingħajr trattament minn qabel ta 'phenobarbital. Wara li l-annimali sawmu għal 24 siegħa, il-fwied ġew imdewweb b'soluzzjoni ta' NaCl kiesħa fis-silġ 0.9 fil-mija in situ, imbagħad maqtugħin f'biċċiet irqaq u omoġenizzati f'soluzzjoni kiesħa ta' 1.15 fil-mija KC1 (1.{{9} } ml/g ta’ piż tal-fwied imxarrab). L-omoġenat ġie dilwit erba' darbiet b'soluzzjoni KC1 ta' 1.15 fil-mija u ċentrifugat fi 8000 g għal 20 min f'4 gradi. Il-frazzjoni tas-supernatant imbagħad inġabret u ultracentrifuged f'105000 g għal 60 min. Il-pellet miksub ġie sospiż mill-ġdid fl-istess volum ta 'soluzzjoni KC1 ta' 1.15 fil-mija. Il-kontenut tal-proteini ġie ddeterminat bil-metodu ta 'Lowry et bl-użu ta' albumina bħala standard.

Preparazzjoni tal-Kampjun Il-kampjuni ttestjati ġew maħlula fl-ilma jew etanol u dilwiti bl-ilma għal konċentrazzjonijiet varji. Il-konċentrazzjonijiet finali ta 'etanol kienu taħt 1 fil-mija fis-sistemi ta' analiżi kollha ħlief DPPH assaġġ radikali scavenging. Etanol f'konċentrazzjoni finali taħt 1 fil-mija ma wera l-ebda effett fuq dawn is-sistemi ta 'assaġġ.

DPPH Radical Scavenging Effect L-effett scavenging ikkorrispondi għall-intensità tat-tifi DPPH radikali, kif deskritt minn Hatano et al.21) Ħames mitt /A ta '60 卩m DPPH f'EtOH ġie miżjud ma' 500 /zl ta 'soluzzjoni tal-kampjun u jitħalla jirreaġixxi għal 30 min f'temperatura tal-kamra, imbagħad id-densità ottika ġiet imkejla f'520 nm. Għall-vojt, intuża EtOH minflok is-soluzzjoni DPPH, u għall-kontroll, intuża H2O minflok is-soluzzjoni tal-kampjun. Il-valuri IC50 ġew ikkalkulati minn linji ta 'rigressjoni fejn l-axxissa tirrappreżenta l-konċentrazzjoni tal-kompost ittestjat u l-ordinata t-tnaqqis fil-mija medju ta' radikali DPPH minn erba 'testijiet separati.

Effetti fuq il-Ġenerazzjoni Radikali tal-Anjoni tas-Superossidu Il-produzzjoni tal-anjoni tas-superossidu fis-sistema xanthine/XOD ġiet determinata bl-użu ta' nofs daqs tal-metodu ta' Imanari et al.22) Taħlita komposta minn 900/zl ta' 0.05m Na2CO3 (pH 10.2), 50 /il kull wieħed minn 3mM xanthine, 3mM EDTA, 1.5mg/ml BSA, 0.75 mM NBT u kampjun ittestjat ġie miżjud ma '50 ta' 0.1 mg/ml XOD biex tibda l- reazzjoni. Wara l-inkubazzjoni għal 30 min, ir-reazzjoni twaqqfet b'50 /il ta' 6 mM CuCl2 u l-assorbanza tkejjel f'560 nm. Is-soluzzjoni ta 'kontroll ġiet ippreparata bl-istess mod, iżda ntuża 50 /il ta' H2O minflok is-soluzzjoni tal-kampjun. F'soluzzjoni vojta, intuża 50 /il ta 'H2O minflok soluzzjoni XOD. Il-valuri IC50 ġew ikkalkulati minn linji ta 'rigressjoni fejn l-axxissa rrappreżenta l-konċentrazzjoni log tal-kompost ittestjat u l-ordinata l-inibizzjoni perċentwali medja ta' tnaqqis NBT ta 'erba' f'testijiet dipendenti.

Effetti inibitorji fuq l-Attività ta 'XOD Effetti inibitorji fuq l-attività ta' XOD ġew stmati bil-metodu ta 'Hatano et al.* b'xi modifiki. Taħlita li tikkonsisti f'600/11 ta' buffer (0.1 m soluzzjoni ta' fosfat, pH 7.5), 50 以 ta' soluzzjoni XOD (0.068 U/ml f'buffer) u 50 卩 1 tas-soluzzjoni tal-kampjun ġiet inkubata minn qabel għal 10 min f'25 grad. Imbagħad, 300 pl ta 'soluzzjoni ta' xanthine (0.1 mM f'buffer) ġew miżjuda mat-taħlita, u s-soluzzjoni li tirriżulta ġiet inkubata għal 30 min f'25 grad. Ir-reazzjoni ta 'l-enżima ġiet mitmuma billi żżid 1 n HC1 (100 /zl), u l-assorbiment tat-taħlita ta' reazzjoni ġiet imkejla f'295 nm. Il-konċentrazzjoni ta 'aċidu uriku ffurmat fit-taħlita ġiet ikkalkulata mill-assorbiment, wara li tnaqqas l-assorbiment tas-soluzzjoni vojta li kienet ippreparata kif deskritt hawn fuq, ħlief li s-soluzzjoni XOD ġiet sostitwita b'50 /zl tal-buffer. L-effetti inibitorji fuq XOD ġew espressi mill-inibizzjoni fil-mija ( fil-mija ) tal-formazzjoni ta 'aċidu uriku vs dak fil-kontroll, li fih intuża l-ilma minflok is-soluzzjoni tal-kampjun. L-inibitur XOD magħruf, allopurinol, intuża bħala kontroll pożittiv.

Effetti Inibitorji fuq il-Perossidazzjoni tal-Lipidi fil-Mikrosomi tal-Fwied tal-Firien Il-perossidazzjoni tal-lipidi fil-mikrosomi tal-fwied tal-firien indotti mhux enżimatikament minn ascorbic/Fe2 plus u indotti b'mod enżimatiku minn ADP/NADPH/Fe3 plus kienu mkejla bil-metodu ta' Kiso et al.l9) b'xi modifiki .

a) Aċidu Ascorbic/Fe2 flimkien ma' Perossidazzjoni tal-Lipidi Indotta fil-Mikrosomi tal-Fwied tal-Firien: It-taħlita ta' reazzjoni kienet magħmula minn 390/11 ta' 100mM KC1/45 mM Tris-HCl (pH 8.0), 50pl ta 'frazzjoni mikrosomali f'1.15 fil-mija KC1 (20mg proteina/ml) u 50 以 ta' soluzzjoni tal-kampjun. Wara li żiedet 10/11 ta '10 mM aċidu askorbiku/0.5mM FeSO4 u mbagħad inkubat f'37 grad għal 20 min, it-taħlita ta' reazzjoni tkessaħ fis-silġ biex twaqqaf ir-reazzjoni. Il-perossidazzjoni tal-lipidi ġiet imkejla bil-metodu tal-aċidu thiobarbituric24) u espressa bħala produzzjoni MDA (malondialdehyde). Dik

b) ADP/NADPH/Fe3 flimkien ma' Perossidazzjoni tal-Lipidi Indotta f'Mikrosomi tal-Fwied tal-Firien: It-taħlita ta' reazzjoni kienet fiha 290贝 ta' 100mM KC1/45him Tris-HCl (pH 8.0), 50/il ta' sospensjoni mikrosomali f'1.15 fil-mija KC1 (20mg proteina/ml) u 50 以 ta 'kampjun fl-ilma. Ħamsin ta '20 mM ADP ippreparat frisk, 50//I ta' 1 mM NADPH u 10 ta '2mM FeCl3 ġew miżjuda u mbagħad inkubati f'37 grad għal 30 min. Il-perossidazzjoni tal-lipidi ġiet imkejla u IC50 ġie kkalkulat bil-metodu ta 'hawn fuq.

benefiċċji cistanche: jipproteġu l-fwied

RIŻULTATI

Determinazzjoni tal-Istruttura B'paragun dirett tad-dejta tagħhom ^H-NMR u 13C-NMR mal-letteratura,2* id-disa' feniletanojdi ġew identifikati bħala 2,-acetylacteoside (1), cistanoside A (2), tubuloside A (3), echinacoside ( 4), acteoside (5), syringalide A 3'-a-rhamnopyranoside (6), tubuloside B (7), isoacteoside (8) u cistanoside F (9), rispettivament (Fig. 2). Madankollu, għall-acteoside, kompost rappreżentattiv ta' phenylethanoids, assenjazzjonijiet tas-sinjali 13C-NMR ta' C-3 u C-4 f'aglycone moety, C-3, C-4 , C-5 u C-6 fil-parti kaffeika f'rapporti preċedenti25) kienu konfużi. Bil-metodu ta '2D-NMR bħal HMBC u HMQC, aħna assenjati mingħajr ambigwità d-dejta 13C-NMR ta' acteoside bħala aglycone moety Cl: 131.49, C-2: 117.14, C-3: 146.07, C{ {41}}: 144.62, C-5: 116.34, C-6: 121.29, Ca: 72.33, C# 36.54; frazzjoni kaffeoyl Cl: 127.63, C-2: 115.26, C-3: 146.79, C{-4: 149.78, C{-5: 116.55, C{-6: 123.24 , Ca: 168.33, Cg: 114.68, Cy: 148.04; frazzjoni ta' glukożju C-l': 104.16, C-2': 75.97, C{-3': 81.66, C4: 70.39, C{-5': 76.16, C{-6' : 62.35; u rhamnose moety: Cl: 102.99, C-2: 72.22, C{-3: 72.05, C{-4: 73.79, C{-5: 70.58, C-6 : 18.46.

Ir-relazzjonijiet struttura-attività ġew studjati għal dawn id-disa 'phenylethanoids mill-radikali DPPH tagħhom u xanthine/XOD iġġenerat attivitajiet ta' scavenging radikali anjoni superossidu, aċidu askorbiku/Fe2 plus u ADP/NADPH/ Fe3 flimkien ma 'perossidazzjoni tal-lipidi indotta fil-mikrosomi tal-fwied tal-firien. L-aċidu caffeic u l-a-tocopherol li huma kenniesa radikali ħielsa u antiossidanti magħrufa sew ġew impjegati bħala sustanzi ta 'kontroll pożittiv.

DPPH Radical Scavenging Activity All of the nine phenylethanoids showed stronger DPPH radical scav-enging activity than either a-tocopherol or caffeic acid, except that cistanoside A (2), syringalide A 3'-a-rhamno- pyranoside (6) and cistanoside F (9) showed weaker activity than caffeic acid (Fig. 3). The activity order was tubuloside B ⑺(IC50 = 2.99 ^m) > echinacoside ⑷ (IC50 = 3.29 fiM)M 2z-acetylacteoside ⑴(IC50 = 3.30 /im) M tubuloside A (3) (IC50 = 3.34/im) acteoside (5) (IC50 = 3.36 〃m)> isoacteoside (8) (IC50 = 3.49 ^m) >caffeic acid (IC50 = 4.79 /2M)> cistanoside A (2) (IC5O = 4.87 /im)>syringalide A S'-a-rhamnopyranoside (6) (IC5O=5.52 /zm) > cistanoside F (9) (IC{50=6}.29 /im) > a-tocopherol (IC{{10 }}.2//m). Tubuloside B ⑺,echinacoside (4), 2/-acetylacetoside (1), tubuloside A (3), acteoside (5) u isoacteoside (8) (IC5O=2.99一3.49 /im), li kull wieħed minnhom għandu erba 'gruppi idroksil fenoliċi fil-molekula bl-istess mod wera attività aktar b'saħħitha minn cistanoside A (2) li 3-OH ta' frazzjoni aglycone kien methylated. Syringalide A 3z-a-rhamnopyranoside (6) li għandu grupp OH wieħed biss fil-parti aglycone wera attività relattivament dgħajfa. Cistanoside F (9), li għandu biss żewġ gruppi hydroxyl li jinsabu f'moety caffeoyl iżda m'għandux phenylethanol aglycone, wera l-attività l-aktar dgħajfa.

Effects on Superoxide Anion Radical Generation All the tested compounds exhibited a stronger inhibitory activity than a-tocopherol but weaker than caffeic acid on the generation of superoxide anion radical (Fig. 4). The activity order was caffeic acid (IC5()= 1.82jUM)>2'- acetylacteoside (1) (IC50 = 2.25 /im) tubuloside B ⑺ (IC50 = 2.34jUM) >echinacoside (4) (IC50 = 2.74juM)^ isoacteoside (8) (IC50 = 2.88 /zm) acteoside (5) (IC50 = 2.89 f/M) >cistanoside F (9) (IC5o = 3.13 rm) tubuloside A (3) (IC50 = 3.17 jUM)syringalide A 3'-a-rhamnopyrano- side (6) (IC50 = 3.20^m)>cistanoside A (2) (IC5O=3.69 jUm) > a-tokoferol (IC50 > 10 〃m).

Effetti inibitorji fuq l-Attività XOD Isoacteoside (8) u tubuloside B (7) biss, li l-moety caffeoyl tagħhom huwa f'pożizzjoni 6z tal-glukosju, kellhom effetti inibitorji fuq l-attività ta 'XOD, u fenilethanojdi oħra, li għandhom porzjon ta' caffeoyl fil-^- pożizzjoni tal-glukosju, ma wriet l-ebda effett fil-konċentrazzjonijiet ittestjati (25一200 m) (Tabella 1). iżolati disa 'komposti feniletanojdi ewlenin minn dan l-estratt u ddeterminaw l-istrutturi tagħhom permezz tal-NMR. sistema bħala tubuloside B (7)M2'-acetylatteoside (1) iso-acteoside (8) echinacoside (4) tubuloside A (3) M acteo side (5) > syringalide A 3'-a-rhamnopyranoside (6) > cistanoside A (2) > cistanoside F (9); fis-sistema ADP/NADPH/Fe3 plus bħala tubuloside B (7)2,-acetylatteoside (^^iso acteoside (8) acteoside (5) > tubuloside A (3) > echinaco side (4) > syringalide A 3z-a-rhamnopyranoside (6) > cistanoside A (2) > cistanoside F (9). Dawn iż-żewġ ordnijiet kienu simili għal dak fit-testijiet ta 'hawn fuq ta' tneħħija ta 'radikali ħielsa, speċjalment fit-test ta' scavenging radikali DPPH. Xorta waħda, in-numru ta 'gruppi idroksil fenoliċi fil-molekula kellu l-aktar rwol importanti fl-inibizzjoni tal-perossidazzjoni tal-lipidi fil-mikrosomi tal-fwied tal-firien.

effetti ta' cistanche

DISKUSSJONI

Aħna ttestjajna l-attivitajiet ta 'scavenging tar-radikali ħielsa tad-diversi estratti tas-solvent taz-zokk ta' Cistanche deserticola fuq radikali DPPH u sibna li l-estratt ta 'acetone-H2O (9:1) wera l-aktar attività b'saħħitha. Biex issib il-kostitwenti attivi ta 'l-attività ta' scavenging radikali ħielsa, iżolajna disa 'komposti feniletanojdi ewlenin minn dan l-estratt u ddeterminajna l-istrutturi tagħhom permezz ta' NMR.

L-effetti antiossidattivi ta 'dawn il-phenylethanoids ġew evalwati mill-attività tagħhom ta' tneħħija tar-radikali ħielsa u l-attività ta 'perossidazzjoni kontra l-lipidi. L-a-tocopherol magħruf ħafna kien użat bħala sustanza ta 'kontroll pożittiv. Bħala l-Il-lipofiliċità ta 'a-tocopherol tista' taffettwa l-attivitajiet tagħha fis-sistemi ta 'assaġġ preżenti ħlief fl-assaġġ ta' scavenging radikali DPPH, ħadna l-aċidu caffeic bħala sustanza oħra ta 'kontroll pożittiv.

L-ewwel, għamilna testijiet fuq l-attivitajiet ta 'tneħħija tar-radikali ħielsa. Id-9 phenylethanoids ittestjati kollha bla dubju wrew attivitajiet ta 'tneħħija radikali DPPH u superoxide anion radikali aktar b'saħħithom minn a-tocopherol, iżda xi wħud kienu aktar b'saħħithom u oħrajn kienu aktar dgħajfa mill-aċidu caffeic. L-attività ta 'scavenging radikali żdiedet b'żieda fin-numru ta' gruppi ta 'hydroxyl fenoliċi. Il-paralleliżmu mhux komplut ta 'attivitajiet ta' scavenging tal-anjoni radikali u superossidu DPPH kien maħsub li kien dovut għall-karattri differenti bejn l-ispeċi radikali u xi fatturi oħra involuti f'dawn iż-żewġ sistemi ta 'reazzjoni,21,26) għar-radikali DPPH huwa radikali indott kimikament li jirreaġixxi. bi kenniesa radikali b'mod kimiku sempliċi, filwaqt li r-radikali tal-anjoni superossidu huwa ġġenerat minn xanthin/XOD, reazzjoni tal-enżimi.

Jekk il-phenylethanoids jinibixxu r-radikali tal-anjoni superossidu ġġenerat minn xanthine/XOD, l-inibizzjoni tista' titqies bħala r-riżultat tal-attività tagħhom ta' tneħħija tar-radikali tal-anjoni superossidu jew (u) l-inibizzjoni tagħhom tal-enzima XOD,23) għalhekk wettaqna test tagħhom. effetti inibitorji ta 'xanthine oxidase. Huwa interessanti li, b'mod selettiv, biss isoacteoside (8) u tubuloside B (7), li l-parti ta 'caffeoyl tagħhom hija f'6/-pożizzjoni tal-glukosju, wrew inibizzjoni. Huma wrew effett fil-konċentrazzjoni ta '25—200jtiM fuq 3.4xlO ^ 3U / ml (10jug / ml) ta' XOD, għalkemm l-attività kienet aktar dgħajfa minn allopurinol; komposti oħra, li l-parti ta 'caffeoyl tagħhom hija fil-《-pożizzjoni tal-glukosju, ma wrew l-ebda effett inibitorju. Dan ir-riżultat ipprovda l-ewwel rapport tal-effett inibitorju tal-phenylethanoids fuq l-enzima XOD. Chan et al21) irrappurtaw li l-aċidu caffeic u xi wħud mill-analogi tiegħu kellhom effetti inibitorji fuq l-attività XOD, madankollu, ma sibna l-ebda effett bħal dan ta 'aċidu caffeic taħt il-kundizzjonijiet ta' reazzjoni preżenti. F'dan it-test, il-konċentrazzjoni XOD kienet simili għal dik fit-test tal-effett fuq il-ġenerazzjoni radikali tal-anjoni superossidu (4.3 /zg/ml), iżda l-konċentrazzjoni tal-komposti kienet ħafna ogħla milli f'dan tal-aħħar. Għalhekk, l-inibizzjoni tal-ġenerazzjoni Oj minn dawn il-phenylethanoids hija dovuta għall-attività ta 'scavenging radikali tagħhom, iżda mhux għall-attività inibitorja tagħhom tal-enzima XOD.

Dik ir-reazzjoni b'katina radikali ħielsa finalment twassal għal perossidazzjoni tal-lipidi hija magħrufa sew.28,29) Aħna għalhekk studjaw dawn il-komposti tal-feniletanojdi għall-effetti tagħhom fuq il-perossidazzjoni tal-lipidi fil-mikrosomi tal-fwied tal-firien indotti mis-sistema enżimatika ADP/NADPH/Fe3 plus u dik indotta minn is-sistema mhux enżimatika aċidu askorbiku/Fe2 plus . Dawn il-komposti kollha wrew effetti ta 'perossidazzjoni kontra l-lipidi aktar b'saħħithom minn aċidu caffeic u a-tocopherol fiż-żewġ sistemi. Huwa ġeneralment aċċettat li ż-żewġ sistemi huma kkatalizzati minn jonji tal-ħadid, jew Fe2 plus jew Fe3 plus , involuti ma 'radikali tal-perossil tal-lipidi,30,31) u li r-radikali idrossiliku OH għandu l-aktar rwol importanti fil-perossidazzjoni tal-lipidi,32 _34) għalkemm il-bidu ta 'OH ġie dubitat f'xi rapporti.35祁6) Min-naħa l-oħra, superoxide anion radical OJ, li huwa l-prodott primarju ta 'e_ attakk fuq O2 fil-katina radikali, huwa pjuttost ħażin radikali reattiv u ma jirriżultax fil-perossidazzjoni tal-lipidi innifsu. Għalkemm dawn il-phenylethanoids wrew attività scavenging aktar dgħajfa fuq ir-radikali tal-anjoni superossidu milli l-aċidu caffeic, huma wrew azzjoni ta 'perossidazzjoni kontra l-lipidi ħafna aktar b'saħħitha minn dan tal-aħħar. Għalhekk, aħna nemmnu li huma, bħal xi polifenoli aromatiċi oħra li jkissru l-katina, jistgħu jinibixxu l-perossidazzjoni tal-lipidi ta 'hawn fuq fil-mikrosomi tal-fwied tal-firien billi jċellaw jonji Fe2 plus jew Fe3 plus, u wkoll billi jeliminaw ir-radikali superossidu Oj biex ikissru reazzjoni katina radikali. .37,38) Barra minn hekk, jistgħu wkoll iqaxxru speċi radikali aktar tossiċi bħal radicals hydroxyl u lipid peroxyl biex jinterrompu direttament il-perossidazzjoni tal-lipidi f'qawwa ogħla minn caffeic acid.38,39)

Li et al. studjaw xi phenylethanoid glycosides inklużi acteoside (verbascoside) (5), isoacteoside (isoverbascoside) (1), u echinacoside (4) minn Pedicularis għall-inibizzjoni tagħhom ta 'l-awtossidazzjoni ta' aċidu linolejku f'micelles, sistema mhux bijoloġika,13) għall-protezzjoni tagħhom kontra l-emolisi ossidattiva in vitro,14''1 u wkoll għall-effetti ta' tneħħija tagħhom fuq NBT/PMS/NADH iġġenerat superossidu u inibizzjoni tal-perossidazzjoni tal-lipidi indotta minn aċidu askorbiku/Fe2 plus fil-mikrosomi tal-fwied tal-ġrieden.15) Attività simili. -istruttura relazzjoni kienet osservata fir-rapporti ta 'Li et al. u r-riżultati tagħna. Jiġifieri, l-attivitajiet tal-phenylethanoids għall-inibizzjoni tal-perossidazzjoni tal-lipidi jiddependu prinċipalment fuq in-numru u l-pożizzjoni sterika ta 'gruppi idroksil fenoliċi.15) Fuq il-bażi tal-kimika stereo tagħhom, il-gruppi idroksil fenoliċi ta' frazzjoni caffeoyl fuq acteoside (5), tubuloside A ( 3), u echinacoside (4), li għandhom il-caffeoyl fil-pożizzjoni 4z tal-glukosju, aktar faċilment jiffurmaw rabta idroġenu mal-gruppi hydroxyl ta 'rhamnosyl minn dawk fuq isoacteoside (8) u tubuloside B (7), li għandhom il-caffeoyl f'pożizzjoni 6' tal-glukosju. Għalhekk, dawn tal-aħħar irriżervaw aktar gruppi ta 'hydroxyl fenoliċi ħielsa minn tal-ewwel u għalhekk wera attività aktar b'saħħitha ta' perossidazzjoni tal-lipidi. Aħna ndunat ukoll li 2z-acetylation ta 'dawn il-phenylethanoids, għalkemm xi ftit, tejbet l-effetti antiossidattivi tagħhom. Pereżempju, acteoside (5) u isoacteoside (8), meta 2'- acetylated f'2/-acetylatteoside (1) u tubuloside B (7), rispettivament, urew attivitajiet aktar b'saħħithom fl-erba 'sistemi ta' analiżi kollha. Minħabba s-superjorità tal-kimika stereo u 2'-acetylation, tubuloside B (7) wera l-aktar attività antiossidativa b'saħħitha fost il-kampjuni ttestjati. Forsi minħabba s-sostituzzjoni tat-tielet parti taz-zokkor f'pożizzjoni 6'~, din il-korrelazzjoni ma kinitx toqgħod tajjeb fil-każ ta' tubuloside A (3) jew echinacoside (4); madankollu, fis-sistema ADP/NADPH/Fe3 plus, tubuloside A ⑶ xorta wera attività ta 'perossidazzjoni kontra l-lipidi aktar b'saħħitha minn echinacoside (4).

Barra minn hekk, l-ordni ta 'attività ta' scavenging radikali DPPH wera paralleliżmu aħjar ma 'dak ta' perossidazzjoni kontra l-lipidi milli għamlet l-ordni ta 'attività ta' scavenging radikali anjoni superossidu. Dan wera għal darb'oħra li l-assaġġ ta 'scavenging radikali DPPH huwa metodu konvenjenti u affidabbli għall-assaġġ antiossidant,26) għalkemm ir-radikali DPPH huwa radikali indott kimikament filwaqt li radikali anjoniku superossidu jista' jkun radikali bijoloġikament endoġenu.

Bħala konklużjoni, id-disa 'phenylethanoids kollha wrew attivitajiet sinifikanti ta' tneħħija ta 'radikali ħielsa u effetti ta' perossidazzjoni kontra l-lipidi fl-istudju preżenti. L-effett antiossidattiv ġie msaħħaħ b'żieda fin-numru ta 'gruppi idroksil fenoliċi fil-molekula. Kif wieħed jista 'jimmaġina, l-effetti antiossidanti ta' dawn il-phenyletha noids ippruvati hawn jista 'jkollhom rwol importanti fl-azzjonijiet tal-mediċina Cistanchis Herba u jistgħu jispjegaw parzjalment il-mekkaniżmi tal-attivitajiet ta' xi phenyl ethanoids kontra neoplażmi,8* infjammazzjoni10) u nefrite, 1 n li fihom ir-radikali ħielsa huma involuti serjament.

Cistsanche Echinacoside: Anti-ossidazzjoni

REFERENZI

1) Namba T., "The Encyclopedia of Wakan-Yaku (Traditional Sino-Japanese Medicines) with Color Pictures,5, Vol. II, Hoikusha, Tokyo, 1994, pp. 16—17.

2) a) Kobayashi H,, Karasawa H., Miyase T., Fukushima S., Chem. Pham. Bull, 32, 3009—3014 (1984); b) Idem, ibid., 32, 3880—3885 (1984); c) Idem, ibid., 33, 1452—1457 (1985); d) Karasawa H., Kobayashi H., Takizawa N., Miyase T., Fukushima S., Yakugaku Zasshi, 106, 562—566 (1986); e) Idem, ibid., 106, 721—724 (1986); /) Kobayashi H., Oguchi H., Takizawa N., Miyase T., Ueno A., Usmanghani K., Ahmad M., Chem. Pharm. Bull., 35, 3309一3314 (1987); g) Yoshizawa F., Deyama T., Takizawa N., Usmanghani K., Ahmad M., ibid., 38, 1927—1930 (1990).

3) a) Kobayashi H, Komatsu J., Yakugaku Zasshi, 103, 508一511 (1983); b): Kobayashi H., Karasawa H., Miyase T., Fukushima S., Chem. Pharm. Bull., 32, 1729—1734 (1984); c) Idem, ibid., 33, 3645—3650 (1985).

4) Naran R., Ebringerova A., Hromadkova Z., Patoprsty V., Phytochemistry, 40, 709—715 (1995).

5) Sato T., Kozima S., Kobayashi K., Kobayashi H., Yakugaku Zasshi. 105, 1131—1144 (1985).

6) Jin XL, Zhang QR, China J. Chinese Materia Medica, 19, 695—697 (1994).

7) Yamahara J., Kitani T., Kobayashi H., Kawahara Y., Yakugaku Zasshi, 110, 932—935 (1990).

8) a) Pettit G. R・,Numata A., Takemura T., Ode RH, Narula A, S., Schmidt JM, Cragg GM, Pase CP, J. Nat. Prod., 53, 456— 58 (1990); b) Saracoglu I., Inoue M., Calis I., Ogihara Y., Biol. Pharm, Bull., 18, 1396—1400 (1995).

9) Andary C., '4Caffeic Acid Glycoside Esters and Pharmacology/ ed. minn Scalbert A., Polyphenolic Phenomena, Edizzjonijiet INRA, Pariġi, 1993, p. 237—245.

10) Murai M., Tamayama Y., Nishibe S., Planta Med.. 61, 479― 80 (1995).

11) Hayashi K., Nagamatsu T., Ito M., Hattori T., Suzuki Y., Jpn. J. Pharmacol., 66, 47一52 (1994).

12) a) Molnar J., Gunics G., Mucsi I., Koltai M., Petri L, Shoyama Y., Matsumoto M., Nishioka L, Acta Microbiol. Hung.. 36, 425― 32 (1989); b) Sasaki H., Nishimura T., Morota T., Chin M., Mitsuhashi H" Komatsu Y., Maruyama H., Tu GR, He W., Xiong YL, Planta Med., 55, 4582462 (1989).

13) Li J., Wang PF, Zheng RL, Liu ZM, Jia 乙 J., Planta Med., 59, 315—317 (1993).

14) Zheng RL, Wang PF, Li J., Liu Z. M,, Jia ZJ, Chem. Phys. Lipidi. 65, 151—154 (1993).

15) Li J., Zheng RL, Liu 乙 M., Jia 乙 J., Acta Pharmacol. Sinica, 13, 427T30 (1992).

16) Barber DA, Harris SR, American Pharmacy. 34, 26一35 (1993).

17) Elstner EF, Klin Wochenschr, 69, 949—956 (1991).

18) Martin GR, Danner DB, Holbrook NJ, Ann. Rev Med., 44, 419—29 (1993).

19) Kiso Y., Tohkino H., Hattori M., Sakamoto T., Namba T., Planta Med.. 50, 298—302 (1984).

20) Lowry OH, Rosebrough NJ, Farr AL, Randall RJ, J. Biol. Chem.. 193, 265—275 (1951).

21) Hatano T., Edamatsu R., Hiramatsu M., Mori A., Fujita Y., Yasuhara T" Okuda T., Chem. Pharm. Bull., 37, 2016一2021 (1989).

22) Imanari T., Hirota M., Miyazaki M., Igaku No Ayumi, 101, 496—497 (1977).

23) Hatano T., Yasuhara T, Yoshihara R., Agata L, Noro T., Okuda T., Chem. Pharm. Bull., 38, 1224—1229 (1990).

24) Ohkawa H., Ohishi N., Yagi K., Anal. Biochem., 95, 351一358 (1979).

25) a) Lahloub M, F., Zaghloul AM, El-Khayat SA, Afifi MS, Sticher O., Planta Med.. 57, 481— 85 (1991); b) Nishimura H., Sasaki H., Inagaki N., Chin M. (Zhen 乙 X.), Mitsuhashi H., Phytochemistry. 30, 965—969 (1991); c) Budzianowski J., Skrzypczak L., ibid,, 38, 997—1001 (1995),

26) Marsden SB, Nature (Londra), 181, 1199—1200 (1958).

27) Chan WS, Wen PC, Chiang HC, Anticancer Res., 15, 703一 708, (1995).

28) Janero DR, Burghardt B., Biochem, Pharmacol.. 37, 3335一3342 (1988).

29) Buettner GR, Arch. Biochem. Biophys., 300, 535一543 (1993).

30) Herbert V., Shaw S., Jayatilleke E., Stopler-Kasdan T., Stem Cells, 12, 289—303 (1994).

31) Aust SD, Miller DM, Samokyszyn VM,Methods Enzymol., 186, 457—463 (1990).

32) Kubota S., Ikegami Y., Kurokawa T., Sasaki R., Sugioka K., Nakano M., Biochem. Biophys. Res, Commun., 108, 1025一1031 (1982).

33) Yagi K., Ishida N., Komura S., Ohishi N., Kusai M., Kohno M., Biochem. Biophys. Riż. Komun., 183, 945一951 (1992).

34) Hockenbery DM, Oltvai ZN, Yin XM, Milliman CL, Korsmeyer SJ, Cell. 75, 241—251 (1993).

35) Bucher JR, Tien M., Aust AD, Biochem. Biophys. Res, Commun., Ill, 777—784 (1983).

36) Yoshida T., Otake H., Aramaki Y., Hara T., Tsuchiya S., Hamada A., Utsumi H., Biol. Pharm. Bull.. 19, 779—782 (1996).

37) Afanas5 EVIB, Dorozhko A. L, Brodskii AV, Kostyuk VA, Potapovitch L A., Biochem. Pharmacol., 38, 1763—1769 (1989).

38) Robak J., Gryglewski RJ, Biochem. Pharmacol.. 37, 837—841 (1988).

39) Chimi H., Morel I., Lescoat G., Pasdeloup N・,Cillard P., Cillard J., Tossicology in Vitro, 9, 695一702 (1995)