Effett Anti-Melanoġeniku Ta' Estratt Etanoliku Ta' Sorgu Bicolor Fuq Melanogenesis Indotta minn IBMX fiċ-Ċelloli tal- Melanoma B16/F10

Kuntatt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

Hye Ju Han, Seon Kyeong Park, Jin Yong Kang, Jong-Min Kim, Seul Ki Yoo, u Ho Jin Heo

Astratt:Biex tevalwa possibbiltà bħala aġent li jbajdu l-ġilda ta 'Sorgu bicolor(S. bicolor), tiegħuantiossidantattività, u effett anti-melanoġeniku fuq 3-isobutyl-1-methylxanthine (IBMX) indottmelanoġenesif'ċelluli tal-melanoma B16/F10 ġew investigati. Ir-riżultat tal-kontenuti fenoliċi totali (TPC) indika that60 fil-mija estratt ta ' l-etanolS. bicolor(ESB) għandu l-ogħla kontenut minn estratti ta’ etanol oħra.Antiossidantl-attività ġiet evalwata bl-użu ta' 2,2'-azino-bis-(3-ethylbenzothiazolin-6-sulfonic acid) diammoniumsalt (ABTS)/1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl (DPPH) attivitajiet ta ' scavenging radikali u malondialdehyde(MDA) effett inibitorju. Dawn ir-riżultati wrew li l-ESB għandu sinifikantiantiossidantattivitajiet. L-effett inibitorju kontra tyrosinase ġie vvalutat ukoll bl-użu ta' L-tyrosine (valur IC50=89.25 µg/mL) u 3,4-dihydroxy-L-phenylalanine (L-DOPA) bħala sottostrati. Barra minn hekk, it-trattament ESB effettivament inibit il-produzzjoni tal-melanin fiċ-ċelloli tal-melanoma B16/F10 indotti minn IBMX. Biex tikkonferma l-mekkaniżmu tal-effett anti-melanoġeniku tal-ESB, eżaminajna proteini relatati mal-melanoġenesi. ESB irregolatmelanoġenesibilli titnaqqas l-espressjoni tal-fattur tat-traskrizzjoni assoċjat mal-mikroftalmja (MITF), tyrosinase, u proteina relatata mat-tyrosinase (TRP)-1. Fl-aħħarnett, 9-hydroxyoctadecadienoic acid (9-HODE),1,3-O-dicaffeoylglycerol u tricin bħala l-komposti ewlenin ta 'ESB ġew analizzati bl-użu ta' kromatografija likwida ultra-prestazzjoni-separazzjoni tal-mobilità tal-jone-quadrupole ħin tat-titjira/spettrometrija tandemmass (UPLC-IMS-QTOF/MS2). Dawn is-sejbiet jissuġġerixxu li l-ESB jista 'jkollhom il-potenzjal fiżjoloġiku li jintuża bħala materjal li jbajdu l-ġilda.

Kliem ewlieni:kontra l-melanoġenesi; Ċellula tal-melanoma B16/F10; aċidu hydroxyoctadecadienoic;Sorghumbicolor; 3-isobutil-1-methylxanthine

Cistanche jinibixxi l-formazzjoni tal-melanin.

1. Introduzzjoni

Melanin huwa ġġenerat permezz ta 'proċess, imsejjaħmelanoġenesiġewwa l-melanosomi intraċellulari tal-melanoċiti, u l-produzzjoni u d-distribuzzjoni tal-melanin jiddeterminaw il-ġilda, l-għajnejn u l-kulur tax-xagħar. Barra minn hekk, il-melanin għandu rwol vitali fil-protezzjoni tal-ġilda minn diversi molekuli u stimuli bħal radjazzjoni ultravjola (UV), speċi reattivi ta 'ossiġnu (ROS), -melanocyte-stimulatinghormone (-MSH), u aġenti li jgħollu l-adenosine monofosfat ċikliku (cAMP) inkluż forskolinand IBMX [1]. B'mod partikolari, ir-radjazzjoni UV, direttament u indirettament, tagħmel ħsara liċ-ċelluli tal-ġilda permezz ta 'ġenerazzjonijiet ROS bħal radikali hydroxyl, anions superoxide, u perossidu tal-idroġenu [2]. Ir-ROS iġġenerat jikkawża waqfiet tad-DNA b'linja waħda u doppja u jattakka molekuli strutturali ċellulari importanti bħal proteini u lipidi [2]. Għalhekk, melanin uantiossidantenżimi bħal glutathione peroxidase, superoxide dismutase, u catalase iżommu livell kostanti billi jneħħu l-ROS prodott. Madankollu, produzzjoni eċċessiva ta 'ROS bħala riżultat ta' fatturi varji tattiva l-melanoġenesi fil-ġilda, u l-akkumulazzjoni anormali ta 'melanin tinduċi effetti negattivi ta' iperpigmentazzjoni, li tikkawża spots ta 'età jew fwied, blotches, u freckles [3,4]. Bħalissa, komposti naturali bħal kojic acid, hydroquinone, arbutin, andascorbic acid, li huma magħrufa bħala inibituri tas-sintesi tal-melanin, qed jiġu utilizzati bħala addittivi li jbajdu l-ġilda. Madankollu, dawn l-ingredjenti mhux biss għandhom penetrazzjoni fqira fil-ġilda iżda wkoll jikkawżaw ċitotossiċità u infjammazzjoni b'amministrazzjoni fit-tul [5]. F'dan ir-rigward, huwa meħtieġ li tiżviluppa aġent li jbajdu mhux irritanti u effettiv biex tittratta l-iperpigmentazzjoni tal-ġilda umana, kif ukoll biex tistudja materjali ta 'riżorsi naturali għal dan.

Iċ-ċelloli tal-ġilda tal-bniedem ġeneralment jiġġeneraw melanin bħala reazzjoni ta 'fotoprotezzjoni. Il-melanogenesis hija proċess kumpless li huwa rregolat permezz ta' varjetà ta' mogħdijiet ta' sinjalazzjoni, u s-sinjali kollha fl-aħħar mill-aħħar jirregolaw b'mod pożittiv l-MITF. Peress li l-MITF attivat jippromwovi l-espressjoni tal-familja tal-ġeni tyrosinase (tyrosinase u TRPs),melanoġenesijibda bis-serjetà [6]. Ġeneralment, l-ewwel pass fil-melanoġenesi huwa li tyrosinase jikkatalizza l-ossidazzjoni ta 'L-tyrosine għal 3,4-dihydroxy-L-phenylalanine (L-DOPA), u sussegwentement jossidizza L-DOPA f'DOPA quinone. U mbagħad TRP-2 jikkonverti d-DOPA chrome f'5,6-dihydroxyindole-2-carboxylic acid (DHICA) jew 5,6-dihydroxyindole (DHI). Fl-aħħar nett, DHICA u DHI huma ossidizzati minn TRP-1, li eventwalment iwasslu għall-produzzjoni tal-melanin [6].

IBMX u methylxanthines oħra jistimulaw il-melanoġenesi billi jinibixxu l-fosfodiesterase u b'hekk iżidu l-livelli ta 'cAMP [7]. cAMP attivat minn IBMX phosphorylates extraċellulari sinjal regolat kinase (ERK) u phosphoinositide 3-kinases/protein kinase B (PI3K/Akt) passaġġi ta 'sinjalazzjoni u finalment iwassal għall-attivazzjoni ta' MITF fil-proċessi melanoġenesi [7]. Għalhekk, ir-regolazzjoni 'l isfel ta' dawn il-proteini tista 'titqies bħala fattur importanti għall-effett ta' kontra t-tibjid.

Sorgu bicolor(S. bicolor), li jappartjeni għall-familja Poaceae, huwa meqjus bħala uċuħ tar-raba importanti reġjuni intropikali, inklużi l-Afrika, l-Amerika Ċentrali, u reġjuni niexfa, u huwa r-raba l-aktar importanti ċereali tar-raba tad-dinja wara qamħ, ross, u qamħirrum [8 ]. Studji reċenti wrew li S. bicoloris ta' benefiċċju għall-bnedmin minħabba li fih fitokimiċi bħal komposti fenoliċi, tannini u anthocyanins [9]. Dawn il-fitokimiċi kisbu attenzjoni akbar minħabba tagħhomantiossidant, effetti kontra l-obeżità, kontra d-dijabete, u anti-infjammatorji [10-14]. Filwaqt li hemm diversi riżultati ta 'riċerka, studji dwar l-effett li jbajdu l-ġilda ta' S. bicolor għadhom ma sarux. Għalhekk, l-istudju preżenti kellu l-għan li jinvestiga l-attività antiossidanti u l-effetti anti-melanoġeniċi ta 'S. bicoloru biex jeżaminaw l-effetti tagħhom fuq IBMX indottimelanoġenesifiċ-ċelloli tal-melanoma B16/F10.

2. Materjali u Metodi

2.1. Kimiċi

Reaġent Folin–Ciocalteu, L-DOPA, L-tyrosine, L-aċidu askorbiku, arbutin, acarbose, dimethylsulfoxide (DMSO), albumina tas-serum bovin, -glucosidase, tyrosinase tal-faqqiegħ, albumina tas-serum bovin, 3-(4,{ {6}}dimetil-2-thiazolyl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) u IBMX inxtraw minn Sigma-Aldrich Chemical Co. (St. Louis, MO, USA). MITF (bsm-51339M) u tyrosinase (bs-0819R)inxtraw minn Bioss (Beijing, iċ-Ċina). TRP-1 (sc-166857) u -actin (sc-69879) inxtraw minn Santa Cruz Biotechnology (Dallas, TX, USA). Antikorpi sekondarji (anti-fenek u kontra l-ġurdien) inkisbu minn Cell Signaling Technology (Danvers, MA, USA).

2.2. Preparazzjoni tal-Kampjun

S. bicolor(20 g) ġie estratt b'diversi konċentrazzjonijiet ta' etanol (0, 20, 40, 60, 80 u 95 fil-mija; 1L) fi 40 grad għal 2 sigħat bl-użu ta 'kondensatur ta' rifluss. L-estratti ġew iffiltrati bl-użu ta’ karta tal-filtru (WhatmanInternational Limited, Kent, UK), u kkonċentrati bl-użu ta’ evaporatur bil-vakwu (N-1000; EYELA Co.,Tokyo, Japan). Wara li l-estratti ġew lajofilizzati bl-użu ta 'freeze dryer vakwu (Il Shin Lab Co., Ltd., Yangju, Korea), l-estratti mnixxfa ġew maħżuna fi grad -20 sakemm jintużaw.

2.3. Attività Antiossidanti In Vitro

2.3.1. Kontenut Fenoliku Totali (TPC)

Il-kontenuti fenoliċi totali ġew eżaminati abbażi tal-prinċipju li r-reagentis ta' Folin–Ciocalteu tnaqqas għal prodott ta' reazzjoni blu taħt kundizzjonijiet alkalini. Kampjun (1 mL) imħallat mar-reaġent ta' Folin–Ciocalteu u 7 fil-mija karbonat tas-sodju. It-taħlita ġiet attivata għal sagħtejn, u mbagħad l-assorbenza tkejjel f'760 nm bl-użu ta 'spettrofotometru (UV-1201; Shimadzu, Kyoto, Japan). TPC ġie kkalkulat mill-kurva standard ta 'aċidu galliku u r-riżultati ġew espressi asmg GAE g-1.

2.3.2. Attività ta' Tkessir Radikali

Soluzzjoni ta’ katjoni radikali ABTS ġiet prodotta billi tħallat 2.45 mM persulfat tal-potassju u 7 mMABTS b’10{{10}} mM buffer tal-fosfat tal-potassju (pH 7.4) li kien fih 150 mM u ppermettiet jirreaġixxu għal 24 siegħa f'temperatura tal-kamra. Is-soluzzjoni ABTS imbagħad ġiet dilwita b'ilma distillat biex tinkiseb assorbenza ta' 0.700 ± 0.020 f'734 nm. Il-kampjun tħalla jirreaġixxi ma' 980 µL tas-soluzzjoni ABTS għal 10 min f'37 grad u mbagħad l-assorbiment f'734 nm tkejjel bl-użu ta' spettrofotometru (UV-1201; Shimadzu, Kyoto, Japan). Soluzzjoni radikali DPPH ġiet ippreparata minn tħoll 0.1 mM DPPH fi 80 fil-mija metanol. Is-soluzzjoni DPPH ġiet dilwita għal assorbiment ta' 1.000 ± 0.020 f'517 nm. 50 µL tal-kampjun tħalltu ma' 1.45 mL tas-soluzzjoni DPPH u rreaġixxew għal 30 min fid-dlam. Wara li rreaġixxiet, it-taħlita ġiet iddeterminata f'517 nm.

2.3.3. Effett Inibitorju fuq il-Perossidazzjoni tal-Lipidi

Biex jitkejjel l-effett inibitorju fuq il-perossidazzjoni tal-lipidi fit-tessut tal-imħuħ, intuża l-metodu tas-sustanza reattiva tal-aċidu thiobarbituric (TBA). It-tessut tal-moħħ ġie omoġenat f'20 mM Tris-HCl buffer (pH7.4) u ċentrifugat f'6000 × g għal 20 min. Is-supernatant ġie miżjud ma '0.1 mM L-aċidu askorbiku u 10 µM sulfat tal-ħadid 37 grad għal 1 siegħa inkubazzjoni. Sussegwentement, 30 fil-mija aċidu trichloroacetic u 1 fil-mija TBA ġew miżjuda mat-taħlita, li mbagħad ġiet inkubata f'banju ta 'l-ilma fi 80 grad għal 20 min. Imbagħad, it-TBA-MDAcomplex tkejjel bl-użu ta' spettrofotometru (UV-1201; Shimadzu, Kyoto, Ġappun) f'532 nm.

2.4. Effett Inibitorju tat-Tyrosinase

L-effett inibitorju tat-tyrosinase ġie ddeterminat bl-użu ta 'L-tyrosine bħala sottostrat. Kampjun ġie miżjud ma 'pjanċa ta' 96-bir u mħallat ma '0.1 M sodium phosphate buffer, tyrosinase u 0.1 mML-substrat ta' tyrosine biex jirreaġixxi f'37 grad. Wara l-inkubazzjoni, l-attività ta 'l-enżima ġiet imkejla bl-użu ta' microplatereader (EPOCH2; BioTek, Winooski, VT, USA) f'490 nm. Ukoll, L-DOPA intuża bħala sottostrat biex titkejjel l-attività inibitorja tat-tyrosinase. 67 mM sodium phosphate buffer, tyrosinase u 10 mML-DOPA substrat ġew miżjuda mal-kampjun biex jirreaġixxu f'37 grad għal 10 min. L-attività tat-tyrosinase kienet imkejla f'415 nm.

Cistanche jinibixxi l-formazzjoni tal-melanin

2.5. -Effett Inibitorju tal-Glucosidase

L-effett inibitorju -glucosidase tkejjel billi tħallat 0.1 M sodium phosphatebuffer u -glucosidase f'37 grad għal 10 min. Wara l-attivazzjoni, it-taħlita ġiet miżjuda ma' 5 mM4-nitrophenyl- -D-glucopyranoside f'buffer f'37 grad għal 5 min, u mbagħad l-assorbanza ġiet imkejla f'405 nm bl-użu ta' microplate reader (EPOCH2; BioTek, Winooski, VT, l-Istati Uniti).

2.6. Assaġġ tal-Vijabilità taċ-Ċelluli

Iċ-ċitotossiċità tal-kampjun ġiet stmata bl-użu ta' assaġġ MTT. Iċ-ċelloli tal-melanoma B16/F10 ġew ikkultivati ​​f'1 × 104ċelluli/bir fi pjanċa ta' 96-bir għal 24 siegħa. Minn hemm 'il quddiem, il-kampjuni ġew ittrattati għal konċentrazzjonijiet ta' 1, 2, 5 u 10 µg/mL. Il-kampjuni ġew ittrattati għal 48 siegħa, u wara ċ-ċelluli ġew ittrattati b'10 µg/mL ta' soluzzjoni stokk MTT għal 3 sigħat. Fl-aħħarnett, il-midja tneħħiet, u DMSO ġie miżjud biex jissolubilizza l-formazan. L-ammont ta 'formazan ġie kkwantifikat bl-użu ta' qarrej tal-mikroplate (EPOCH2; BioTek, Winooski, VT, USA) f'570 nm (tul ta 'mewġ ta' eċitazzjoni) u 655 nm (tul ta 'mewġ ta' emissjoni).

2.7. Kejl tal-Kontenut tal-Melanin Ċellulari

Biex jitkejjel l-ammont ta 'melanin, ċelluli tal-melanoma B16/F10 ġew ikkultivati ​​fi pjanċa ta' 24-bir b'adensità ta '4 × 104cells/well fuq għal 24 siegħa. Imbagħad, iċ-ċelloli ġew ittrattati b'100 mM IBMX u ESB jew kontroll pożittiv (arbutin) għal 48 siegħa addizzjonali. Wara t-trattament, iċ-ċelluli ġew maħsula u maħsuda bl-użu ta' phosphate buffer saline (PBS). Iċ-ċelloli maħsuda ġew imbagħad ċentrifugati f'16,000x g għal 10 min, u l-pellet miksub ġie maħlul b'idrossidu tas-sodju 1 N li fih 10 fil-mija DMSO f'90 grad għal 20 min. Il-kontenut tal-melanin tkejjel f'490 nm bl-użu ta' microplate reader (EPOCH2; BioTek, Winooski, VT, USA).

2.8. Analiżi Western Blot

Ċelloli tal-melanoma B16/F10 ittrattati minn qabel ġew maħsula b'PBS u lisati bl-użu ta' buffer RIPA li fih inibituri tal-protease 1 fil-mija fuq is-silġ. Il-konċentrazzjonijiet tal-proteini ġew determinati permezz tal-assaġġ tal-proteini Bradford, u l-proteini ugwali ġew żnaturati b'buffer Laemmli għal 10 minuti f'95 grad. Il-proteini denaturati ġew separati b'elettroforesi tal-ġell ta '10 fil-mija sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide (SDS-PAGE) u mbagħad ġew trasferiti fuq membrani tal-polyvinylidene difluoride (PVDF) (Millipore, Billerica, MA, USA). Sussegwentement, il-membrani ġew imblukkati b'5 fil-mija ħalib xkumat f'salina b'Tris-buffered b'0.1 fil-mija Tween20 (TBST) għal siegħa, u mbagħad irreaġixxew b'antikorpi primarji matul il-lejl f'4 gradi. Il-membrani ġew irreaġuti bl-antikorpi sekondarji għal siegħa u l-kumplessi immuni ġew viżwalizzati bl-użu ta 'reaġent kimiluminixxenti mtejjeb (Bionote, Hwaseong, Korea). L-immaġini tal-medda ġew misjuba u analizzati minn Chemi-doc (iBright Imager, Thermo-Fisher Scientific, Waltham, MA, USA).

2.9. Analiżi UPLC-IMS-QTOF/MS2

Il-komposti ewlenin fil-60 fil-mija estratti etanoliċi taS. bicolorġew analizzati minn UPLC-IMS QTOF/MS2(Vion, Waters Corp., Milford, MA, USA). Is-separazzjoni kromatografika saret bl-użu ta' kolonna Acquity UPLC BEH C18 (2.1 × 10{{10}} mm, 1.7 µm daqs tal-partiċelli; Waters Corp.) b'rata ta' fluss ta' 0.35 mL/min. Il-fażijiet mobbli kienu jikkonsistu f'solvent A (0.1 fil-mija aċidu formiku f'ilma distillat) u B (aċetonitrile), u l-kundizzjonijiet tal-analiżi kienu jinkludu l-gradjent tal-ħin li ġej: 1 fil-mija B f'0-1 min, 1-100 fil-mija B f'1-7 min, 100 fil-mija B f'7-8 min, 100-1 fil-mija B fi 8-8.2 min, 1 fil-mija B f'8.2-10 min. Spettrometrija tal-massa wasperformed fil-mod negattiv ta 'jonizzazzjoni elettrospray (ESI) taħt il-kondizzjonijiet li ġejjin: sourcetemperature, 100 ◦C; temperatura tal-linja desolvation, 400 ◦C; enerġija tal-ħabta tar-rampa, 10–30 V; vultaġġ kapillari, 2.5 kV. Komposti fenoliċi ġew skoperti permezz ta 'skan sħiħ li jvarja minn m/z 50 sa 1500.

2.10. Analiżi Statistika

Ir-riżultati kollha ġew ippreżentati bħala l-medja ± devjazzjoni standard (SD). Id-differenza statistika bejn il-gruppi kienet determinata b'Analiżi one-way tal-varjanza (ANOVA) bl-użu tat-test ta' firxa multipla ġdida ta' Duncan (p <{1}}.05) bil-verżjoni="" tas-softwer="" sas="" 9.4="" (sas="" institute,="" cary,="" nc,="" usa)="" .u="" l-interrelazzjoni="" bejn="">antiossidanteffetti (ABTS/DPPH radical scavenging attività andMDA effett inibitorju) u l-effett inibitorju tamelanoġenesi-enżimi medjati (tyrosinase u -glucosidase) ġiet evalwata analiżi ta 'korrelazzjoni Pearson.

3. Riżultati

3.1. Kontenut Fenoliku Total

Biex tqabbel il-antiossidantattività ta' kull estratt etanoliku minnS. bicolor, TPC ġie investigat.Kif muri fil-Figura 1, TPC kienu differenti fost l-estratti etanoliċi; is-60 fil-mija estratt etanoliku (150.08 ± 1.13 mg GAE/g) kien ogħla b'mod sinifikanti mill-estrazzjonijiet l-oħra (0 fil-mija; 70.83 ± 1.18, 20 fil-mija; 100.42 ± 0.72, 40 fil-mija; ; 114.67 ± 1.46, 80 fil-mija; 118.33 ± 3.17 u 95 fil-mija; 73.67 ± 1.46 mg GAE/g). Għalhekk, l-estratt etanoliku ta '60 fil-mija intuża għal aktar analiżi sperimentali.

3.2. Attività ta' Tkessir Radikali

Il-antiossidantattività ta 'l-estratt 60 fil-mija etanoliku minnS. bicolor(ESB) tkejjel bl-użu tal-assaġġ ABTS/DPPH u l-assaġġ MDA, u r-riżultati ġew murija fil-Figura 2. L-attività ta 'scavenging radikali tal-ABTS tal-ESB ġiet esebita f'97.98 fil-mija f'konċentrazzjoni ta' 1000 ug/mL, u vitamina Ċ (99.82 fil-mija ) , li jintuża bħala l-kontroll pożittiv u kellu wkoll attività simili ta 'scavenging radikali fl-istess konċentrazzjoni (Figura 2A). U, ESB wera effett ta 'inibizzjoni ta' 50 fil-mija (valur IC50) tar-radikali ABTS f'konċentrazzjoni ta '409.71 ug/mL. Kif muri fil-Figura 2B, l-attività ta 'scavenging radikali DPPH ta' ESB intweriet 79.44 fil-mija f'konċentrazzjoni ta '1000 ug/mL, u l-valur IC50 kien indikat f'612.53 ug/mL. L-effett inibitorju tal-produzzjoni MDA ta 'ESB wera effett inibitorju ta' 89.54 fil-mija f'konċentrazzjoni ta '50 ug/mL u wera effett inibitorju ogħla mill-catechin (71.03 fil-mija), li huwa l-kontroll pożittiv, fl-istess konċentrazzjoni (Figura 2C). Barra minn hekk, il-valur IC50 ta 'MDA kien osservat f'konċentrazzjonijiet ta' 16.56 ug/mL ta 'ESB.

3.3. Effett Inibitorju ta 'Enżimi Medjati mill-Melanoġenesi

L-effett inibitorju ta 'melanoġenesi-enżimi medjati ġew evalwati bl-użu ta 'tyrosinase u -glucosidase (Figura 3). Biex titkejjel l-attività inibitorja tat-tyrosinase kontra s-sintesi tal-melanin, saru esperimenti bl-użu ta' L-tyrosine u L-DOPA bħala sottostrat taħt kundizzjonijiet ħielsa minn ċelluli. B'riżultat ta' dan, il-valur IC50 kien 89.25 µg/mL meta L -tyrosine intuża bħala substrat (Figura 3A), iżda L-DOPA ma setgħetx li aktar minn 5 0 fil-mija tal-effett inibitorju kien osservat (Figura 3B). F'dan iż-żmien, il-valur IC50 tal-kontroll pożittiv (arbutin) għal L-tyrosine kien 74.35 µg/mL, li kien ogħla minn ESB. ESB instab li kellu effett inibitorju aħjar fuq tyrosinase bl-użu ta 'L-tyrosine milli bl-użu ta' L-DOPA bħala sottostrat. Għalhekk, ibbażat fuq ir-riżultati tal-assaġġ bl-użu ta 'żewġ sottostrati, l-effett tyrosinaseininibitory ta' ESB huwa meqjus li huwa relatat mal-ossidazzjoni ta 'L-tyrosine għal L-DOPA aktar milli l-ossidazzjoni ta' L-DOPA għal DOPA quinone fil-melanoġenesi. L-effett inibitorju tat-tyrosinase bl-użu ta 'L-DOPA bħala sottostrat u attività ta' scavenging radikali (ABTS; 0.943, p < 0.05,="" dpph;="" 0.952,="" p="">< 0.05)="" indika="" l-korrelazzjonijiet="" qawwija="" pożittivi="" fit-tabella="">

Biex jitkejjel l-effett inibitorju tal-melanoġenesi-enżima medjata, l-attività inibitorja kontra -glucosidase ta 'ESB kienet imkejla. Kif muri fil-Figura 3C, ESB inibixxa -glucosidase bi 33.72 fil-mija f'konċentrazzjoni ta '200 µg/mL. U l-IC50 ta 'ESB kien 46.29 µg/mL, li huwa madwar ħames darbiet ogħla minn dik karbożi (216.05 µg/mL). Dawn ir-riżultati jindikaw li l-ESB għandu attività inibitorja aħjar -glucosidase minn acarbose bħala kontroll pożittiv. U l-effett inibitorju -glucosidase żvela korrelazzjonijiet pożittivi qawwija ma 'effett inibitorju MDA (0.966, p <0.05) fit-tabella="">

3.4. Il-Vijabilità taċ-Ċelloli u s-Sinteżi tal-Melanin Ċellulari

Biex tiġi kkonfermata ċ-ċitotossiċità tal-ESB, iċ-ċelluli tal-melanoma B16/F10 ġew ittrattati b'ESB għal 24 siegħa f'konċentrazzjonijiet ta' 1, 2, 5, 10 u 20 µg/mL. Ir-riżultati wrew li l-ESB ma affettwax il-vijabbiltà taċ-ċelluli fil-konċentrazzjonijiet indikati meta mqabbla mal-kontroll (Figura 4A). Għalhekk, l-esperimenti twettqu billi ntgħażlu konċentrazzjonijiet ta' 2, 5 u 10 µg/mL. Sussegwentement, iċ-ċelluli tal-melanoma B16/F10 ġew ittrattati b'IBMX biex janalizzaw l-effett tal-ESB fuq il-produzzjoni tal-melanin. Kif muri fil-Figura 4B, il-livell ta 'kontenut ta' melanin żdied għal 316.85 fil-mija meta ttrattat b'IBMX. Min-naħa l-oħra, il-grupp ESBtreated (108.60 fil-mija) f'konċentrazzjoni ta '10 µg/mL wera kontenut ta' melanin imnaqqas b'mod sinifikanti meta mqabbel mal-grupp trattat IBMX, u kontenut simili ta 'melanin meta mqabbel mal-grupp ta' arbutin (101.79 fil-mija) bħala kontroll pożittiv.

3.5. Melanogenesis Pathway in B16/F10 Melanoma Cells

Melanogenesishuwa proċess essenzjali biex jipproteġi l-ġilda tal-bniedem minn stimoli esterni, u dan il-proċess huwa regolat minn diversi mekkaniżmi. F'dan l-istudju, aħna kejlu l-livell ta 'espressjoni ta' molekuli li jirregolaw il-melanoġenesi biex nikkonfermaw il-mekkaniżmu inibitorju potenzjali tal-produzzjoni ta 'melanin indotta minn ESB onIBMX fiċ-ċelloli tal-melanoma B16/F10 (Figura 5). Ir-riżultati wrew li ESBeffectively naqqas l-espressjoni MITF indotta minn IBMX (Figura 5A, B). Għalhekk, l-espressjoni ta 'tyrosinase (Figura 5A, C) u TRP -1 (Figura 5A, D) ġiet regolata 'l isfel minn MITF imnaqqas bi trattament ESB. Bħala riżultat, it-trattament ESB irregola l-espressjoni ta 'proteini relatati fiċ-ċelloli tal-melanoma B16/F10 indotti minn IBMX.

3.6. Analiżi UPLC-IMS-QTOF/MS2

Profil tal-komposti ewlenin ta 'ESB ġie skannjat minn LC/MS f'firxa ta' m/z 50-1500, u l-kromatogrammi tal-quċċata bażi huma murija fil-Figura 6. Aktar identifikazzjoni u karatterizzazzjoni tal-komposti saru meta mqabbla ma 'dejta tal-letteratura bl-użu MS2fragmentationdata (Tabella 2). Ibbażat fuq il-frammenti fil-letteratura preċedenti, il-quċċata 2 kienet 1-O-caffeoylglycerol (m/z 253.07, 179.03, 161.02 u 135.04) [15]; quċċata 3, dicaffeoylglycerides (m/z 415.10, 253.07, 179.03 u 135.04) [16]; quċċata 4, 1,3-O-dicaffeoylglycerol (m/z 415.10, 253.07, 179.03, 161.02 u 135.04) [16];peak 5, p-coumaroyl-caffeoylglycerol (m., 1.091.0291.0391.0391.0391.0392915. u 135.04) [17]; quċċata 6,feruloyl-caffeoylglycerol (m/z 429.12, 253.07, 193.05, 161.02 u 134.03) [18]; quċċata 7, triċin (m/z 329.23,314.04, 299.01 u 271.02) [19]; u l-quċċata 9, 9-hydroxyoctadecadienoic acid (9-HODE) (m/z 295.22, 277.21 u 171.10) [20], rispettivament. Fosthom, 1,3-O-dicaffeoylglycerol (Figura 6B), tricin (Figura 6C) u9-HODE (Figura 6D) ġew identifikati bħala komposti ewlenin.

effetti ta' cistanche:kontra l-ossidazzjoni

4. Diskussjoni

Melanogenesishuwa rrappurtat li jkun ikkawżat minn żieda fl-istress ossidattiv minn stimuli esterni. L-istress ossidattiv jikkawża ossidazzjoni tad-DNA u proteini, perossidazzjoni tal-lipidi, u żieda fl-aċidi grassi mhux saturati. Dan l-istress iwassal ukoll għal żieda bla bżonn is-sintesi tal-melanin fil-melanoċiti fuq il-ġilda. Għalhekk, melanin eċċessiv iġġenerat jista 'jikkawża pigmentazzjoni, u jista' jwassal għal kanċer tal-ġilda. IBMXstimulates melanogenesis billi jinibixxi phosphodiesterase u b'hekk iżidu l-livelli ta 'cAMP [7]. Hekk kif il-livell ta' cAMP fiċ-ċelloli jiżdied, jikkawża attivazzjoni tal-mogħdijiet ta 'sinjalazzjoni ERK u PI3K/Akt li jippromwovu l-ġenerazzjoni ta' proteini assoċjati mal-melanoġenesi. Għalhekk, investigajna l-effett li jbajdu l-ESB fuq il-melanoġenesi indotta minn IBMX fiċ-ċelloli tal-melanoma B16/F10.

Il-komposti fenoliċi bħala l-metaboliti sekondarji tal-pjanti għandhom il-proprjetà li jiġu stabbilizzati minn struttura ta 'reżonanza meta jirreaġixxu mar-radikali [21]. Ukoll, il-komposti fenoliċi jaġixxu bħala fatturi importanti għall-attività anti-ossidanti bħall-attività ta' tneħħija radikali ABTS/DPPH, u actas inibituri tal-formazzjoni tal-pigment minħabba li għandhom struttura kimika bħal dik tal-L-tyrosine [22,23].Assaġġ ABTS/DPPH huwa l-aktar metodu komuni u sempliċi għall-istima in vitroantiossidantattività. F'dan l-istudju, l-ESB wera attività għolja ta' tkessiħ ta' TPC (Figura 1) u ABTS/DPPH (Figura 2A, B). Speċjalment, ESB kien ogħla fl-attività ta ' scavenging radikali ABTS mill-attività ta ' scavenging DPPHradical. L-assaġġ DPPH jintuża biex ikejjel l-attività ta 'scavenging radikali ta' komposti idrofobiċi, filwaqt li l-assaġġ ABTS jagħmilha possibbli li titkejjel l-attività ta 'scavenging radikali kontra komposti idrofobiċi kif ukoll idrofiliċi [24]. Għalhekk, ġie kkonfermat li l-attività ta ' scavenging radikali tal-ESB kienet aktar affettwata mill-kompost idrofiliku.

L-espożizzjoni għar-radjazzjoni UV tikkawża produzzjoni ta 'ROS u għandha effetti diretti u indiretti fuq il-ġilda. B'mod partikolari, ROS jinduċi perossidazzjoni tal-lipidi billi jattakka aċidi grassi mhux saturati, li huma komponenti ta' membrani taċ-ċelluli [2]. L-akkumulazzjoni ta 'perossidi tal-lipidi twassal għall-qerda tas-sistema antiossidanti tal-ġilda, li tikkawża pigmentazzjoni, infjammazzjoni u tixjiħ [25]. F'dan l-istudju, ESB wera li jinibixxu l-perossidazzjoni tal-lipidi eċċellenti (Figura 2C). Il-komposti fenoliċi li jinsabu fil-pjanti naturali ġew irrappurtati li huma assoċjati ma 'attività ta' scavenging radikali [26]. Ukoll, Maresca et al. [27] irrapporta li t-tneħħija ta 'ROS b'antiossidanti hija effettiva fl-inibizzjoni tal-bijosintesi tal-melanin. Studju reċenti rrapporta li l-frazzjonijiet tal-aċetat tal-etil u tal-aglycone tal-weraq Dendropanax morbifera jistgħu jaġixxu bħala protettivi taċ-ċelluli tal-ġilda u antiossidanti naturali billi jipproteġu ċ-ċelloli HaCaT kontra l-istress ossidattiv [28]. Barra minn hekk, it-trattament bl-istess frazzjonijiet wera effett anti-melanoġeniku aħjar minn arbutin, użat bħala kontroll apożittiv, kontra l-ġenerazzjoni eċċessiva ta 'melanin indotta minn -MSH fiċ-ċelloli tal-melanoma B16/F10 [28].

Diversi mekkaniżmi huma assoċjati ma 'melanoġenesi, u l-għan komuni għall-aġenti li jbajdu l-ġilda huwa r-regolamentazzjoni tat-tyrosinase, li hija enzima importanti fil-melanoġenesi. Tyrosinase, enzima li fiha r-ram, tikkatalizza żewġ reazzjonijiet f'din il-mogħdija: l-idrossilazzjoni ta 'L-tyrosine toL-DOPA u l-ossidazzjoni ta' L-DOPA għal DOPA quinone [6]. Meta espost għal ammonti kbar ta 'UV orROS, l-attività ta' tyrosinase tiżdied u s-sintesi tal-melanin tiżdied ukoll. Għalhekk, ir-riżultati tal-kejl tal-effett inibitorju ta 'tyrosinase fir-rigward tas-sintesi tal-melanin wera li ESB wasfound li għandu effett inibitorju aħjar fuq tyrosinase bl-użu ta' L-tyrosine milli bl-użu ta 'L-DOPA bħala substrat (Figura 3A, B). Studju reċenti rrapporta l-korrelazzjoni bejn TPC u l-inibizzjoni ta 'tyrosinase minħabba li l-komposti fenoliċi għandhom struttura kimika simili għal dik ta' L-tyrosine, sottostrat ta 'tyrosinase.Skond Choi et al. [29], ġie osservat li l-effiċjenza ta ' l-attività ta ' scavenging radikali ħielsa u l-effett inibitorju tat-tyrosinase żdiedet fi proporzjon mal-ħin tal-fermentazzjoni ta ' Cheonggukjang, li kien dovut għall-ammont ta ' TPC jiżdied mal-ħin tal-fermentazzjoni. Im & Lee [30] osservat li l-frazzjoni tal-aċetat tal-etil ta '75 fil-mija estratt etanoliku minn Taraxacum core num kellha attività antiossidant TPCand abbundanti, u l-effett inibitorju tat-tyrosinase kien superjuri għal frazzjonijiet oħra (hexane, chloroform, butanol, u akweju).

Tyrosinase, waħda mill-glikoproteini, hija glikosilata meta l-ktajjen tal-polipeptidi jittraslokaw fir-retikulu endoplasmiku. Diversi enzimi huma involuti f'dan il-proċess, u fosthom, l-inibizzjoni ta '-glucosidase tista' tinibixxi t-tiwi ta 'tyrosinase biex tifforma struttura inattiva mingħajr ram. B'riżultat ta' dan, tyrosinase ma jistax jiġi trasportat lejn il-melanosome u jinibixxi l-produzzjoni tal-melanin.Il-polifenol preżenti fil-pjanti huwa kapaċi mhux biss li jnaqqas l-istress ossidattiv, iżda wkoll jinibixxi l-enzimi idrolizzanti tal-karboidrati bħal -glucosidase billi jeħel mal-proteini [31]. Studju preċedenti indika li ċ-ċelloli tal-melanoma B16/F10 fil-preżenza ta 'inibituri ta' glycosylation jirriżultaw fit-tnaqqis tal-melanoġenesi billi jnaqqsu l-kontenut totali ta 'tyrosinase [32]. U Choi et al. [33] irrapporta li deoxynojirimycin, wieħed mill-inibituri -glucosidase, imblukkat glycosylation ta ' tyrosinaseand inibit il-migrazzjoni tyrosinase għal melanosomes. Ando et al. [34] wrew li huwa possibbli li tinibixxi s-sintesi tal-melanin fiċ-ċelloli tal-melanoma billi tikkontrolla l-glycosylation ta 'tyrosinase minn inibituri -glucosidase bħal glutathione, ferritin, u geldanamycin. Kim et al. [35] irrapporta l-korrelazzjoni tajba għall-Bee Pollen bħala naturaliantiossidantbejn TPC u l-effett inibitorju tat-tyrosinase ({{0}}.973,p <0.05), u="" wkoll="" tpc="" taw="" il-korrelazzjoni="" pożittiva="" ma="" 'attività="" ta'="" scavenging="" radikali="" dpph="" (0.897,="" p="">< 0.05).="" u="" r-riżultati="" jissuġġerixxu="" li="" l-polifenoli="" bħala="" antiossidanti="" naturali="" jistgħu="" jkunu="" potenzjalment="" effettivi="" għat-tibjid="" tal-ġilda="" abbażi="" tal-attività="" antiossidant="" eċċellenti="" tagħhom.="" fl-istudju="" tagħna,="" l-effett="" antiossidant="" ta="" 'esbin="" il-proċess="" li="" jinibixxi="" l-azzjoni="" ta'="" tyrosinase="" kien="" indikat="" li="" huwa="" korrelatat="" ħafna="" permezz="" ta="" 'inibizzjoni="" ta'="" l-ossidazzjoni="" ta="" 'l-dopa="" għal="" dopa="" quinone="" u="" l-glycosylation="" ta'="" tyrosinase="" (tabella="" 1).="" għal="" din="" ir-raġuni,="" l-antiossidant.="" effett="" tal-esb="" għandu="" effett="" fuq="" l-effett="" li="" jbajdu="" l-ġilda="" billi="" jaffettwa="" theinhibition="">melanoġenesi-enżimi medjati.

antiossidant naturali: cistanche tubulosa

Il-mogħdija tas-sinjalar tal-PKA hija l-proċess ewlieni involut fil-melanoġenesi, u dan huwa attivat minn IBMX, li huwa aġent li jgħolli l-cAMP. Il-mogħdija tas-sinjalar tal-PKA tista’ tirregola fatturi ta’ traskrizzjoni bħal MITF u proteina li tgħaqqad l-elementi li tirreaġixxi għall-cAMP, li huma involuti fl-espressjoni ta’melanoġenesiregolaturi bħal tyrosinase, TRP-1, u TRP-2. Konsegwentement, it-trattament IBMX iżid l-espressjoni tal-MITF u l-familja tal-ġeni tyrosinase (tyrosinase u TRP-1) permezz tal-attivazzjoni tal-cAMP [7]. Park et al. [36] wera li l-ammont ta 'sintesi tal-melanin minn estratt etanoliku PapenfusiellaCuomo (65.17 ± 13.40 fil-mija) f'konċentrazzjoni ta' 40 µg/mL kien simili għal kojic acid (72.30 ± 3.92 fil-mija) bħala kontroll pożittiv, u rrapporta li wera potenzjal bħala materjal li jbajdu naturali. F'dan l-istudju, ESB wera effett inibitorju effettiv fuq is-sintesi tal-melanin simili għal dak tal-kontroll pożittiv f'konċentrazzjonijiet baxxi (Figura 4). Wara dan, biex jiġi vvalutat l-effett dettaljat ta 'anti-melanogenice ta' ESB, saret analiżi tal-western blot fuq proteina medjata mill-melanoġenesi bl-użu ta 'ċelluli B16/F10melanoma.

Akt, li huwa involut f'diversi mekkaniżmi, għandu rwol ewlieni fi proċessi ċellulari multipli bħall-apoptosi, il-glukożju, u l-metaboliżmu tal-ġilda. B'mod partikolari, iż-żieda ta 'cAMP permezz ta' trattament IBMX tnaqqas il-fosforilazzjoni ta 'Akt u l-attivazzjoni tagħha. Ukoll, Akt inattivat jinduċi l-attivazzjoni ta' GSK-3, li jfisser li l-fosforilazzjoni ma tinkisebx, jiġifieri, il-livell ta' p-GSK-3 huwa mnaqqas [7]. Skont il-letteratura preċedenti, il-parti tal-ajru ta 'Pueraria thunbergia tiddegrada l-MITF billi tattiva l-mogħdija ta' sinjalazzjoni Akt/GSK-3 fiċ-ċelloli tal-melanoma B16/F10 [37]. Ukoll, Huang etal. [38] wera li [6]-school ippromwoviet l-espressjoni p-Akt u inibixxi s-sinjalar tal-melanoġenesi fiċ-ċelloli tal-melanoma B16/F10. GSK attivat-3 jirregola l-familja tal-ġeni tyrosinase billi phosphoryatingSer289 ta 'MITF, konsegwentement jippromwovi l-melanoġenesi. MITF huwa fattur maġġuri ta' traskrizzjoni li jeħel ma' promotur tal-ġene tyrosinase, u sussegwentement iżid l-espressjoni ta' enżimi relatati mal-proliferazzjoni tal-melanoċiti umelanoġenesi[7]. Meta l-espressjoni ta' tyrosinase tiġi promossa minn MITF, sussegwentement twassal għal żieda fil-livelli ta' TRP-1 u TRP-2, u bħala riżultat, dawn l-enzimi melanoġeniċi jipproduċu melanin [6]. L-istress ossidattiv ikkawżat mid-dawl UV jistimula l-pigmentazzjoni tal-melanin fil-ġilda. Għalhekk, l-attività tat-tkessiħ tar-radikali jew ROS hija effettiva biex trażżan il-produzzjoni tal-melanin, u l-polifenoli b'attività antiossidanti jista 'jkollhom effetti ta' jbajdu eċċellenti [38]. Choi et al. [39] wera li z-zkuk tal-bambu Koreani (Phyllostachys nigra varjetà henosis) irregolaw b'mod baxx l-MITF medjat minn PKA/CREB permezz tat-tneħħija ta 'radikali ABTS/DPPH. U estratt etanoliku ta '70 fil-mija ta' Nelumbo nucifera G. Leaf inibixxi l-espressjoni ta 'MITF, tyrosinase u TRPs b'attivitajiet antiossidanti bħall-kapaċità ta' donazzjoni ta 'elettroni u inibizzjoni ta' xanthine oxidase [40]. F'dan l-esperiment, intwera li t-trattament ESB naqqas l-espressjoni tal-familja tal-ġene MITF u tyrosinase (tyrosinase u TRP-1), li jippromwovu l-ossidazzjoni ta 'DHICA għal DHI fil-passaġġ tal-melanoġenesi (Figura 5). Ibbażat fuq dawn ir-riżultati, intwera li l-ESB jirregola 'l isfel il-melanogenesis medjata mill-IBMX ibbażata fuq is-superjuri tagħha.antiossidanteffetti.

Ibbażat fuq il-letteratura preċedenti, il-komposti fenoliċi ewlenin fl-ESB ġew identifikati li1,3-O-di-caffeoyl glycerol (Figura 6B), tricin (Figura 6C) u 9-HODE (Figura 6D) [16 ,19,20]. Fosthom, 9-HODE, li huwa l-aktar kompost abbundanti fl-ESB, huwa wieħed mill-metaboliti tal-linoleicacid u juri effett li jbajdu fuq il-ġilda irritata billi jinibixxi tyrosinase [41]. Ukoll, b'differenza għal komposti alifatiċi oħra, 9-HODE huwa rrappurtat li huwa stabbli fl-esperimenti kollha ta' ossidazzjoni u li għandu effett li jbajdu fuq il-ħsara ROS [41]. Sadanittant, triċina (5,7-dihydroxy- 2-(4-idrossi-3,5-di-methoxyphenyl)-4H-chromene{{24 }}waħda) ilha rikonoxxuta għall-effetti ta’ benefiċċju tagħha fuq is-saħħa, bħal attivitajiet antiossidanti, antivirali u kontra t-tumur/kontra l-kanċer [42–44]. Mu et al. [45] irrapporta li t-tricin wera effett inibitorju aħjar fuq l-attività ta 'tyrosinase meta mqabbel ma' arbutin bħala kontroll pożittiv. Barra minn hekk, Meng et al. [46] irrapporta li triċin iżolat mill-estratt tal-metanol tax-xgħir younggreen (Hordeum vulgare L.) inibixxi l-bijosintesi tal-melanin u l-attività tat-tyrosinase fiċ-ċelloli tal-melanoma B16/F10 permezz tal-grupp hydroxyl fil-pożizzjoni C-4 u gruppi metossi fil- C-3',5'pożizzjonijiet tal-iskeletru tat-tricin. Phenylpropanoids bħal 1-O-caffeoylglycerol, dicaffeoylglycerides, u 1,3-O-dicaffeoylglycerol huma komposti organiċi li huma sintetizzati minn pjanti minn phenylalanine u tyrosine. Phenylpropanoid u l-forom glycosylated tagħhom kienu rrappurtati li huma antiossidanti qawwija jew billi jqassmu direttament ROS jew billi jaġixxu bħala kenniesa radikali peroxyl li jkissru l-katina [47].

L-aċidu p-Coumaric, li għandu struttura kimika simili għal L-tyrosine, jikkompeti ma 'L-tyrosine għal siti attivi fuq tyrosinase [48]. Huwa magħruf bħala inibitur qawwi tat-tyrosinase, u kien irrappurtat li l-effett tiegħu kontra l-melanogenesis huwa aktar b'saħħtu minn komposti strutturalment simili bħal cinnamicacid [48]. Barra minn hekk, An et al. [48] ​​irrapporta li l-aċidu p-cumariku, kostitwent ta 'Sasa quelpaertensisNakai, inibixxi l-attività ta' tyrosinase billi juża L-DOPA bħala sottostrat, u naqqas il-produzzjoni ta 'melanin fiċ-ċelloli tal-melanoma B16/F10. Għalhekk, ESB jista 'jitqies li għandu effett ta' jbajdu eċċellenti permezz tal-aċidu p-cumariku. Barra minn hekk, l-ispettri MS ta' 1-O-caffeoylglycerol u 1-3-O-dicaffeoylglycerol wrew mudelli ta' frammentazzjoni simili f'm/z 179, 161, u 135, u dawn il-frammenti ġew irrapportati bħala residwu ta' aċidu kaffejku. Huma għandhom spettru UV simili għal dak ta 'derivattiv ta' aċidu kaffejku b'λmax f'madwar 326 nm, u għalhekk huma meqjusa bħala derivattivi ta 'aċidu kaffejku [48]. Ġie rapportat li l-aċidu caffeic, derivattiv ta 'diversi komposti, huwa antiossidant qawwi in vitro/in vivo, u jnaqqas l-attività ta' styrosinase umelanoġenesifiċ-ċelloli tal-melanoma B16/F10. Konsegwentement, l-effett anti-melanoġeniku tal-ESB jista' jitqies li huwa dovut għalantiossidantiu sustanzi li jbajdu l-ġilda bħal komposti asalifatiċi u fenoliċi.

effetti ta 'cistanche: anti-ossidazzjoni

5. Konklużjonijiet

Biex tevalwa l-possibbiltà bħala aġent li jbajdu l-ġilda taSorgu bicolor, effetti anti-ossidanti u anti-melanoġeniċi ta 'ESB fuq melanoġenesi indotta minn IBMX ġew evalwati f'melanocells B16/F10. ESB esebiti sinifikantiantiossidantattivitajiet fl-attività ta ' scavenging radikali ABTS/DPPH andMDA effett inibitorju. ESB impedixxa l-ewwel pass tamelanoġenesibilli jinibixxi -glucosidaseand tyrosinase bl-użu ta 'L-tyrosine u L-DOPA bħala sottostrati. L-effetti anti-melanoġeniċi ta 'ESB fuq IBMX indottimelanoġenesiġew evalwati fiċ-ċelloli tal-melanoma B16/F10, u r-riżultati wrew li l-ESB inibixxi l-melanoġenesi indotta minn IBMX fiċ-ċelloli tal-melanoma B16/F10. L-akkumulazzjoni tal-melanin kienet inibita minn regolazzjoni 'l isfel tal-espressjoni ta' MITF u l-familja tal-ġeni tyrosinase (tyrosinaseand TRP-1) fil-melanoġenesi indotta minn IBMX. Il-komposti ewlenin tal-ESB ġew analizzati bħala1,3-O-di-caffeoyl glycerol, tricin, u 9-HODE. Konsegwentement, ESB wera in vitroantiossidantactivityand effett anti-melanoġeniku fiċ-ċelluli tal-melanoma B16/F10, u għalhekk, jistgħu jintużaw bħala aġent li jbajdu l-ġilda fis-suq tal-kosmetiċi.

kontra l-ossidazzjonipilloli cistanche